מלנומה היא מחלה אגרסיבית מאוד שמתפשטת במהירות לאיברים אחרים. פרוטוקול זה מתאר את היישום של הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, יחד עם עיבוד 3D, כדי לפקח על הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות במודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית.
מאמר שיטה
מלנומה היא מחלה אגרסיבית מאוד שמתפשטת במהירות לאיברים אחרים. פרוטוקול זה מתאר את היישום של הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, יחד עם עיבוד 3D, כדי לפקח על הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות במודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית.
Tyr::CreER+, BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים מהונדסים גנטית (עכברי Braf/Pten) נמצאים בשימוש נרחב כמודל in vivo של מלנומה גרורתית. לאחר גידול ראשוני כבר המושרה על ידי טיפול טמוקסיפן, עלייה בנטל גרורתי הוא ציין בתוך 4-6 שבועות לאחר אינדוקציה. מאמר זה מראה כיצד ניתן לנצל הדמיית UltraSound בתדר גבוה במיוחד (UHFUS) כדי לעקוב אחר העלייה במעורבות גרורתית של בלוטות הלימפה המפשעתיות על ידי מדידת הגידול בנפחן.
מערכת UHFUS משמשת לסריקת עכברים מורדמים באמצעות בדיקה ליניארית UHFUS (22-55 מגה-הרץ, רזולוציה צירית 40 מיקרומטר). תמונות במצב B מבלוטות הלימפה המפשעתיות (הן בצד שמאל והן בצד ימין) נרכשות בתצוגה של ציר קצר, וממקמות את בעלי החיים באיסוף גב. רשומות אולטראסאונד נרכשות באמצעות גודל צעד 44 מיקרומטר על זרוע מכנית ממונעת. לאחר מכן, רכישות דו-ממדיות (2D) במצב B מיובאות לפלטפורמת התוכנה לתמונת אולטרסאונד לאחר עיבוד, ובלוטות לימפה מפשעתיות מזוהות ומפולחות באופן אוטומטי למחצה בתמונות הדו-ממדיות החתך שנרכשו. לבסוף, שחזור כולל של נפח תלת מימדי (3D) מתקבל באופן אוטומטי יחד עם עיבוד של נפח בלוטות הלימפה, אשר בא לידי ביטוי גם כמדידה מוחלטת.
טכניקת vivo לא פולשנית זו נסבלת היטב ומאפשרת תזמון של מפגשי הדמיה מרובים על אותה חיה ניסיונית במשך שבועיים. זה, אם כן, אידיאלי להעריך את ההשפעה של טיפול תרופתי על מחלות גרורתיות.
מלנומה היא צורה אגרסיבית של סרטן העור המתפשטת לעתים קרובות לאתרי עור אחרים (גרורות תת עוריות), כמו גם לקשריות לימפה, ריאות, כבד, מוח ועצמות1. בעשור האחרון, תרופות חדשות הוכנסו לפרקטיקה קלינית ותרמו לשיפור תוחלת החיים של חולי מלנומה גרורתית. עם זאת, מגבלות להישאר, כולל זמן משתנה ומידת התגובה, תופעות לוואי חמורות, ואת ההתקוממות של התנגדות שנרכשה1. לכן, חשוב לזהות התפשטות גרורתית בשלביה המוקדמים, כלומר, כאשר היא מגיעה לבלוטות הלימפה המקומיות.
ביופסיה של בלוטות הלימפה המקומיות (בלוטות הלימפה הזקיף) מבוצעת בדרך כלל כדי לבדוק את נוכחותם של תאי מלנומה. עם זאת, הדמיית אולטרסאונד תופסת אחיזה כשיטה לא פ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי משרד הבריאות האיטלקי (פרוטוקולים בעלי חיים #754/2015-PR ו #684/2018-PR).
1. אינדוקציה מלנומה
הערה: טיר בן שישה שבועות::CreER +,BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] שימשו במחקר זה (ראו טבלת החומרים).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
לאחר ציור העור של Tyr::CreER +,BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים עם 4-HT, פעילות Cre מושרה, שבגללה יש מתג ברמה הגנומית מ wt Braf ל BrafV600E , בעוד Pten הולך לאיבוד (איור 3A). בתוך 2-3 שבועות, עכברים לפתח גידולים ראשוניים באתר עם 100% חרטה. לאחר ארבעה שבועות מטיפול 4-HT (t0), גידולים ראשוניים מגיעים לנפח של 50-100 מ"מ3, ואת הצמיחה שלהם ניתן למדוד על ידי calipers במשך שבועיים נוספים ((t1 ו- t2; .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הנתונים המתקבלים במחקר זה מעידים על היכולת של הדמיית אולטרסאונד כדי לפקח על המעורבות גרורתית של בלוטות הלימפה מפשעתיות של מודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית. כפי שמוצג בעבר16, טכניקה זו שימושית במיוחד כדי להעריך את היעילות של טיפול תרופתי. הסיבה לכך היא כי זה מאפשר ניטור של השינוי בנפח בלוטות הלימפה באותו בעל חיים לאורך זמן, על ידי השוואת המדידות שנאספו ב t1 וt2 עם אלה שנאספו ב t0. זה, בתורו, תורם לעלייה בחוסן של התוצאות שהושגו, כי שונות בין עכברי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
המחברים רוצים להודות לס. בורצ'יאלי (FTGM, פיזה) על עזרתה בהליכים בבעלי חיים. עבודה זו נתמכה על ידי ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica institutional Funding to LP; MFAG #17095 הוענק על ידי AIRC-Associazione Italiana Ricerca סול קנקרו ל- LP.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תרופה 4-הידרוקסיטמוקסיפן | Merck | H6278 | המשמשת לאינדוקציה של גידול |
| B6. Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) עכברים | מעבדת ג'קסון | 013590 | |
| Blu gel | Sooft Ialia | ג'ל תמיסת עיניים | |
| BRAFV600E נוגדן | Spring Bioscience Corporation | E19290 | |
| IsoFlo (isoflorane) | Zoetis | נוזל להרדמה גזית | |
| נוגדן MLANA | תרמו פישר מדעי | M2-7C10 | |
| סיגמא ג'ל | אלקטרודות | פרקר | |
| ג'ל טרנסוניק ג'ל שקוף | ג'ל אולטרסאונד | Telic SAU | |
| Veet | רקיט בנקיזר IT | קרם הסרת שיער | |
| מערכת הרדמה כפולה קומפקטית | פוג'יפילם, Visualsonics Inc. | מערכת הרדמה מבוססת איזופלורן המצוידת בחרוט אף ותא אינדוקציה | |
| MX550S | Fujifilm, Visualsonics Inc. | בדיקה ליניארית UHFUS | |
| Vevo 3100 | Fujifilm, Visualsonics Inc. | מערכת UHFUS | |
| תחנת הדמיה Vevo | Fujifilm, Visualsonics Inc. | תחנת הדמיה UHFUS ויחידת ניטור פיזיולוגית מתקדמת ניחנה בלוח מחומם | |
| Vevo Lab | Fujifilm, Visualsonics Inc. | פלטפורמת תוכנה לעיבוד לאחר תמונת אולטרסאונד |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה