כאן אנו מציגים הליכים כירורגיים מעודנים על ביצוע מוצלח של השתלת איים תוך-ספורטיביים, הליך כירורגי רלוונטי מבחינה קלינית אך מאתגר מבחינה טכנית, בעכברים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
למרות שהכבד מתקבל כיום כאתר ההשתלה העיקרי עבור איים אנושיים בהגדרות קליניות, איים מושתלים תחת קפסולת הכליה ברוב מחקרי השתלת האי הפרה-קליני מכרסמים. מודל זה נפוץ כי השתלת אי תוך-הפסטי מורין היא מאתגרת מבחינה טכנית, ואחוז גבוה של עכברים יכול למות מסיבוכים כירורגיים, במיוחד דימום מאתר ההזרקה לאחר ההשתלה. במחקר זה, שני נהלים שיכולים למזער את השכיחות של דימום וריד פורטל לאחר עירוי מוצגים. השיטה הראשונה מיישמת ספוג ג'לטין hemostatic נספג לאתר ההזרקה, והשיטה השנייה כוללת חדירה מחט הזרקת האי דרך רקמת השומן תחילה ולאחר מכן לתוך וריד הפורטל באמצעות רקמת השומן כמחסום פיזי כדי לעצור את הדימום. שתי השיטות יכולות למנוע ביעילות מוות של עכברים כתוצאה מדימום. כל החלק הכבד מראה הפצת איון וראיות של פקקת איון לאחר ההשתלה, תכונה אופיינית להשתלת איים תוך-הפגפיים, הוצגו. פרוטוקולים משופרים אלה לחדד את הליכי השתלת האי התוך-הפגטי ועשויים לסייע למעבדות להקים את ההליך לחקר ההישרדות והתפקוד של האיים בהגדרות פרה-קליניות.
מבוא
השתלת איים תוך-ספורטיביים (IIT) דרך וריד הפורטל היא השיטה הנפוצה ביותר להשתלת איון אנושית בהגדרות קליניות. מודל IIT העכבר מציע הזדמנות נהדרת ללמוד השתלת איון ולבדוק גישות התערבות מבטיחות שיכולות לשפר את היעילות של השתלת איון1. IIT תואר לראשונה בשנות השבעים ושימש מספר קבוצות 1,2,3,4,5. זה חזר לפופולריות לאחר פריצת הדרך בהשתלת האי האנושי בשנת 20006,7. עם זאת, רוב מחקרי השתלת האיון השתמשו בקפסולת הכליה כאתר מוע....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים נערכו באישור הוועדות המוסדיות לטיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטה הרפואית של דרום קרוליינה ובמרכז הרפואי ראלף ה. ג'ונסון בצ'רלסטון.
1. אינדוקציה לסוכרת באמצעות סטרפטוזוטוצין (STZ)
- הכנת עכברי נמען:
- לשקול את כל העכברים בנפרד.
- בדוק את רמות הגלוקוז בדם מדגימת דם וריד הזנב באמצעות glucometer.
- קביעת מינון STZ לשלושה תרחישים שונים:
- עבור עכברים עם מחלת כבד שומני להזריק מנה אחת של STZ [40 מ"ג / קילוגרם / יום, הזרקה תוך אפריטונית (i.p.) במשך 5 ימים רצופים.
- עבור עכברי NOD-SCID להזריק 125 מ"ג/ק"ג של STZ, זריקה אחת, i.p. לאחר צום לילה.
- עבור C57BL / 6 עכברים להז....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ביצענו השתלות איים סינגניים וקסנוגניים דרך וריד הפורטל. פונקציית השתלת האיון נצפתה באופן תלוי במינון בשני המודלים להשתלת איון. במודל השתלת האי הסינגניים באמצעות עכברי C57BL/6, השתלה של 250 איים הובילה לנורמוגליקמיה חולפת לפני שהעכברים חזרו להיפרגליקמיה. עכברים שקיבלו 500 איים הגיעו והחזיקו נורמוגליקמיה מעבר ל-30 יום לאחר ההשתלה (איור 2A). עכברים בשתי הקבוצות הראו משקל גוף מוגבר (איור 2B).
באופן דומה, באיים האנושיים למודל השתלת עכבר NO.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במחקר זה הוכחו שני הליכים משופרים שיכולים למנוע דימום ועשויים להפחית את תמותת העכבר במהלך IIT של העכבר. מחקר זה מאפשר לחוקרים לדמיין את מודל השתלת האיים הייחודי בחקר התגובה הדלקתית המתווכת בדם מיידי לאחר ההשתלה. מודל IIT הוא מודל ייחודי לחקר הישרדות תאי איון ופגיעות איסכמיות בכבד בתגובה להשתלת איון19. כאן, חידדנו את ההליך בהתבסס על מחקרים קודמים והפחתנו את התמותה המוקדמת של עכבר שנגרם מסיבוכים. שתי השיטה A14,15,16
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
כל המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד אינטרסים.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי המחלקה לענייני יוצאי צבא (VA-ORD BLR&D הצטיינות I01BX004536), והמכון הלאומי לבריאות מענקים # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, כדי HW. ברצוננו להודות לכם מר מייקל לי וגברת לינדזי סוואבי על עריכת השפה
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 10% פורמלין ניטרלי חוצץ v/v | פישר סיינטיפיק | 23426796 | |
| מזרק 1 מ"ל עם מחט | AHS AH01T | ||
| 20 מ"ל מזרק | BD | 301031 | |
| 25G x 5/8 אינץ' מחטים היפודרמיות | BD | 305122 | |
| רפידות הכנה לאלכוהול, סטרילי | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| הרדמה לבעלי חיים מערכת | VetEquip, Inc. | ||
| בופרנורפין הידרוכלוריד, הזרקת | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| צינורות צנטריפוגה, 15 מ"ל | פישר סיינטיפיק | 0553859A | |
| CMRL-1066 | קורנינג | 15110CV | |
| DMEM | קורנינג | 10013CV | |
| אתנול, מוחלט (200 הוכחה), כיתה ביולוגיה מולקולרית | פישר סיינטיפיק | ||
| מספריים מיקרו ניתוח עדינים במיוחד 4 "ישר חד | Roboz מכשיר כירורגי ושות'. | RS-5882 | |
| סרום בקר עוברי (FBS) | קורנינג | 35011CV | |
| FreeStyle מד סוכר | Abbott | Lite | |
| FreeStyle רצועות בדיקת גלוקוז בדם | Abbott | Lite | |
| Gelfoam (ספוג ג'לטין נספג, USP) | Pharmacia & Upjohn Company | 34201 | |
| מלקחיים Graefe 4 אינץ' קצה עדין במיוחד | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| כרית מחוממת | אמזון | B07HMKMBKM | |
| מחזיק מחט Hegar-Baumgartner 5.25 אינץ' | רובוז מכשירים כירורגיים ושות ' | מזרק אינסולין RS-7850 | |
| עם מחט 27 מד | BD | 879588 | |
| רפידות הכנה ליוד | פישר סיינטיפיק | 19-027048 | |
| איזופלורן | פיראמל טיפול קריטי | NDC 66794-017-25 | |
| פניצילין/סטרפטומיצין (P/S) | HyClone | SV30010 | |
| תפר פוליפרופילן 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| תפר פוליפרופילן 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| נתרן כלורי, 0.9% תמיסה תוך ורידית | VWR | 2B1322Q | |
| סטרפטוזוצין (STZ) | Sigma | S0130 | |
| וילון כירורגי, סטרילי | Med-Vet International | DR1826 | |
| קלטת רקמות | פישר סיינטיפיק | 22-272416 |
מקורות
- Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes. Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).
- Ballinger, W. F., Lacy, P. E. Transplantation of intact pancreatic islets in rats. Surg....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
