התכווצות המלט הדנטלי במהלך הריפוי מחליפה את לוחית הבסיס. פרוטוקול זה ממזער את הבעיה על ידי יצירת בסיס ראשוני של המלט הדנטלי שמשאיר מקום למלט את לוח הבסיס. שבועות לאחר מכן, ניתן לקבע את לוח הבסיס במקומו על פיגום זה באמצעות מלט חדש קטן, ובכך להפחית את התכווצותו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שימוש בציפוי בסיס ובמיניסקופ מעוגן מראש עם עדשה אובייקטיבית למחקר חולף בסידן בעכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
מדעני מוח משתמשים במיקרוסקופים זעירים (מיניסקופים) כדי לצפות בפעילות עצבית אצל בעלי חיים המתנהגים בחופשיות. צוות המיניסקופים של אוניברסיטת קליפורניה, לוס אנג'לס (UCLA) מספק משאבים פתוחים לחוקרים לבנות מיניסקופים בעצמם. V3 UCLA Miniscope הוא אחד המיניסקופים הפופולריים ביותר בקוד פתוח הנמצאים כיום בשימוש. הוא מאפשר הדמיה של הארעיות הפלואורסצנטית הנפלטת מתאי עצב מהונדסים גנטית דרך עדשה אובייקטיבית המושתלת בקליפת המוח השטחית (מערכת בעלת עדשה אחת), או באזורים עמוקים במוח באמצעות שילוב של עדשת ממסר המושתלת במוח העמוק ועדשה אובייקטיבית המעוגנת מראש במיניסקופ כדי לצפות בתמונה המועברת (מערכת בעלת שתי עדשות). אפילו בתנאים אופטימליים (כאשר תאי עצב מבטאים מחוונים פלואורסצנטיים ועדשת הממסר הושתלה כראוי), שינוי נפח של מלט השיניים בין לוחית הבסיס לבין חיבורו לגולגולת בעת ריפוי צמנטי יכול לגרום לחוסר התאמה עם מרחק שונה בין עדשת המטרה לעדשת הממסר, וכתוצאה מכך איכות התמונה ירודה. לוח בסיס הוא לוח המסייע להרכיב את המיניסקופ על הגולגולת ומקבע את מרחק העבודה בין עדשת המטרה לעדשת הממסר. לפיכך, שינויים בנפח הצמנט הדנטלי סביב לוחית הבסיס משנים את המרחק בין העדשות. הפרוטוקול הנוכחי נועד למזער את בעיית חוסר ההתאמה הנגרמת כתוצאה משינויי נפח בצמנט הדנטלי. הפרוטוקול מפחית את חוסר ההתאמה על ידי בניית בסיס ראשוני של מלט דנטלי במהלך השתלת עדשת ממסר. זמן ההחלמה לאחר ההשתלה מספיק לביסוס של צמנט דנטלי כדי לרפא את לוחית הבסיס לחלוטין, כך שניתן יהיה לקבע את פלטת הבסיס על פיגום זה באמצעות כמה שפחות מלט חדש. במאמר הנוכחי נתאר אסטרטגיות לציפוי בסיס בעכברים כדי לאפשר הדמיה של פעילות עצבית עם עדשה אובייקטיבית המעוגנת במיניסקופ.
מבוא
כתבי פעילות פלואורסצנטית אידיאליים להדמיה של הפעילות העצבית מכיוון שהם רגישים ויש להם טווחים דינמיים גדולים 1,2,3. לכן, מספר גדל והולך של ניסויים משתמשים במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות ישירות בפעילות העצבית 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים שבוצעו במחקר זה אושרו על ידי הוועדה הלאומית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת טייוואן (אישור מספר: NTU-109-EL-00029 ו- NTU-108-EL-00158).
1. הערכת שינוי נפח של צמנט דנטלי
הערה: שינויים בנפח הצמנט הדנטלי מתרחשים במהלך תהליך הריפוי. בדוק את שינויי הנפח של צמנט דנטלי לפני ההשתלה וציפוי הבסיס. חוקרים יכולים לבדוק כל מותג של מלט דנטלי ולהשתמש במותג עם שינוי הנפח הנמוך ביותר כדי לקבע את לוח הבסיס. דוגמה לכך מוצגת באיור 3.
- שוקלים 0.5 גרם מכל אבקת מלט דנטלית ומערבבים אותה עם התמיסה המתאימה לה (1 מ"ל).
הערה: יחס אבקה/נוזל המומלץ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הערכת שינוי נפח הצמנט הדנטלי
מכיוון שנפח הצמנט הדנטלי משתנה במהלך תהליך הריפוי, זה עשוי להשפיע באופן משמעותי על איכות ההדמיה, בהתחשב בכך שמרחק העבודה של עדשת GRIN הוא בערך 50 עד 350 מיקרומטר 4,8. לכן, שני צמנטים דנטליים זמינים מסחרית נבדקו במקרה זה, טמפרון וטוקוסו, לפני הליך ההשתלה וציפוי הבסיס (איור 5). תחילה נבדקו סרטונים כדי לקבוע אם המלטים התכווצו ולאחר מכן השוו את נפחי המלט כאשר התייבשו לחלוטין. אותו ריכוז ונ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הדו"ח הנוכחי מתאר פרוטוקול ניסויי מפורט עבור חוקרים המשתמשים במערכת UCLA Miniscope בעלת שתי עדשות. הכלים שתוכננו בפרוטוקול שלנו הם זולים יחסית לכל מעבדה המעוניינת לנסות הדמיית סידן in vivo . פרוטוקולים מסוימים, כגון הזרקה ויראלית, השתלת עדשות, ציפוי בסיס דמה וציפוי בסיס, יכולים לשמש גם עבור גרסאות אחרות של מערכת המיניסקופים כדי לשפר את שיעור ההצלחה של הדמיית סידן. מלבד בעיות כלליות בהזרקה ויראלית, והשתלת עדשה שיש לתקן ללא קשר לגרסת המיניסקוף, המבנה של לוח הבסיס של UCLA עלול לגרום לשינוי מיקום, מה שיכול להוביל למ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
זה לא מחקר שנתמך על ידי התעשייה. המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים כספיים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי משרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן (108-2320-B-002 -074, 109-2320-B-002-023-MY2).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מקדחה 0.7 מ"מ | #19008-07 | כלים מדעיים עדינים; ארה"ב | לניתוח |
| 0.1– 10 μ l קצות פיפטה | 104-Q; QSP | פישר סיינטיפיק; סינגפור | לבדיקת צמנט דנטלי |
| 20 G IV cathater | #SR-OX2032CA | Terumo Corporation; טוקיו, יפן | לניתוח |
| מחט 27 גרם | AGANI, AN*2713R | Terumo Corporation; טוקיו, יפן | לניתוח |
| AAV9-syn-jGCaMP7s-WPRE | #104487-AAV9; 1.5*10^13 | Addgene הכנה ויראלית; MA, ארה" | ב להזרקה ויראלית |
| אטרופין סולפט | Astart; שינג'ו, טייוואן | לניתוח/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס | |
| בסיס V3 | http://miniscope.org | לציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס | |
| BLU TACK | #30840350 | בוסטיק; צ'לסי, מסצ'וסטס, ארה"ב | חימר דביק רב פעמי; לניתוחים/ציפוי דמה/ציפוי בסיס |
| רונגור פרידמן | 13 ס"מ | דינר; טוטלינגן, גרמניה | על ציפוי בסיס |
| בופרנורפין | אינדיביור; בריטניה | לניתוח | |
| קרפרופן | רימדיל | זואטיס; אקסטון, הרשות הפלסטינית | משככי כאבים |
| Ceftazidime | טייוואן ביוטק; טייוואן | למנוע זיהום | |
| רכישת נתונים PCB עבור UCLA Miniscope | שנרכש ב-https://www.labmaker.org/collections/neuroscience/products/data-aquistion-system-daq | לציפוי בסיס | |
| סט צמנט דנטלי | Tempron | GC Corp; טוקיו, יפן | לבדיקת צמנט דנטלי |
| סט צמנט דנטלי | Tokuso Curefast | Tokuyama Dental Corp.; טוקיו, יפן | לבדיקת מלט שיניים/ניתוחים/ציפוי בסיס/ציפוי בסיס דמה |
| תקן מעבדה כפולה עם מתאמי עכבר וחולדה | #51673 | Stoelting Co; אילינוי, ארה" | ב לניתוח/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס |
| משחת | אלקון; ז'נבה, שוויץ | לניתוח/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס | |
| איבופרופן | יונגשין; | משככי כאבים | |
| Isoflurane | Panion & BF ביוטק בע"מ; טאויואן, טייוואן | לניתוחים/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס | |
| Inscopix | nVista System | Inscopix; פאלו אלטו, קליפורניה | להשוואה עם V3 UCLA Miniscope |
| Ketamine | Pfizer; ניו יורק, ניו יורק | להמתת חסד | |
| מלח רגילים | לניתוח | ||
| מהדקי מיקרו בולדוג | 12.102.04 | דימדו; טוטלינגן, גרמניה | להשתלת עדשות |
| מיקרוליטר מיקרו-מזרקים, 2.0 ומיקרו; L, 25 מד | #88400 | המילטון; Bonaduz, שוויץ | להזרקה ויראלית |
| דפוס גומי סיליקון | ZA22 Thixo | Zhermack; Badia Polesine, איטליה | עבור ציפוי בסיס דמה |
| עדשת אינדקס שיפוע אובייקטיבי (GRIN) # | 64519 | Edmund Optics; ניו ג'רזי, ארה"ב | עבור פרפילם דמה |
| #PM996 | Bemis; נינה, ארה"ב | ליניקה ניידת של ציפוי בסיס דמה | |
| #DF-750 | Doctor's Friend Medical Instrument Co., Inc., Taichung, טייוואן | לניתוח | |
| עדשת GRIN ממסר | #1050-002177 | Inscopix; פאלו אלטו, קליפורניה, ארה"ב | לציפוי בסיס/ציפוי בסיס דמה |
| ברגי עיגון נירוסטה | בקוטר 1.00 מ"מ, אורך כולל 3.00 מ"מ | לניתוח | |
| מיקרוסקופ סטריאו | #SL720 | Sage Vison; טאיפיי סיטי החדשה, טייוואן | לניתוח/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס |
| מכשיר סטריאוטקסי | #51673 | Stoelting; IL, ארה"ב | לניתוח/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס |
| UV Cure Adhesive | #3321 | Loctite; Dü סלדורף, גרמניה | לבדיקת צמנט דנטלי |
| V3 UCLA Miniscope | שנרכש ביום https://www.labmaker.org/products/miniscope-complete-set-of-components | לניתוח/ציפוי בסיס דמה/ציפוי בסיס | |
| קסילזין | X1126 | סיגמא-אולדריץ'; סנט לואיס, מיזורי | להמתת |
| חסד תרסיס משאבת קסילוקאין 10% | AstraZeneca; Sö dertä lje, שבדיה | לניתוח |
מקורות
- Tian, L., Hires, S. A., Looger, L. L. Imaging neuronal activity with genetically encoded calcium indicators. Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (6), 647-656 (2012).
- Grienberger, C., Konnerth, A. Imaging calcium in neurons. Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).
- Dana, H., et a....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
