דגימת רקמת שומן תת-עורית אנושית באמצעות טכניקת שאיבת שומן קטנה

Summary

כתב היד והסרטון הנלווה אליו מדגימים טכניקת ביופסיה מלעורית לקבלת דגימות של רקמת שומן תת עורית מאזורים המקיפים את הטבור. שיטה זו היא דרך זולה ויעילה לחקור מגוון פרמטרים (למשל, ביטוי גנים או חלבונים, פעילות אנזימים, תכולת שומנים) בתוך רקמת השומן.

Abstract

מחקרים על רקמת שומן מועילים בהבנת מצבים מטבוליים ואחרים. רקמת שומן תת עורית אנושית נגישה. עם הכשרה מתאימה והקפדה על טכניקה אספטית, דגימות שומן תת עוריות ניתן להשיג בבטחה וביעילות בסביבה לא קלינית על ידי חוקרים. לאחר מתן הרדמה מקומית צידית לטבור, מחט 14 גרם המחוברת למזרק 5 או 10 מ"ל מוחדרת דרך העור לרקמה התת עורית. תחת יניקה, המזרק מועבר בתנועה הדדית, חיתוך כדי לבודד שברי רקמת שומן. משיכת הבוכנה מספיקה כדי להבטיח כי שברי רקמת השומן שואפים דרך המחט לתוך המזרק. ביופסיה בודדת יכולה לאסוף כ-200 מ"ג רקמה. טכניקת ביופסיה זו בטוחה מאוד הן למשתתפים והן לצוות המחקר. בעקבות הביופסיה, המשתתפים יכולים לחדש את רוב הפעילויות היומיומיות, אם כי הם צריכים להימנע משחייה ופעילויות מאומצות מדי במשך 48 שעות כדי למנוע דימום מוגזם. המשתתפים יכולים לעבור בבטחה 2 ביופסיות תוך יום אחד, כלומר ניתן ליישם את הטכניקה במחקרי התערבות חריפה לפני-אחרי.

Introduction

רקמת השומן יכולה לספק מידע שימושי על תפקוד חילוף החומרים של בני אדם. רקמת השומן התת עורית האנושית נגישה בקלות. טכניקה למיצוי רקמת שומן תת עורית תוארה לראשונה באמצע שנות ה -80¹; מאז, הפרוטוקול הראשוני שופר כדי להגדיל את התשואה ולשפר את הסבילות של משתתפי המחקר. רקמת שומן תת עורית ניתן לקבל מאתרים רבים, בדרך כלל מן glutei¹ ואזור הבטן². דגימות מהאחרונים עשויות להיות רצויות יותר מכיוון שהן מספקות מידע בעל ערך רב יותר בהקשרים הקשורים למחלות מטבוליות³.

ביופסיית רקמת שומן תת עורית בשיטת מיני-שאיבת שומן יכולה להתבצע בבטחה וביעילות במסגרת לא קלינית. לאחר הכשרה מתאימה על ידי רופא מוסמך ושימוש בטכניקה אספטית קפדנית, חוקרים יכולים לבצע ביופסיות אלה באופן שגרתי עם סיכון מינימלי הן למשתתפים והן לחוקרים. צוות הביופסיה חייב להיות מורכב משני אנשים לפחות: האדם שיבצע את הביופסיה ועוזר.

על האחראי על הביופסיה מוטלת המשימה לאשר את זהות המשתתף, לבדוק שהמשתתף יכול לעבור את ההליך בבטחה (ראה שלבי פרוטוקול 2.1-2.4 להלן), לוודא שהמשתתף מרגיש בנוח לאורך כל ההליך, להבטיח שמירה על טכניקה סטרילית לאורך כל ההליך, לבצע את ההליך ולספק למשתתף נהלים בעל פה ובכתב לאחר הטיפול. תפקידו של העוזר הוא לטפל ולעבד במהירות את רקמת השומן המתקבלת לצורך ניתוח ו/או אחסון מאוחרים יותר. העוזר גם עוזר בכך שהוא "הידיים הלא סטריליות" ומבטיח שהמשתתף יהיה רגוע לאורך כל ההליך. מטרת הסרטון והמאמר הזה היא לתאר את הליך הביופסיה שלב אחר שלב כדי להשיג בבטחה רקמת שומן תת עורית מאזור הבטן.

Protocol

הערה: ועדת המחקר הפולשני או הקליני של אוניברסיטת סטירלינג NHS אישרה את הליך הביופסיה המתואר להלן. כל המחקרים בהליך זה חייבים להיות מאושרים על ידי ועדת האתיקה העצמאית המתאימה. על לוקח הביופסיה להשלים הכשרה פורמלית בטכניקה המתוארת בהתאם לדרישות המוסד שלו. בדרך כלל, זה כרוך בהתבוננות בהדגמה של טכניקת ביופסיית רקמת השומן המתוארת על ידי רופא מוסמך, ולאחר מכן תרגול מפוקח. לאחר שהמתאמן ביצע 10 ביופסיות רקמת שומן בהתנדבות תחת פיקוח, הן ייבדקו על ידי רופא מוסמך כדי להבטיח ידע טוב ותרגול של ההליך. לאחר מכן, הרופא המוסמך מספק לאדם טופס בדיקה חתום.

1. הכנת חדר מעבדה

1. ודאו כי במעבדה יש חדר פרטי מתאים עם משטחים נקיים ולא נקבוביים הניתנים לניגוב ומיטה נקייה ונוחה (רצוי לא נקבובית) עליה יכול המשתתף לשכב בשכיבה. נקו את כל המשטחים הנדרשים להליך הביופסיה באמצעות תרסיס אתנול 70% ומגבות נייר נקיות. ספקו כריות או כריות נקיות כדי לתמוך במשתתף במידת הצורך.
2. שמור פחי סילוק חדים מתאימים ושקיות פסולת ביו-האזרד בהישג יד מהאזור שבו מתבצעת הביופסיה ובהישג יד של האדם הלוקח את הביופסיה.
3. הכינו את הציוד הדרוש להליך והכינו על עגלת רפואה כללית חדשה לפני שהמשתתף מגיע למעבדה (איור 1). לקבלת רשימה מלאה של חומרים מתכלים הנדרשים, עיין בטבלת החומרים.

2. הכנת המשתתפים

1. יש לוודא שכל המשתתפים נותנים הסכמה מדעת בכתב לפני ביצוע ההליך בהתאם לפרוטוקולים הנדרשים על ידי ועדת האתיקה העצמאית של המוסד. בנוסף, בקשו מהמשתתפים למלא שאלון כתוב כדי לוודא שהם אינם אלרגיים לחומרים המשמשים בהליך (כלומר, ניקל, כרום, הרדמה מקומית, יוד, רכיכות ופלסטרים).
2. אשר את זהות המשתתף. ודא שהמשתתף מבין את ההליך שיש לבצע ואת ההשפעות המשניות האפשריות, כולל שטפי דם, כאבים וזיהום (טבלה 1). לאסוף הסכמה בעל פה בנוסף להסכמה מדעת שהושגה בעבר בכתב.
3. תאר למשתתף כיצד יבוצע ההליך, תוך שימת דגש על אופן מתן חומר ההרדמה והביופסיה עצמה. ודא שהמשתתף מרגיש בנוח עם ההמשך.
   הערה: הרדמה תת עורית מקומית תיצור תחושת עקצוץ, בדומה לעקיצת דבורה בעלת משך זמן קצר. משתתפים רבים מדווחים על מתן ההרדמה כחלק הכי לא נוח בטכניקה. לאחר שההרדמה נכנסה לתוקף, המשתתף צריך להרגיש לא יותר מתחושת משיכה קלה במהלך הביופסיה.
4. ודא שלמשתתף אין אלרגיות להרדמה המקומית (במיוחד מסוג אמינו-אמיד, אם משתמשים בלידוקאין או דומה), מתכות מסוימות (ניקל וכרום) ורכיכות (אם משתמשים בתמיסות מבוססות יוד). בנוסף, ודא שהמשתתפים אינם נוטלים כל צורה של תרופות נוגדות קרישה.
5. ספק למשתתף הזדמנות ללכת ולרוקן את שלפוחית השתן שלו במידת הצורך, כדי להבטיח שהוא לא יצטרך להפריע להליך או לחוות אי נוחות מיותרת בשלב 4.1.

3. הליך ביופסיה - הנחיות ללוקח הביופסיה

1. לאחר שהמשתתף שוכב בתנוחת שכיבה, זהה את אתר הביופסיה כ 5-10 ס"מ לרוחב הטבור.
   הערה: אם המשתתף עובר מספר ביופסיות באותו יום, זהה אתרי ביופסיה בצדדים מנוגדים של הטבור עבור כל ביופסיה. זה יבטיח מרחק מקסימלי בין כל אתר ביופסיה.
2. יש לשטוף ידיים עם סבון ומים חמים על פי הנחיות רפואיות סטנדרטיות⁴.
3. הניחו את היריעה הסטרילית על העגלה או פינת העבודה הנקייה, תוך הקפדה לגעת רק בקצוות החיצוניים של הסדין.
4. ללבוש כפפות כירורגיות סטריליות באמצעות טכניקה אספטית נכונה. בקש מהעוזר לפתוח את שאר הציוד באופן כזה שהוא ייפול על הסדין הסטרילי המוכן מבלי לגעת / לזהם את הציוד. ודא שהסייען מקפיד לא לגעת בפריטים בעת הסרת כלים מהעטיפות הסטריליות שלהם.
5. הנחו את העוזר לפזר כמות קטנה של תמיסה מבוססת יוד על גזה סטרילית כלשהי (מבלי להרוות יתר על המידה את הגזה) על משטח העבודה.
6. יש לעקר כ-5-10 ס"מ² סביב אתר הביופסיה הנבחר באמצעות גזה סטרילית ותמיסה מבוססת יוד. ודא שהעור מנוקה בתנועה ספירלית הנעה החוצה מאתר הביופסיה המוצע. חזור על הליך ניקוי העור פעמיים. הסר עודפי נוזלים (למשל, נוזל מאזור סטרילי) על ידי ניגוב עם גזה סטרילית טרייה.
7. יחד עם העוזר, לאשר בעל פה את התוכן של בקבוקון ההרדמה המקומית (2% לידוקאין בפרוטוקול זה) וכי זה בתוך תאריך התפוגה שלה. הנחו את העוזר להחזיק את הבקבוקון הפתוח הפוך ולשאוב 5 מ"ל של הרדמה מקומית לתוך מזרק, באמצעות מחט של 21 גרם. יש להשליך את המחט לפח החד, ולוודא שהמזרק נקי מבועות אוויר.
8. החל מחט 26 גרם על המזרק לגרש כל בועות אוויר. בעדינות לצבוט את עור הבטן ואת רקמת השומן, להזיז אותו מן דופן הבטן. לאחר מכן, הכנס את המחט אופקית לתוך הרקמה התת עורית בזווית שאינה עולה על 10° ביחס לפני השטח של העור.
   1. למשוך את הבוכנה של מזרק עוד 0.5 מ"ל (כדי להבטיח שהמחט לא תהיה בכלי דם). אם הדם מופיע במזרק, לסגת ולהכניס מחדש את המחט בזווית אחרת.
   2. יש להרים שכבה בקוטר 2-4 מ"מ כדי להרדים את אזור ההחדרה.
   3. קדמו את המחט לתוך הרקמה התת-עורית ותנו ~1 מ"ל של לידוקאין בתבנית בצורת מניפה (איור 2), תוך הקפדה על משיכת הבוכנה בכל פעם לפני הזרקת חומר ההרדמה.
   4. הסר והשלך את מחט 26 G, מרח מחט של 21 G על המזרק, גרש את כל בועות האוויר, ונהל את ~ 4 מ"ל הנותרים של לידוקאין בתבנית בצורת מאוורר (איור 2), תוך הקפדה למשוך את הבוכנה בכל פעם לפני הזרקת חומר ההרדמה.
9. יש להמתין כ-5 דקות עד שההרדמה המקומית תיכנס לתוקף. השתמש באזמל סטרילי כדי לדחוף בעדינות את אזור הביופסיה ל- i) לוודא שההרדמה המקומית נכנסה לתוקף ו- ii) לזהות את גבולות האזור המורדם. במידת הצורך, המתן דקה או שתיים נוספות ובצע הערכה מחדש.
10. לאחר שביעות רצון מכך שההרדמה המקומית עובדת, צבטו בעדינות את העור ואת רקמת השומן (כמו בשלב 3.8) והשתמשו באזמל סטרילי כדי ליצור נקב קטן של 1-2 מ"מ בעור.
    הערה: זה רק צריך להיות גדול מספיק כדי להקל על הכניסה של מחט 14 גרם חייב להיות קטן מספיק כי אין צורך בתפר כדי לסגור אותו. זה נפוץ עבור כמה דימום להתרחש מנקודה זו ואילך, אשר ניתן לשלוט עם חתיכת גזה סטרילית.
11. ראשית, להחיל מחט 14 גרם על מזרק 5 או 10 מ"ל. לאחר מכן, תוך צביטה עדינה של העור ורקמת השומן, מחדירים בהדרגה את המחט דרך הנקב לתוך רקמת השומן בערך במרכז האזור המרדים ובזווית שאינה עולה על 10° ביחס לפני העור.
    הערה: עבור כל המקרים של התקדמות מחט בשלב 3.11, יש לשמור על זווית מזרק של לא יותר מ-10°.
    1. החל יניקה על ידי משיכת הבוכנה בערך 2.5 מ"ל סימן. קח את הביופסיה על ידי הזזת המחט בתנועה מהירה אחורה וקדימה כדי לפרוס שברי רקמת שומן. לאחר כ -30 שניות, סובבו את המחט והמזרק דרך 90° וחזרו על הליך זה כדי לשבור את שברי רקמת השומן, אשר לאחר מכן שואפים לתוך המזרק על ידי היניקה.
       הערה: ניתן להשתמש בגדלים אחרים של מזרק. חיוני שהחוקר יבחר גודל מזרק המאפשר גם אחיזה טובה במזרק וגם שמירה נוחה על נסיגת הבוכנה לצורך תחזוקת הוואקום. קיימים מזרקי נעילה המתחזקים את הוואקום, מה שיכול לשפר את השליטה במחט ולהפחית את הקושי הנתפס עבור לוקח הביופסיה ⁵.
    2. לאחר כ 45-60 שניות של שלב 3.11.1, להסיר את המחט ולרוקן את תוכן המזרק על שכבת גזה המכסה סירת שקילה. ודא כי לומן של המחט פונה כלפי מטה כדי למנוע התזת דם פוטנציאלית.
    3. חזור על שלבים 3.11.1 ו- 3.11.2 למשך 3 פעמים לכל היותר. בדוק שהמשתתף מרוצה להמשיך לפני כל חזרה על ההליך לעיל.
    4. בעת ביצוע שלבים 3.11.1 ו- 3.11.2, הנחו את העוזר לעבד ולהכין את הדגימות לניתוח/אחסון (ראה סעיף 5).

4. הליך לאחר ביופסיה

1. לאחר שהתקבלה דגימה משביעת רצון (כלומר, ~ 200 מ"ג) של רקמת שומן, הנח 1-2 שכבות של גזה סטרילית מעל פצע הניקוב, ולאחר מכן הנח חבילת קרח על אלה, והפעל לחץ מוצק במשך כ -10 דקות כדי לגרום למוסטזיס.
2. כאשר מתרחשת המוסטזיס, נגבו כל תמיסה על בסיס יוד / דם מיובש עם גזה סטרילית, ומרחו על האתר חבישת פצע דבק עם פד סופג. בדקו שהמשתתף מרגיש טוב וספקו הוראות בעל פה ובכתב על הטיפול באתר הביופסיה.
   1. הדגישו כי המשתתפים צפויים להפגין שטפי דם בימים הקרובים. הודע להם שזה עשוי להיות משמעותי, אם כי זה ממוזער על ידי חבילת הקרח בשלב 4.1 וייפתר ללא השפעות מתמשכות.
   2. מומלץ כי במידה והמשתתפים חשים אי נוחות/כאב לאחר שחומר ההרדמה נשחק, עליהם ליטול משככי כאבים כגון אקמול בהתאם להוראות על החפיסה, אך להימנע מנטילת משככי כאבים שיש בהם פעילות נוגדת קרישה (למשל, איבופרופן או אספירין).
   3. הסבירו כי נפיחות, אדמומיות או פריקה מאתר הביופסיה הם אינדיקציות לזיהום. במקרה הלא סביר שבו מופיעים סימנים או תסמינים אלה, הנחו את המשתתף לפנות בדחיפות לקבלת ייעוץ רפואי מרופא או מיחידת תאונות וחירום מקומית. יש ליידע את המשתתף כי אם הוא פונה לייעוץ רפואי, עליו גם להודיע על כך לצוות המחקר.
      הערה: כצוות מחקר, לא לוקח הביופסיה ולא העוזר יכולים לספק ייעוץ או טיפול רפואי; עם זאת, חשוב שצוות המחקר יהיה מודע ויתעד את כל המקרים של סיבוכים כתוצאה מהליך הביופסיה.
   4. מומלץ למשתתפים להימנע משחייה או מפעילות מאומצת מדי במשך 48 שעות עד לסגירת אתר החתך.
3. יש לפנות את כל החדים המשומשים והחומרים המזוהמים לחדים ייעודיים ו/או למיכלי פסולת קליניים.
4. נקו את כל המשטחים המשמשים בהליך הביופסיה באמצעות תרסיס אתנול 70% ומגבות נייר נקיות. יש להניח פריטי מצעים חד פעמיים ולא חד פעמיים בשקיות קליניות מתאימות לסילוק או לניקוי, בהתאמה.

5. עיבוד מדגם - הוראות לעוזר

1. השתמשו בפינצטה סטרילית וב-0.9% מלח כדי לשטוף את דגימת רקמת השומן כדי להסיר מזהמים נראים לעין (כלומר, דם, כלי דם). לאחר מכן, שקלו את דגימות רקמת השומן באמצעות קשקשים דיגיטליים. פצלו את הרקמה לחתיכות בגודל מתאים לניתוח במורד הזרם והכניסו אותן לצינורות אחסון מתאימים באמצעות פינצטה סטרילית. לטבול את הצינורות המכילים ביופסיות רקמת השומן בחנקן נוזלי ב -190 °C כדי להקפיא הבזק עד שהדגימות מאוחסנות ב -80 °C.
   הערה: על המסייע להשלים את עיבוד הדגימה במהירות האפשרית, בדרך כלל תוך 3 דקות משאיפת הדגימה, כדי למזער את הפגיעה הפוטנציאלית בדגימה.

Results

הליך הביופסיה המתואר של רקמת השומן הוא טכניקה יעילה ובעלת סיכון נמוך עבור חוקרים להשיג דגימות רקמת שומן תת עורית ממתנדבים אנושיים. ביצענו 39 ביופסיות רקמת שומן תת עורית באמצעות ההליך המתואר ב-11 נשים בריאות במשקל תקין (גיל, 27.4 ± 3.3 שנים; מדד מסת גוף (BMI), 22.6 ± 1.5 ק"ג²). כל המשתתפים הגיעו למעבדה בין השעות 07:00-10:00 לאחר תקופת צום של 8-12 שעות. תפוקת הדגימה באמצעות הליך ביופסיה של רקמת שומן זו הייתה 192.0 ± 97.1 מ"ג (טווח = 32.8-393.6 מ"ג) (איור 4). לא ראינו קשר בין תפוקת ה...

Discussion

הפרוטוקול המתואר והווידאו המשויך אליו מספקים סקירה שלב אחר שלב של טכניקת שאיבת שומן זעירה לקבלת דגימות רקמת שומן תת עורית מאזור הבטן. קבוצת מחקר זו ביצעה בסך הכל 124 ביופסיות במשך 19 חודשים ללא תופעות לוואי בקרב המשתתפים. ההליך בטוח וקשור לסיכון מינימלי למשתתפים או לצוות הביופסיה, בתנאי שאמצעי הבטיחות המתוארים מתבצעים. טכניקה אספטית (כולל פתיחה וחלוקה של ציוד סטרילי מבלי לזהם אותם, הלבשה/הסרה מתאימה של כפפות סטריליות, היגיינת ידיים כללית) חייבת להישמר בכל עת על ידי החוקרים המבצעים את ההליך (כדי למזער את הסיכון לזיהום למש...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
פריט: 14 גרם מחט 14 גרם x 3 1/8 אינץ' 210 מ"מ x 80 מ"מ	B בראון	4665473	לכל ביופסיה: 1
פריט: 21 גרם מחט 21 גרם x 1 1/2 אינץ' 0.8 מ"מ x 38 מ"מ	טרומו	AN*2138R1	לכל ביופסיה:
2 פריט: 26 G<&br/> 26 גרם x 1/2 אינץ' מחט מיקרולנס 0.45 מ"מ x 13 מ"מ	BD	303800	לכל ביופסיה: 2
פריט: 5 מ"ל מזרק 5 מ"ל luer	DB plastipak	302187	לכל ביופסיה: 2
פריט: חבישת פצעים דביקה חבישה נגדית לאחר הניתוח 9.5 x 8.5	Smith & אחיין	6600709	לכל ביופסיה: 1
פריט: אזמל סטרילי חד פעמי אזמל חד פעמי להב סטרילי מס' 10	Swann Morton	/0501	לכל ביופסיה: 1
פריט: Icepack BlueDot חבילה לשימוש חוזר חם/קר 26.5 ס"מ x 13.0 ס"מ	NuCare	F711	לכל ביופסיה: פריט אחד
: תמיסת חיטוי על בסיס יוד Videne Ecolab	Videne	3030440	לכל ביופסיה: q.s
פריט: לידוקאין 2% w/o אפינפרין לידוקאין 2% הזרקה 5 מ"ל	B בראון	3558553	לכל ביופסיה: 5 מ"ל
פריט: כפפות לא סטריליות כפפות ניטריל רגישות ללא אבקה Starguard		Starguard SG-N-S	לכל ביופסיה: זוג
פריט: נתרן כלורי 0.9% נתרן כלריד 0.9% w/v עירוי תוך ורידי BP	BBraun	S8004-5384	לכל ביופסיה: ש.ס.
פריט: תמיסת ייצוב* תמיסת ייצוב RNAlater	ThermoFisher Scientific	AM7020	לכל ביופסיה: q.s
פריט: מלקחיים סטריליים מלקחיים סטריליים	Rocialle	RML109-006	לכל ביופסיה: 1
פריט: ספוגיות גזה סטריליות ספוגיות לא ארוגים סטריליות 7.5 x 7.5 ס"מ	Prestige	1860	לכל ביופסיה: 5
פריט: כפפות סטריליות כפפות רפואיות סטריליות ויניל רכות ללא אבקה	Prestige	S: P4301 M:P3302 L:P3301	לכל ביופסיה: זוג
פריט: צינורות מיקרוצנטריפוגה סטריליים 1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה סטריליים	StarLab	I1415-5510	לכל ביופסיה: q.s
פריט: גיליון סטרילי נייר לבן רגיל 90 x 90 ס"מ	Rocialle	RML 126-216	לכל ביופסיה: 1
פריט: סירת שקילה סירות בצורת יהלום	הית'רו סיינטיפיק		HS1427C לכל ביופסיה: 1
* מציין חומרים