מאמר שיטה

בידול מקרופאג' וקיטוב לפנוטיפ דמוי M2 באמצעות קו תאים דמוי THP-1 לוקמיה דמוי מונוציטים

31.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/62652

⸱

2 באוגוסט 2021

 ,  ,  ,  , 
1Price Institute of Surgical Research, Department of Surgery, University of Louisville

במאמר זה

סיכום

מקרופאגים דמויי M2 הקשורים לגידול (TAM) קשורים להתקדמות הגידול ולאבחנה לקויה בסרטן. פרוטוקול זה משמש כמדריך מפורט להבחנה וקיטוב של תאים דמויי THP-1 למקרופאגים דמויי M2 תוך 14 יום. מודל זה הוא הבסיס לחקור את ההשפעות האנטי דלקתיות של TAM בתוך microenvironment הגידול.

תקציר

מקרופאגים הקשורים לגידול (TAM) יכולים להחליף את הביטוי שלהם ואת פרופיל הציטוקינים שלהם על פי גירויים חיצוניים. פלסטיות יוצאת דופן זו מאפשרת ל- TAM להסתגל לשינויים מתמשכים בתוך מיקרו-סביבה של הגידול. מקרופאגים יכולים להיות בעיקר תכונות פרו דלקתיות (דמויי M1) או אנטי דלקתיות (דמויי M2) ויכולים לעבור ללא הרף בין שתי המדינות העיקריות הללו. מקרופאגים דמויי M2 בסביבת הגידול קשורים להתקדמות הסרטן ופרוגנוזה ירודה במספר סוגים של סרטן. שיטות רבות ושונות לגרימת בידול וקיטוב של תאי THP-1 משמשות לחקירת מנגנונים תאיים ובין תאיים והשפעות TAM בתוך המיקרו-סביבה של גידולים. נכון לעכשיו, אין מודל מבוסס לקיטוב מקרופאגים דמוי M2 באמצעות קו התא THP-1, ותוצאות פרופילי הביטוי והציטוקינים של מקרופאגים בשל גירויים במבחנה מסוימים משתנות בין מחקרים. פרוטוקול זה משמש הדרכה מפורטת כדי להבדיל בין תאים דמויי THP-1 מונוציט למקרופאגים M0 ולקטב עוד יותר תאים לתוך פנוטיפ דמוי M2 בתוך 14 ימים. אנו מדגימים את השינויים המורפולוגיים של תאים דמויי THP-1, מקרופאגים מובחנים ומקרופאגים מקוטבים דמויי M2 באמצעות מיקרוסקופיה קלה. מודל זה הוא הבסיס למודלים של קו התאים החוקרים את ההשפעות האנטי דלקתיות של TAM ואת האינטראקציות שלהם עם אוכלוסיות תאים אחרות של microenvironment הגידול.

מבוא

מקרופאגים הקשורים לגידול (TAM) ותפקידם בדלקת כרונית, תחילת הסרטן והתפתחות הגידול הם מטרות חשובות במחקר האחרון1,2. מונוציטים דם היקפיים המגויסים למיקרו-סביבה של הגידול המתפתח מבדילים למקרופאגים וניתן לקוטב לשני תתי סוגים עיקריים של מקרופאגים3. המקרופאג' המופעל קלאסית מייצג את הפנוטיפ דמוי M1 הפרו-דלקתי בעיקר ותת-סוג דמוי M2 המופעל לחילופין מראה מאפיינים אנטי דלקתיים בעיקר4. מקרופאגים יכולים לעבור באופן דינמי בין שני פנוטיפים עיקריים אלה בהתאם לחילוף החומרים התאי שלהם, עם תת-סוגים ביניים בעלי תכונות דלקתיות ואנטי דלקתיות5. TAM מייצג אוכלוסייה הטרוגנית של שני הפנוטיפים. פונקציה לקידום גידול ופרוגנוזה ירודה בסוגים שונים של סרטן קשורה במיוחד למקרופאגים דמויי M26,7,8.

הפרופילים התפקודיים של מקרופאגים והאינטראקציה שלהם עם תאים אחרים בתוך המיקרו-סביבה של הגידול הם מורכבים ומאתגרים ללכידה בסביבה המשתנה ללא הרף במהלך התפתחות גידול מתמשכת. קווי תאים יכולים לספק לאוכלוסיית תאים הומוגנית יכולת כדאיות יציבה בתרבות, אשר יכולה להקל על תהליך הדגמת מנגנונים תאיים ובין תאיים מוגדרים. קו התאים דמוי מונוציט THP-1 הוא מערכת מודל לגיטימית למונוציטים אנושיים ראשוניים9. קו תאים מונצח באופן ספונטני זה הושג מדם היקפי של תינוק בן שנה עם לוקמיה מונוציטיתחריפה 9,10. הבידול והקיטוב של תאי THP-1 דווחו על ידי מספר מחקרים ובוצעו בדרכים שונות מרובות11,12,13,14. הפעלה, ולכן, הקיטוב של מקרופאגים לתוך פנוטיפ דמוי M1 מלווה מנגנון ריבאונד אנטי דלקתי מפצה, קידום פנוטיפ דמוי M2 באמצעות ציטוקינים המיוצרים על ידי מקרופאגים דלקתיים, כגון אינטרלוקין 6 (IL-6) או itaconate15,16. זה עשוי לשמש כמנגנון שבירה כדי להחלשות תגובה דלקתית overshooting לאחר הפעלת התא17. תהליך ההבחנה והקיטוב של מונוציטים ותאים דמויי THP-1 לפנוטיפ אנטי דלקתי דמוי M2 מלווה בעצמו גם בגירויים פרו דלקתיים שיש להתגבר עליהם. תגובת ציטוקינים דלקתית יכולה להיגרם על ידי מתח מכני18, כגון שינוי מדיה כדי להזין מחדש את התאים, או הוספת תרכובות כימיות כדי להבדיל בין תאי THP-1, כגון פורבול 12-myristate 13-אצטט (PMA), ולזירוז ייצור של גורם נמק הגידול α (TNFα), אינטרלוקין 1β (IL-1β) או IL-619. פרופיל ביטוי ציטוקינים שונה זה כתגובה ל- PMA יכול להשפיע ולמנוע קיטוב מקרופאגים עוקב20. תקופות מנוחה נאותות, כפי שדווח בעבר לאחר טיפול PMA, לאפשר תגובות דלקתיות אלה כדי להקטין ולהקל על קיטוב התא לתוך פנוטיפ M2-כמו ברור21.

פרוטוקול זה מדגים שיטה להבדיל ולקטב תאים דמויי THP-1 לתוך פנוטיפ דמוי M2 של מקרופאגים בתוך 14 ימים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: מבט כולל על השלבים המתוארים בפרוטוקול זה מוצג באיור 1. קו תאי הלוקמיה דמוי המונוציט האנושי THP-1 נרכש. ניתוח חוזר טנדם קצר בוצע כדי לאמת את קו התא THP-1. בצע את כל השלבים בתנאים סטריליים. קו התא המונוציטי THP-1 גדל בהשעיה ואינו מתחבר למשטחי תרבית התא. דבקות יכולה להיגרם על ידי הבחנה מונוציטים לתאים דמויי מקרופאג 'באמצעות, למשל, מתח מכני או טיפול ספציפי עם PMA.

1. פולחן ותחזוקה של תאים דמויי THP-1 דמויי מונוציט

  1. הגדר שעון זמן ל- 150 s. הסר את הנקינה הקפואה המכילה את קו התא THP-1(שולחן החומרים)מהחנקן הנוזלי והפשירו אותו מיד באמבט מים נקי (37 מעלות צלזיוס). התחל את שעון השעון ברגע שהנק ויכניסו את הוויאל לאמבטיית המים. לשחרר את המכסה כדי לשחרר את הלחץ כי הוא בונה בשל תהליך ההפשרה אבל להבטיח כי פתיחת הצינור לא ליצור קשר עם המים, כדי למנוע זיהום. פרק הזמן האופטימלי להפשרת התאים נע בין 120-150 s. המשך להפשיר את השעיית התא עד שבב קרח בגודל של כ 4 מ"מ נשאר בתוך המשחקון; לאחר מכן, המשך לשלב הבא באופן מיידי.
  2. העבר את השלב הנוזלי של השעיית התא לצינור 15 מ"ל המכיל 9 מ"ל של מדיה צמיחה חמה (37 °C)(שולחן החומרים). לאחר מכן, להעביר 1 מ"ל של ההשעיה החמה של תא בינוני לתוך פקיעת THP-1 ובחזרה לתוך צינור 15 mL כדי להמיס את שבב הקרח הנותר לשטוף את הקרבון כדי להבטיח כי אין תאים נשארים מאחור.
  3. מערבבים את המתלים בעדינות על ידי צנרת למעלה ולמטה עם פיפטה 1000 μL. הסר מדגם קטן (כ 10 μL) כדי לספור את התאים עבור הכדאיות (באמצעות טריפן כחול עבור אי הכללה) בזמן שהם הסתובבו. ספין את השעיית התא החם ב 200 x g במשך 7 דקות ב 37 °C (50 °F).
  4. הסר את supernatant לחלוטין resuspend עם נפח מסוים של מדיום צמיחה חמה כדי להשיג צפיפות תא של 5 x 105/mL. מערבבים את המתלים בעדינות ומעבירים 22 מ"ל של נפח לתוך T-75 תאי תרבית צלוחיות(שולחן החומרים). יש לאחסן צלוחיות זקופות באינקובטור של 37 °C (5%), עם ריכוז של 5% פחמן דו-חמצני (CO2). החלף את מדיה הצמיחה כל 3-4 ימים.

2. זריעת תאי THP-1 ובידול למקרופאגים M0

  1. הכן את התא המכיל מדיום גדילה עם צפיפות התא המתאימה לתאי זרע בצפיפות של 3 x 105/ mL / גם לתוך לוחות תרבית תאים 24-well (שולחן החומרים). מערבבים את המדיום בעדינות ומכינים עליקוטים של 26 מ"ל, כל אחד לשים לתוך צינור 50 מ"ל. השתמש בכל 26 mL aliquot עבור זריעת התאים לתוך צלחת בהתאמה.
  2. מעבירים 1 מ"ל של המדיום המכיל תאים לכל באר של צלחת 24-well. מערבבים את המדיה בעדינות על ידי צנרת למעלה ולמטה בין העברות.
  3. הכן פתרון מלאי של PMA (להמיס 1 מ"ג של PMA ב 100 μL של דימתיל סולפוקסיד (DMSO) = ~ 16 mM פתרון של PMA ב- DMSO) ולדלל אותו עם תמיסת מלח חוצץ פוספט קר (PBS) לריכוז עבודה סופי של 10 ננוגרם / μL ממש לפני טיפול בתא(טבלה של חומרים). שמור את הפתרון על קרח ולהשתמש בו מיד. אל תפשיר מחדש. הוסף 100 ננוגרם של PMA לבאר. תן לכל צלחת תא לשבת באינקובטור ללא כל טיפול נוסף במשך 72 שעות.
  4. לאחר 72 שעות, להסיר את מדיום הצמיחה ולהחליף אותו עם 1 מ"ל של מדיום צמיחה טרי. אין לגעת בתחתית הבארות עם טיפים פיפטה. תן לתאים לנוח עוד 96 שעות באינקובטור.
  5. לאחר 96 שעות, חזור על שלב 2.4 (שינוי מדיה) ותן לתאים לנוח למשך 24 שעות נוספות.
    הערה: המקרופאגים M0 מוכנים כעת לשימוש לניסויים(איור 2). מיד לפני הטיפול בתאים כחלק מניסויים נוספים, שקול שינוי מדיה עם RPMI בלבד (טבלה של חומרים) מאז תוספי מדיה צמיחה יכול לגרום להפרעה עם ריאגנטים המתווספים לטיפול בתא. במקרה שיש צורך במקרו-אג'ים דמויי M2, המשך בסעיף 3.

3. קיטוב מקרופאגים M0 למקרופאגים דמויי M2

  1. הכן פתרון מלאי של IL-4 ו- IL-13 (להמיס 20 מיקרוגרם של IL-4 או IL-13 ב 200 μL של מים ללא גרעין) ולדלל אותו לריכוז עבודה סופי של 2 ננוגרם / μL עם PBS מיד לפני הטיפול בתא. שמור את הפתרון על קרח ולהשתמש בו מיד. אל תפשיר מחדש.
  2. הסר את מדיום הצמיחה ולהחליף אותו עם 1 מ"ל של מדיום צמיחה טרי. הוסיפו 20 ננוגרם של אינטרלוקין 4 (IL-4) ו-20 ננוגרם של אינטרלוקין 13 (IL-13) לבאר. תן לתאים לנוח 48 שעות באינקובטור.
  3. לאחר 48 שעות, חזור על שלב 3.2. תן לתאים לנוח עוד 48 שעות באינקובטור.
  4. הסר את מדיום הצמיחה ולהחליף אותו עם 1 מ"ל של מדיום צמיחה טרי. תן לתאים לנוח 48 שעות באינקובטור.
    הערה: מקרופאגים דמויי M2 מוכנים כעת לשימוש לניסויים (איור 2). מיד לפני הטיפול בתאים כחלק מניסויים נוספים, שקול שינוי מדיה עם RPMI בלבד (טבלה של חומרים) מאז תוספי מדיה צמיחה יכול לגרום להפרעה.

4. ניתוק וקצירת מקרופאגים לציטומטריית זרימה

הערה: השתמש בשיטה מכנית המשלבת הלם קר ושריטת תאים כדי לנתק ולקצור את המקרופאגים המקוטבים מלוחות לציטומטריית זרימה.

  1. הסר את התא החם בינוני ולהחליף אותו עם תערובת של PBS קר כקרח (ללא סידן ומגנזיום) ו 5% סרום בקר עוברי (FBS), 1 מ"ל לבאר. מיד לאחר מכן, מניחים את צלחת התא על קרח במשך 45 דקות. אין להניח את צלחת התא על קרח לפני המדיום התא החם מוסר, שכן זה יקטין את הכדאיות התא באופן משמעותי. שמור את התאים על קרח רק לאחר גרימת הלם קר עם תערובת PBS קר כקרח / 5% FBS.
  2. לאחר 45 דקות על קרח, לגרד את התאים באמצעות מגרדי תאים מיני(שולחן החומרים). מעבירים בעדינות את המקרופאגים המנותקים ב-PBS/5% FBS קרים לצינור 15 מ"ל. שמור את הצינור על קרח בכל עת עד שהתאים מוכתמים.
    הערה: מאגר שמונה בארות של תאים כדי להגיע ספירת תאים נאותה עבור כתמים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מקרופאגים דמויי M2 אופיינו, וקיטוב M2 אומת באמצעות ציטומטריית זרימה עבור אשכול של סמני בידול (CD) CD14, CD11b, CD80 (סמן דמוי M1) ו- CD206 (סמן דמוי M2). כתמי ציטומטריה זרימה בוצעו על פי הוראות היצרן. מקרופאגים נשטפו עם PBS / 5% FBS ודגרו עם בלוק קולטן Fcγ כדי למנוע כריכה לא מוגדרת. התאים הוכתמו אז בנוגדנים נגד CD14 ו-CD80 של עכברים מצומדים של PE, עם נוגדני CD11b אנטי-אנושיים מצומדים של PE, ועם נוגדני CD206 אנטי-אנושיים עם עכבר מצומדים PE-טנדם ו- IgG(טבלת חומרים) תואמתאיזוטיפ למשך 30 דקות ב-4 מעלות צלזיו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה על הבחנה וקיטוב תאים דמויי THP-1 בתוך 14 ימים מספק שיטה להשיג מקרופאגים עם פנוטיפ דמוי M2 נפרד עקב דגירה טיפול ארוכה של תאים עם תקופות מנוחה נאותה בין שלבים.

שלבים מסוימים הם קריטיים לפרוטוקול זה. זמן ההכפלה של מונוציטים THP-1 הוא כ 26 שעות. תאים יכולים להיות מפוצלים בצפיפות תא של 9 x 105/mL ויש לזרוע בצפיפות של 3 x 105/mL במהלך כל פיצול. הפיצול יכול להתבצע מבלי להסיר את כל הבינוניות (הישנות) של התאים - הזנה מחדש של התאים עם רק 50% מהמדיום הטרי אכן יכולה להובי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אינם מצהירים על ניגודי עניינים פוטנציאליים.

תודות

מכון המחירים למחקר כירורגי, אוניברסיטת לואיוויל, נתמך כלכלית על ידי ג'ון ו. פרייס וברברה דרופון אטווד פרייס טראסט. למקורות המימון לא היה כל תפקיד בעיצוב וביצוע המחקר וכן באיסוף, ניהול, ניתוח ופרשנות הנתונים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.4% טריפאן כחולVWR, רדנור, ארה"ב152-5061
צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"לארה"ב סיינטיפיק, אוקלה, ארה"ב1615-5510
10 מ"ל פיפט סרולוגיVWR, רדנור, ארה"ב  89130-898
1000 μ L TipOne טיפים פיפטארה"ב מדעי, אוקלה, ארה"ב1111-2821
15 מ"ל  צינור צנטריפוגהVWR, רדנור, ארה"ב89039-664
20 μ טיפים ל-TipOne פיפטארה"ב סיינטיפיק, אוקלה, ארה"ב1120-1810
200 μ טיפים לפיפט L TipOneארה"ב מדעית, אוקלה, ארה"ב1120-8810
25 מ"ל פיפט סרולוגיVWR, רדנור, ארה"ב  89130-900
5 מ"ל פיפט סרולוגיVWR, רדנור, ארה"ב  89130-896
צינור צנטריפוגה 50 מ"לVWR, רדנור, ארה"ב89039-662
תמיסת Accutase 500 מ"לסיגמא, סנט לואיס, ארה"בA6964
תמיסת אנטי-פטרייקה אנטיביוטית (100x), סיגמא מיוצבת, סנט לואיס, ארה"בA5955-100 מ"לעם 10,000 יחידות פניצילין, 10 מ"ג סטרפטומיצין ו-25 μ גרם אמפוטריצין B למ"ל, מסונן סטרילי, BioReagent, מתאים
לחממת CO2 קלסרתאים VWR, רדנור, ארה"בC170-ULE3
CytoOne T-75 ס"מ בקבוק עם מכסה מסנןארה"ב Scientific, אוקלה, ארה"בCC7682-4875
Dulbecco' s Phosphate Buffered Saline (PBS)Sigma, סנט לואיס, ארה"בD8537-500 מ"לPBS ללא סידן כלורי ומגנזיום כלוריד, מכיוון ששניהם יכולים לשנות את קיטוב המקרופאגים
צנטריפוגה Eppendorf 5804 R (מקוררת)Eppendorf, Enfield, ארה"ב-אתיל
אלכוהול (70%)--
FACSCalibur flow cytometerBD Biosciences, סן דייגו, ארה"ב-ציטומטר הזרימה פועל עם תוכנת CellQuest (BD Biosciences)
Falcon צלחת 24 בארותVWR, רדנור, ארה"ב353504
סרום בקר עוברי (FBS)ATCC, Manassas, ארה"ב30-2020
FITC עכבר אנטי-אנושי CD14BD Biosciences, סן דייגו, ארה"ב555397ציטומטריית זרימה, סמן תאים מיאלואידים (100 בדיקות)
FITC עכבר אנטי-אנושי CD80BD Pharmingen, סן דייגו, ארה"ב557226 ציטומטריית זרימה, סמן M1 (100 בדיקות)
FITC Mouse IgG1 κ בקרת איזוטיפBD Pharmingen, סן דייגו, ארה"ב555748ציטומטריית זרימה, בקרת איזוטיפ עבור CD80 (100 בדיקות)
FITC Mouse IgG2a, κ בקרת איזוטיפBD Biosciences, סן דייגו, ארה"ב553456ציטומטריית זרימה, בקרת איזוטיפ עבור CD14 (100 בדיקות)
Human BD Fc Block BDBiosciences, סן דייגו, ארה"ב564220ציטומטריית זרימה, בלוק Fc (0.25 מ"ג)
אינטרלוקין אנושי 13 (IL-13)R& D, מיניאפוליס, ארה"בIL-771-10 μ g
אינטרלוקין אנושי 4 (IL-4)מו"פ & D, מיניאפוליס, ארה"בSRP3093-20 μ g
ארון בטיחות ביולוגית Labconco (סדרת דלתא 36212/36213)Labconco, קנזס סיטי, ארה"
גלוטמין, 200 מ"מATCC, מנסס, ארה"ב30-2214
ליפופוליסכריד (LPS) מ- E. coli 0111: B4סיגמא, סנט לואיס, ארה"בL2630-100 מ"ג
מגרדי תאים מיניביוטיום, פרמונט, ארה"ב22003
נויבאואר המוציטומטרפישר סיינטיפיק, וולת'אם, ארה"ב02-671-5
ניקון אקליפס מיקרוסקופ הפוך TS100ניקון, מלוויל, ארה"ב-מים
נטולי נוקלאזInvitrogen, קרלסבד, ארה"בAM9937
מיקרוסקופ אור אולימפוס RH-2מיקרוסקופ מרכז, פיסטרוויל, ארה"ב40888
P10 פיפט משתנה- GilsonVWR, Radnor, ארה"ב76180-014
P1000 פיפט משתנה-GilsonVWR, רדנור, ארה"ב76177-990
P200 פיפט משתנה- GilsonVWR, Radnor, ארה"ב76177-988
PE עכבר אנטי-אנושי CD11bBD Biosciences, סן דייגו, ארה"ב555388ציטומטריית זרימה, סמן תאים מיאלואידים (100 בדיקות)
PE Mouse IgG1, κ בקרת איזוטיפBD Biosciences, סן דייגו, ארה"ב555749ציטומטריית זרימה, בקרת איזוטיפ עבור CD11b (100 בדיקות)
PE-Cy 5 עכבר אנטי אנושי CD206BD Pharmingen, סן דייגו, ארה"ב551136ציטומטריית זרימה, סמן M2 (100 בדיקות)
PE-Cy 5 עכבר IgG1 וקאפה; בקרת איזוטיפBD Pharmingen, סן דייגו, ארה"ב555750ציטומטריית זרימה, בקרת איזוטיפ עבור CD206 (100 בדיקות)
Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)Sigma, St. Louis, USAP8139
Powerpette Plus pipettorVWR, Radnor, USA75856-448
אמבט מים מדויק (דגם 183)Precision Scientific, שיקגו, ארה"ב66551
RPMI-1640 ATCC בינוני, מנסס, ארה"ב30-2001
קו תאים THP-1, אוסף תרביות מסוג אמריקאי (ATCC)ATCC, מנסס, ארה"בTIB-202
תרבית ב-L-תמיסת

מקורות

  1. Zhang, R., et al. Cancer-associated fibroblasts enhance tumor-associated macrophages enrichment and suppress NK cells function in colorectal cancer. Cell Death and Disease. 10 (4), 273(2019).
  2. Wang, J., Li, D., Cang, H., Guo, B. Crosstalk between cancer and immune cells: Role of tumor-associated macrophages in the tumor microenvironment. Cancer Medicine. 8 (10), 4709-4721 (2019).
  3. Soncin, I., et al. The tumor microenvironment creates a niche for the self-renewal of tumor-promoting macrophages in colon adenoma. Nature Communications. 9 (1), 582(2018).
  4. Mosser, D. M., Edwards, J. P. Exploring the full spectrum of macrophage activation. Nature Reviews Immunology. 8 (12), 958-969 (2008).
  5. Mazzone, M., Menga, A., Castegna, A. Metabolism and TAM functions-it takes two to tango. Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (4), 700-716 (2018).
  6. Eum, H. H., et al. Tumor-promoting macrophages prevail in malignant ascites of advanced gastric cancer. Experimental and Molecular Medicine. 52 (12), 1976-1988 (2020).
  7. Qian, B. Z., Pollard, J. W. Macrophage diversity enhances tumor progression and metastasis. Cell. 141 (1), 39-51 (2010).
  8. Scheurlen, K. M., Billeter, A. T., O'Brien, S. J., Galandiuk, S. Metabolic dysfunction and early-onset colorectal cancer - how macrophages build the bridge. Cancer Medicine. 9 (18), 6679-6693 (2020).
  9. Bosshart, H., Heinzelmann, M. THP-1 cells as a model for human monocytes. Annals of Translational Medicine. 4 (21), 438(2016).
  10. The American Type Culture Collection (ATCC). , Available from: https://www.atcc.org/products/all/TIB-202.aspx#generalinformation (2021).
  11. Baxter, E. W., et al. Standardized protocols for differentiation of THP-1 cells to macrophages with distinct M(IFNgamma+LPS), M(IL-4), and M(IL-10) phenotypes. Journal of Immunological Methods. 478, 112721(2020).
  12. Genin, M., Clement, F., Fattaccioli, A., Raes, M., Michiels, C. M1 and M2 macrophages derived from THP-1 cells differentially modulate the response of cancer cells to etoposide. BMC Cancer. 15, 577(2015).
  13. Starr, T., Bauler, T. J., Malik-Kale, P., Steele-Mortimer, O. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 13 (3), 0193601(2018).
  14. Lund, M. E., To, J., O'Brien, B. A., Donnelly, S. The choice of phorbol 12-myristate 13-acetate differentiation protocol influences the response of THP-1 macrophages to a pro-inflammatory stimulus. Journal of Immunological Methods. 430, 64-70 (2016).
  15. Yin, Z., et al. IL-6/STAT3 pathway intermediates M1/M2 macrophage polarization during the development of hepatocellular carcinoma. Journal of Cellular Biochemistry. 119 (11), 9419-9432 (2018).
  16. O'Neill, L. A. J., Artyomov, M. N. Itaconate: the poster child of metabolic reprogramming in macrophage function. Nature Reviews Immunology. 19 (5), 273-281 (2019).
  17. Luig, M., et al. Inflammation-induced IL-6 functions as a natural brake on macrophages and limits gn. Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1597-1607 (2015).
  18. Maruyama, K., Nemoto, E., Yamada, S. Mechanical regulation of macrophage function - cyclic tensile force inhibits NLRP3 inflammasome-dependent IL-1beta secretion in murine macrophages. Inflammation and Regeneration. 39, 3(2019).
  19. Gatto, F., et al. PMA-Induced THP-1 Macrophage Differentiation is Not Impaired by Citrate-Coated Platinum Nanoparticles. Nanomaterials (Basel). 7 (10), (2017).
  20. Maess, M. B., Wittig, B., Cignarella, A., Lorkowski, S. Reduced PMA enhances the responsiveness of transfected THP-1 macrophages to polarizing stimuli. Journal of Immunological Methods. 402 (1-2), 76-81 (2014).
  21. Daigneault, M., Preston, J. A., Marriott, H. M., Whyte, M. K., Dockrell, D. H. The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages. PLoS One. 5 (1), 8668(2010).
  22. Raggi, F., et al. Regulation of human macrophage M1-M2 polarization balance by hypoxia and the triggering receptor expressed on myeloid cells-1. Frontiers in Immunology. 8, 11097(2017).
  23. Neutelings, T., Lambert, C. A., Nusgens, B. V., Colige, A. C. Effects of mild cold shock (25 degrees C) followed by warming up at 37 degrees C on the cellular stress response. PLoS One. 8 (7), 69687(2013).
  24. Kurashina, Y., et al. Enzyme-free release of adhered cells from standard culture dishes using intermittent ultrasonic traveling waves. Communications Biology. 2, 393(2019).
  25. Chen, S., So, E. C., Strome, S. E., Zhang, X. Impact of Detachment Methods on M2 Macrophage Phenotype and Function. Journal of Immunological Methods. 426, 56-61 (2015).
  26. Bailey, J. D., et al. Isolation and culture of murine bone marrow-derived macrophages for nitric oxide and redox biology. Nitric Oxide. 100-101, 17-29 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

M2THP 1CD14CD2064

מאמרים קשורים