הקמת מערכת אקולוגית של תמנון למחקר ביו-רפואי וביו-הנדסה

סיכום

הבנת המבנים הפיזיולוגיים והאנטומיים הייחודיים של תמנונים יכולה להשפיע מאוד על המחקר הביו-רפואי. מדריך זה מדגים כיצד להקים ולתחזק סביבה ימית כדי להכיל מין זה וכולל הדמיה חדשנית וגישות אנליטיות כדי לדמיין את האנטומיה והתפקוד של מערכת העצבים של התמנון.

תקציר

התפתחויות רבות במחקר הביו-רפואי הושפעו מגילוי מנגנונים אנטומיים ותאיים התומכים בתפקודים ספציפיים במינים שונים. התמנון הוא אחד מאותם בעלי חיים יוצאי דופן שהעניקו למדענים תובנות חדשות על תחומי מדעי המוח, רובוטיקה, רפואה רגנרטיבית ותותבות. מחקר עם מין זה של צפלופודים דורש הקמת מתקנים מורכבים וטיפול נמרץ הן לתמנון והן למערכת האקולוגית שלו שהיא קריטית להצלחת הפרויקט. מערכת זו דורשת מערכות סינון מכניות וביולוגיות מרובות כדי לספק סביבה בטוחה ונקייה עבור החיה. יחד עם מערכת הבקרה, תחזוקה וניקוי שגרתיים מיוחדים נדרשים כדי לשמור ביעילות על המתקן פועל לטווח ארוך. מומלץ לספק סביבה מועשרת לבעלי חיים אינטליגנטיים אלה על ידי שינוי הנוף של הטנק, שילוב מגוון טרף, והכנסת משימות מאתגרות עבורם לעבוד. התוצאות שלנו כוללות MRI והדמיה אוטופלואורסצנטית לכל הגוף, כמו גם מחקרים התנהגותיים כדי להבין טוב יותר את מערכת העצבים שלהם. לתמנונים יש פיזיולוגיה ייחודית שיכולה להשפיע על תחומים רבים במחקר הביו-רפואי. לספק להם מערכת אקולוגית בת קיימא הוא הצעד המכריע הראשון בחשיפת היכולות הייחודיות שלהם.

מבוא

מושגים חדשים במחקר ביו-רפואי ובהנדסה ביו-רפואית מושפעים לעתים קרובות מזיהוי אסטרטגיות ספציפיות שיש למינים ביולוגיים כדי להתמודד עם תנאים ואתגרים סביבתיים ופיזיולוגיים. לדוגמה, הבנת תכונות הפלואורסצנטיות בגחליליות הובילה לפיתוח חיישנים פלואורסצנטיים חדשים שיכולים לדווח על פעילות תאית באורגניזמים מודל ^אחרים1; זיהוי תעלות יונים המופעלות על ידי אור באצות הובילה להתפתחות של תאית וטמפורלית ספציפית אור מבוסס אור-neuromodulation2,3,4,5; גילוי חלבונים שפמנון זכוכית המנווטים על פי השדה המגנטי של כדור הארץ הוביל להתפתחות של נוירומודולציה מגנטית-מבוססת6,7,8,9,10,11; הבנת רפלקס הסיפון באפליסיה סייעה להבנת הבסיס התאי להתנהגות12,13,14.

החוקרים ממשיכים להרחיב על ההנדסה הביולוגית הנוכחית וארגז הכלים הפילוגנטי על ידי ניצול נקודות החוזק הייחודיות ונקודות המבט החדשניות על פונקציות פיזיולוגיות שמינים מעבדה לא קונבנציונליים מחזיקים. סוכנויות פדרליות מתחילות לתמוך בקווי מחקר אלה על ידי מימון עבודה חדשנית המבוצעת על מינים מגוונים.

סוג אחד של בעלי חיים בעלי יכולות אנטומיה והתחדשות ייחודיות, כמו גם השליטה הסתגלותית של כל אחת מזרועותיו, ביולוגים ומהנדסים מרתקים, וקהלים שובי לב מכל חלקי החברה הוא התמנון ¹⁷. ואכן, היבטים רבים של הפיזיולוגיה וההתנהגות של התמנון נחקרו בעשורים האחרונים15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 . עם זאת, ההתפתחויות האחרונות בביולוגיה מולקולרית ואולוציונית, רובוטיקה, הקלטת תנועה, הדמיה, למידת מכונה ואלקטרופיזיולוגיה מאיצות תגליות הקשורות לפיזיולוגיה והתנהגות תמנון ומתרגמות אותן לאסטרטגיות ביו-הנדסה חדשניות27,28,29,30,31,32,33,34,35 36,37,38,39.

כאן אנו מתארים כיצד להקים ולתחזק גידול תמנון, אשר יהיה עניין ורלוונטי למדענים ומהנדסים מרקעים שונים, תחומי עניין מדעיים, ומטרות. עם זאת, התוצאות שלנו מתמקדות ביישום תמנונים במדעי המוח ובמחקר הנדסה עצבית. לתמנון מערכת עצבים מפותחת מאוד עם 45 מיליון נוירונים במוח המרכזי, 180 מיליון נוירונים באונות האופטיות, ו-350 מיליון נוירונים נוספים בשמונת חבלי צירי וגרעינים היקפיים; לשם השוואה, לכלב יש מספר דומה של נוירונים וחתול רק חצי ^ממנו40. שלא כמו מערכת העצבים החולייתית, ישנם רק סיבים 32K efferent ו 140K afferent המחברים את מיליוני הנוירונים במוח התמנון למיליוני נוירונים בכל אחד מהסיבים ציריים של זרועם40,41,42. סיבים יחסית אלה יחסית מחוברים מצביעים על כך שרוב הפרטים לביצוע התוכניות המוטוריות מבוצעים בלב צירי עצמו, תוך שים דגש על השליטה העצבית המופצת באופן ייחודי שיש לתמנונים. לזרועות התמנון יש שליטה מוטורית עדינה ויוצאת דופן המאפשרת להם מיומנויות מניפולציה כגון פתיחת מכסי צנצנת, גם כאשר הם נמצאים בתוך המיכל. יכולת מוטורית מפותחת זו ייחודית לסוג של צפלופודים (תמנון, דיונון ודיונונים)⁴³.

ואכן, באמצעות מאות מיליוני שנות אבולוציה, פיתח התמנון מערכת גנום ופיזיולוגית יוצאת דופן ומתוחכמת43,44, שהעניקה השראה להתפתחות ולהתקדמות חדשות בתחומי המדע וההנדסה. לדוגמה, תיקון דבק עמיד במים המבוסס על המבנה האנטומי של פראיירי התמנון יכול להיצמד למשטחים רטובים ^{ויבשים45}; חומר הסוואה סינתטי בהשראת עור ההסוואה של התמנון יכול להפוך משטח שטוח ודו-ממדי למשטח תלת מימדי עם בליטות ^{ובורות46}. רובוטים רכים ואוטונומיים זעירים (כלומר, אוקטובוטים) שבעתיד יוכלו לשמש ככלים כירורגיים בתוך ^הגוף47; וזרוע (כלומר, OctoArm) המחוברת לרובוט דמוי ^טנק48 פותחו גם הם. מינים רבים של תמנונים משמשים במחקר ביו-רפואי למשל, תמנון וולגאריס, תמנון סיננסיס, אוקטופוס variabilis, ו תמנון bimaculoides (O. bimaculoides); O. וולגרי ו O. bimaculoides להיות הנפוץ ביותר 34,49,50. הרצף האחרון של גנומים תמנון שונים עושה סוג זה של עניין מיוחד ופותח גבולות חדשים במחקר תמנון34,43,51,52.

O. bimaculoides המשמשים בהקמה שלנו הוא מין בגודל בינוני של תמנון, שהתגלה לראשונה בשנת 1949, שניתן למצוא במים רדודים מול חופי צפון מזרח האוקיינוס השקט ממרכז קליפורניה לדרום חצי האי באחה ^{קליפורניה17}. זה יכול להיות מזוהה על ידי כתמי עיניים כוזבים על המעטפת שלה מתחת לעיניו. בהשוואה לתמנון ענק באוקיינוס השקט (Enteroctopus dofleini) ולתמנון המשותף (O. vulgaris), התמנון הדו-ספוט של קליפורניה (O. bimaculoides) קטן יחסית, מתחיל קטן מכמה סנטימטרים, גדל במהירות כצעיר. כאשר גדל בתוך מעבדה, גודל המעטפת למבוגרים יכול לגדול לגודל ממוצע של 100 ס"מ ולשקול עד 800 ^g53,54. לתמנונים יש תקופת צמיחה מהירה ב-200 הימים הראשונים שלהם; עד אז, הם נחשבים למבוגרים וממשיכים לגדול לאורך כל חייהם55,56,57. תמנונים יכולים להיות קניבליסטיים, במיוחד כאשר שני המינים שוכנים יחד בתוך טנק; לכן, הם צריכים להיות שוכנים בנפרד בטנקים ^{נפרדים58}.

פרוטוקול

כל המחקרים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ושימוש (IACUC) של אוניברסיטת מישיגן סטייט.

1. הגדרת ציוד טנק תמנון

1. ראשית, להשיג את כל החומרים הלא ביולוגיים עבור אקווריום שישולב במערכת הסביבתית הימית, כפי שמוצג בטבלת החומרים. הגדלים מסופקים באינצ'ים.
2. לשטוף את כל צינורות, צנרת, ומערכת מסנן חלקים עם 70% אתנול ו deionized (DI) מים לפני ההתקנה. אין להשתמש בסבון או בכימיקלים אחרים בעת הניקוי.
3. הנח שולחן פיברגלס בגודל 13 אינץ' x 49 אינץ' x 1/2 אינץ' (חלק #71) עם ארבע רגלי שולחן עשויות סיבי פחמן ועם מידות של 2 אינץ' x 2 אינץ' x 23 אינץ' (חלק #72). חברו את הרגליים ישירות מתחת לפינות השולחן.
4. מתחת למשטח העליון, בין כל אחת מרגלי השולחן, מניחים גשרי ייצוב סיבי פחמן באורך 2 אינץ' על 2 אינץ' (חלק #72) המחוברים לחלק התחתון של השולחן ישירות על קצה המדף העליון. צרף עם ברגים מדף אחר עם אותם ממדים ישירות על הקרקע מתחת לשולחן. תן למשאבה (ראה שולחן חומרים) לשבת ישירות על משטח המדף התחתון בזמן שהמיכל יושב על המשטח העליון. מערכת זו מוצגת באיור 1.
   הערה: תפוקת המים מהמיכל ניזונה מכבידה וכל הצינורות, למעט אלה הניזונים פנימה והחוצה מהמיכל, צריכים להיות נמוכים יותר מתחתית המיכל כדי להבטיח לחץ ראש ניקוז מרבי.

איור 1: התקנת טנק תמנון. מפרצון מים ושקע (א). שלושה מיכלי תמנון כל אחד עם שטח של 1.22 מ 'x 0.3 מ '(b). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

5. לקדוח חור יחיד 13/4 אינץ ', 2 אינץ 'מאחד הצדדים של הטנק, באמצעות מקדחות חיתוך זכוכית. החלק התחתון של מסך היניקה של תפוקת המים יקבע את גובה חור הפלט כפי שמוצג בצד ימין של איור 2a. מפלס המים ייקבע על ידי מסך היניקה ויהיה צורך להיות לפחות 6 אינץ 'מראש המיכל המאפשר אזור התזה מים.
6. השתמש בפריימר PVC ובמלט כדי לחבר לצמיתות את המקטעים. כדי לעשות זאת, ראשית, להחליק את הקצה של צינור PVC זכר המיועד לסוף הצינור הנשי. מניחים פיסת סרט של ציירים בצד החיצוני של החלק הגברי שעדיין נראה לעין כדי למנוע מהפריימר והמלט להופיע בצד החיצוני של הצינור. להפריד את החלקים לאחר ההקלטה ומניחים שכבה קלה של פריימר בצד החיצוני של הצינור הגברי בעקבות היישום של המלט באותו אזור.
7. להתאים מחדש את הצינור הגברי לתוך הצינור הנשי, בהקדם האפשרי, לאחר היישום של מלט ולהסיר את הקלטת. 24 שעות לאחר היישום של פריימר ומלט, לשטוף חלקים מחוברים חדשים עם מי DI. לזמן ריפוי להסתכל על מוצר המלט לכיוונים נוספים.
   הערה: ודא את ההתקנה של כל צינורות וציוד ממוקם כראוי לפני השימוש פריימר PVC ומלט; דרישות אורך הצינור עשויות להשתנות.
8. לאחר מכן, חבר לצמיתות את הקצה החיצוני (OD) בקוטר 1 אינץ' של מסך היניקה לקצה הקוטר הפנימי (ID) של מפרק המרפק בקוטר 1 אינץ'. חבר את קצה מפרק המרפק לצינורות PVC ישרים (1 אינץ 'OD). חבר את הצד השני של הצינורות הישרים ולאחר מכן למזהה 1 אינץ 'של המתאם הישר דרך הקיר שקע נקבה להתחבר.
   הערה: המזהה מתייחס למרחק הרחב ביותר בין הקירות הפנימיים של הצינור. OD מתייחס לחלק החיצוני של רוחב הצינורות.
9. חבר לצמיתות את המתאם הישר דרך הקיר לצינור PVC באורך 4 אינץ' ישר עם מנת יתר בגודל 1 אינץ' (החל מהשלב 1.8). הצינור הזה יפנה אל מחוץ למיכל.
10. חבר לצמיתות את הצינור הישר למרכז מחבר PVC (בצורת Tee מזהה 1 אינץ'; מהשלב 1.9). לאחר מכן, חבר לצמיתות שני צינורות באורך 6 אינץ' (חלק #69) (OD של 1 אינץ') לשני הקצוות הנגדיים של מחבר הטי-אחד הפונה ישירות למעלה לשחרור האוויר והשני ישירות כלפי מטה לזרימת מים.
11. חבר לצמיתות את הצינור הישר המורחב כלפי מטה (החל בשלב 1.10) לצינור תיל שקע נקבה (מזהה 1 אינץ'). חבר צינור גומי באורך 36 אינץ' (מזהה 3/4 אינץ') למתאם הצינור.
12. מניחים את מערכת הקירור בין צינורות תפוקת המים לבין מערכת sump.
13. חבר את אביזרי העקיצה בגודל 3/4 אינץ', שמגיעים עם המערכת, ליציאות הקלט והפלט של יחידת הצ'ילר. שים את צינורות הגומי (מ שלב 1.11) על מתקן הכניסה של הצ'ילר.
14. חברו חתיכה חדשה של צינורות זיהוי בגודל 3/4 אינץ' (החל מהשלב 1.13) מתפוקת הצ'ילר (החל מהשלב 1.12) ועד לתחנוכת מערכת ה-sump כפי שמוצג באיור 2b.
15. לאחר מכן, הניחו את מסנן הגרביים בגודל 4 אינץ' x 12 אינץ', בגודל נקבובית של 200 מיקרומטר, בשטח המיועד לו כפי שמוצג באיור 2. כמו כן, כפי שמתואר באיור 2, הניחו את רחפן החלבון ואת משאבת החזרה באזורים המתאימים שלהם. יחד עם משאבת ההחזרה, חבר את השסתום הצף העליון האוטומטי לקיר הפנימי של אזור המשאבה, 2 אינץ 'מעל החלק העליון של מפרצון המים של המשאבה; אין לחסום את הסרת המשאבה מהמיכל, במידת הצורך.
16. חבר לצמיתות צינור ישר באורך 12 אינץ' (3/4 אינץ' OD) לשקע המשאבה (החל מהשלב 1.15). בקצה השני של הצינור הישר 3/4 אינץ', חבר לצמיתות את מנת המנת יתר של הצינור למפרק מרפק של 3/4 אינץ' ID 45°. לקצה השני של המפרק, חברו לצמיתות צינורות OD בגודל 3/4 אינץ'.
17. חבר את הקצה השני של הצינור הישר (החל בשלב 1.16) למזהה בגודל 3/4 אינץ' של מתאם הפחתה ישר. חבר לצמיתות את קצה המתאם הגדול יותר (2 אינץ'OD) לקלט של אור UV.
    הערה: אורכי הצינורות הישרים עשויים להשתנות.
18. לאחר מכן, התאם את המיקום של זרם אור UV עם צינור הפלט של המשאבה (החל מהשלב 1.17) כך שהצינור אינו מתעקל בין אור למשאבה (החל מהשלב 1.15). לקדוח חורים לתוך סד הייצוב כדי להתאים את חורי חיבור אור UV. התאם את גודל הברגים למקדחה וחבר את אור ה- UV לשולחן באמצעות הברגים שניתנו.
19. חבר לצמיתות את הצד בגודל 2 אינץ' של מתאם הפחתת אחר לפלט של אור ה- UV (החל בשלב 1.18). חבר מנת יתר בגודל 1 אינץ' של צינור ישר באורך 5 אינץ' למזהה 1 אינץ' של המתאם. לאחר מכן, חבר חתיכה פינתית של 90° עם מזהה בגודל 1 אינץ' לצינור OD בגודל 1 אינץ'; יש את הקצה הלא מחובר של פיסת הפינה מצביע לכיוון הצד של המיכל שבו קלט המים נועד ללכת (באותו צד כמו בשלב 1.5).
20. חבר לצמיתות את הקצה השני של הפינה (מהשלב 1.19) לצינור באורך 6 אינץ' (חלק #69) בעל מנת יתר של 1 אינץ' עם הקלט של יחידת בקרת הזרימה (חלק #2). חבר לצמיתות צינור OD נוסף בגודל 1 אינץ' (חלק #69) לפלט של יחידת ניטור הזרימה; האורך חייב להאריך לפחות 3 אינץ 'מעבר לצד של הטנק.
21. באמצעות מקדח חיתוך זכוכית בגודל 13/4 אינץ' (חלק מס' 1), חתוך חור חדש 3 אינץ' מעל קו המים המיועד ורחוק 2 אינץ' מצד המיכל (איור 1a) בצד שממול לזה שיש לו בור תפוקת מים. חבר מחיצה נוספת דרך הקיר המתאימה עם החלקה בגודל 1 אינץ' (חלק #77) הפונה אל מחוץ למיכל.
22. לתלוש המחיצה חבר צינור ישר עם מנת מנת יתר בגודל 1 אינץ' ואורך של 4 אינץ' (חלק #69) לצמיתות. צמצם את הצינורות מהחלק האחרון של שלב 1.21 כדי להתאים את המרחק צינורות זה משתרע מהמיכל. חבר לצמיתות צינור 90° (חלק #65) לכל אחד מהצינורות הפתוחים וחתוך צינור ישר OD סופי בגודל 1 אינץ ' (חלק #69) המחבר לצמיתות את שני חלקי הפינה.
    הערה: איור 3 מציג ייצוג פשוט של מערכת האקווריום.
23. הגדר את שאר מערכת הבקרה (חלק #34), תחילה הרכבה של רצועת הכוח (חלק #53) לשולחן עצמו או לקיר סמוך. לידו הרכבה מודול ניטור הנוזלים (חלק #2).
24. חבר את חיישן הזרימה, רצועת הכוח וחיישני זיהוי הדליפה למודול. הגדר את נורית הצמיחה (חלק מס' 26) המחובר לסל האצות (איור 2).
25. חבר את חיישן הזרימה, אור UV, אור גדילה, משאבה ושומן חלבון לחטיף האנרגיה. הגדר את תכנות מערכת בקרת המים בהתאם למדריך של היצרן.
26. הכן מים מלוחים על ידי ערבוב חצי תערובת מלח זמינה מסחרית עם 1 גלון של אוסמוזה הפוכה (RO) או deionized (DI) מים. הפוך 45 גלונים כדי למלא באופן מלא טנק אחד ומערכת סיכום.
27. הפעל את המשאבה בתוך בקר זרימת המערכת sump והמשיך להוסיף מים מלוחים עד שהשסתום העליון האוטומטי נמצא במצב כבוי כך שאין צורך במים מתוקים נוספים.
28. ברגע שהמים מלאים, להפסיק למלא ולהדליק את יחידת צינון המים כדי להגדיר את הטמפרטורה בין 18 °C (50 °F) עד 22 °C (70 °F) מכיוון שזה טווח הטמפרטורה ^עדיף53 מעלות צלזיוס. תדליק את רחפן החלבון.
29. מוסיפים 30 ק"ג של אלמוגים כתוש לתחתית המיכל, כמו גם שכבה של אלמוגים כתוש לתחתית פח האצות. הוסיפו מספר סלעים חיים ותוספות אחרות לסביבת התמנון. מניחים חלק עליון כדי לכסות את פתיחת המיכל.
    הערה: סלעים חיים הם אלמוגים מתים המאוכלסים על ידי חיים ימיים מקרוסקופיים כגון חיידקים ואצות.
30. מוסיפים חיידקים nitrifying המשמשים אקווריומים מים מלוחים לפי ההוראות על האריזה. המשיכו להוסיף זאת לפי ההוראות, בדקו את הטמפרטורה, המליחות, ה-pH, האמוניה, הניטריט והחנקות מדי יום עם ערכות לבדיקת מים, חיישן pH וחיישן טמפרטורה. הערכים הבטוחים לרמות אמוניה, ניטריט וחנקות נמוכים מ-0.5 ppm, 0.25 ppm ו-10 ppm ^{בהתאמה58}.
31. ודא אור UV כבוי במשך הימים חיידקים nitrifying מתווסף כדי לאפשר מיקרואורגניזמים מים מלוחים לגדול. לאחר הפרמטרים נמצאים בטווחים בטוחים, אור UV ניתן להפעיל מחדש.
32. לאחר הקמת המערכת, בדוק גם כי ה- pH והחמצון הם ב 8.0-8.4 ו ^-59, בהתאמה. לפני הוספת בעלי חיים לאקווריום, בדוק את נוכחותם של כל רמות נחושת וחמצן בתוך המערכת באמצעות ערכת בדיקת מי נחושת.
    הערה: נחושת גורמת נזק חסרי חוליות וזה מפריע osmoregulation בזימים ^{דגים60,61}.
33. אם נחושת נמצאה במים, לבדוק את מקור המים DI / RO. לאחר קביעת כי מקור המים אינו מכיל נחושת, לבצע 30% שינוי מים ומניחים את בלוק הפחמן הפעיל (חלק #46) בתוך המים. אם הבעיה נמשכת, בצע שינוי מים מלא ונקה את כל החלקים.
34. לאחר שכל הפרמטרים של המים נקבעים להיות בתוך רמות בטוחות, להוסיף 10 שרימפס רפאים למערכת לפחות שבוע לפני הוספת התמנונים. זה יעזור להציג ביומסה עבור חיידקים ולהצביע על איכות המים הכוללת.
35. הוסף תושבים אקולוגיים אקווריום נוסף לפח האצות. זה כולל Chaetomorpha spp. (אצות ספגטי), Trochus Sp. (חילזון טרקוס מרכב), ומרסרינריה מרקנריה ( צדפות אבן דובדבן).

איור 2: מערכת סיכום. תצוגה צדדית של מערכת הסיכום (א). תצוגה עליונה של מערכת הסיכום (ב). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: אקווריום עם מערכת סינון סיכום מתחת למיכל ויחידות הבקרה הסביבתית. חצים ירוקים מצביעים על כיוון זרימת המים במערכת. מים זורמים מסעיף אחד עד שתיים לקירור ועל שלושה כדי להפריד חומר ביולוגי כבד מחומר קל יותר. פסולת כבדה צפה לתחתית והחוצה לחלק חמש בעוד החומר הביולוגי הקטן יותר זורם לתוך מסנן הגרביים בתוך סעיף ארבע. מים זורמים מארבע מתחת לסעיף חמש נכנסים לרפרוף החלבון בשישה כדי להסיר את הפסולת שנותרה בתוך המים. פח האצות מכיל מיקרואורגניזמים לפירוק פסולת, אמוניה וחנקות וכן לחמצן את המים. בחלק האחרון של המערכת, יותר מים מתווספים כדי להסביר את האידוי לפני נשאב בחזרה לתוך המיכל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

2. מיכלי אחסון

1. הקימו שני מיכלי אחסון מים גבוהים של 60 גלון, אחד למי המלח והשני למי RO. ודא שקו המילוי המרבי של מיכל המים המתוקים גבוה יותר מהשולחן. חבר צינורות בגודל 1/4 אינץ' לחלק העליון האוטומטי של השסתום הצף במערכת sump וצרף את הקצה השני של הצינורות לתחתית מיכל המים המתוקים.
   הערה: זה כדי למלא מחדש אם המים מתאדים. מלח יישאר במים.
2. ממלאים את מיכל המים המלוחים במים ומוסיפים את כמות המלח היחסית למיכל. יש להזרים ברציפות את מיכל אחסון המים המלוחים לערבוב וחימצון תקין. יש להמתין שעה לפני השימוש כדי להבטיח ערבוב מלא של המלח.
   הערה: מיכל המים המלוחים שימושי למילוי המיכלים לאחר הניקוי.

3. התקנת מיכל מזון

1. לשמירה על שרימפס בחיים במשך יותר משבוע, לאחסן אותם במיכל נפרד מן התמנון עם המליחות מתחת 30 ppt ואת הטמפרטורה קרובה ל 25 °C (5 °F).
2. כדי לעשות זאת, שבוע לאחר הבשלת מיכלי התמנון, העבר 8 גלונים של מים מלוחים בוגרים למיכל השרימפס. מוסיפים 15 ק"ג של אלמוגים כתוש לתחתית המיכל. הוסיפו כמה סלעים חיים למיכל כדי להחביא מקומות לתרסיסים (איור 4).
   הערה: מי ים בוגרים מתייחסים לתהליך של מתן אפשרות לחיידקים ימיים לגדול בתוך המים המלוחים כפי שמוצג בשלב 1.30.
3. חבר מסנן מיכל לקצה המיכל. הגדר את מסנן המיכלים לפי הוראות היצרן. הוסף משאבת אוויר ליד המיכל המחובר לצינור עם אבן אוויר מחוברת שהוכנסה למיכל.
4. נקה את המסנן ושנה את רפידות המסנן מדי שבוע. כמו כן, 25% מהמים יצטרכו להשתנות בו זמנית. בדוק פרמטרים חנקן, pH, וטמפרטורה מדי יום במיכלי המזון עם ערכות בדיקת מים כמתואר בשלב 1.30. אם הפרמטרים של חנקן המים נשארים גבוהים, בצעו שינויים נוספים במים והוסיפו שקית סופגת חנקן למים; או אם הבעיות נמשכות יותר מחודש, יהיה צורך להעביר את השרימפס למיכל גדול יותר.
5. מוסיפים שרימפס ברגע שמכתם אלמוגים כתוש מתפוגג. כדי להוסיף שרימפס הראשון, עם ההגעה, להעביר את השרימפס מבלי לשלוח מים למיכל מים מלוחים קטן במשך 5 דקות כדי להסיר biowaste. לאחר מכן, ניתן להוסיף את השרימפס ישירות למיכל. ניתן להוסיף דגי יתושים ישירות למיכל השרימפס.
   הערה: ניתן לרכוש דגי שרימפס ויתושים מכל ספק מסחרי של בעלי חיים הרשומים על גיליון החומרים או ספקי מזון אחרים. אפשר גם להציע תמנונים שרימפס מופשר.
6. להאכיל שרימפס ודגים עם פתיתי דגים, צמחייה מתה, או ^אצות62, לפי הוראות מזון.
7. למיכל הסרטנים, מוסיפים 1 גלון של מים מלוחים ו -10 ק"ג של חלוקי נחל. עורמים את חלוקי האבן בצד אחד ומשאירים אדמה יבשה בצד אחד ו-2 ס"מ של מים מלוחים בצד השני (כפי שצוין באיור 4). הפרמטרים האופטימליים של מים סביבתיים עבור חסרי חוליות אלה צריכים להיות 30-35 ppt ו 22-25 °C (70 °F) עבור מליחות ^{וטמפרטורה11,63}, בהתאמה.
8. הוסיפו סרטני כנר ישירות למיכל (איור 4). סרטנים יבלו את רוב חייהם על היבשה, אך יוכלו להיות מתחת למים במשך כמה ימים בכל פעם, מה שהופך את הטנק שנמצא בחלקו מתחת למים חיוני להישרדותם ארוכת הטווח.
9. להאכיל סרטני כנר פעם ביום על ידי הוספת פתיתי דגים לתוך המנה על האזור היבש של הטנק. לנקות מדי שבוע על ידי הסרת סרטנים ושינוי 100% של מים מלוחים. תנקה את חלוקי האבן.
10. יש לאחסן רכיכה ימית (צדפות ומולים) בתוך מיכלי המים המלוחים כדי שהתמנונים יפתחו את עצמם ויספקו מנגנון סינון מים ^נוסף64.
11. מניחים מולים בתוך מיכל נפרד פנוי בשבוע הראשון כדי להימנע מהנחת עומס פסולת מיותר על מערכת הסינון של מיכל התמנון.
    הערה: בעוד מולים היו המזון המועדף על התמנון, הם נוטים יותר למות זמן קצר לאחר ההגעה ויגדילו באופן משמעותי את הפסולת הביולוגית בתוך המיכל אם הם נוכחים בכמויות גדולות.

4. הקדמת תמנון למיכל

1. ודא שרמות האמוניה, הניטריט והחנקות נמוכות מ-0.5 ppm, 0.25 ppm ו-10 ppm בהתאמה. יש משאבת יד מים זמין כדי להסיר דיו תמנון מן הטנק. מומלץ גם שני אנשים להליך זה.
2. עם ההגעה, מניחים את השקית על הסולם ומפחיתים את משקל השקית לאחר הסרת התמנון. מוסיפים אבן אוויר לשקית כדי להגדיל את חמצון המים תוך העברת החיה למיכל שלהם. מדדו את טמפרטורת המים ואת המליחות של מי המשלוח. תיעד מקרים של מחלה ממושכת לאחר המשלוח.
   1. מבלי להעביר מים מהתיק למיכל, תלו את שקית התובלה מעל פינת המיכל כשהשקית שקועה חלקית במי המיכל כדי להתחיל לשנות את הטמפרטורה של תיק ההובלה. מוציאים 10% מהמים מהתיק וזורקים את הכיור. מוסיפים את אותה כמות מים מהמיכל לשקית. חוזרים על הפעולה כל 10 דקות עד שטמפרטורת המים בשקית שונה לא יותר מ-1° מטמפרטורת המים במיכל.
   2. לאחר הפרש הטמפרטורה של התיק ואת הטנק הם בתוך 1 °, להבטיח כפפות שחוקים כדי להעביר את התמנונים למיכל האישי שלהם. כדי לזוז, מניחים את שתי הידיים מתחת לתמנון כדי לספק תמיכה במהלך ההעברה; האדם השני יצטרך למשוך בעדינות את זרועות היניקה מצד השקית.
   3. ברגע שהתמנון יוצא מהשקית, העבירו אותו במהירות למים של בית הגידול החדש שלו ומעבירים כמה שפחות מים משקית המשלוח. השתמש במשאבת היד כדי להסיר כל דיו התמנון משחרר כאשר במיכל. עכשיו לשקול את השקית עם מים כדי לקבל משקל משוער של החיה.
3. במשך השבועיים הראשונים לאחר ההגעה, לעקוב אחר הצריכה היומית של התמנון זה צריך להיות סביב 4% עד 8% ממשקלו58,65,66. התמנון צריך להיבדק ארבע פעמים ביום; זה יכול להיות מופחת פעמיים ביום לאחר 2 שבועות. שוקלים כל שבועיים כדי להתאים את צריכת המזון שלהם לפי הצורך.
   הערה: מינים מסוימים של תמנון ידועים לברוח מן הטנק שלהם, ולכן מומלץ לשים משקל 2.5 ק"ג על המכסה של הטנק שלהם.

5. טיפול יומיומי

1. באמצעות ערכת בדיקת מים מלוחים זמינה מסחרית עבור pH, אמוניה, ניטריט וחנקות, להוסיף את הכמות מכוונת הערכה של מי טנק לארבע המבחנות המסופקות עם הערכה. כפי שצוין בערכת הבדיקה, הוסף את כמות המגיב הצבעוני לצינור המתאים.
2. אם רמות האמוניה, הניטריט והחנקות הן מעל 0.5 ppm, 0.25 ppm ו- 10 ppm בהתאמה, לשטוף את הביומסה מתוך מסנן הגרביים או לשנות למסנן גרביים חדש. בנוסף, לנקות ביומסה מראש הרחפן עם מברשת ולהוסיף חיידקים ג'ינס נוספים למיכל. אם הבעיות נמשכות, אז להחליף 25% של מים מלוחים מתוקים.
   הערה: השלבים לעיל מפחיתים תרכובות חנקן בתוך המערכת האקולוגית.
3. הסר את כל פגרי הסרטן והשרימפס המתים מהמיכל, כמו גם כל חומר צואתי תמנון באמצעות משאבת יד. מוציאים את כל הסרטנים החיים הנותרים מהמיכל ומעבירים אותם בחזרה למיכל האחסון. לאחר מכן, סדר מחדש חפצים גדולים בתוך המיכל.
4. הצג מחצית ממספר הסרטנים שהתמנון יאכל מדי יום למיכל במשקל 1.25 +/- 0.25 גרם. להאכיל שרימפס מופשר או סרטני כנר זכר קטנים לתמנונים צעירים. בהתאם לניסוי, סרטנים ושרימפס ניתן להציג בכל מקום במיכל או לתמנון ישירות.
   הערה: צריכת המזון היומית של התמנונים היא 4%-8% ^{ממשקלם67}. שרימפס קפוא יכול להיות מסופק גם כמקור מזון המבוסס על משקל התמנון.
5. תציע חמישה חסילונים רפאים מדי יום. בממוצע, שלושה נצרכו בניסוי זה. כדי לספק מגוון רחב של מזון לתמנון, לתת צדפה חיה אחת או מולים פעם בשבוע ותמיד לשמור על שלושה דגי יתושים בתוך הטנק.
   הערה: אין צורך לתת לבעלי החיים מגוון מזון ויכול למנוע מבעלי חיים להיות פיתה על ידי מזון במהלך ניסויים. לוח הזמנים האכלה המשמש כאן כדי לפקח בצורה הטובה ביותר על האכלה תמנון והתנהגות היא להציג מחצית ממספר הסרטנים המבוססים על משקל ולהגדיל את מספר השרימפס לחמישה בבוקר. בערב, הציגו את המחצית השנייה של הסרטנים למיכל.

6. תברואה שבועית

1. כבה את אורות הרחפן, המשאבה ופח האצות לפני ניקוי מערכת הסיכום. לאחר מכן, לכבות את השסתום האוטומטי של המערכת לפני הסרת מים. לבסוף, להסיר את הרחפן ואת כל המים רק ממערכת sump.
2. לשפשף קלות את פח האצות כדי להסיר את רוב הביומסה מקירותיה. נקו את שאר אזור הסיכום בעזרת מברשת. הסר את מסנן הגרביים, לנקות עם חומץ, ולתת לו להתייבש; להסתובב עם מסנן גרביים אחר בכל שבוע החלפה עם חדשים כל שלושה חודשים. הסר ונקה ביומסה מהחלק העליון של הרחפן שבועי.
   הערה: הימנע משימוש במתכת לניקוי הפלסטיק מכיוון שהוא ייצור שריטות שעלולות להיות מועדות לצמיחה מיקרוביאלית.
3. מחזירים את הרחפן למערכת ומתחילים למלא במים מלוחים. כאשר אזור המשאבה מתחיל להתמלא, ניתן להפעיל שוב את כל המערכות. הפסק להוסיף מים כאשר החלק העליון האוטומטי של שסתום צף הוא במצב כבוי.

איור 4: טנק לסרטני כנר (מינוקה פוגנקס). תחתית המיכל מיועדת למחצה למיטה יבשה והחצי השני ל-2 ס"מ של מים מלוחים רדודים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 5: טנק לשרימפס רפאים (פאלאמפונטס פאלדוסוס). סלעים במיכל השרימפס מספקים מקומות לשרימפס להסתתר ולהיפלט, כמו גם לצמיחת מיקרואורגניזמים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

7. טיפול בבעלי חיים חשויים

1. עקבו אחר המדריך ^reference66 כדי להעריך את בריאות התמנון.
   הערה: עבור תמנונים נקבה, מחזור סוף החיים מתחיל בדרך כלל לאחר הטלת ביצים. בעל החיים יתחיל להפחית את צריכת המזון ויפסיק לאכול לגמרי ויהפוך ליותר רדים. תוחלת החיים לאחר תהליך סוף החיים משתנה. לא ניתן לנקוט בפעולה נוספת מלבד האכלה וניטור של החיה. זכרים סנסנטים יפחיתו את צריכת המזון ויהפכו ^{לרדומים68}.

8. הרדמה תמנון

1. בצע הרדמה תמנון כמפורט באטלר-סטרובן ואח '⁶⁹.
2. קבל מיכל 6 L עם מכסה כי הוא לפחות 15 ס"מ גבוה. מניחים 4 ליטר מים ישירות ממיכל התמנון לתוך המיכל ומספקים אוויר עבור 4 ליטר של מים מלוחים באמצעות משאבת אוויר קטנה עם אבן אוויר כדי להפיץ חמצן לסביבת ^המים58.
3. לפני הצגת התמנון, להוסיף 1% EtOH למיכל. לפני הטיפול בתמנון, תיעד את מספר הנשימות לדקה על ידי ספירת נשיפה של מים מהסיפון.
   הערה: עבור תמנונים במעבדת החוקרים, הנשימה הבסיסית היא 16 - 24 נשימות לדקה.
4. לפני הזזת התמנון, יש לתעד את פיגמנטציה העור של התמנון ואת קצב הנשימה הבסיסי. הסר את התמנון מן הטנק באמצעות מיכל פה פתוח 4 L נקי על ידי איסוף אותו עם המים שמסביב.
   הערה: במהלך הרדמה, שיעורי הנשימה אינם מצביעים בהכרח על הרדמה מלאה.
5. שקול את התמנון בזמן במיכל, ולאחר מכן להזיז אותו על ידי הנחת שתי הידיים סביב גוף התמנון והרמתו. ייתכן שיהיה צורך באדם נוסף כדי להסיר את הגפיים השאיבה מקירות המיכל.
6. מעבירים במהירות את התמנון למיכל המוכן עם 1% EtOH. סגור את המכסה כדי למנוע בריחה אפשרית.
7. תיעד את הנשימה של התמנון לדקה על ידי ספירת נשיפה של מים מסיפון בסוף 5 הדקות הראשונות. אם הנשימה נשארת מעל קו הבסיס והחיה ממשיכה להגיב לצביטת אור, הוסיפו 0.25% EtOH נוספים למים. תוספת של אתנול למים יכולה להימשך למקסימום של 3% EtOH.
   הערה: אינדיקציה אחת לכך שהתמנון אינו מודע היא אובדן השליטה שלו בכרומטופופורים שלו. במקרה זה העור נראה חיוור מהרגיל. אינדיקציה נוספת היא לצבוט קלות את הזרועות ולבדוק אם יש תגובה מוטורית. אם עדיין אין תגובה בשלב זה, התמנון אינו מודע, וניתן לבצע ניסויים.
8. בעוד תחת הרדמה, לפקח על הנשימה והצבע של התמנון כדי להבטיח שהוא נשאר מחוסר הכרה למשך ההליך. אם התמנון מתחיל להתעורר במהלך ההליך, להוסיף 0.25% EtOH נוסף.
9. לביטול ההשפעות של הרדמה אתנול, להעביר את התמנון למיכל חדש 4 L או גדול יותר של מים מחומצנים ממיכל ההחזקה הקבוע שלה. ברגע שהנשימה חוזרת לשגרה, התמנון הופך לפעיל, ועורו חוזר לפיגמנטים רגילים; אפשר להחזיר אותו למיכל שלו.

9. המתת חסד של תמנון

1. פעלו על פי הסטנדרטים הבינלאומיים להמתת חסד תמנון כמפורט בפיוריטו ואח ', מולטשניובסקי ואח ', ובאטלר-סטרובן ואח ^{' 57,58,69}.
2. הכן מיכל 6 ליטר חדש עם 4 ליטר מים ממיכל ההחזקה של התמנון. מערבבים ב-MgCl2 לריכוז של 4% למיכל המתת החסד. בצע צעדים מ 8.1 עד 8.9 כדי להחיש את התמנון.
3. הזז את התמנון לאחר שלב 8.8 למיכל המתת החסד. לאחר עצירת הנשימה, המתינו 5 דקות ובצעו decerebration של התמנון או לשמור במיכל המתת החסד במשך 5 דקות נוספות.

10. התנהגות של O. bimaculoides

1. אין להאכיל את התמנון בבקרים כאשר הם יוכשרו להשתמש במיכל מכסה בורג. הגדר התקן הקלטת מצלמה המצביע על האזור המיועד להזנה.
2. קבל צינור מכסה בורג 50 מ"ל עם חורים בקוטר 1 מ"מ על פני השטח ואת המכסה לזרימת מים בכל המיכל. מניחים סרטן כנר בתוך המיכל. מניחים משקל בתוך המיכל או מחוברים החוצה כדי שהוא יישאר בתחתית המיכל.
3. מניחים את המיכל בתחתית המיכל בתוך השטח הפתוח ומבחן התמנון והמצלמה. אם הסרטן לא נאכל לאחר 4 שעות, ואז להסיר אותו מן הצינור לחדש את לוח הזמנים האכלה ליום. המשך לבצע תרגיל זה מדי יום.
   הערה: זה מוצג באיור 6 ונדון בסעיף התוצאה הייצוגית.

11. תמנון MRI

הערה: בעבר, תגובות MRI פונקציונליות מעוררות ב רשתית התמנון נמדדו בבעלי חיים ^מרדים70. כאן, השגנו MRI ברזולוציה מרחבית גבוהה במיוחד של מערכת העצבים של התמנון שדרשה שעות של סריקה. לכן, זה בוצע ב O. bimaculoides מורדם.

1. השגו תמונות MRI באמצעות מערכת 7T. עטפו את התמנון בניילון נצמד פוליוויניל כלוריד באיכות מטבח כדי לשמור על הידרציה של הרקמה. מניחים את התמנון על העטיפה, מכניסים את הקצוות ולאחר מכן מגלגלים לאטום.
2. השתמש בנפח שידור/קבל סליל בקוטר 4 ס"מ כדי לרכוש תמונות של המוח וזרועות מרובות. השתמש ברצף נדיר משוקלל T1 עם הפרמטרים הבאים: זמן חזרה (TR) של 1500 אלפיות שני, זמן הד (TE) של 20 אלפיות שני, רזולוציה של 117 x 117 x 500 מיקרומטר, 100 ממוצעים, גורם נדיר 8. אלה הם פרמטרי MRI טיפוסיים למוח מכרסמים הדמיה. שימוש בגורם RARE הופך את ההדמיה למהירה יותר, בעוד ש-100 תמונות משועבדות יחד בממוצע כדי להגדיל את יחס האות ^לרעש71.
3. תמונה זרוע התמנון באמצעות סליל שידור נפח 86 מ"מ ומערך 4 x 4 ס"מ 4 ערוצים לקבל סליל. חותכים זרוע באמצעות מספריים כירורגיים ומניחים אותה בצינור חרוט 15 מ"ל מלא מלוחים חוצצי פוספט.
   הערה: הרצף היה רצף שחזור היפוך T1_weighted (MP-RAGE) עם פרמטרים: TR/ TE = 4000/2.17 ms, עיכוב היפוך 1050 ms, 100 x 100 x 500 μm רזולוציה, 9 ממוצעים, זמן סריקה 1.5 שעות (איור 7). רצף היפוך-שחזור מבטל את האות מהמים ומגביר את הניגודיות בתוך התמונה; רצף זה נבחר מכיוון שהוא מאפשר הדמיה של האנטומיה הפנימית של ^arm72.

12. הדמיית טומוגרפיה של קריו-פלואורסצנטיות (CFT)

1. להקפיא את התמנון: לעבוד במכסה אדים. מכסים את תחתית דיואר בקרח יבש, ואז ממלאים בהקסנים. מורידים לאט את התמנון לתוך ההקסנים במשך כ -10 דקות, מוסיפים hexanes טרי וקרח יבש כנדרש כדי לכסות את התמנון באופן מלא עם hexanes קר. שמור את התמנון קפוא ב -20 °C (70 °F) עד שהוא מוטבע.
2. הטמעה וקטע התמנון: צור תבנית מלבנית בגודל המתאים כדי להחזיק את התמנון באמצעות הכלים המסופקים על ידי יצרן CFT. מכסים את תחתית התבנית במדיה OCT (טמפרטורת חיתוך אופטימלית) (חומר סטנדרטי המשמש במעבדות היסתולוגיות) ומניחים לה לקפוא לג'ל חצי מוצק.
3. מניחים את התמנון הקפוא לתוך שכבת הג'ל של OCT, ולאחר מכן לכסות לאט עם OCT ב 2-3 שכבות. בין מדרגות מזיגה, להקפיא את מדרגות הבלוק עד OCT הוא בשלב הג'ל. לאחר התמנון מכוסה לחלוטין, להקפיא את הבלוק לפחות 12 שעות ב -20 °C (70 °F).
4. טען את הדגימה למערכת טומוגרפיה קריו-פלואורסצנטית73.
5. מקטע ותמונה כל O. bimaculoides המתחסד ברזולוציה מזוסקופית באמצעות 3 מסנני פליטה / עירור ובכך לייצר כמה ערכות נתונים איזוטרופיות 3D.
6. כאשר החתך מגיע לזרוע ולמערכת העיכול, העבר את הסעיפים לשקופיות להיסטולוגיה נוספת.
7. טען את ערכת הנתונים הגולמית לתוך תוכנת השחזור מספק CFT שתוכנן במיוחד כדי לאפשר עיבוד מהיר.
8. בנייה מחדש של מחסנית תלת-ממדית באמצעות יישור ציון דרך, איזון היסטוגרמה, תיקוני פלואורסצנטיות ונורמליזציה, כולל הסרת השפעות פלואורסצנטיות תת-קרקעיות עבור כל אורך גל.
9. לאחר שהערימה השלישית הסופית מיוצרת על-ידי כלי השחזור, דמיינו את הנתונים באמצעות כלי תוכנת ההדמיה ויצרו פסי טיסה עם שכבות-על של אור לבן ופלואורסצנטיות יחד עם הקרנות עוצמה מרבית תלת-ממדיות (3D-MIPS), למשל, איור ⁸⁷³.

תוצאות

כל בעלי החיים במחקרים שלנו הושגו מהטבע, ולכן לא ניתן היה לקבוע את גילם המדויק והשהות שלהם במעבדה הייתה משתנה. מצב תמנון נצפה מדי יום. לא ראינו טפילים, חיידקים, נזק לעור או התנהגות חריגה. המשקל הממוצע של בעלי חיים היה 170.38 +/- 77.25 גרם. כל חיה איכלסה את מיכל ה-40 גלון שלה. סטיית התקן הממוצעת ± לפרמטרים שנרשמו עבור טנק במשך שבוע הייתה: pH 8.4 ± 0.0, מליחות 34.06 ± 0.61 ppt, טמפרטורה 18.7 ± 0.75 °C (75 °F), אמוניה 0.11 ± 0.14 ppm, ניטריט 0.25 ± 0.14 ppm, וחנקות 1.43 ± 2.44 ppm.

התנהגות...

דיון

התקנת מערכת:
המערכת האקולוגית של האקווריום פותחה באופן שבו מועסקות שיטות מכניות וביולוגיות לסינון וחימצון המים. רכיבי הסינון של המערכת משתמשים במסנני גרביים, ברפרוף חלבונים ובניקוי קבוע כדי לשמור על רמות החנקן והחמצן. חשוב מכך, אנו מסתמכים גם על מיקרואורגניזמים ימיים כדי לצרוך את התרכובות החנקניות המסוכנות ופסולת ביולוגית אחרת, כמו גם לזרום את המים באמצעות תהליכי פוטוסינתזה. שיטות נוספות, מלבד השימוש באצות, כדי להוסיף חמצן למים היא דרך אוויר חיצוני עם אבן אוויר מחוברת. לפני הוספת חיידקים, מומלץ להוסיף...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
1-3/4 אינץ'. מקדח	הום דיפו		204074205 כלי חיתוך זכוכית מספר חלק: 1
חיישני זרימה 1 אינץ'	Neptune Systems	משווק מקומי	עם חיישן למדידת זרימת מים מספר חלק: 2
1 אינץ' מסננת מחיצה החלקה	שונית בתפזורת	207113	מסננת למיכל יציאת מים מספר חלק: 3
מיכל 10 ליטר	Preuss חיות מחמד	סוחר מקומי	מיכל החזקת סרטן כנר מספר חלק: 4
4 אינץ' X 12 אינץ' 200 מיקרון ניילון מונופילימנט גרב מסנן רשת עם טבעת פלסטיק	UJ41171 AQUAMAXX		לחומר אורגני גדול בבור מספר חלק: 5
אקווריום 40 ליטר	Preuss חיות מחמד	סוחר מקומי	4 מיכלי אקווריום מזון מספר חלק: 6
מיכלי פולי 60 גרם - מלבן	Preuss חיות מחמד	סוחר	מקומי2 אגירת מים (מלח ומים מתוקים) מספר חלק: 7
אקווה אקטיבי 1/10 HP הידרופוני או אקווריום צ'ילר 2018	דרך דגםאנו	719574198463	לקירור מים ברציפות מספר חלק: 8
ALAZCO 2 ידית אחיזה רכה מברשת דיס אריחים כבדה	ALAZCO	B06W2FT5V5	ניקוי מיכלים מספר חלק: 9
ערכת בדיקת אמוניה	תרופות אקווריום	33D	לבדיקת מים מספר חלק:10
מערכת Apex	WiFi Neptune Systems	מערכת משווק מקומי	לניטור מחוץ לאתר מספר חלק:11
ערכת בדיקת אקווריום API	Amazon	B001EUE808	לבדיקת מים מספר חלק:12
ערכת בדיקת נחושת API	Amazon	B0006JDWH8	לבדיקת מים מספר חלק:13
אקווה אולטרה סגול קלאסי UV 25 וואט יחידות סדרת	אקווה אולטרה סגול	A00028	להסרת חיידקים העוזבים מערכת בור מספר חלק: 14
AquaClear 50 מוסיף מסנן קצף, 3 חבילות	Aquaclear	A1394	מסנן פחמן מיכל מזון מוסיף מספר חלק: 15
Aqueon QuietFlow LED PRO מסנן כוח אקווריום 30		יחידות סינון מיכל מזון 100106082 Aqueon מספר חלק: 16
ערכת מילוי אוטומטי (ATK) (כל אחד כולל מודול FMM אחד, 2 חיישנים אופטיים ומצוף אחד)	Neptune Systems	משווק מקומי	למיכל מים מתוקים מספר חלק: 17
תוספת אוטומטית מ-RODI (LLC)	Neptune Systems	משווק מקומי	מאחסון מים למיכלי תמנון מספר חלק: 18
Banded Trochus Snail	LiveAquaria	CN-112080	עבור פח אצות מספר חלק: 19
אצות Chaetomorpha, Aquacultured	LiveAquaria	BVJ-76354	עבור אצות פח מספר חלק: 20
צדפות - חי, קונכייה קשה, אבן דובדבן, פראי, ארה"ב תריסר	שוק דגים פולטון	N/A	מזון חי מספר חלק:21
תערובת מלח ים קלאסית -	אספקת שונית בתפזורת	211813	מלח למי מיכל מספר חלק:22
צינורות פלסטיק Clear Masterkleer Soft PVC, לאוויר ומים, 3/4 אינץ' ID,   1 אינץ' OD	McMaster	5233K71	כלי ניקוי מספר חלק: 23
Continuum Aquablade-P מגרד אצות בטוח אקרילי עם להב פלסטיק - 15 אינץ'	Marine Depot	4C31001	כלי ניקוי מספר חלק: 24
ערכת בדיקת נחושת	תרופות אקווריום	65L	לבדיקת מים מספר חלק: 25
Curve Refugium CREE LED אקווריום אור	Eshopps	6500K	פח אצות light מספר חלק:26
Eheim 1262 משאבות החזרה	EHEIM	1250219	משאבת למיכלי אחסון מספר חלק:27
Eshopps R-100 Refugium Sump GEN 3	Eshopps	15000	מערכת בור מספר חלק:28
אלכוהול אתילי, 200 הוכחה	Sigma-Aldrich	64-17-5	הרדמה מספר חלק:29
Extech DO600 ExStik II מד חמצן מומס	Extech	DO600	מדידת חמצן מספר חלק: 30
סרטני כנר; חי; תריסר	שרימפס מלח צפון מזרחי	N/A	מזון חי מספר חלק: 31
מחסניות סינון	מסנני מיכל מזון 100106087 Aqueon		מספר חלק: 32
חול יבש אלמוגים כתוש בפלורידה - CaribSea	Bulk Reef Supply 212959		משקעים לתחתית המיכל מספר חלק: 33
מודול FMM	Neptune Systems	משווק מקומי	למערכת apex מספר חלק: 34
Fritz-Zyme TurboStart 900 -	אספקת שונית בתפזורת	של	חיידקים start מספר חלק: 35
משאבת תוף המופעלת ביד, סיפון, משאבה בסיסית עם זרבובית, לדלי מסוג מיכל, Pail	Grainger	38Y789	משאבת יד מים מספר חלק: 36
ערכת בדיקת pH גבוה	תרופות אקווריום	27	לבדיקת מים מספר חלק: 37
רשת רשת עדינה Imagitarium לשרימפס	Petco	2580993	רשת העברת שרימפס ודגים מספר חלק: 38
ערכת איתור נזילות (LDK) - כוללת מודול FMM בתוספת 2 חיישני ALD	מערכות	נפטוןסוחר מקומי	מונח על הרצפה כדי לזהות מים מספר חלק: 39
Lee'S Algae Scrover Pad Jumbo -	LE12007 מחסן ימי		מספר חלק: 40
סלעים חיים	Preuss Pets	בית גידול של סוחר מקומי לתמנון מספר חלק: 41
מברשת ניקוי בקבוקים ארוכה 17 אינץ'	Haomaomao	B07FS7J7PN	ניקוי מיכל ארוך במיוחד חלק מספר: 42
מגנזיום כלוריד	סיגמא-אולדריץ'	M1028-100 מ"ל	המתת חסד מספר חלק: 43
מתלה בדיקה מגנטי	מערכות נפטון	סוחר מקומי	להחזקת בדיקות חיישן קודקוד מספר חלק: 44
שרימפס רפאים ימיים	שרימפס מלח צפון מזרח	N/A	מזון חי מספר חלק: 45
מרינלנד C-Series מיכל שקיות פחמן מדיה מסנן, 2 ספירה	לעיסה	98331	לרמות נחושת גבוהות מספר חלק: 46
תיק ניטרה-זורב	תרופות אקווריום	AP2213	סופג תרכובות חנקן מספר חלק: 47
ערכת בדיקת חנקות	תרופות אקווריום	LR1800	לבדיקת מים מספר חלק: 48
ערכת בדיקת ניטריט	תרופות אקווריום	26	לבדיקת מים מספר חלק: 49
Pawfly 2 אינץ' צילינדר אבני אוויר 6 יחידות מפזר בועות אבני אוויר למשאבת מיכל דגים באקווריום כחול	אמזון	B076S56XWX	אוורור מים מספר חלק: 50
צינורות חברת תעופה פן פלקס לאקווריומים וכו'; שקוף וגמיש מתנגד לכיווץ, צינורות B0002563MM סטנדרטיים של אמזון באורך 8 רגל			לחיבור משאבת אוויר לאבן אוויר מספר חלק: 51
אינסטלציה עם איחודים/שסתומים בתוספת צינור גמיש בגודל 3/4 אינץ'	Preuss Pets	סוחר מקומי	הובלת מים מספר חלק: 52
PM1 מודול	Neptune Systems	סוחר מקומי	מודול בקרת כוח עבור apex מספר חלק: 53
חלבון רחפן	Reef Octopus	AC20284	מסיר פסולת ביולוגית ממערכת מספר חלק: 54
PVC Apex לוח הרכבה, לולאות, תושבות תיל	Neptune Systems	משווק מקומי	מסייע להבטיח ארגון לחוטים וצינורות בתוך מערכת מספר חלק: 55
PVC מלט רגיל ו-4 אונקיות NSF פריימר סגול	אמזון	Oatey - 30246	לחיבור צינורות PVC מספר חלק:56
יחידת RODI	Neptune Systems	משווק מקומי	RO Water מספר חלק: 57
בדיקות מליחות	בדיקות HANNA	HI98319	מודד מליחות מים מספר חלק: 58
Seachem טיפול באקווריום בתולי	Seachem	1438	מספק חיידקים המפרקים עודפי מזון, פסולת ושארית מספר חלק: 59
מייצב	מיכל דגים יציבות SeachemSeachem	116012607	Seachem Stability תקים במהירות ובבטחה את הביופילטר של האקווריום במערכות מים מתוקים וימיים מספר חלק: 60
סט צמרות lexan	Preuss Pets	מכסי מיכל אקווריום של סוחר מקומי מספר חלק: 61
סט של כבלי אקוובוס שונים באורך מורחב	Neptune Systems	סוחר מקומי	למערכת Apex מספר חלק: 62
SLSON אקווריום אצות מגרד מברשת ספוג דו צדדית מנקה מברשת דגים עם ידית ארוכה לאקווריומים מזכוכית	אמזון	B07DC2TZCJ	מספר חלק: 63
התאמת צינור PVC בקיר סטנדרטי למים, מתאם מרפק 45 מעלות, 3/4 שקע נקבה x 3/4 שקע זכר	McMaster	4880K189	צינור PVC מספר חלק:64
קיר סטנדרטי  התאמת צינור PVC למים, 90 מעלות  מרפק  מתאם,  1 שקע נקבה x 1 שקע זכר	McMaster	4880K773	צינור PVC מספר חלק: 65
Standard-Wall  התאמת צינור PVC למים, מתאם,   1  שקע-חיבור  נקבה x 1 דוקרני	זכר מקמאסטר	4880K415	צינור PVC מספר חלק:66
קיר סטנדרטי  התאמת צינור PVC למים, ישר  מפחית,  2 שקעים נקבה x  3/4  שקע נקבה	McMaster	4880K008	צינור PVC מספר חלק: 67
Standard-Wall  התאמת צינור PVC למים, מחבר טי,   לבן,  1 גודל  שקע-חיבור  נקבה	McMaster	4880K43	צינור PVC מספר חלק: 68
Standard-Wall  צינור PVC קשיח ללא הברגה למים, גודל צינור אחד, צינור PVC באורך 10 רגל	McMaster	48925K13	צינור מספר חלק: 69
צינור PVC קשיח ללא הברגה בקיר סטנדרטי למים, גודל צינור 3/4, אורך 5 רגל	McMaster	48925K92	צינור PVC מספר חלק: 70
יריעת פיברגלס FRP מבנית, רוחב 48 אינץ' x 96 אינץ' אורך, 1/2 אינץ' עבה	McMaster	8537K15	חומר שולחן עליון מספר חלק: 71
צינור מרובע פיברגלס FRP מבני, אורך 10 רגל, רוחב 2 אינץ' x 2 אינץ' גבוה מבחוץ, 1/8 אינץ' עובי קיר	McMaster	8548K33	חומר שולחן מבני מספר חלק: 72
משקעי טנק	TopDawg אספקת חיות מחמד	8479001207	משקעים לתחתית מיכל סרטני הכנר מספר חלק: 73
בדיקת טמפרטורה	Neptune Systems	סוחר מקומי	בדיקת טמפרטורה למיכלים מספר חלק: 74
Tetra TetraMarine פתיתי מים מלוחים גדולים לכל הדגים הימיים	B00025K0US	מזון דגים, שרימפס וסרטנים מספר חלק: 75
משאבת אוויר לאקווריום Tetra Whisper לאקווריומים של 10 ליטר	משאבת אוויר Petco	2335234	למיכלים קטנים יותר מספר חלק: 76
התאמת צנרת דרך קיר עבה, למים, מחבר PVC, 1 שקע נקבה	McMaster	36895K843	צינור PVC מספר חלק: 77
משאבת Vectra s2	אספקת שונית בתפזורת	212141	משאבת אקווריום מספר חלק: 78
משאבת מים	TACKLIFE	GHWP1A	משאבה לניקוי מיכלים מספר חלק: 79
Wyze Cam v2 1080p HD מצלמת בית חכם WiFi מקורה עם ראיית לילה	של אמזון	B076H3SRXG	DeepLabCut הקלטה מספר חלק: 80