מאמר שיטה

אופטימיזציה של ההגדרה והתנאים עבור אלקטרורטינוגרמה של Ex Vivo כדי לחקור את תפקוד הרשתית בעיניים קטנות וגדולות

DOI:

10.3791/62763

⸱

27 ביוני 2022

 ,  , 
1John A. Moran Eye Center, University of Utah

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שינוי של מערך multielectrode קיים או ציוד מהדק תיקון עושה את ex vivo electroretinogram נגיש יותר. שיטות משופרות לתיעוד ושמירה על תגובות אור ex vivo מקלות על חקר תפקוד התאים הפוטורצפטורים וה-ON-דו-קוטביים ברשתית הבריאה, מודלים של בעלי חיים של מחלות עיניים ורשתיות של תורמים אנושיים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מדידות של תגובות אור עצביות ברשתית הן קריטיות לחקר הפיזיולוגיה של הרשתית הבריאה, לקביעת שינויים פתולוגיים במחלות רשתית ולבדיקת התערבויות טיפוליות. האלקטרורטינוגרמה ex vivo (ERG) מאפשרת כימות של תרומות מסוגי תאים בודדים ברשתית המבודדת על ידי הוספת חומרים פרמקולוגיים ספציפיים והערכה של שינויים פנימיים ברקמה ללא תלות בהשפעות מערכתיות. ניתן למדוד את תגובות אור הרשתית באמצעות מחזיק דגימת ex vivo ERG מיוחד ומערך הקלטה, ששונה מציוד קיים של מהדק טלאי או מערך מיקרואלקטרודה. במיוחד, המחקר של תאים דו-קוטביים על-קוטביים, אך גם של פוטורצפטורים, נפגע על ידי הירידה האיטית אך המתקדמת של תגובות האור ב-ex vivo ERG לאורך זמן. מהירות זלוף מוגברת והתאמת טמפרטורת ההפרשה משפרים את תפקוד הרשתית ex vivo וממקסמים את משרעת התגובה והיציבות. ה- ex vivo ERG מאפשר באופן ייחודי לחקור סוגי תאים עצביים ברשתית בודדים. בנוסף, שיפורים למקסום אמפליטודות התגובה והיציבות מאפשרים לחקור תגובות אור בדגימות רשתית מבעלי חיים גדולים, כמו גם מעיני תורמים אנושיים, מה שהופך את ה- ex vivo ERG לתוספת רבת ערך לרפרטואר הטכניקות המשמשות לחקר תפקוד הרשתית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אלקטרורטינוגרפיה מודדת את תפקוד הרשתית בתגובה לאור1. הוא חלק בלתי נפרד מלימוד הפיזיולוגיה והפתופיזיולוגיה של הרשתית, ומדידת ההצלחה של טיפולים במחלות רשתית. ה- in vivo ERG נמצא בשימוש נרחב להערכת תפקוד הרשתית באורגניזמים שלמים, אך יש לו מגבלות משמעותיות 2,3. בין אלה, הניתוח הכמותי של סוגי תאי רשתית בודדים ב- in vivo ERG נפגע, שכן הוא רושם את סכום השינויים הפוטנציאליים, ולכן תגובות כיסוי, מכל תאי הרשתית לגירויים קלים4. יתר על כן, הוא אינו מאפשר בקלות תוספת של תרופות לרשתית, הוא פגיע להשפעות סיסטמיות, ויש לו יחס אות לרעש נמוך יחסית. חסרונות אלה מתבטלים ב- ex vivo ERG החוקר את תפקוד הרשתית המבודדת 2,3,5,6. ה- ex vivo ERG מאפשר הקלטה של תגובות גדולות ויציבות מסוגי תאי רשתית ספציפיים על ידי הוספת מעכבים פרמקולוגיים והערכה קלה של חומרים טיפוליים, אשר ניתן להוסיף לסופרפוזט. יחד עם זאת, הוא מסיר השפעות של השפעות מערכתיות ומבטל רעש פיזיולוגי (למשל, פעימות לב או נשימה).

ב- ex vivo ERG, רשתיות או דגימות רשתית מבודדות ומותקנות בצד הפוטורצפטור למעלה על הכיפה של מחזיק הדגימה 3,5. מחזיק הדגימה מורכב, מחובר למערכת זלוף המספקת לרשתית מדיה מחוממת ומחומצנת, ומונח על במת מיקרוסקופ, אשר שונה כדי לספק גירויי אור מבוקרי מחשב. כדי לתעד את התגובות שמעוררות האור, מחזיק הדגימה מחובר למגבר, לדיגיטייזר ולמערכת הקלטה (איור 1). טכניקה זו מאפשרת בידוד של תגובות מפוטורצפטורים של מוטות וחרוטים, תאי ON-bipolar ו-Müller glia על ידי שינוי הפרמטרים של גירויי האור והוספת חומרים פרמקולוגיים.

ניתן להמיר מהדק תיקון קיים או מערך רב-אלקטרודות (MEA) להקלטת ex vivo ERG, בשילוב עם מתאם ex vivo ERG זמין מסחרית או מחזיק דגימה מותאם אישית במכונה של מחשב פוליקרבונט (CNC), כדי למדוד את תגובות האור ברשתיות ממודלים של בעלי חיים קטנים, כגון עכברים. שינוי זה מגדיל את הנגישות של ex vivo ERG תוך מזעור הצורך בציוד מיוחד. העיצוב של מחזיק הדגימה מפשט את טכניקת ההרכבה ומשלב אלקטרודות, ומבטל את הצורך במניפולציה של מיקרואלקטרודות בהשוואהלשיטות ex vivo ERG שדווחו בעבר 7. קצב הזלוף והטמפרטורה בתוך בעל הדגימה הם גורמים חשובים המשפיעים על תכונות התגובה של פוטורצפטורים ותאי ON-bipolar. על ידי התאמת תנאים אלה, ניתן להקליט את ה- ex vivo ERG באופן אמין מרשתית העכבר המבודדת לאורך פרקי זמן ממושכים. תנאי ניסוי ממוטבים מאפשרים הקלטות ex vivo ERG באגרופים ברשתית מרשתיות גדולות יותר, כולל עיניים גדולות של בעלי חיים ועיניים של תורמים אנושיים8.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים בעכברים נערכו בהתאם למדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה המוסדית למחקרים בבעלי חיים באוניברסיטת יוטה. עיני חזיר להדגמת הסרטון הזה הושגו לאחר המוות מבית המטבחיים (משאבי חזירים בני קיימא, ג'ונסוןוויל). העיניים התקבלו מתורמים אנושיים לאחר מוות מוחי או לבבי בהסכמה לשימוש מחקרי באמצעות בנק העיניים של יוטה ליונס, בנק העיניים של סן דייגו או Lifesharing, אשר הוסמכו באופן מלא על ידי ה- FDA, איגוד ארגוני רכש האיברים (AOPO) ואיגוד בנקי העיניים של אמריקה. לשימוש בעיניים של תורמים אנושיים היה מעמד פטור באוניברסיטת יוטה (IRB מס' 00106658) וב-ScrippsHealth IRB (IRB מס' 16-6781).

1. הגדרת ה- ex vivo ERG

  1. כדי להמיר מערך רב-אלקטרודות, חבר את מחזיק הדגימה ex vivo ERG באמצעות שלב ראש למגבר דיפרנציאלי, המחובר לכניסה האנלוגית של לוח הממשק של מערכת מערך הרב-אלקטרודות. השתמש בתוכנת ההקלטה עבור מערך multielectrode כדי להקליט ולאחסן את נתוני הקלט מ- ex vivo ERG. הגדר את הרווח של מגבר הדיפרנציאל ל-100 והוסף הגברה נוספת של 10x מתח בהתאם למפרט הדיגיטייזר. הגדר את מסנן המעבר הנמוך ל- 100 הרץ.
  2. כדי להמיר מערך מהדק טלאי, חבר את מחזיק הדגימה ex vivo ERG באמצעות שלב ראש למגבר דיפרנציאלי, המחובר לשלב הראש של מגבר מהדק התיקון. השתמש בתוכנת מערכת מהדק התיקון וב- digitizer כדי להקליט ולאחסן את נתוני הקלט מ- ex vivo ERG. הגדר את הרווח של מגבר הדיפרנציאל ל-100 והפעל הגברה נוספת של 10x מתח באמצעות שלב ראש מהדק התיקון. הגדר את מסנן המעבר הנמוך ל- 100 הרץ.
  3. חבר נורות LED עם אורכי הגל המתאימים (למשל, כ-530 ננומטר כדי לעורר תגובות של תאי מוט פוטורצפטור ותאי ON-bipolar) למיקרוסקופ. שלוט בנורות ה- LED באמצעות תוכנת הקלטה המאפשרת הפעלה של גירויים קלים. כדי לשלוט בגירויים של אור, השתמש בדרייבר LED הנשלט על-ידי יציאות אנלוגיות מדיגיטייזר.
  4. כייל את תפוקת האור של נוריות ה-LED במיקום הרשתית במחזיק הדגימה באמצעות פוטודיודה. במידת הצורך, הכנס מסנני צפיפות ניטרליים לנתיב האור כדי לעמעם את עוצמת האור.
  5. השתמש במחזיק דגימת ex vivo ERG זמין מסחרית או מותאם אישית.
    הערה: שרטוטים לעיבוד CNC מפוליקרבונט ניתן לקבל מהמחברים על פי בקשה.
  6. כדי להכין את האלקטרודה, הכנס אלקטרודת גלולת Ag/AgCl למחבר לואר מושחל. מלא את החלק הפנימי של מחבר הלואר בדבק חם והכנס שקע של 2 מ"מ לתוך הדבק החם מהצד שאינו מושחל. הלחמה חוט כסף של אלקטרודת EP1 לשקע 2 מ"מ. הברג את האלקטרודה המוגמרת, עם טבעת o על החוט, לתוך יציאות האלקטרודה של מחזיק הדגימה ex vivo ERG.
    הערה: ניתן להשתמש באלקטרודות במשך זמן רב. אם משטח הכדור צובר לכלוך ו/או מחשיך (הדבר עלול לגרום למתח היסט גבוה ו/או לסחיפה חשמלית), ניתן "ללטש" אותו באמצעות נייר זכוכית עדין.
  7. לפחות יום אחד לפני הניסוי, הדבק ניירות סינון על הכיפות של מחזיק הדגימה ex vivo ERG באמצעות דבק אפוקסי, כדי להבטיח שהדבק לא יחסם את תעלת האלקטרודה (ראה 3 לווידאו).

2. הכנת בעלי חיים

  1. חשוכים מסתגלים לבעלי חיים למשך 6 שעות לפחות או למשך הלילה.

3. הכנת ציוד

  1. מלאו את קו ההזלפה של ה-ex vivo ERG במדיום של איימס עם 5% פחמן דו חמצני ו-95% חמצן. חבר את קו הזלוף לגוף חימום עם מקור זרם DC או בקר חום ליד מחזיק הדגימה כדי לחמם את המדיום של איימס, כך שהרשתית נשמרת בערך 35-38 מעלות צלזיוס.
  2. מלא את שני החצאים של מחזיק הדגימה ex vivo ERG בתמיסת אלקטרודות, אטם את קו ההזלפה עם פקקי luer, חבר את האלקטרודות והרכיב את מחזיק הדגימה עם ארבעה ברגים (ראה 3 לווידאו).
  3. בדוק את מתח ההתנגדות וההיסט בין האלקטרודות במחזיק הדגימה המורכב על ידי הכנסת הגששים של המולטימטר לאלקטרודות.
    הערה: אם אין חסימות, והאלקטרודות במצב טוב, ההתנגדות צריכה להיות מתחת ל-100 kΩ ומתח הקיזוז מתחת ל-5 mV.
  4. חברו את מחזיק הדגימה המורכב לקו הזלוף והניחו על הבמה של מיקרוסקופ שהוקם כדי לספק הבזקי אור. ודא כי מחזיק הדגימה וקו הזלוף אינם מכילים בועות אוויר.

4. הכנת רקמות

  1. להקריב את החיה עם CO2 ומיד לעטוף את העיניים, או להשיג עיניים גדולות של בעל חיים או אדם תורם.
  2. נקו את הגלובוס של רקמת החיבור הנותרת והשרירים החוץ-עיניים. לחתוך את עצב הראייה.
  3. על נייר סינון, בזהירות למקם חתך קטן עם סכין גילוח לאורך אורה serrata, כ 1 מ"מ מן הלימבוס בעין העכבר. מכניסים מספריים עדינים של ואנה לתוך החתך וחותכים לאורך הלימבוס כדי להסיר את החלק הקדמי של העין עם העדשה.
  4. העבירו את העיניים לצלחת המכילה את המדיום של איימס. תפסו את הסקלרה עם מלקחיים עדינים, תוך הקפדה שלא לגעת ברשתית. מכניסים מספריים של ואנה בין הרשתית לסקלרה וחותכים את הסקלרה מהחלק ההיקפי לכיוון החלק המרכזי. יש להיזהר שלא לגעת או לפגוע ברשתית.
  5. לשתק את הסקלרה על ידי החזקת צד אחד של החתך עם מספריים vannas על החלק התחתון של צלחת דיסקציה. תפסו את הסקלרה עם מלקחיים בצד השני של החתך. הסר את הסקלרה מבלי לגעת או לפגוע ברשתית על ידי פירוק הסקלרה משני צדי החתך כדי לאפשר בידוד של הרשתית עם נזק מינימלי לרקמה.
  6. הסר את המקטע הקדמי עם העדשה מהעין העמיתה ואחסן את העין בטמפרטורת החדר בתמיסה של איימס המבעבעת ב-5% פחמן דו חמצני ו-95% חמצן.
    הערה: ניתן לקבל תגובות אור פונקציונליות מעיניים המאוחסנות בדרך זו במשך מספר שעות.
  7. בעיניים גדולות, כולל עיני תורם אנושיות, נקו את הגלובוס של רקמת החיבור שנותרה והסירו את המקטע הקדמי ואת העדשה, בדומה להליך המתואר לעין העכבר. השתמש באזמל כדי לבצע חתך כ 3 מ"מ מן הלימבוס. הכנס מספריים דיסקציה מעוקלים לתוך החתך לחתוך לאורך הלימבוס כדי להסיר את החלק הקדמי של העין עם העדשה. השג דגימות רשתית עבור אלקטרורטינוגרפיה ex vivo עם אגרוף ביופסיה חד פעמית 3-6 מ"מ.

5. הרכבת הרקמה על מחזיק הדגימה

  1. הכניסו את החצי התחתון של מחזיק הדגימה לתוך צלחת פטרי גדולה ומלאו במדיום של איימס מחומצן, כך שהכיפה של מחזיק הדגימה פשוט שקועה.
  2. תופסים בזהירות את קצה הרשתית עם מלקחיים עדינים ומעבירים את הרשתית על הכיפה של מחזיק הדגימה ex vivo , צד הפוטורצפטור פונה כלפי מעלה.
  3. הרם את מחזיק הדגימה מהפתרון של איימס, ודאג שהרשתית תישאר במקומה.
  4. ייבש לחלוטין את הצלחת של מחזיק הדגימה כדי למזער רעשים, crosstalk חשמלי, ו shunting אותות.
  5. הרכיבו את שני חצאי מחזיק הדגימה עם ארבעה ברגים וחברו את קו הזליפה. יבשו את האלקטרודה בחצי התחתון של מחזיק הדגימה וחברו את כבל האנודה לצד הרשתית הפנימית ואת כבל הקתודה לצד הפוטורצפטור.
  6. יש למזג את מחזיק הדגימה עם לפחות 1 מ"ל/דקה של מדיום איימס מחומצן למשך 10-20 דקות כדי לאפשר זמן לתגובות האור להתייצב.

6. רישום תפקוד תאי עצב ברשתית

  1. תעדו משפחות תגובה על ידי חשיפת הרשתית להבזקי אור בעוצמה הולכת וגוברת. לדוגמה, לתעד משפחות תגובות של מוטות עכבר עם עוצמות אור הנעות בין כ-10 ל-1,000 פוטונים/מיקרומטר 2 ומשפחות מתאי ON-bipolar של עכברים עם עוצמות אור הנעות בין כ-0.6 ל-20 פוטונים/מיקרומטר2.
  2. מדוד תגובות אור פוטורצפטור (a-wave) בנוכחות בריום כלוריד של 100 μM, שחוסם תעלות אשלגן בתאי גליה של מולר, ו-40 μM DL-AP4, שחוסם העברת אותות גלוטמטרגיים לתאי ON-דו-קוטביים (איור 2B).
  3. כדי לבודד את גל ה-b, שמקורו בתפקוד של תאי ON-דו-קוטביים, תחילה תיעדו תגובות אור משולבות הן מתאי פוטורצפטור והן מתאי ON-דו-קוטביים בנוכחות בריום כלוריד בלבד (איור 2A). לאחר מכן, יש לחדור במשך 5-10 דקות עם המדיום של איימס המכיל בריום כלוריד, כמו גם DL-AP4, ולהקליט תגובות פוטורצפטור לאותם גירויי אור כמו קודם (איור 2B). הפחת תגובות פוטורצפטור מתגובות משולבות של תאים פוטורצפטורים ותאי ON-דו-קוטביים, ובכך חישב את תגובות האור של תאי ON-דו-קוטביות בלבד (איור 2C).

7. אופטימיזציה של תפקוד התא הדו-קוטבי

הערה: גל b, שמקורו בתאים הדו-קוטביים ON, רגיש מאוד לטמפרטורה במחזיק הדגימה ולקצב הזליפה.

  1. שמרו על קצב זלוף של לפחות 0.5 מ"ל/דקה כדי לקבל את גל ה-b.
    הערה: קצב זלוף גבוה יותר של 1-2 מ"ל/דקה עדיף כדי לשמור על תגובה גדולה ויציבה של תאים דו-קוטביים ON.
  2. ודא כי עבור קצב זלוף נתון, הטמפרטורה במחזיק הדגימה ליד הרשתית קרובה לטמפרטורת הגוף (כלומר, בערך 35-38 מעלות צלזיוס).
    הערה: חשוב להתאים את הטמפרטורה של הבשתן, המחומם לפני שהוא מגיע למחזיק דגימת ex vivo ERG, כך שהוא נמצא בטווח הטמפרטורות האופטימלי ברשתית.
  3. יש לאחסן את כוסות העיניים לניסויים מאוחרים יותר מוגנות מפני אור ובמדיום מחומצן של איימס בטמפרטורת החדר כדי לשמור על גלי A ו-B תקינים למשך מספר שעות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אקס ויוו ERG מאפשר הקלטה של תגובות אור פוטורצפטור ותאים דו-קוטביים הניתנים לשחזור ויציבות, לדוגמה, מרשתית העכבר (איור 2A-C). הקלטה של תגובות פוטורצפטור מרשתיות של תורמים אנושיים אפשרית עם עיכוב של עד 5 שעות לאחר המוות של אנוקלציה (איור 2D) ושל תגובות תאים דו-קוטביים ON עם עיכוב של <20 דקות באנוקלציה (איור 2E). פרמטרים חשובים לקבלת תגובות גדולות כוללים טכניקת דיסקציה זהירה, קצב זלוף גבוה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הוא פותח במקור בשנת 1865 על ידי הולמגרן כדי למדוד את תגובות האור ברשתית מהרשתיתהדו-חיים 10, אך אילוצים טכניים מנעו בתחילה שימוש נרחב ב-ERG. אף על פי כן, מחקרים ראשוניים של Ragnar Granit ואחרים זיהו את המקורות התאיים של ה-ERG ומדדו תגובות של תאים פוטורצפטורים ותאי ON-bipolar exvivo 11,12,13. מאז, שיטות מעודנות אפשרו שימוש נרחב יותר בהקלטות ex vivo ERG 14,15, אם כי אמפליטודות התגובה, במיוח...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאף אחד מהכותבים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המכון הלאומי לעיניים EY02665 ו- EY031706 והקרן הבינלאומית לחקר הרשתית לד"ר וינברג, מענק הליבה של המכונים הלאומיים לבריאות (EY014800), ומענק בלתי מוגבל ממחקר למניעת עיוורון, ניו יורק, ניו יורק, למחלקה לרפואת עיניים ומדעי הראייה, אוניברסיטת יוטה. ד"ר פרנס וינברג זכה גם בפרס מחקר למניעת עיוורון / פרס פיתוח הקריירה החופשית של ד"ר ה. ג'יימס וקרול, וד"ר סילקה בקר ממענק ARVO EyeFind. אנו מודים לד"ר אן הנקן ממכון המחקר סקריפס על כך שסיפקה את עין התורם המשמשת להקלטות המוצגות באיור 2E.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
שקע 2 מ"מWPI2026-10חומרים להכנת אלקטרודה
Ag/AgCl אלקטרודהWorld Precision InstrumentsEP1חומרים להכנת אלקטרודה
מדיום איימססיגמא אולדריץ'A1420מדיית זלוף
בריום כלורידסיגמא אולדריץ'B0750חוסם תעלות אשלגן
DL-AP4טוקריס0101אנטגוניסט גלוטמטרגי בספקטרום רחב
OcuScience Ex Vivo ERG מתאםOcuSciencen/aex vivo ERG מחזיק דגימה
מחבר לואר הברגהMcMaster-Carr51525K222 או 51525K223חומרים להכנת אלקטרודה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System. , (1995).
  2. Bonezzi, P. J., Tarchick, M. J., Renna, J. M. Ex vivo electroretinograms made easy: performing ERGs using 3D printed components. Journal of Physiology. 598 (21), 4821-4842 (2020).
  3. Vinberg, F., Kefalov, V. Simultaneous ex vivo functional testing of two retinas by in vivo electroretinogram system. Journal of Visualized Experiments. (99), e52855(2015).
  4. Heckenlively, J. R., Arden, G. B. Principles and Practice of Clinical Electrophysiology of Vision. , MIT Press. (2006).
  5. Vinberg, F., Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. Ex vivo ERG analysis of photoreceptors using an in vivo ERG system. Vision Research. 101, 108-117 (2014).
  6. Winkler, B. S. Calcium and the fast and slow components of P3 of the electroretinogram of the isolated rat retina. Vision Research. 14 (1), 9-15 (1974).
  7. Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. A dissection of the electroretinogram from the isolated rat retina with microelectrodes and drugs. Visual Neuroscience. 16 (4), 727-741 (1999).
  8. Abbas, F., et al. Revival of light signalling in the postmortem mouse and human retina. Nature. , (2022).
  9. Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. Diabetic photoreceptors: Mechanisms underlying changes in structure and function. Visual Neuroscience. 37, (2020).
  10. Kantola, L., Piccolino, M., Wade, N. J. The action of light on the retina: Translation and commentary of Holmgren (1866). Journal of the History of the Neurosciences. 28 (4), 399-415 (2019).
  11. Frank, R. N., Dowling, J. E. Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina. Science. 161 (3840), 487-489 (1968).
  12. Hamasaki, D. I. The effect of sodium ion concentration on the electroretinogram of the isolated retina of the frog. Journal of Physiology. 167 (1), 156-168 (1963).
  13. Granit, R. The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve. Journal of Physiology. 77 (3), 207-239 (1933).
  14. Donner, K., Hemila, S., Koskelainen, A. Temperature-dependence of rod photoresponses from the aspartate-treated retina of the frog (Rana temporaria). Acta Physiologica Scandinavica. 134 (4), 535-541 (1988).
  15. Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation. Vision Research. 39 (13), 2165-2177 (1999).
  16. Luke, M., et al. The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function. Brain Research Protocols. 16 (1-3), 27-36 (2005).
  17. Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. Rod phototransduction and light signal transmission during type 2 diabetes. BMJ Open Diabetes Research and Care. 8 (1), 001571(2020).
  18. Nymark, S., Haldin, C., Tenhu, H., Koskelainen, A. A new method for measuring free drug concentration: retinal tissue as a biosensor. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (6), 2583-2588 (2006).
  19. Winkler, B. S., Kapousta-Bruneau, N., Arnold, M. J., Green, D. G. Effects of inhibiting glutamine synthetase and blocking glutamate uptake on b-wave generation in the isolated rat retina. Visual Neuroscience. 16 (2), 345-353 (1999).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Ex Vivo ERGRetinal Light ResponsesON Bipolar CellsPhotoreceptor ResponsesMulti Electrode ArrayPatch ClampPerfusion SpeedHuman Donor RetinaAmes Medium

מאמרים קשורים