הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

העברה של miRNA אקסוגני מסונתז באופן מלאכותי לחקות לכליה באמצעות ננו-חלקיקי פוליאתילנימין במספר מודלים של עכברים למחלות כליות

1.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63302

⸱

10 במאי 2022

 ,  ,  ,  , 
1Division of Nephrology, First Department of Integrated Medicine, Saitama Medical Center, Jichi Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מספקים חיקויי miRNA אקסוגניים מסונתזים באופן מלאכותי לכליה באמצעות הזרקת וריד זנב של וקטור לא ויראלי וננו-חלקיקי פוליאתילנימין במספר מודלים של עכברים למחלות כליות. זה הוביל לביטוי יתר משמעותי של miRNA המטרה בכליה, וכתוצאה מכך עיכוב התקדמות של מחלת כליות במספר מודלים של עכברים.

תקציר

מיקרו-רנ"א (miRNAs), רנ"א קטן שאינו מקודד (21-25 בסיסים) שאינו מתורגם לחלבונים, מעכב הרבה רנ"א שליח מטרה (mRNAs) על ידי ערעור ועיכוב תרגומם במחלות כליות שונות. לכן, החלפה של ביטוי miRNA על ידי חיקוי miRNA אקסוגני מסונתז מלאכותית היא אפשרות טיפול שימושית פוטנציאלית לעיכוב התפתחות של מחלות כליות רבות. עם זאת, מכיוון ש-RNAase בסרום מתפרק באופן מיידי בחיקוי miRNA אקסוגני הניתן באופן שיטתי in vivo, אספקת miRNA לכליה נותרה אתגר. לכן, וקטורים שיכולים להגן על miRNA אקסוגני מחקה מפני פירוק על ידי RNAase ולהעביר אותם באופן משמעותי לכליה נחוצים. מחקרים רבים השתמשו בווקטורים נגיפיים כדי להעביר miRNA אקסוגני מחקה או מעכב לכליה. עם זאת, וקטורים נגיפיים עלולים לגרום לתגובת אינטרפרון ו / או חוסר יציבות גנטית. לכן, פיתוח וקטורים נגיפיים הוא גם מכשול לשימוש קליני של miRNA אקסוגני מחקה או מעכבים. כדי להתגבר על חששות אלה בנוגע לווקטורים נגיפיים, פיתחנו שיטה וקטורית לא-ויראלית להעברת חיקויי miRNA לכליה באמצעות הזרקת וריד זנב של ננו-חלקיקי פוליאתילנימין (PEI-NPs), מה שהוביל לביטוי יתר משמעותי של miRNA מטרה במספר מודלים עכבריים של מחלת כליות.

מבוא

miRNAs, רנ"א קטן שאינו מקודד (21-25 בסיסים) שאינו מתורגם לחלבונים, מעכב הרבה רנ"א שליח מטרה (mRNAs) על ידי ערעור יציבותם ועיכוב תרגומם במחלות כליות שונות 1,2. לכן, ריפוי גנטי המשתמש בחיקוי או מעכבי miRNA אקסוגניים מסונתזים באופן מלאכותי הוא אפשרות חדשה פוטנציאלית לעיכוב התפתחותן של מחלות כליות רבות 3,4,5.

למרות ההבטחה של miRNA מחקה או מעכבים עבור ריפוי גנטי, משלוח לאיברי המטרה נותר משוכה גדולה עבור ניסויים in vivo לפתח את הפוטנציאל הקליני שלהם. מכיוון שמירנ"א מסונתז באופן מלאכותי מחקה או מעכב נתונים לפירוק מיידי על ידי RNase בסרום, מחצית החיים שלהם מתקצרת עם מתן מערכתי in vivo6. בנוסף, היעילות של miRNA מחקה או מעכב לחצות את קרום הפלזמה ואת הציטופלסמה transfect הוא בדרך כלל הרבה יותר נמוך ללא וקטורים מתאימים 7,8. קווי ראיות אלה מצביעים על כך שנדרש פיתוח מערכת חיקוי או מעכבי miRNA לכלייה, כדי לאפשר את השימוש בהם במסגרות קליניות ולהפוך אותם לאפשרות טיפול חדשה בחולים עם מחלות כליה שונות.

וקטורים נגיפיים שימשו כנשאים להעברת miRNA אקסוגני מחקה או מעכב לכליה 9,10. למרות שהם פותחו עבור בטיחות ביולוגית ויעילות transfection, וקטורים נגיפיים עדיין עלולים לגרום לתגובת אינטרפרון ו / או חוסר יציבות גנטית11,12. כדי להתגבר על חששות אלה, פיתחנו מערכת miRNA המחקה את העברת הכליה באמצעות ננו-חלקיקי פוליאתילנימין (PEI-NPs), וקטור לא ויראלי, במספר מודלים עכבריים של מחלת כליות13,14,15.

PEI-NPs הם NPs ליניאריים מבוססי פולימר שיכולים להעביר ביעילות אוליגונוקלאוטידים, כולל חיקויי miRNA, לכליה, ונחשבים עדיפים להכנת וקטורים לא נגיפיים בגלל בטיחותם לטווח ארוך ותאימות ביולוגית13,16,17.

מחקר זה מדגים את ההשפעות של miRNA אקסוגני שיטתי המחקה העברה עם PEI-NPs באמצעות הזרקת ורידים בזנב בעכברי מודל פיברוזיס כלייתי המיוצרים על ידי חסימת שופכן חד צדדית (UUO). בנוסף, אנו מדגימים את ההשפעות של miRNA אקסוגני שיטתי המחקה העברה עם PEI-NPs באמצעות הזרקת ורידים בזנב בעכברי מודל של מחלת כליות סוכרתית (עכברי db/db: C57BLKS/J Iar -+Lepr db/+Leprdb) ובעכברי מודל של פגיעה חריפה בכליות המיוצרים על ידי פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה כלייתית (IRI).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הפרוטוקולים לניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית ג'יצ'י ובוצעו בהתאם להנחיות השימוש והטיפול בחיות ניסוי של מדריך האוניברסיטה הרפואית ג'יצ'י לחיות מעבדה. כאן, הדגמנו miRNA המחקה העברה לכליה וכתוצאה מכך ביטוי יתר שלה באמצעות עכברי UUO. מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של האוניברסיטה הרפואית ג'יצ'י [אישור מס '19-12 עבור פיברוזיס כליות, 17-024 עבור זיהום כליות חריף (AKI), ו 19-11 עבור נפרופתיה סוכרתית].

1. הכנת קומפלקס PEI-NPs-miRNA-mimic

הערה: כאן, הכנה של PEI-NPs-miRNA-mimic13,14,15 ו- PEI-NPs-control-miRNA (כבקרה שלילית) מתוארים עבור עכבר אחד.

  1. הכינו את הפריטים הבאים:
    1. הכינו 10 μL של PEI-NPs ליניאריים.
    2. הכינו 50 מיקרוליטר של miRNA מסונתז באופן מלאכותי המומס במים נטולי נוקלאז בריכוז של 100 מיקרומטר (5 nmol miRNA מומס ב-50 מיקרוליטר מים נטולי נוקלאז).
    3. הכינו 50 μL של miRNA מבוקרים מסונתזים באופן מלאכותי (ללא מטרה) המומסים במים נטולי נוקלאז בריכוז של 100 מיקרומטר (5 nmol miRNA מומס ב-50 מיקרוליטר מים נטולי נוקלאז).
    4. הכינו תמיסות גלוקוז של 5% ו-10%. ודא את זמינותם של צינורות מיקרוצנטריפוגות 1.5 מ"ל ומערבל מערבולת.
  2. להמיס 10 μL של PEI-NPs ב 90 μL של תמיסת גלוקוז 5% בצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל. לאחר מכן, מערבלים את הצינור בעדינות ומסתובבים כלפי מטה.
  3. ערבבו 50 μL של miRNA מסונתז באופן מלאכותי (5 nmol) מומס במים נטולי נוקלאז (ריכוז 100 μM) עם 50 μM של תמיסת גלוקוז 10% בצינורות מיקרוצנטריפוגות 1.5 מ"ל. לאחר מכן, מערבלים את הצינור בעדינות ומסתובבים כלפי מטה. תהליך זה מניב miRNA מומס בתמיסת גלוקוז 5%.
  4. ערבבו 100 μL של PEI-NPs בתמיסת גלוקוז 5% ו-100 μL של miRNA מחקה (5 nmol) בתמיסת גלוקוז 5%. לאחר מכן, מערבלים את הצינור בעדינות ומסתובבים כלפי מטה.
  5. דגרו על התערובת במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר (RT) כדי להכין קומפלקס יציב של PEI-NPs-miRNA-mimimi. תמיסה זו מכילה PEI-NPs ו-miRNA מחקה (5nmol) ביחס של חנקנים (N) בפולימר לפוספט (P) בחומצות גרעין (יחס N/P) = 6 (איור 1).
    הערה: ניתן להכין קומפלקס PEI-NPs-control-miRNA באמצעות אותו תהליך המתואר בשלבים 1.1-1.5 עבור כל המודלים של עכברי מחלות כליות המתוארים בכתב יד זה (UUO, נפרופתיה סוכרתית ו- AKI). נפח הזרקה אחד של PEI-NP-miRNAs-mimic זהה ל-5nmol של miRNAs-mimic מצומד עם PEI-NPs ביחס N/P = 6. משך ההזרקה ותדירות ההזרקה של כל חיקוי PEI-NP-miRNAs-תלוי במודל המחלה שבו הוא מיושם.

2. אישור על העברה משמעותית של miRNA mimic לכליה בעכברי UUO על ידי PEI-NP באמצעות הזרקת ורידים בזנב באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי

הערה: כאן, שיטת המסירה של miRNA מטוהר באופן מלאכותי לחקות את הכליה משוכללת, המציין הקמת שיטות טיפוליות למחלות כליות שונות. בקצרה, עכברי UUO קיבלו חיקוי miRNA עם תווית ציאנין3 חומצה קרבוקסילית (Cy3) בתוספת 100 μL של PEI-NPs דרך וריד הזנב. המסירה לכליות אושרה במיקרוסקופ פלואורסצנטי. מתואר PEI-NPs-cyanine3 חומצה קרבוקסילית (Cy3)-חיקוי miRNA (אוליגונוקלאוטידים) עבור עכבר אחד. שיטה זו יכולה לספק באופן משמעותי חיקוי miRNA לכליה במספר מודלים של עכברים, כגון עכברי UUO, עכברים חולי כליות סוכרתיים ועכברי AKI המיוצרים על ידי IRI. כאן, השתמשנו במודל עכבר UUO להדגמת הווידאו. שיטת האינדוקציה של UUO תוארה בעבר במקום אחר13. עקוב אחר פרוטוקולים אלה תוך שישה ימים לאחר ניתוח UUO.

  1. הכינו את הפריטים הבאים:
    1. הכינו 2 μL של PEI-NPs ו-100 μL של אוליגונוקלאוטידים דו-גדיליים בעלי תווית Cy3 [חיקוי miRNA עם תווית Cy3 (1 nmol; 10 μM)].
    2. הכינו תמיסות גלוקוז של 5% ו-10%. ודא את זמינותם של צינורות מיקרוצנטריפוגות 1.5 מ"ל ומערבל מערבולת.
    3. השתמש בצינור צנטריפוגה פלסטיק 50 מ"ל עם חור קטן בכובע כדי לבודד את ורידי הזנב של עכברי UUO.
    4. עבור מיקרוסקופ פלואורסצנטי, הכינו תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT), קריוסטט, חנקן נוזלי, מלח חוצץ פוספט (PBS), מזרקים 1.0 מ"ל עם מחט 27 גרם, וזכוכית מצופה סילאן.
      הערה: ניתן להכין לוטוס טטרגונולובוס לקטין (סמן צינורית פרוקסימלי) ו- 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) לצביעה אופציונלית של צינוריות פרוקסימליות וגרעיני תאים.
  2. להמיס 2 μL של PEI-NPs ב 98 μL של 10% תמיסת גלוקוז בצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל. לאחר מכן, מערבלים את הצינור בעדינות ומסתובבים כלפי מטה.
  3. הוסף 100 μL של miRNA מסומן Cy3 לחקות 100 μL של PEI-NPs בתמיסת גלוקוז 10% (מוכן בשלב 2.2). לאחר מכן, מערבלים את הצינור בעדינות ומסתובבים כלפי מטה.
  4. דגרו על התערובת במשך 15 דקות ב-RT כדי להכין קומפלקס יציב של PEI-NPs-Cy3-labeled-miRNA-mimi.
  5. הניחו את עכבר ה-UUO בצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל ללא הרדמה, ולאחר מכן הניחו את הזנב דרך החור המוכן בפקק.
  6. מלא מזרק 1.0 מ"ל עם מחט 27 G עם 200 μL של קומפלקס PEI-NPs-Cy3-miRNA-לחקות.
  7. הזריקו PEI-NPs-Cy3-miRNA-mimic (200 μL) דרך וריד הזנב של העכבר באמצעות מזרק 1.0 מ"ל עם מחט 27 גרם.
    הערה: נגבו את וריד הזנב בצמר גפן רווי אתנול (70%-80%) כדי להרחיב את וריד הזנב ולחטא את אזור ההזרקה.
  8. שעה לאחר הזרקה של 200 μL של PEI-NPs-Cy3-miRNA-מחקה מורכבות, מרדימים את העכבר עם איזופלורן (4%-5%) באמצעות מכשיר הרדמה מתאים לבעלי חיים קטנים. אשר את עומק ההרדמה עם היעדר רפלקס צביטת בוהן. לשמור על ההרדמה עם איזופלורן (3%) לאורך כל הניתוח.
  9. לאחר מכן, בצע חתך לתוך העור, השרירים והצלעות עם מספריים כירורגיים ומלקחיים כדי לחשוף את הלב. לאחר ביצוע חתך באטריום הימני, יש להזריק PBS לחדר השמאלי כדי לשאוב דם בכל הגוף עד שצבע הכליה משתנה לצהוב בהיר (מה שמעיד על כך שכל גוף העכבר מחורר עם PBS).
    הערה: זילוח הלב מבוצע כדי להסיר ביעילות את הדם בכל הגוף .
  10. עצור isoflurane ולהסיר את הכליות מן העכברים ולשטוף אותם עם PBS. לאחר מכן, להסיר כמוסות כליות מן הכליות ולשטוף את הכליות פעמיים עם PBS.
  11. יש להטמיע את דגימות רקמת הכליה בתרכובת OCT ולהקפיא בחנקן נוזלי.
  12. השתמש cryostat להכנת חלקים (5 מיקרומטר עובי). הרכיבו את המקטעים על מגלשות זכוכית מצופות סילאן וקיבעו אותם עם 4% פרפורמלדהיד.
    הערה: רקמות כליות יכולות להיות מוכתמות באופן אופציונלי בלקטין לוטוס טטרגונולובוס (2 מ"ג/מ"ל) ב-RT למשך שעתיים עבור צינוריות פרוקסימליות, ולאחר מכן DAPI (30 ננומטר ב-PBS) ב-RT למשך 15 דקות עבור גרעיני תאים.
  13. שטפו בעדינות את המגלשות פעמיים עם PBS.
  14. דמיינו את הצביעה הפלואורסצנטית על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי בהגדלה של 100x ו-400x ותוכנת הדמיה מתאימה.

3. אישור על שינויי miRNA מטרה לאחר העברת miRNA mimic לכליה על ידי PEI-NP באמצעות הזרקת וריד הזנב

  1. בצע תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (qRT-PCR) כדי לאשר את שינויי miRNA המטרה.
    הערה: עיין במאמר שפורסם בעבר לקבלת הפרטים של qRT-PCR18,19,20. מערכת qRT-PCR המשמשת ליצירת התוצאות המייצגות המפורטות להלן שונתה על ידי היצרן. qRT-PCR צריך להתבצע בהתאם לפרוטוקול היצרן העדכני ביותר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

miRNA המטרה עבור פיברוזיס כליות, נפרופתיה סוכרתית, ו AKI המתוארים להלן נבחרו על בסיס מיקרו-מערך, qRT-PCR, ו / או מסד נתונים מחקר עבור יישומי ריפוי גנטי. לפרטים נוספים ראו פרסומים קודמים13,14,15.

העברה והשפעות של miRNA-146a-5p-mimic באמצעות PEI-NPs בעכברי פיברוזיס כליות13
ניתוח מיקרוסקופיה פלואורסצנטית הראה כי הזרקת וריד הזנב של PEI-NPs יכולה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

באמצעות הפרוטוקול המוצג בכתב יד זה, PEI-NPs יכולים לספק חיקויי miRNA לכליה כדי לגרום לביטוי יתר של miRNA מטרה, וכתוצאה מכך השפעות טיפול במודלים עכברי in vivo של מספר מחלות כליות, כולל פיברוזיס כליות, מחלת כליות סוכרתית ו- AKI.

השיטה להכנת קומפלקס של PEI-NPs וחיקוי miRNA היא פשוטה מאוד. פני השטח הטעונים חיובית של PEI-NPs לוכדים את חיקוי ה-miRNA כאשר הם רק מעורבבים 13,14,15,16,17

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.

תודות

עבודה זו נתמכה חלקית על ידי JSPS KAKENHI (מענק מס' 21K08233). אנו מודים לאדנץ (https://jp.edanz.com/ac) על עריכת טיוטות כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4',6-diamidino-2-phenylindole לצביעה לגרעיןThermo Fisher ScientificD-1306
Buffer RPEQiagen79216מאגר כביסה 2
מאגר RWTQiagen1067933Wash Buffer 1
Control-miRNA-mimic (miRNA מסונתז באופן מלאכותי)Thermo Fisher Scientificלא הוקצה5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT- 3' (sense)
5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′ (אנטיסנס)
אוליגונוקלאוטידים דו-גדיליים עם תווית Cy3Takara Bio Inc.
Fluorescein-labeled Lotus tetragonolobus לקטין וקטורמעבדות בע"מFL-1321
In vivo-jetPEIPolyplus101000021
מיקרו-אמפר אופטי 96-באר צלחת תגובה עבור qRT-PCRתרמו פישר מדעי431681396 בארות צלחת תגובה
מיקרו-אמפ סרט דבק אופטיתרמו פישר מדעי4311971סרט דבק לצלחת תגובה 96 בארות
miRNA-146a-5p חיקוי (miRNA מסונתז באופן מלאכותי)Thermo Fisher Scientificלא הוקצה5'-UGAGAACUGAAUUCCAUGGGU
UT-3′ (חוש) 5'-CCCAUGGAAUUCAGUUCUCAUU -3′ (אנטיסנס)
miRNA-146a-5p פריימרQiagenMS00001638 לא זמין מכיוון ש-Qiagen שינתה ערכות qRT-PCR (ממערכת miScript miRNA PCR למערכת miRNA miRNA PCR ממאי 2021)
miRNA-181b-5p חיקוי (miRNA מסונתז באופן מלאכותי)עיצוב גניםלא הוקצה5'-AACAUUCAUUGCUGUCGGUGG
GUU-3'
פריימר miRNA-181b-5pQiagenMS00006083לא זמין מכיוון ש-Qiagen שינתה ערכות qRT-PCR (ממערכת miScript miRNA PCR למערכת miRNA miRNA PCR של miRCURY ממאי 2021)
miRNA-5100-mimic (miRNA מסונתז באופן מלאכותי)עיצוב גניםלא הוקצה5'-UCGAAUCCCAGCGGUGCCUCU -3′
miRNA-5100-primerQiagenMS00042952לא זמין מכיוון ש-Qiagen שינתה ערכות qRT-PCR (ממערכת miScript miRNA PCR למערכת miRCURY LNA miRNA PCR ממאי 2021)
miRNeasy Mini kitQiagen217004עמודת ספין מעוגנת ממברנה בצינור איסוף של 2.0 מ"ל
ערכת miScript II RTQiagen218161לא זמין מכיוון ש-Qiagen שינתה ערכות qRT-PCR (ממערכת miScript miRNA PCR למערכת miRCURY LNA miRNA PCR ממאי 2021)
miScript ערכת PCR ירוקה של miScript SYBRQiagen218073לא זמין מכיוון ש-Qiagen שינתה ערכות qRT-PCR (ממערכת miScript miRNA PCR למערכת miRCURY LNA miRNA PCR ממאי 2021)
מגרסת QIAQiagen79654עמודות ספין ביופולימר בצינור
איסוף של 2.0 מ"למגיב ליזה QIAzolQiagen79306מגיב ליזה מבוסס פנול/גואנידין
QuantStudio 12K Flex מערכת PCR בזמן אמתThermo Fisher Scientific4472380מכשיר PCR בזמן אמת
QuantStudio 12K Flex תוכנה גרסה 1.2.1.Thermo Fisher Scientific4472380תוכנת מכשיר PCR בזמן אמת
ללא RNaseQiagen129112
RNU6-2 פריימרQiagenMS00033740לא זמין מכיוון ש-Qiagen שינתה ערכות qRT-PCR (ממערכת miScript miRNA PCR למערכת miRCURY LNA miRNA PCR ממאי 2021)
Tissue-Tek OCT (תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית)Sakura Finetek Japan Co., Ltd.לא מוקצה
MIR7900 מים

מקורות

  1. Mohr, A. M., Mott, J. L. Overview of microRNA biology. Seminars in Liver Disease. 35 (1), 3-11 (2015).
  2. Bushati, N., Cohen, S. M. microRNA functions. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 23, 175-205 (2007).
  3. Simpson, K., Wonnacott, A., Fraser, D. J., Bowen, T. microRNAs in diabetic nephropathy: From biomarkers to therapy. Current Diabetes Reports. 16 (3), 35(2016).
  4. Yheskel, M., Patel, V. Therapeutic microRNAs in polycystic kidney disease. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 26 (4), 282-289 (2017).
  5. Lv, W., et al. Therapeutic potential of microRNAs for the treatment of renal fibrosis and CKD. Physiological Genomics. 50 (1), 20-34 (2018).
  6. Dykxhoorn, D. M., Lieberman, J. The silent revolution: RNA interference as basic biology, research tool, and therapeutic. Annual Review of Medicine. 56, 401-423 (2005).
  7. Dykxhoorn, D. M., Palliser, D., Lieberman, J. The silent treatment: siRNAs as small molecule drugs. Gene Therapy. 13 (6), 541-552 (2006).
  8. Stewart, S. A., et al. Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells. RNA. 9 (4), 493-501 (2003).
  9. Deng, M., et al. Klotho gene delivery ameliorates renal hypertrophy and fibrosis in streptozotocin-induced diabetic rats by suppressing the Rho-associated coiled-coil kinase signaling pathway. Molecular Medicine Reports. 12 (1), 45-54 (2015).
  10. Zhou, Y., et al. Suppressor of cytokine signaling (SOCS) 2 attenuates renal lesions in rats with diabetic nephropathy. Acta Histochemica. 116 (5), 981-988 (2014).
  11. Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors. Current Gene Therapy. 3 (6), 545-565 (2003).
  12. Lukashev, A. N., Zamyatnin, A. A. Viral vectors for gene therapy: Current state and clinical perspectives. Biochemistry. Biokhimiia. 81 (7), 700-708 (2016).
  13. Morishita, Y., et al. Delivery of microRNA-146a with polyethylenimine nanoparticles inhibits renal fibrosis in vivo. International Journal of Nanomedicine. 10, 3475-3488 (2015).
  14. Ishii, H., et al. MicroRNA expression profiling in diabetic kidney disease. Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical. 237, 31-52 (2021).
  15. Aomatsu, A., et al. MicroRNA expression profiling in acute kidney injury. Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical. (21), 00283-00288 (2021).
  16. Lungwitz, U., Breunig, M., Blunk, T., Gopferich, A. Polyethylenimine-based non-viral gene delivery systems. European Journal of Pharmceutics and Biopharmaceutics. 60 (2), 247-266 (2005).
  17. Swami, A., et al. A unique and highly efficient nonviral DNA/siRNA delivery system based on PEI-bisepoxide nanoparticles. Biochemical and Biophysical Research Communications. 362 (4), 835-841 (2007).
  18. Kaneko, S., et al. Detection of microRNA expression in the kidneys of immunoglobulin a nephropathic mice. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (161), e61535(2020).
  19. Yanai, K., et al. Quantitative real-time PCR evaluation of microRNA expressions in mouse kidney with unilateral ureteral obstruction. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (162), e61383(2020).
  20. Aomatsu, A., et al. A quantitative detection method for microRNAs in the kidney of an ischemic kidney injury mouse model. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (163), e61378(2020).
  21. Kushibiki, T., Nagata-Nakajima, N., Sugai, M., Shimizu, A., Tabata, Y. Enhanced anti-fibrotic activity of plasmid DNA expressing small interference RNA for TGF-beta type II receptor for a mouse model of obstructive nephropathy by cationized gelatin prepared from different amine compounds. Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 110 (3), 610-617 (2006).
  22. Xia, Z., et al. Suppression of renal tubulointerstitial fibrosis by small interfering RNA targeting heat shock protein 47. American Journal of Nephrology. 28 (1), 34-46 (2008).
  23. Tanaka, T., et al. In vivo gene transfer of hepatocyte growth factor to skeletal muscle prevents changes in rat kidneys after 5/6 nephrectomy. American Journal of Transplantation: Official Journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 2 (9), 828-836 (2002).
  24. Hamar, P., et al. Small interfering RNA targeting Fas protects mice against renal ischemia-reperfusion injury. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (41), 14883-14888 (2004).
  25. Ma, D., et al. Xenon preconditioning protects against renal ischemic-reperfusion injury via HIF-1alpha activation. Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (4), 713-720 (2009).
  26. Wei, S., et al. Short hairpin RNA knockdown of connective tissue growth factor by ultrasound-targeted microbubble destruction improves renal fibrosis. Ultrasound in Medicine and Biology. 42 (12), 2926-2937 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

החדרה של miRNA Mimicמודלים למחלות כליותוקטור לא-ויראליהזרקה לווריד הזנבפיברוזיס כלייתימחלה כלייתית סוכרתיתפגיעה כלייתית חריפהמיקרוסקופיה פלואורסצנטיתאנליזת qRT-PCR
העברה של miRNA אקסוגני מסונתז באופן מלאכותי לחקות לכליה באמצעות ננו-חלקיקי פוליאתילנימין במספר מודלים של עכברים למחלות כליות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.