הפרוטוקול הנוכחי מדגים את הפיתוח של ביוסנסור טרנזיסטור אפקט שדה גרפן מגודר אלקטרוליטים (EGGFET) ויישומו בזיהוי אימונוגלובולין G (IgG) של סמנים ביולוגיים.
מאמר שיטה
הפרוטוקול הנוכחי מדגים את הפיתוח של ביוסנסור טרנזיסטור אפקט שדה גרפן מגודר אלקטרוליטים (EGGFET) ויישומו בזיהוי אימונוגלובולין G (IgG) של סמנים ביולוגיים.
במחקר הנוכחי, גרפן ונגזרותיו נחקרו ונעשה בהם שימוש עבור יישומים רבים, כולל אלקטרוניקה, חישה, אגירת אנרגיה ופוטוקטליזה. סינתזה וייצור של גרפן באיכות גבוהה, אחידות טובה ופגמים נמוכים הם קריטיים עבור התקנים בעלי ביצועים גבוהים ורגישים מאוד. בין שיטות סינתזה רבות, תצהיר אדים כימיים (CVD), הנחשב לגישה מובילה לייצור גרפן, יכול לשלוט במספר שכבות הגרפן ולהניב גרפן באיכות גבוהה. יש להעביר גרפן CVD ממצעי המתכת שעליהם הוא גדל על מצעי בידוד ליישומים מעשיים. עם זאת, הפרדה והעברה של גרפן על מצעים חדשים מאתגרות עבור שכבה אחידה מבלי לפגוע או להשפיע על המבנים והתכונות של הגרפן. בנוסף, טרנזיסטור אפקט שדה גרפן מגודר אלקטרוליטים (EGGFET) הודגם בזכות היישומים הרחבים שלו בגילויים ביומולקולריים שונים בגלל הרגישות הגבוהה שלו ותצורת המכשיר הסטנדרטית שלו. במאמר זה, מודגמים גישת העברת גרפן בסיוע פולי (מתיל מתקרילט) (PMMA), ייצור של טרנזיסטור אפקט שדה גרפן (GFET) וזיהוי אימונוגלובולין G (IgG) של סמנים ביולוגיים. ספקטרוסקופיית ראמאן ומיקרוסקופיית כוח אטומי יושמו כדי לאפיין את הגרפן המועבר. השיטה מוצגת כגישה מעשית להעברת גרפן נקי ונטול שאריות תוך שמירה על סריג הגרפן הבסיסי על מצע בידוד ליישומי אלקטרוניקה או ביוסנסינג.
גרפן ונגזרותיו נחקרו ושימשו ליישומים רבים, כולל אלקטרוניקה 1,2, חישה 3,4,5, אגירת אנרגיה 6,7 ופוטוקטליזה 1,6,8. סינתזה וייצור של גרפן באיכות גבוהה, אחידות טובה ופגמים נמוכים הם קריטיים עבור התקנים בעלי ביצועים גבוהים ורגישים מאוד. מאז פיתוח תצהיר האדים הכימיים (CVD) בשנת 2009, הוא הראה הבטחה אדירה וקבע את מקומו כחבר חיוני במשפחת הגרפן 9,10,11,12,13. הוא גדל על מצע מתכת, ומאוחר יותר לשימושים מעשיים, מועבר על מצעי בידוד14. מספר שיטות העברה שימשו להעברת גרפן CVD לאחרונה. שיטת הפולי (מתיל מתקרילט) (PMMA) היא הנפוצה ביותר מבין הטכניקות השונות. שיטה זו מתאימה במיוחד לשימוש תעשייתי בשל יכולתה בקנה מידה גדול, עלות נמוכה יותר ואיכות גבוהה של הגרפן המועבר14,15. ההיבט הקריטי של שיטה זו הוא להיפטר משאריות ה-PMMA עבור יישומי הגרפן של CVD מכיוון שהשאריות עלולות לגרום לירידה בתכונות האלקטרוניות של גרפן 14,15,16, לגרום להשפעה על הרגישות והביצועים של הביו-סנסורים17,18, וליצור וריאציות משמעותיות של התקן להתקן19.
ביוסנסורים מבוססי ננו-חומרים נחקרו באופן משמעותי בעשורים האחרונים, כולל ננו-חוטי סיליקון (SiNW), ננו-צינורית פחמן (CNT) וגרפן20. בגלל המבנה החד-שכבתי שלו ותכונותיו הייחודיות, גרפן מדגים מאפיינים אלקטרוניים מעולים, תאימות ביולוגית טובה ופונקציונליזציה של facile, מה שהופך אותו לחומר אטרקטיבי לפיתוח ביוסנסורים 14,21,22,23. בשל מאפייני טרנזיסטורים בעלי אפקט שדה (FET) כגון רגישות גבוהה, תצורה סטנדרטית והוכחת מסה חסכונית21,24, FET מועדף יותר במימושים ניידים ונקודתיים מאשר בהתקני ביוסנסינג אחרים מבוססי אלקטרוניקה. הביו-סנסורים של אפקט שדה גרפן מגודר אלקטרוליטים (EGGFET) הם דוגמאות ל-FETs המוצהרים21,24. EGGFET יכול לזהות אנליטים ממוקדים שונים כגון חומצות גרעין25, חלבונים 24,26, מטבוליטים27, ואנליטים רלוונטיים ביולוגית אחרים28. הטכניקה המוזכרת כאן מבטיחה יישום של גרפן CVD בהתקן ננו-אלקטרוניקה ביוסנסינג ללא תווית המציע רגישות גבוהה יותר וזיהוי זמן מדויק יותר על פני התקני ביוסנסינג אחרים29.
בעבודה זו מודגם תהליך כולל לפיתוח ביוסנסור EGGFET ותפקודו לצורך זיהוי סמנים ביולוגיים, כולל העברת גרפן CVD על מצע בידוד, ראמאן ואפיוני AFM של הגרפן המועבר. יתר על כן, ייצור של EGGFET ושילוב עם אספקת דגימת פולידימתילסילוקסן (PDMS) היטב, פונקציונליזציה של ביו-רקפטורים וזיהוי מוצלח של אימונוגלובולין G (IgG) אנושי מסרום על ידי ניסויי ספייק והתאוששות נדונים גם כאן.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
1. העברת תצהיר אדים כימיים של גרפן
2. ייצור טרנזיסטור אפקט שדה גרפן (GFET)
3. פונקציונליזציה של GFET לזיהוי IgG
4. זיהוי IgG
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
התוצאות הייצוגיות מראות את הגרפן CVD המועבר המאופיין ברמאן וב-AFM, בהתאמה. פסגת G והפסגות הדו-ממדיות של תמונת ראמאן מספקות מידע מקיף לגבי קיומו ואיכותו של הגרפן החד-שכבתי המועבר32 (איור 1). תהליכי ליתוגרפיה סטנדרטיים30,31 יושמו לייצור התקן GFET, כפי שמוצג באיור 2. איור 3 מראה את ה-GFET המפוברק עם בארות מסירת דגימות PDMS מורכבות ואת מערך הניסוי. ה-PDMS...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
יש לקצץ את הגרפן CVD שנרכש על סרט נחושת לגודל הנכון עבור שלבי הייצור הבאים. חיתוך של הסרטים יכול לגרום להתכווצות, אשר צריך למנוע. הפרמטרים המסופקים בשלב הייצור יכולים להיקרא לחריטת פלזמה של גרפן, ומספרים אלה יכולים להיות מגוונים בעת שימוש במכשירים שונים. יש לעקוב מקרוב אחר הדגימה החרוטה ולבדוק אותה כדי להבטיח תחריט מלא של גרפן. ניתן ליישם מספר שיטות טרום-ניקוי כדי לנקות את המצעים, כגון סוניקציה באצטון, IPA ומי DI למשך 5 דקות, שטיפת מים DI וייבוש או טיפול בגז חנקן עם פלזמה O2 (300 W, ב~ 100 sccm למשך 5 דקות). ק...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין אינטרסים מתחרים או אינטרסים מנוגדים לחשוף.
הניסויים נערכו באוניברסיטת מערב וירג'יניה. אנו מכירים במתקני המחקר המשותפים באוניברסיטת ווסט וירג'יניה על ייצור מכשירים ואפיון חומרים. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע של ארה"ב תחת מענק מס '. NSF1916894.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1-חומצה פירנויטירית N- hydroxysuccinimide ester | Sigma Aldrich | 457078-1G | פונקציונליזציה |
| מקלט MFP-3D מיקרוסקופ כוח אטומי | אוקספורד אינסטרומנטס | אפיון גרפן | |
| AZ 300 MIF | מיקרוכימיקלים | AZ 300 MIF | מפתח פוטו-רזיסט |
| AZ 300 MIF | מיקרוכימיקלים | AZ 300 MIF | פוטו-רזיסט |
| סרום בקר אלבומין | סיגמא אולדריץ' | 810014 | חסימת |
| ברנסון 1210 סוניקטור | SONITEK | ניקוי מדגם | |
| תחריט נחושת | סיגמא אולדריץ' | 667528-500ML | הסרת סרט נחושת לשחרור גרפן |
| דימתיל סולפוקסיד (DMSO) | VWR | 97063-136 | פונקציונליזציה |
| אגרופים חד פעמיים ביופסיה, אינטגרה Miltex | VWR | 21909-144 | ליצור היטב ב-PDMS |
| תחריט זהב | תחריט זהב, TFA, טרנסן | 658148 | קסם |
| סופרמרקט גרפן | גרפן 2 אינץ' x 2 אינץ' אלמנט | חישה ביולוגית של המכשיר | |
| IgG aptamer | Base Pair Biotechnologies | מותאם אישית | קולטן ביולוגי |
| Keithley 4200A-SCS מנתח פרמטרים | מדידת Tektronix | ו זיהוי | |
| KMG CR-6 | KMG כימיקלים | 64216 | תחריט כרום |
| קורט ג'יי לסקר מאייד קרן אלקטרונית | קורט ג'יי לסקר | תצהיר מתכת | |
| Laurell Technologies 400 ספינרים | Laurell Technologies | WS-400BZ-6NPP/LITE | ציפוי סרט דק |
| מרץ PX-250 פלזמה אשר | מרץ מכשירים | ניקוי מדגימות | |
| תחריט ניקל | תחריט ניקל, TFB, תחריט 600016000 טרנסן | ||
| OAI חשיפה לשיטפון OAI | פוטוליתוגרפיה | פוספט | |
| חוצץ מלח (PBS) | סיגמא אולדריץ' | 806552-500 מ"ל | מאגר |
| PMMA 495K A4 | מיקרוכימיקלים | PMMA 495K A4 | Photoresist לסיוע בהעברת גרפן |
| פולידימתילסילוקסן (PDMS) | סיגמא אולדריץ' | Sylgard 184 | מסירת מדגם היטב |
| Renishaw InVia Raman מיקרוסקופ | Renishaw | אפיון גרפן | |
| נתרן הידרוקסיד (NaOH) | סיגמא אולדריץ' | 221465-25G | פונקציונליזציה |
| Suss Microtech MA6 Mask Aligner | Suss MicroTec | פוטוליתוגרפיה | |
| Thermo Scientific Cimarec Hotplate | Thermo Scientific | SP131635 | מדגם ומכשיר אפייה |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה