הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 מרירית האף של העכבר כדי לזהות את הביטוי של CD226

2.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63525

⸱

10 במאי 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Otolaryngological Department of Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, 2Institute of Medical Research, Northwestern Polytechnical University, 3Orthopedic Department of Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, 4Department of Immunology, Fourth Military Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 (ILC2s), המעורבים בדלקת מסוג 2, משתתפים בעיקר בתגובה לזיהום הלמינת'ס, מחלות אלרגיות, הומאוסטזיס מטבולי ותיקון רקמות. במחקר זה מודגם הליך לבידוד ILC2s מרירית האף וזיהוי הביטוי של CD226.

תקציר

עם מחקרים רבים על תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 (ILC2s) שפורסמו לאורך השנים, ILC2s ידועים כמעורבים בוויסות תהליכים פתולוגיים שונים, כולל חסינות נגד הלמינת'ס, תיקון רקמות, תרמוגנזה, ומחלות אוטואימוניות כגון אסטמה ונזלת אלרגית (AR). ILC2s שוכנים דרך קבע ברקמות היקפיות כגון העור, המעיים, הריאות וחלל האף; עם זאת, יש מידע מוגבל על הפונקציות המדויקות שלהם חסינות רירית האף. CD226 היא מולקולה קוסטימולטורית מפעילה, המתבטאת בעיקר בתאי הרג טבעי (NK), תאי T ומונוציטים דלקתיים. עם זאת, האם ILC2s מבטאים CD226 או ממלאים תפקיד בפתוגנזה של מחלות הקשורות ל- ILC2s עדיין לא ידוע. כאן, ביססנו שיטה לבודד ולזהות ILC2s מרירית האף וזיהינו ביטוי CD226 על ILC2s שהתקבל מעכברים בריאים ועכברי AR. במאמר זה נתאר פרוטוקול זה לבידוד וזיהוי של ILC2s מרירית האף של עכבר, אשר יסייע לחקור את המנגנון הפתולוגי הפנימי של הפרעות אימונולוגיות במחלות רירית האף.

מבוא

תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 (ILC2s) התגלו לראשונה ברקמות חלל הצפק של עכברים ולאחר מכן הוכחו כנמצאים בדם וברקמות היקפיות אחרות כגון הריאות, העור וחלל האף 1,2,3. כתאים שוכנים ברקמות, ILC2s נשמרים ומתרבים בעיקר באופן מקומי ומתפקדים כשומרים הראשונים המגיבים לגירויים מזיקים אקסוגניים באמצעות ייצור ציטוקינים רבים מסוג 2 וגרימת חסינות מסוג 2 4,5,6. ILC2s יכולים גם להפעיל את השפעתם על ידי סחר לכיוון הרקמות הנגועות 7,8.

בדומה לתאי T-helper 2 (Th2), רשתות הבקרה המסובכות של ILC2s מבטיחות את מעורבותם המשמעותית בהתקדמות מחלות דלקתיות שונות מסוג 2, כולל מחלות אלרגיות בדרכי הנשימה 8,9. באסתמה, אזעקות שמקורן בתאי אפיתל יכולות להפעיל את ILC2s, אשר מקדמים עוד יותר דלקת ריאות באמצעות הפרשת אינטרלוקין (IL)-4, IL-5 ו- IL-1310. מחקרים קליניים הצביעו גם על כך שרמות ILC2 היו גבוהות באופן משמעותי בכיח ובדמם של חולים עם אסתמה חמורה, דבר המצביע על קשר של ILC2s עם חומרת האסתמה ותפקודם כמנבא להתקדמות אסתמה11.

נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית כרונית נפוצה המשפיעה על מיליוני אנשים מדי שנה, והטיפולים היעילים למחלה זו מוגבלים12,13. ILC2s ממלאים תפקידים מכריעים בפתופיזיולוגיה של מציאות רבודה, בין אם בשלב הרגישות או ביצירת סימפטומים ושלבהדלקת 14. בחולים עם AR, רמות ILC2 בדם ההיקפי דווחו כגבוהות הן מקומית והן מערכתית15. עם זאת, השפעות מסוימות והמנגנונים הבסיסיים של ILC2s על הפתופיזיולוגיה וההתקדמות של AR עדיין דורשים חקירה נוספת.

CD226 - גליקופרוטאין טרנסממברנה המשמש כמולקולה קוסטימולטורית - מתבטא בעיקר בתאי הרג טבעי (NK), תאי T ומונוציטים דלקתיים אחרים16,17. האינטראקציה של CD226 והליגנדות שלו (CD155 ו / או CD112) או המתחרה (TIGIT) מאפשרת לו להשתתף בתפקודים הביולוגיים של תאי חיסון שונים18. קשירת הליגנדות על תאים מציגי אנטיגן ל- CD226 על לימפוציטים ציטוטוקסיים (CTL) מקדמת את ההפעלה של שני התאים בו זמנית, בעוד שההפעלה של CTL יכולה להיות מדוכאת עוד יותר על ידי TIGIT (קולטן חיסוני של תאי T עם תחומי Ig ו- ITIM), המתחרה של CD22619,20. מחקר אנושי ex vivo גילה כי CD226 ו- CD155 על תאי T מווסתים את האיזון בין Th1/Th17 ו- Th2 באמצעות אפנון דיפרנציאלי של תת-קבוצות Th21. CD226 יכול גם לתווך הידבקות טסיות ופעילות קוטלת גידוליםNK 22,23. בינתיים, CD226 נחקר היטב בפתוגנזה של מחלות זיהומיות שונות, מחלות אוטואימוניות וגידולים 18,24,25. כיום, CD226 הפך לנקודת אור חדשה עבור אימונותרפיה. מחקרים מצאו כי שלפוחיות חוץ-תאיות יכולות להפוך את ביטוי CD226 על תאי NK כדי להחזיר את פעילותם ציטוטוקסית ולהתערב בהתקדמות סרטן ריאות26. מחקר שנערך לאחרונה חשף תת-אשכול של ILCs מקבוצת המעי העוברי 3 המאופיין בביטוי CD226 גבוה על ידי ריצוף RNA חד-תאי27, אשר הצביע על כך ש- CD226 עשוי למלא תפקידים בחסינות המולדת בתיווך תאי הלימפה.

הידע שלנו על ILC2s בדלקת בדרכי הנשימה מבוסס בעיקר על מחקרים על אסתמה; עם זאת, מעט ידוע על תפקידיהם בחסינות רירית האף. לפיכך, נקבע פרוטוקול לבידוד וזיהוי ILC2s מרירית האף. המחקר מתמקד בביטוי CD226 על ILC2s ברקמות האף והשונות שלו בין עכברים בריאים לעכברים AR. זה עשוי לספק תובנות חדשות על המנגנונים הבסיסיים של רגולציה בתיווך ILC2 במערכת החיסון המקומית ולשמש בסיס לפיתוח גישות חדשות לטיפול במציאות רבודה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. כל הנהלים והפרוטוקולים אושרו על ידי ועדת האתיקה של המחקר המדעי באוניברסיטה הרפואית הצבאית הרביעית (מס '20211008).

1. הקמת מודל Murine AR

  1. בית זכרים ונקבות עכברים מסוג בר (WT) C57BL/6 בגילאי 8-12 שבועות בתנאים ספציפיים נטולי פתוגנים ומספקים צ'או מעבדה סטנדרטי ומים.
  2. תחליב 50 מיקרוגרם של ovalbumin (OVA) ב 0.2 מ"ל של PBS סטרילי המכיל 2 מ"ג של הידרוקסיד אלומיניום על ספסל נקי כדי לשמור על סטריליות. בימים 0, 7 ו-14, יש להזריק תוך צפקית לעכברים נקבות או זכרים 50 מיקרוגרם כל אחד של OVA מתחלב.
  3. בימים 21, 22, 23, 24 ו-25, החדרה תוך-אפית של עכברים עם 50 מיקרוגרם של OVA מומס ב-30 מיקרוליטר של PBS סטרילי (15 מיקרוליטר לנחיר) תחת הרדמה באינהלציה (2-3% איזופלורן עם קצב זרימת חמצן או 0.5 ליטר/דקה).
  4. הרדימו את העכברים 24 שעות לאחר האתגר האחרון (יום 26).

2. בידוד תאים חד-גרעיניים (MNCs) מרירית האף

  1. הרדימו את העכברים על ידי פריקת צוואר הרחם בהרדמה עמוקה. השרו את ראש העכברים באתנול 75% למשך 5 דקות והימנעו מכניסת אתנול לנחיר החיצוני. הניחו את הבטן כלפי מטה על שולחן הניתוחים.
  2. חתכו את השיניים הקדמיות. בקו האמצע של הראש, לעשות חתך, לחתוך לפתוח את העור באמצעות מספריים.
  3. מוציאים את הלסת התחתונה, חותכים את כל האף לאורך קצה החיך, ומניחים את הרקמה בתוך צלחת פטרי 60 מ"מ המכילה 5 מ"ל PBS קר כקרח. בעזרת מספריים ומלקחיים, להסיר את הבשר והשרירים דבק העצמות.
  4. העבירו את אף העכבר לצלחת פטרי חדשה בקוטר 60 מ"מ המכילה 5 מ"ל PBS קר כקרח. לשטוף את העצמות פעמיים עם 5 מ"ל של PBS קר כקרח.
  5. מעבירים את האף לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מ"ל.
  6. יש לרסק ולהעביר את האף במידה מספקת לצינור של 15 מ"ל המכיל 2 מ"ל של חיץ עיכול שחומם מראש (RPMI 1640 בינוני בתוספת 1 מ"ג/מ"ל של collagenase IV ו-10 U/mL DNase I).
  7. הדקו את המכסה והניחו את הצינור אנכית בשייקר אורביטלי בטמפרטורה של 37°C, עם תסיסה מתמשכת ב-120-150 סל"ד למשך 40 דקות.
    הערה: חממו מראש את מאגר העיכול ל-37°C כדי להשיג את פעילות האנזים הגבוהה ביותר.
  8. הוסף 5 מ"ל של סל"ד קר כקרח 1640 בינוני המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) כדי לעצור את תהליך העיכול.
  9. סנן דרך מסננת תאים בגודל 70 מיקרומטר כדי להסיר שברים מוצקים.
  10. צנטריפוגה ב 500 x גרם במשך 5 דקות, ולאחר מכן בעדינות להשליך את supernatant.
  11. השהה מחדש את הגלולה בסל"ד קר כקרח 1640 בינוני וצנטריפוגה ב 500 x גרם למשך 5 דקות. השליכו בעדינות את הסופרנטנט.
  12. השהה מחדש את גלולת התא ב- 4 מ"ל של מדיה הדרגתית בצפיפות של 40% (160 מיקרוליטר של 10x PBS + 1.44 מ"ל של תמיסת מלאי מדיה הדרגתית בצפיפות + 2.4 מ"ל של מדיום RPMI 1640).
  13. הכנס בעדינות פיפטת פסטר לתחתית הצינור והוסף באיטיות 2.5 מ"ל של מדיה הדרגתית בצפיפות 80% (200 μL של 10x PBS + 1.8 מ"ל של תמיסת מלאי מדיה הדרגתית צפיפות + 0.5 מ"ל של מדיום RPMI 1640).
  14. הגדר את קצב ההאצה וההאטה של הצנטריפוגה נמוך יותר מההילוך השלישי והצנטריפוגה על 400 x גרם למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
  15. הסר את השכבה העליונה של זיהומים לפני ניקוז התאים בממשק כדי למנוע זיהום פוטנציאלי. נקז בזהירות את שכבת התאים החד-גרעיניים (MNCs) בממשק המדיה ההדרגתית בצפיפות של 40%/80% לתוך צינור של 15 מ"ל המכיל 2 מ"ל PBS קר כקרח באמצעות פיפטה. שטפו את התאים עם PBS קר כקרח פעמיים.

3. צביעת פני שטח לניתוח FCM

  1. קצור את התאים ואת הצנטריפוגה ב 500 x גרם במשך 5 דקות ב 4 °C (75 °F). השהה מחדש את גלולת התא במאגר צביעה (PBS בתוספת 2% FBS ו- 0.1% NaN3) וצנטריפוגה ב- 500 x גרם למשך 5 דקות ב- 4 ° C. השליכו את הסופרנטנט.
    אזהרה: יש לנקוט משנה זהירות בעת הכנת חיץ הצביעה. NaN3 רעיל מאוד ועלול לגרום נזק לאיברים אם נבלע, נשאף, או בא במגע עם העור. כמו כן, הימנעו משחרור לסביבה.
  2. השהה מחדש את התאים בתמיסת חסימה של 80 μL (נוגדן אנטי-CD16/32 (1:100) מדולל במאגר צביעה) לכל צינור. לדגור במשך 30 דקות בחושך ב 4 °C (75 °F).
  3. ללא שטיפה, יש להוסיף 20 μL של הדילול המתאים של קוקטייל הנוגדנים המכתים את פני השטח (טבלה 1).
  4. יש להוסיף 1 μL (לכל בדיקה) של צבע כדאיות קבוע 520 (FVD) ממש לפני הוספת קוקטייל הנוגדנים לדגימות. יש לדגור בחושך ב-4°C למשך 30 דקות. הגדר נוגדני איזוטיפ תואמים ופלואורסצנטיות מינוס אחד (FMO) כבקרות השליליות.
  5. לשטוף את התאים ב 500 μL של חיץ צביעה על ידי צנטריפוגה ב 500 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C.
  6. להשהות מחדש את גלולת התא ב 200 μL של חיץ צביעה. הוסיפו 50 μL של חרוזי ספירה מוחלטים מערבולת לתאים המוכתמים והתסיסו. חשוף אותם לניתוח ציטומטריית זרימה (FCM).
    הערה: נתוני FCM התקבלו באמצעות מנתח תאים ספקטרלי ונותחו באמצעות תוכנת ניתוח ציטומטריית זרימה (FCM).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מודל מורין המושרה על ידי OVA פותח כדי לחקור את התפקיד של ILC2s במציאות רבודה. בניית מודל AR murine התבססה על מחקרים קודמים עם שינויים קלים 28,29,30,31. סרטון בן 10 דקות צולם כדי למדוד את תדירות ההתעטשות והגירוד באף לאחר אתגר האף האחרון. תסמינים אלרגיים של עכברי AR הנגרמים על ידי OVA הוצגו באיור 1. תדירות שפשוף האף והתעטשות בעכברי AR הייתה גבוהה משמעותית מאשר בקבוצת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ILC2s קשורים קשר הדוק עם דלקת מסוג 2 והפרעות דלקתיות, כפי שהודגם במספר גדל והולך של מחקרים. הן מודלים של עכברים והן תצפיות אנושיות תורמים להבנה טובה יותר של תפקודו בדרכי הנשימה העליונות. בפתופיזיולוגיה של אסתמה, ILC2s מופעלים באמצעות לימפופיאטין סטרומה תימי, IL-25 ו- IL-33, המיוצרים בעיקר על ידי תאי אפיתל. לאחר מכן משקפים תאי Th2, ILC2s מייצרים IL-4, IL-5 ו- IL-13 כדי להחמיר דלקת מסוג2 32. יתר על כן, תת-קבוצות שונות של ILC2s מייצרות גם IL-10 ו- IL-1733,34,35

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

R.Z. נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '81871258) וכספים שסופקו על ידי האוניברסיטה הרפואית הצבאית הרביעית (No.2020rcfczr). י.ז. נתמך על ידי תוכנית המחקר הבסיסית למדעי הטבע של שאאנשי (מס' 2021JM-081).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלומיניום הידרוקסידMeilun טכנולוגיה ביולוגית21645-51-2
CD11beBioscience11-0112-82משמש בנוגדנים קוקטיילים
CD11cBioLegend117306בשימוש בנוגדנים קוקטיילים
CD16/32BioLegend101302שיבוט: 93; דילול 1:100
CD226BioLegend128812בשימוש בקוקטייל-נוגדן
CD3eBioLegend100306בשימוש בנוגדנים קוקטיילים
CD45BioLegend103128בשימוש בנוגדנים קוקטיילים
CD45ReBioscience11-0452-82בשימוש בקוקטייל-נוגדן
CD90.2BD Pharmingen553014בשימוש בנוגדנים קוקטייל
קולגנאז IVDIYIBioDY40128
ספירהחרוזי ספירה מוחלטת בהיריםInvitrogenC36950חרוזי ספירה מוחלטת
Dnase figure-materials-1BeyotimeD7076
סרום בקר עובריgibco10270-106
צבע כדאיות לתיקון eFluor 520 (FITC)eBioscience65-0867-14FVD
HBSS, סידן, מגנזיוםServicebioG4204-500
KLRG1eBioscience17-5893-81בשימוש בנוגדנים קוקטיילים
NaN3SIGMAS2002
NovoExpress תוכנהAgilentTechnologiesגרסה 1.5.0זרימה ציטומטריה (FCM) תוכנה לניתוח
OVASIGMA9006-59-1
PBS, 1xServicebioG4202-500
PBS, 10xServicebioG4207-500
PercollYeasen40501ES60צפיפות מדיית שיפוע
RPMI 1640 מדיית תרביתCorning10-040-CVRV
מנתח תאים ספקטרלייםSONYSA3800
:

מקורות

  1. Huang, Y., et al. S1P-dependent interorgan trafficking of group 2 innate lymphoid cells supports host defense. Science. 359 (6371), 114-119 (2018).
  2. Price, A. E., et al. Systemically dispersed innate IL-13-expressing cells in type 2 immunity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (25), 11489-11494 (2010).
  3. Ebihara, T., et al. Trained innate lymphoid cells in allergic diseases. Allergology International. 70 (2), 174-180 (2021).
  4. Gasteiger, G., Fan, X., Dikiy, S., Lee, S. Y., Rudensky, A. Y. Tissue residency of innate lymphoid cells in lymphoid and nonlymphoid organs. Science. 350 (6263), 981-985 (2015).
  5. Moro, K., et al. Interferon and IL-27 antagonize the function of group 2 innate lymphoid cells and type 2 innate immune responses. Nature Immunology. 17 (1), 76-86 (2016).
  6. Helou, D. G., et al. LAIR-1 acts as an immune checkpoint on activated ILC2s and regulates the induction of airway hyperreactivity. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 149 (1), 223-236 (2022).
  7. Karta, M. R., et al. beta2 integrins rather than beta1 integrins mediate Alternaria-induced group 2 innate lymphoid cell trafficking to the lung. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 141 (1), 329-338 (2018).
  8. Helou, D. G., et al. PD-1 pathway regulates ILC2 metabolism and PD-1 agonist treatment ameliorates airway hyperreactivity. Nature Communications. 11 (1), 3998(2020).
  9. Kabata, H., Moro, K., Koyasu, S. The group 2 innate lymphoid cell (ILC2) regulatory network and its underlying mechanisms. Immunological Reviews. 286 (1), 37-52 (2018).
  10. Zheng, H., et al. The role of Type 2 innate lymphoid cells in allergic diseases. Frontiers in Immunology. 12, 586078(2021).
  11. Maggi, L., et al. The dual function of ILC2: From host protection to pathogenic players in type 2 asthma. Molecular Aspects of Medicine. 80, 100981(2021).
  12. Meltzer, E. O., et al. Burden of allergic rhinitis: results from the Pediatric Allergies in America survey. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 124, 3 Suppl 43-70 (2009).
  13. Wheatley, L. M., Togias, A. Clinical practice. Allergic rhinitis. The New England Journal of Medicine. 372 (5), 456-463 (2015).
  14. Bousquet, J., et al. Allergic rhinitis. Nature Reviews. Disease Primers. 6 (1), 95(2020).
  15. Kato, A. Group 2 innate lymphoid cells in airway diseases. Chest. 156 (1), 141-149 (2019).
  16. Nakamura-Shinya, Y., et al. DNAM-1 promotes inflammation-driven tumor development via enhancing IFN-gamma production. International Immunology. 34 (3), 149-157 (2022).
  17. Braun, M., et al. CD155 on Tumor cells drives resistance to immunotherapy by inducing the degradation of the activating receptor CD226 in CD8(+) T cells. Immunity. 53 (4), 805-823 (2020).
  18. Huang, Z., Qi, G., Miller, J. S., Zheng, S. G. CD226: An emerging role in immunologic diseases. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 564(2020).
  19. Gilfillan, S., et al. DNAM-1 promotes activation of cytotoxic lymphocytes by nonprofessional antigen-presenting cells and tumors. Journal of Experimental Medicine. 205 (13), 2965-2973 (2008).
  20. Zhang, D., et al. TIGIT-Fc alleviates acute graft-versus-host disease by suppressing CTL activation via promoting the generation of immunoregulatory dendritic cells. Biochimica et Biophysica Acta: Molecular Basis of Disease. 1864, 3085-3098 (2018).
  21. Lozano, E., Joller, N., Cao, Y., Kuchroo, V. K., Hafler, D. A. The CD226/CD155 interaction regulates the proinflammatory (Th1/Th17)/anti-inflammatory (Th2) balance in humans. Journal of Immunology. 191 (7), 3673-3680 (2013).
  22. Kojima, H., et al. CD226 mediates platelet and megakaryocytic cell adhesion to vascular endothelial cells. Journal of Biological Chemistry. 278 (38), 36748-36753 (2003).
  23. Martinet, L., Smyth, M. J. Balancing natural killer cell activation through paired receptors. Nature Reviews. Immunology. 15 (4), 243-254 (2015).
  24. Yeo, J., Ko, M., Lee, D. H., Park, Y., Jin, H. S. TIGIT/CD226 axis regulates anti-tumor immunity. Pharmaceuticals. 14 (3), Basel, Switzerland. 200(2021).
  25. Nakano, M., et al. Association of elevated serum soluble CD226 levels with the disease activity and flares of systemic lupus erythematosus. Scientific Reports. 11 (1), 16162(2021).
  26. Chang, W. A., et al. miR-150-5p-containing extracellular vesicles are a new immunoregulator that favor the progression of lung cancer in hypoxic microenvironments by altering the phenotype of NK cells. Cancers. 13 (24), 6552(2021).
  27. Stehle, C., et al. T-bet and RORalpha control lymph node formation by regulating embryonic innate lymphoid cell differentiation. Nature Immunology. 22 (10), 1231-1244 (2021).
  28. Piao, C. H., Fan, Y. J., Nguyen, T. V., Song, C. H., Chai, O. H. Mangiferin alleviates ovalbumin-induced allergic rhinitis via Nrf2/HO-1/NF-kappaB signaling pathways. International Journal of Molecular Sciences. 21 (10), 3415(2020).
  29. Zhao, Y., Tao, Q., Wu, J., Liu, H. DMBT1 has a protective effect on allergic rhinitis. Biomedicine and Pharmacotherapy. 121, 109675(2020).
  30. Piao, C. H., et al. Ethanol extract of Dryopteris crassirhizoma alleviates allergic inflammation via inhibition of Th2 response and mast cell activation in a murine model of allergic rhinitis. Journal of Ethnopharmacology. 232, 21-29 (2019).
  31. Liang, M. J., et al. Immune responses to different patterns of exposure to ovalbumin in a mouse model of allergic rhinitis. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 273 (11), 3783-3788 (2016).
  32. Ebbo, M., Crinier, A., Vely, F., Vivier, E. Innate lymphoid cells: major players in inflammatory diseases. Nature Reviews. Immunology. 17 (11), 665-678 (2017).
  33. Seehus, C. R., et al. Alternative activation generates IL-10 producing type 2 innate lymphoid cells. Nature Communications. 8 (1), 1900(2017).
  34. Cai, T., et al. IL-17-producing ST2(+) group 2 innate lymphoid cells play a pathogenic role in lung inflammation. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (1), 229-244 (2019).
  35. Golebski, K., et al. IL-1beta, IL-23, and TGF-beta drive plasticity of human ILC2s towards IL-17-producing ILCs in nasal inflammation. Nature Communications. 10 (1), 2162(2019).
  36. Lei, A., Zhou, J. Cell-surface molecule-mediated cell-cell interactions in the regulation of ILC2-driven allergic inflammation. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (22), 4503-4510 (2019).
  37. Maazi, H., et al. ICOS:ICOS-ligand interaction is required for type 2 innate lymphoid cell function, homeostasis, and induction of airway hyperreactivity. Immunity. 42 (3), 538-551 (2015).
  38. Lei, A. H., et al. ICAM-1 controls development and function of ILC2. The Journal of Experimental Medicine. 215 (8), 2157-2174 (2018).
  39. Drake, L. Y., Iijima, K., Kita, H. Group 2 innate lymphoid cells and CD4+ T cells cooperate to mediate type 2 immune response in mice. Allergy. 69 (10), 1300-1307 (2014).
  40. Wang, Y., et al. The comparation of intraperitoneal injection and nasal-only delivery allergic rhinitis model challenged with different allergen concentration. American Journal of Rhinology & Allergy. 33 (2), 145-152 (2019).
  41. Niu, Y., et al. HIF1alpha deficiency in dendritic cells attenuates symptoms and inflammatory indicators of allergic rhinitis in a SIRT1-dependent manner. International Archives of Allergy and Immunology. 181 (8), 585-593 (2020).
  42. Van Nguyen, T., et al. Anti-allergic rhinitis activity of alpha-lipoic acid via balancing Th17/Treg expression and enhancing Nrf2/HO-1 pathway signaling. Scientific Reports. 10 (1), 12528(2020).
  43. Pyun, B. J., et al. Gardenia jasminoides attenuates allergic rhinitis-induced inflammation by inhibiting periostin production. Pharmaceuticals (Basel). 14 (10), 986(2021).
  44. Liu, Z., et al. Analysis of expression of ILC2 cells in nasal mucosa based on animal model of allergic bacterial infection rhinitis. Journal of Infection and Public Health. 14 (1), 77-83 (2021).
  45. Hu, B., Wang, Y., Zheng, G., Zhang, H., Ni, L. Effect of parasympathetic inhibition on expression of ILC2 cells in a mouse model of allergic rhinitis. The World Allergy Organization journal. 14 (9), 100582(2021).
  46. Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function. European Journal of Microbiology & Immunology. 2 (2), 112-120 (2012).
  47. Krisna, S. S., et al. Optimized protocol for immunophenotyping of melanoma and tumor-bearing skin from mouse. STAR Protocols. 2 (3), 100627(2021).
  48. Hoyler, T., et al. The transcription factor GATA-3 controls cell fate and maintenance of type 2 innate lymphoid cells. Immunity. 37 (4), 634-648 (2012).
  49. Huang, Y., et al. IL-25-responsive, lineage-negative KLRG1(hi) cells are multipotential 'inflammatory' type 2 innate lymphoid cells. Nature Immunology. 16 (2), 161-169 (2015).
  50. Loering, S., et al. Differences in pulmonary group 2 innate lymphoid cells are dependent on mouse age, sex and strain. Immunology and Cell Biology. 99 (5), 542-551 (2021).
  51. Lin, L., et al. Allergic inflammation is exacerbated by allergen-induced type 2 innate lymphoid cells in a murine model of allergic rhinitis. Rhinology Journal. 55 (4), 339-347 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ביטוי CD226נזלת אלרגיתפלוו ציטומטריהבידוד תאיםמדרג צפיפותסמינוג של אנטיגן שטחתאים מונונוקלארייםמודל עכבר
בידוד תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 מרירית האף של העכבר כדי לזהות את הביטוי של CD226
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.