הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הקמת קסנוגרפטים מסרטן הלבלב שמקורם בדגי זברה לבדיקת רגישות לכימותרפיה

2.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63744

⸱

12 במאי 2023

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, University of Pisa, 2General Surgery Unit, Department of Translational Research and New Technologies in Medicine and Surgery, University of Pisa

במאמר זה

סיכום

מודלים פרה-קליניים נועדו לקדם את הידע בביולוגיה של סרטן ולחזות את יעילות הטיפול. מאמר זה מתאר את הדור של xenografts מבוססי דגי זברה שמקורם בחולה (zPDXs) עם שברי רקמת גידול. zPDXs טופלו בכימותרפיה, שהשפעתה הטיפולית הוערכה במונחים של אפופטוזיס תאי של הרקמה המושתלת.

תקציר

סרטן הוא אחד הגורמים העיקריים למוות ברחבי העולם, והשכיחות של סוגים רבים של סרטן ממשיכה לעלות. התקדמות רבה הושגה במונחים של סינון, מניעה וטיפול; עם זאת, מודלים פרה-קליניים המנבאים את פרופיל הרגישות הכימותרפית של חולי סרטן עדיין חסרים. כדי למלא את הפער הזה, פותח ואומת מודל קסנוגרפט שמקורו במטופל in vivo . המודל התבסס על עוברים של דגי זברה (Danio rerio) יומיים לאחר ההפריה, אשר שימשו כמושתלים של שברי קסנוגרפט של רקמת גידול שנלקחו מדגימה כירורגית של מטופל.

ראוי גם לציין כי דגימות ביופטיות לא עוכלו או התפרקו, על מנת לשמור על המיקרו-סביבה של הגידול, שהיא קריטית מבחינת ניתוח התנהגות הגידול והתגובה לטיפול. הפרוטוקול מפרט שיטה לביסוס xenografts מבוססי דגי זברה שמקורם במטופל (zPDXs) מכריתה כירורגית ראשונית של גידול מוצק. לאחר הקרנה על ידי אנטומופתולוג, הדגימה מנותחת באמצעות להב אזמל. רקמת נמק, כלי דם או רקמת שומן מוסרים ולאחר מכן קצוצים לחתיכות 0.3 מ"מ x 0.3 מ"מ x 0.3 מ"מ.

לאחר מכן החלקים מסומנים באופן פלואורסצנטי ומושתלים בחלל הפריביטלין של עוברי דגי זברה. ניתן לעבד מספר רב של עוברים בעלות נמוכה, מה שמאפשר ניתוח in vivo בתפוקה גבוהה של הרגישות הכימותרפית של zPDXs למספר תרופות אנטי-סרטניות. תמונות קונפוקליות נרכשות באופן שגרתי כדי לזהות ולכמת את רמות אפופטוטיקה המושרות על ידי טיפול כימותרפי בהשוואה לקבוצת הביקורת. הליך xenograft יש יתרון זמן משמעותי, שכן ניתן להשלים אותו ביום אחד, מתן חלון זמן סביר לבצע סינון טיפולי עבור ניסויים קליניים משותפים.

מבוא

אחת הבעיות של חקר הסרטן הקליני היא שסרטן אינו מחלה אחת, אלא מגוון מחלות שונות שיכולות להתפתח עם הזמן, ודורשות טיפולים ספציפיים בהתאם למאפייני הגידול עצמו והחולה1. כתוצאה מכך, האתגר הוא לנוע לעבר מחקר סרטן מוכוון מטופל, על מנת לזהות אסטרטגיות מותאמות אישית חדשות לחיזוי מוקדם של תוצאות הטיפול בסרטן2. זה רלוונטי במיוחד עבור אדנוקרצינומה של צינור הלבלב (PDAC), שכן הוא נחשב לסרטן קשה לטיפול, עם שיעור הישרדות של 5 שנים של 11%3.

האבחנה המאוחרת, ההתקדמות המהירה והיעדר טיפולים יעילים נותרו הבעיות הקליניות הדחופות ביותר של PDAC. האתגר העיקרי הוא, אם כן, למדל את המטופל ולזהות סמנים ביולוגיים שניתן ליישם במרפאה כדי לבחור את הטיפול היעיל ביותר בקנה אחד עם רפואה מותאמת אישית 4,5,6. עם הזמן, גישות חדשות הוצעו למדל מחלות סרטן: אורגנואידים שמקורם בחולה (PDOs) וקסנוגרפטים שמקורם בעכבר (mPDXs) שמקורם ברקמת גידול אנושית. הם שימשו כדי לשחזר את המחלה כדי לחקור את התגובה ואת ההתנגדות לטיפול, כמו גם הישנות המחלה 7,8,9.

באופן דומה, העניין במודלים מבוססי דגי זברה שמקורם בחולה xenograft (zPDX) גדל, הודות למאפיינים הייחודיים והמבטיחים שלהם10, המייצגים כלי מהיר וזול לחקר הסרטן11,12. מודלים של zPDX דורשים רק דגימת גידול קטנה, מה שהופך את ההקרנה בתפוקה גבוהה של כימותרפיה לאפשרית13. הטכניקה הנפוצה ביותר המשמשת למודלים של zPDX מבוססת על עיכול דגימה מלא והשתלה של אוכלוסיות התאים הראשוניות, אשר משחזרת חלקית את הגידול, אך יש לה את החסרונות של היעדר מיקרו-סביבה של הגידול ותקשורת צולבת בין תאים ממאירים ובריאים14.

עבודה זו מראה כיצד zPDX יכול לשמש כמודל פרה-קליני לזיהוי פרופיל הרגישות הכימותרפית של חולי סרטן הלבלב. האסטרטגיה רבת הערך מקלה על תהליך הקסנוגרפט, שכן אין צורך בהרחבת תאים, מה שמאפשר את האצת ההקרנה הכימותרפית. כוחו של המודל הוא שכל מרכיבי המיקרו-סביבה נשמרים כפי שהם ברקמת הסרטן החולה, כי, כידוע, התנהגות הגידול תלויה ביחסי הגומלין ביניהם15,16. זה עדיף מאוד על פני שיטות חלופיות בספרות, שכן ניתן לשמר את ההטרוגניות של הגידול ולתרום לשיפור יכולת החיזוי של תוצאת הטיפול והישנות באופן ספציפי למטופל, ובכך לאפשר שימוש במודל zPDX בניסויים קליניים משותפים. כתב יד זה מתאר את השלבים הכרוכים ביצירת מודל zPDX, החל מכריתה של גידול בחולה וטיפול בו כדי לנתח את התגובה לכימותרפיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

משרד בריאות הציבור האיטלקי אישר את כל הניסויים בבעלי חיים המתוארים, בהתאם לדירקטיבה 2010/63/EU בנושא שימוש וטיפול בבעלי חיים. ועדת האתיקה המקומית אישרה את המחקר, תחת מספר רישום 70213. הסכמה מדעת התקבלה מכל הנבדקים המעורבים. לפני שמתחילים, יש להכין את כל הפתרונות והציוד (סעיף 1) ולחצות את הדגים (סעיף 2).

1. הכנת פתרונות וציוד

הערה: ראה טבלה 1 לקבלת הפתרונות והמדיה שיש להכין.

  1. התמיכה של Agarose gel
    1. שקלו את אבקת האגרוז בבקבוק הניתן למיקרו והמיסו אותה בנפח נתון של מדיום דג זברה E3 ליצירת ג'ל 1%. מחממים במיקרוגל עד שהאגרוז מתמוסס לחלוטין.
      הערה: אין להרתיח יתר על המידה את התמיסה.
    2. יוצקים את האגרוז המומס לצלחת פטרי ומחכים עד שהג'ל יתמצק לחלוטין.
    3. הכינו גלילי אגרוז קטנים (~ 5 מ"מ גובה) באמצעות פיפטת פסטר פלסטיק עם קצה חתוך. לאחר ההכנה, יש לאחסן בצלחת פטרי בטמפרטורה של 4°C עטופה ברדיד אלומיניום.
  2. מיקרו-מחטים מזכוכית
    1. משוך את נימי זכוכית בורוסיליקט עם מושך כדי להשיג מחטים עדינות (הגדרות: חום 990, PULL 550).
      הערה: מנימים אחד, ניתן להשיג שתי מחטים עדינות בקוטר קצה של 10 מיקרומטר.

2. מעבר דגים ואיסוף ביצים

  1. העברת דגים בוגרים למכלי רבייה 3 ימים לפני השתלת הרקמות, כמתואר על ידי אבדש ואחרים.17.
  2. הערה: מומלץ יחס של 1:1 או 2:3 זכרים לנקבות. צפיפות הדגים צריכה להיות מקסימום חמישה דגים לליטר מים. יש להפריד בין זכרים לנקבות באמצעות מחסום למשך הלילה.
  3. למחרת, הסירו את המחסום ואפשרו לדגים להזדווג.
  4. הוציאו את הדגים ממכלי הרבייה והחזירו אותם למכלי הדיור שלהם.
  5. יוצקים את המים ממיכל הרבייה דרך רשת דקה. מעבירים את הביצים המופרות לצלחת פטרי עם מדיום דג זברה E3.
  6. בדקו את צלחת הפטרי עם סטריאומיקרוסקופ והשליכו את הביצים העכורות. שמור את הביצים מופרות בתווך E3 זברה טרי ב 28 ° C.

3. אוסף דגימות

הערה: מלקחיים Autoclave וידית אזמל.

  1. עיבוד מיידי
    1. לאסוף את הדגימה הכירורגית של הגידול ב 10 מ"ל של תווך הגידול ב 4 ° C (דגימת הגידול נע בין 5 מ"מ ל 10 מ"מ קוטר). העבר את הדגימה ב 4 ° C מהמיקום הרצוי לעיבוד מיידי.
  2. אחסון למשך הלילה (אופציונלי)
    1. לאסוף את דגימת הגידול הכירורגי ב 10 מ"ל של מדיום הגידול ולאחסן את הדגימה לילה ב 4 ° C.
  3. אחסון בטמפרטורה של -80°C (אופציונלי, הכי פחות מומלץ)
    1. אחסנו את הדגימה בטמפרטורה של -80°C בבקבוקון קריוגני עם מדיום גידולי בתוספת 5% דימתיל סולפוקסיד (DMSO).

4. עיבוד דגימה

הערה: בצע את השלבים מתחת למכסה מנוע זרימה למינרית של תרבית רקמה סטרילית.

  1. לשטוף את כל רקמת הגידול עם 5 מ"ל של מדיום הגידול הטרי, pipeting למעלה ולמטה 10x באמצעות פיפטה פסטר פלסטיק. שאפו והשליכו את אמצעי הכביסה. חזור על שלב זה 3x.
    הערה: הימנע שאיפה של רקמת הגידול כפי שהוא יכול להישאר מחובר פיפטה פסטר פלסטיק.
  2. מעבירים את הדגימה בצלחת פטרי וממזגים אותה ב 1-2 מ"ל של מדיום גידול טרי. חותכים את דגימת הגידול לחתיכות קטנות (1-2 מ"מ3) באמצעות להב אזמל ומניחים אותם בצינור פלסטיק סטרילי 5 מ"ל עם תווך גידול.
  3. הגדר את מסוק הרקמה McIlwain לעובי 100 מיקרומטר. מניחים את שברי הדגימה על שולחן הפלסטיק העגול של המסוק וקוצצים אותם. סובבו את השולחן ב-90° וחזרו על החיתוך.
  4. צנטריפוגה את השברים ב 300 × גרם במשך 3 דקות. לאחר מכן, שאפו בזהירות את הסופרנאטנט והשליכו אותו.
  5. לדגור על השברים עם גשש תאים פלואורסצנטי, CM-DiI (ריכוז סופי של 10 מיקרוגרם / מ"ל במי מלח חוצצים פוספט של דולבקו [DPBS]), אדום עמוק (ריכוז סופי של 1 μL / מ"ל ב- DPBS), או CellTrace (ריכוז סופי של 5 מיקרומטר ב- DPBS) למשך 30 דקות, ומניחים את הצינור באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס.
  6. השהה מחדש את השברים על ידי פיטום עדין למעלה ולמטה כל 10 דקות.
    הערה: במקרה של CellTrace, יש להוסיף מדיום המכיל לפחות 1% חלבון בסוף הדגירה, בהתאם להוראות היצרן.
  7. צנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 3 דקות ולהשליך את supernatant. חזור על שלב זה 3x עם 1 מ"ל של DPBS כדי להסיר צבע לא משולב.
  8. להשעות את השברים ב 5 מ"ל של DPBS בצלחת פטרי 60 מ"מ.
    הערה: ודא שהרקמה אינה מתייבשת.

5. הקמת zPDX

הערה: בצע את השלבים מתחת למכסה מנוע זרימה למינרית של תרבית רקמה סטרילית.

  1. מרדימים את העוברים יומיים לאחר ההפריה (dpf) עם 0.16 מ"ג/מ"ל טריקאין בתווך דג זברה E3.
  2. הכניסו שלושה גלילי אגרוז (שלב 1.1.3) לצלוחית פטרי והניחו עובר של דג זברה על גליל, תוך חשיפת צד אחד. הסר את התמיסה העודפת כדי לשמור על העובר בסרט דק בלבד.
  3. מעבירים את פיסת הרקמה המוכתמת במלקחיים סטריליים מצלחת הפטרי לתמיכה של 1% אגרוז שבה העובר שוכב. הרימו את הרקמה, הניחו אותה על גבי חלמון העובר, ואז דחפו אותה לחלל הפריביטלין באמצעות מיקרו-מחט זכוכית המושכת בחום (שלב 1.2.1).
  4. הוסיפו בעדינות כמה טיפות של E3 1% פניצילין-סטרפטומיצין (Pen-Strep) לעובר כדי להחזיר אותו לנוזל.
  5. חזור על שלבים 5.2-5.4 עבור כל העוברים, ולבסוף, להסיר את תמיכות האגרוז מצלחת פטרי ולדגור על העוברים ב 35 מעלות צלזיוס.
  6. בדוק את העוברים עבור xenografts הנכון (צביעה חיובית) 2 שעות לאחר ההשתלה באמצעות סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי. להשליך את העוברים עם שברי הגידול שאינם לגמרי בתוך החלל perivitelline, כמו גם את העוברים המתים. חלקו את העוברים באופן אקראי בשש פלטות מרובות בארות (מקסימום n = 20 עוברים/באר), בחלוקה שווה לקבוצות בהתאם לתוכנית הניסוי (למשל, ביקורת ו-FOLFOXIRI).

6. טיפול

  1. לדלל את התרופה (למשל, 5-fluorouracil, oxaliplatin, irinotecan) לתוך E3 1% Pen-Strep, ערבוב יסודי על ידי pipeting למעלה ולמטה מספר פעמים. כפי שהוצע על ידי Usai et al.12, השתמש דילול פי חמישה של התרופה במי הדגים, ביחס לריכוז פלזמה שווה ערך (EPC).
  2. מערבבים את התרופות להכנת הקוקטייל (למשל, FOLFOXIRI).
  3. הסר את המדיה מכל באר והוסף את קוקטייל התרופה 2 שעות לאחר ההשתלה.
  4. לטפל בעוברים במשך 3 ימים. לחדש את קוקטייל התרופות כל יום.

7. צביעה אימונופלואורסצנטית בהר שלם

הערה: לפני שמתחילים, מניחים אצטון בטמפרטורה של -20°C ומכינים את התמיסות המפורטות בטבלה 1.

  1. יום 1:
    1. תקן את הזחלים עם 1 מ"ל של 4% paraformaldehyde בבקבוקוני זכוכית ב 4 ° C במשך הלילה.
  2. יום 2:
    1. לשטוף את הזחלים 3 x 5 דקות עם 1 מ"ל של PBS, בעדינות מתסיס על נדנדה פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    2. יש לאחסן ב-1 מ"ל של 100% מתנול בטמפרטורה של -20°C למשך הלילה (או לאחסון לטווח ארוך).
    3. התייבשו 3 x 10 דקות עם 1 מ"ל של PTw (0.1% tween ב-PBS), והתסיסו בעדינות על נדנדה של פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    4. חדיר עם 1 מ"ל של 150 mM Tris-HCl ב- pH 8.8 למשך 5 דקות ב- RT, ולאחר מכן חימום למשך 15 דקות ב- 70 ° C.
    5. שטף 2 x 10 דקות עם 1 מ"ל של PTw, בעדינות מתסיס על נדנדה פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    6. יש לשטוף 2 x 5 דקות עם 1 מ"ל של dH2O, בעדינות על נדנדה פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    7. חדיר עם 1 מ"ל של אצטון קר כקרח במשך 20 דקות ב -20 ° C.
    8. יש לשטוף 2 x 5 דקות עם 1 מ"ל של dH2O, בעדינות על נדנדה פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    9. שטף 2 x 5 דקות עם 1 מ"ל של PTw, בעדינות על נדנדה פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    10. לדגור את הזחלים ב 1 מ"ל של חיץ חוסם במשך 3 שעות ב 4 ° C, בעדינות תוסס על נדנדה פלטפורמת מעבדה (400 סל"ד).
    11. הניחו את הזחלים בצלחות באר מחולקות לקבוצה באופן הבא: 10 זחלים בנפח 50 מיקרוליטר/באר בצלחת בת 96 בארות או 20 זחלים בנפח של 100 מיקרוליטר/באר בצלחת בת 48 בארות.
    12. יש להשליך את החיץ החוסם, לדגור על הזחלים בתמיסת נוגדנים ראשונית (למשל, קספאז-3 אנטי-אנושי נגד בני אדם, 1:250) מדולל במאגר הדגירה למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס בחושך, ולנענע בעדינות על צלחת שייקר (400 סל"ד). ראה שלב 7.2.11 לקבלת אמצעי אחסון מומלצים.
  3. יום 3:
    1. שטפו את הזחלים ברצף 3 x 1 שעות עם 1 מ"ל של PBS-TS (10% סרום עיזים, 1% Triton X-100 ב-PBS) ולאחר מכן, עם 2 x 10 דקות עם 1 מ"ל של PBS-T (1% Triton X-100 ב-PBS) ו-2 x 1 שעות עם 1 מ"ל של PBS-TS. בכל שטיפה, להסעיר בעדינות את הצלחות המכילות את הזחלים על צלחת שייקר (400 סל"ד).
    2. לדגור על הזחלים עם נוגדנים משניים מצומדים בצבע פלואורסצנטי (למשל, נוגדן משני צולב נגד ארנב IgG [H+L], Alexa Fluor 647, 1:500) ו-100 מיקרוגרם/מ"ל Hoechst 33258 מדולל במאגר הדגירה בחושך למשך הלילה ב-4°C, עם תסיסה עדינה על צלחת שייקר (400 סל"ד). ראה שלב 7.2.11 לקבלת נפחים מומלצים של תמיסת נוגדנים משנית.
  4. יום 4:
    1. שטף 3 x 1 שעות עם 1 מ"ל של PBS-TS ו 2 x 1 שעות עם 1 מ"ל של PTw, עם תסיסה עדינה על צלחת שייקר (400 סל"ד).
    2. צור שכבה עגולה עם האמייל (עובי של ~ 0.5-1 מ"מ) על שקופיות מיקרוסקופ. תנו לאמייל להתייבש והניחו את הזחלים במרכז השכבה העגולה, תוך חשיפת הצד של הקסנוגרפט.
    3. יבשו את התמיסה העודפת והרכיבו את מכסה הזכוכית באמצעי הרכבה מסיס במים שאינו פלואורסצנטי.

8. הדמיה

  1. צלם תמונות תחת מיקרוסקופ קונפוקלי עם מטרה של 40x. השתמש בפרמטרי הרכישה הבאים: רזולוציה של 1024 x 512 פיקסלים עם מרווח Z של 5 מיקרומטר.

9. ניתוח אפופטוזיס על ידי ImageJ

  1. טען (פיג'י זה רק) תוכנת ImageJ (https://imagej.net/Fiji/Downloads) ופתח את תמונת הקובץ Z-stack (לחץ על קובץ | פתוח). בחלון הקופץ, בחר Stack viewing/Hyperstack ולחץ על OK.
  2. שכבת-על של הערוצים השונים על-ידי בחירה באפשרות תמונה | צבע | הכינו קומפוזיט.
  3. גררו את סרגל Z בתחתית התמונה כדי לדפדף בתמונת מחסנית Z ולזהות את אזור xenograft (תאים חיוביים למעקב אחר תאים פלואורסצנטיים. ראה שלב 4.5) במרחב perivitelline של דג הזברה.
  4. בחר כלי נקודה וספור את מספר התאים האנושיים אפופטוטיים (חיובי למעקב אחר תאים פלואורסצנטיים וקספאז-3 שסוע), כפי שמוצג בסרטון המשלים S1.
  5. לחץ פעמיים על סמל כלי הצבעה , שנה את המונה וספור את המספר הכולל של גרעיני תאים אנושיים (גרעיני תאים חיוביים CM-DiI).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הניסיונית ליצירת zPDXs מאדנוקרצינומה ראשונית של הלבלב האנושי. דגימת גידול נאספת, טחונה ומוכתמת באמצעות צבע פלואורסצנטי, כמתואר בפרוטוקול סעיף 4. לאחר מכן zPDXs הוקמו בהצלחה על ידי השתלת פיסת גידול בחלל הפריביטלין של 2 עוברי דגי זברה dpf, כמתואר בסעיף 5 של הפרוטוקול. כפי שמתואר בסעיף 6 של הפרוטוקול, ה-zPDXs נבדקו עוד יותר כדי לזהות את פרופילי הרגישות לכימותרפיה של תאים סרטניים שמקורם בחולה. לדוגמה, השילוב הכימותרפי FOLFOXIRI (5-fluorouracil, חומצה פולינית, oxaliplatin, ואירינוטקן) נבדק, שכן הוא מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מודלים In vivo בחקר הסרטן מספקים כלים שלא יסולא בפז להבנת הביולוגיה של הסרטן ולחיזוי התגובה לטיפול בסרטן. כיום, מודלים שונים in vivo זמינים, למשל, בעלי חיים מהונדסים גנטית (עכברים מהונדסים ונוקאאוט) או xenografts שמקורם בחולה מתאים ראשוניים אנושיים. למרות תכונות אופטימליות רבות, לכל אחד מהם יש מגבלות שונות. בפרט, המודלים הנ"ל חסרים דרך אמינה לחקות את המיקרו-סביבה של רקמת הגידול של המטופל.

הוצע כי מיקרו-סביבה של הגידול עשויה למלא תפקידים חשובים רבים בתגובה לתרופות

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

תודות

עבודה זו מומנה על ידי Fondazione Pisa (פרויקט 114/16). המחברים רוצים להודות לרפלה גאטה מהיחידה להיסטופתולוגיה של Azienda Ospedaliera Pisana על בחירת דגימת המטופל והתמיכה הפתולוגית. אנו מודים גם לאלסיה גלנטה על התמיכה הטכנית בניסויים. מאמר זה מבוסס על עבודה של COST Action TRANSPAN, CA21116, הנתמכת על ידי COST (שיתוף פעולה אירופי במדע וטכנולוגיה).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
5-פלואורואורצילטבע פארמה AGSMP 1532755
48 צלחת רב-בארותSarstedt83 3923
96 צלחת רב-בארותSarstedt82.1581.001
אצטוןMerck179124
אבקת אגרוז MerckA9539
AmphotericinThermo Fisher Scientific15290018
נוגדן נגד גרעינים, שיבוט 235-1MerckMAB1281 דילול 1:200
רשת אקווריום QN6Penn-plax0-30172-23006-6
BSAMerckA9418
CellTraceThermo Fisher ScientificC34567
CellTracker CM-DiI תרמו פישר סיינטיפיקC7001
CellTracker אדום עמוק Thermo Fisher ScientificC34565
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E)טכנולוגיית איתות תאי9661S1:250 דילול
דימתיל סולפוקסיד (DMSO) PanReac AppliChem ITW ריאגנטיםA3672,0250
Dumont #5 מלקחייםWorld Precision Instruments501985
חומצה פולינית -  נימי זכוכית של LederfolinPfizer
, 3.5 אינץ'Drummond Scientific Company3-000-203-G/Xקוטר חיצוני = 1.14 מ"מ. קוטר פנימי = 0.53 מ"מ.
בקבוקוני זכוכית VWR InternationalWHEAW224581
עזים נגד ארנבות  IgG  (H+L) נוגדן משני נספג צולב, Alexa Fluor 647Thermo Fisher ScientificA-21244   דילול 1:500
סרום עיזיםתרמו פישר סיינטיפיק31872
Hoechst 33342Thermo Fisher ScientificH3570
IrinotecanHospira
בקבוקוני מקפיא בטמפרטורה נמוכהVWR International479-1220
McIlwain קוצץ רקמותWorld Precision Instruments
מיקסרמיקרופלייטSCILOGEX822000049999
OxaliplatinTeva
ParaformaldehydeMerckP6148-500G
PBS Thermo FisherScientific 14190094
פניצילין-סטרפטומיצין תרמו פישר סיינטיפיק15140122
צלחת פטרי 100 מ"מSarstedt83 3902500
צלחת פטרי 60 מ"מSarstedt83 3901
פיפטה פסטר מפלסטיקSarstedt86.1171.010
Poly-MountTebu-bio18606-5
Propidium iodideMerckP4170
RPMI-1640 בינוניתרמו פישר11875093
להב אזמל מס' 10 נירוסטה סטריליתVWR ידית אזמל SWAN3001
#3מכשירי דיוק עולמיים500236
טריקאיןMerckE10521
טריטון X-100 MerckT8787
Tween 20MerckP9416
מכשיר תריסחולץ מיקרופיפטה אנכיP-30 
mAb ארנב בינלאומית

מקורות

  1. Rubin, H. Understanding cancer. Science. 219 (4589), 1170-1172 (1983).
  2. Krzyszczyk, P., et al. The growing role of precision and personalized medicine for cancer treatment. Technology. 6 (3-4), 79-100 (2018).
  3. Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. Cancer statistics, 2022. CA Cancer Journal for Clinicians. 72 (1), 7-33 (2022).
  4. Trunk, A., et al. Emerging treatment strategies in pancreatic cancer. Pancreas. 50 (6), 773-787 (2021).
  5. Moffat, G. T., Epstein, A. S., O'Reilly, E. M. Pancreatic cancer-A disease in need: Optimizing and integrating supportive care. Cancer. 125 (22), 3927-3935 (2019).
  6. Sarantis, P., Koustas, E., Papadimitropoulou, A., Papavassiliou, A. G., Karamouzis, M. V. Pancreatic ductal adenocarcinoma: Treatment hurdles, tumor microenvironment and immunotherapy. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 12 (2), 173-181 (2020).
  7. Marshall, L. J., Triunfol, M., Seidle, T. Patient-derived xenograft vs. organoids: a preliminary analysis of cancer research output, funding and human health impact in 2014-2019. Animals. 10 (10), 1923(2020).
  8. Li, Y., Tang, P., Cai, S., Peng, J., Hua, G. Organoid based personalized medicine: from bench to bedside. Cell Regeneration. 9 (1), 21(2020).
  9. Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The generation and application of patient-derived xenograft model for cancer research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
  10. Rizzo, G., Bertotti, A., Leto, S. M., Vetrano, S. Patient-derived tumor models: a more suitable tool for pre-clinical studies in colorectal cancer. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 40 (1), 178(2021).
  11. Usai, A., et al. Zebrafish patient-derived xenografts identify chemo-response in pancreatic ductal adenocarcinoma patients. Cancers. 13 (16), 4131(2021).
  12. Usai, A., et al. A model of a zebrafish avatar for co-clinical trials. Cancers. 12 (3), 677(2020).
  13. Chen, X., Li, Y., Yao, T., Jia, R. Benefits of zebrafish xenograft models in cancer research. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 616551(2021).
  14. Miserocchi, G., et al. Management and potentialities of primary cancer cultures in preclinical and translational studies. Journal of Translational Medicine. 15 (1), 229(2017).
  15. Baghban, R., et al. Tumor microenvironment complexity and therapeutic implications at a glance. Cell Communication and Signaling. 18 (1), 59(2020).
  16. Albini, A., et al. Cancer stem cells and the tumor microenvironment: interplay in tumor heterogeneity. Connective Tissue Research. 56 (5), 414-425 (2015).
  17. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. Journal of Visualized Experiments. (69), e4196(2012).
  18. Quail, D. F., Joyce, J. A. Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis. Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).
  19. Tavares Barroso, M., et al. Establishment of pancreatobiliary cancer zebrafish avatars for chemotherapy screening. Cells. 10 (8), 2077(2021).
  20. Kopetz, S., Lemos, R., Powis, G. The promise of patient-derived xenografts: the best laid plans of mice and men. Clinical Cancer Research. 18 (19), 5160-5162 (2012).
  21. Xing, F., Saidou, J., Watabe, K. Cancer associated fibroblasts (CAFs) in tumor microenvironment. Frontiers in Bioscience. 15 (1), 166-179 (2010).
  22. Strähle, U., et al. Zebrafish embryos as an alternative to animal experiments-a commentary on the definition of the onset of protected life stages in animal welfare regulations. Reproductive Toxicology. 33 (2), 128-132 (2012).
  23. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

קסנוגרפט של דג זברהקסנוגרפט ממקור חולהמודל לסרטן הלבלבמיקרו-סביבה של גידולסימון פלואורסצנטימיקרוסקופיה קונפוקליתהשתלת פרגמנטים של גידולסריקת תרופותניתוח אפופטוזיס
הקמת קסנוגרפטים מסרטן הלבלב שמקורם בדגי זברה לבדיקת רגישות לכימותרפיה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.