ליזטים של טסיות דם מייצגים כלי מתפתח לטיפול במחלות פני השטח של העין. כאן אנו מציעים שיטה להכנה, חלוקה, אחסון ואפיון של ליזאט טסיות שנאסף מתורמי טסיות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
פלזמה עשירה בטסיות דם לטיפול במחלות פני השטח של העין
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלות שונות של פני השטח של העין מטופלות בטיפות עיניים שמקורן בדם. השימוש בהם הוכנס לקליניקה בגלל תכולת המטבוליטים וגורמי הגדילה שלהם, המקדמת התחדשות פני השטח של העין. ניתן להכין טיפות עיניים על בסיס דם ממקורות שונים (כלומר, תרומת אפרזיס מדם מלא או טסיות דם), כמו גם עם פרוטוקולים שונים (למשל, דילולים שונים ומחזורי הקפאה/הפשרה). שונות זו מעכבת את הסטנדרטיזציה של פרוטוקולים קליניים, וכתוצאה מכך, את הערכת היעילות הקלינית שלהם. פירוט ושיתוף ההליכים המתודולוגיים עשויים לתרום להגדרת קווים מנחים משותפים. במהלך השנים האחרונות, מוצרים אלוגניים מתפזרים כחלופה לטיפולים האוטולוגיים מכיוון שהם מבטיחים סטנדרטים גבוהים יותר של יעילות; ביניהם, טיפות עיניים פלזמה עשירות טסיות דם (PRP-L) מוכנים עם נהלי ייצור פשוטים. ביחידה לרפואת עירוי ב- AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, איטליה, PRP-L מתקבל מתרומת טסיות-אפרזיס. מוצר זה מדולל בתחילה ל-0.3 x 109 טסיות /מ"ל (החל מריכוז ממוצע של 1 x 10 9 טסיות/מ"ל) ב-NaCl של0.9 %. טסיות מדוללות מוקפאות/מופשרות, ולאחר מכן צנטריפוגות כדי לסלק פסולת. הנפח הסופי מפוצל ל-1.45 מ"ל ומאוחסן ב-80 מעלות צלזיוס. לפני מתן לחולים, טיפות עיניים נבדקות לסטריליות. חולים יכולים לאחסן ליזטים טסיות ב -15 מעלות צלזיוס למשך עד חודש. הרכב גורם הצמיחה מוערך גם מתוך aliquots שנבחרו באקראי, ואת הערכים הממוצעים מדווחים כאן.
מבוא
מוצרים שמקורם בדם נמצאים בשימוש נרחב בטיפול בפצעים1, כירורגיית לסתות ואורתופדיה, ולטיפולבמחלות שונות של פני השטח של העין 2 כגון מחלת העין היבשה (DED)3. ב- DED, ההומיאוסטזיס של סרט הדמעות נפגע כתוצאה מתפקוד לא תקין של גורמים שונים המעורבים בייצור דמעות ותקינות פני השטח של העין 4,5.
DED מאופיין בהטרוגניות בסיבות ובחומרה 6,7,8 ועשוי להיות תוצאה של גורמים שונים כמו הזדקנות, מין9, עדשות מגע, תרופות אקטואליות או סיסטמיות 10,
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
PRP-L המשמש להערכה כמותית של גורמי צמיחה נאספו במסגרת מחקר רחב יותר על אפיון מוצרי PRP למטרות רגנרטיביות, שבוצע ב- AUSL-IRCCS di Reggio Emilia ואושר על ידי הוועדה האתית של אזור וסטה אמיליה נורד ב-10 בינואר 2019 (פרוטוקול מספר 2019/0003319). התורמים נתנו את הסכמתם מדעת בהתאם להצהרת הלסינקי. לא היה צורך באישור אתי לאיסוף הנתונים המצטברים והאנונימיים של שאלון מדד מחלות פני השטח של העין (OSDI), המשמש באופן שגרתי רופאים לניטור תסמיני תסמונת העין היבשה. איור 1A מציג מתווה של הפרוטוקול שבוצע, בעוד שהתמונות באיור 1B מתארות את השלבים העיקריים של ההליך.
1. אוסף פלזמה עשירה בטסיות דם (P....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הרציונל לשימוש בטיפות עיניים שמקורן בסרום (שהוא המוצר מבוסס הדם הנפוץ ביותר לטיפול במחלות פני העין) טמון בתכולתן של GFs, אשר נגזרות כמעט לחלוטין מטסיות דם במחזור. PRP מכיל מספר גבוה משמעותית של טסיות דם (וכתוצאה מכך, של GFs שמקורם בטסיות) בהשוואה לסרום דם היקפי, הנע בין 0.15 x 10 9-0.45 x 109 PLTs / mL. על פי החוקים האיטלקיים, ספירת הטסיות ביחידות PRP צריכה להיות לפחות 0.9 x 109-1 x 109 PLTs / mL. לכן, כדי להשיג מוצר המדמה את היעילות של טיפות עיניים בסרום, PRP צריך להיות מדולל .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בשנים האחרונות, השימוש הקליני של מוצרים מבוססי טסיות עבור פתולוגיות פני השטח של העין גדל, אבל הדיפוזיה שלהם נפגעת על ידי חוסר חוסן מדעי. זה נגרם בעיקר על ידי הטרוגניות רחבה במקורות התורמים ופרוטוקולי הכנה, שלעתים קרובות אינם נחשפים במלואם או לא תוכננו במיוחד למטרה שלשמה הם מחולקים. במיוחד, מידע על מוצרים מבוססי טסיות שנאספו על ידי אפרזיס עדיין חסר. לכן, מטרת העבודה הנוכחית הייתה לתאר את העיבוד שלב אחר שלב של ליזטים פלזמה עשירים בטסיות דם (PRP-L) המתקבלים על ידי אפרזיס לטיפול ב- DED.
PRP-L הוא .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים.
תודות
המחברים מבקשים להודות ל-"Casa del Dono di Reggio Emilia" על אספקת תרכיזי טסיות שמקורם בתורמים.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Equipments | |||
| CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, גרמניה | אוטם שקיות | |
| HeraSafe קולט אדים Heraeus | Instruments, גרמניה | Class II קולט אדים ביולוגי | |
| MCS+ 9000 מערכת איסוף טסיות | ניידת Haemonetics, איטליה | ציוד אוטומטי לאיסוף פלזמה ורב-רכיבים לתרומת טסיות דם, תאים אדומים, פלזמה או רכיבי דם משולבים | |
| שייקר טסיות דם, PF396i | הלמר, ארה"ב | שייקר טסיות דם | |
| Raycell X-ray Irradiator | דם MDS Nordion, קנדה | רנטגן רדיאטור דם | |
| ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, גרמניה | תכשיט במהירות גבוהה | |
| Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, גרמניה | המוציטומטר לספירת טסיות | |
| אמבטיה חמה, WB-M15 | Falc Instruments, איטליה | אמבטיה חמה | |
| <חזק>חומרים | |||
| ACD-A תמיסה נוגדת קרישה A | Fenwal Inc., ארה"ב | DIN 00788139 | תמיסה נוגדת קרישה לאפרזיס טסיות דם (1000 מ"ל) |
| BD BACTEC Peds Plus/F בקבוקוני תרבית | BD Biosciences, ארה"ב | BD 442020 | בדיקת סטריליות |
| BD BACTEC Peds Plus/F בקבוקוני תרבית | BD Biosciences, ארה"ב | 442020 | לפחות 2 בקבוקונים לבדיקת סטריליות |
| BD Luer Lok מזרק | BD Plastipack, ארה"ב | 300865 | לפחות 4 מזרקים סטריליים (50 מ"ל) |
| פאנל סרטן אנושי Bio-Plex 1 | מעבדות BioRad, ארה"ב | 171AC500M | פאנל סטנדרטי להערכת |
| איזופורמים PDGFפאנל סרטן אנושי Bio-Plex 2 | מעבדות BioRad, ארה"ב | 171AC600M | פאנל סטנדרטי להערכת EGF |
| Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader | מעבדות BioRad, ארה"ב | Magpix | מכשיר זה מאפשר בדיקות אימונולוגיות מרובות באמצעות חרוזים מגנטיים פונקציונליים. |
| Bio-Plex Pro TGF-b Assay | BioRad Laboratories, ארה"ב | 10024984 סט ותקנים להערכת איזופורמים של TGFb | |
| BioRet | ARIES srl., איטליה | A2DH0020 | לפחות 4 ספייק פירסינג לשקיות דם |
| צינור איסוף דם | BD Vacutainer, ארה"ב | 367835 | צינור אחד, הכרחי לביצוע ספירת |
| טסיות דםערכת טיפות עיניים. מכשיר רפואי COL ליישום ושימור טיפות עיניים מרכיבי המו | מכשיר ביומד s.r.l., איטליה | COLC50 | . לפחות 2 ערכות לכל יחידת PRP שנאספו |
| סרטן אנושי PDGF-AB/BB סט 1x96well | מעבדות BioRad, ארה"ב | 171BC511 | סט להערכת איזופורמים PDGF |
| סרטן אנושי 2 סט EGF 1x96well | מעבדות BioRad, ארה"ב | 171BC603M | סט להערכת EGF |
| NaCl 0.9% תמיסה סטרילית | בקסטר S.p.A., איטליה | B05BB01 | 1000 מ"ל |
| אלרגן בע"מ, ארה"ב | שאלון אינדקס מחלות פני העין | OSDI | |
| פירסינג ספייק | BioRet ARIES srl., איטליה | BS051004 | |
| תמיסת תוסף טסיות דם ספייק A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., איטליה | 40842 | תמיסה משמרת לתרכיזי טסיות דם (1000 מ"ל) |
| תוכנה אקסל | מיקרוסופט, ארה"ב | אקסל | תוכנת ניתוח נתונים |
| Teruflex שקית העברה 1000 מ"ל | TERUMO BCT Inc., איטליה | BB*T100BM | 1 לדילול PRP |
| שקית העברה Teruflex 300 מ"ל | TERUMO BCT Inc., איטליה | BB*030CM | לפחות 6 עבור כל יחידת PRP שנאספה |
מקורות
- Everts, P. A., et al. Platelet-rich plasma and platelet gel: A review. The Journal of Extra-Corporeal Technology. 38 (2), 174(2006).
- Giannaccare, G., et al. Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular s....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
