הפרוטוקול הנוכחי מתאר מכשיר לבדיקת חיכוך המחיל החלקה הדדית בו-זמנית ועומס רגיל על שני גופנים ביולוגיים שבאים במגע.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
הפרוטוקול הנוכחי מתאר מכשיר לבדיקת חיכוך המחיל החלקה הדדית בו-זמנית ועומס רגיל על שני גופנים ביולוגיים שבאים במגע.
בדלקת מפרקים ניוונית ראשונית (OA), 'בלאי' תקין הקשור להזדקנות מעכב את יכולתו של הסחוס לקיים את תפקודי נושא העומס והשימון שלו, ומטפח סביבה פיזית מזיקה. האינטראקציות החיכוכיות של סחוס מפרקי וסינוביום עשויות להשפיע על הומאוסטזיס משותף באמצעות שחיקה ברמת הרקמה ומכנוטרנסדוקציה תאית. כדי לחקור את התהליכים המכניים והמכנוביולוגיים האלה, מתואר מכשיר המסוגל לשכפל את תנועת המפרק. מכשיר בדיקת החיכוך שולט בהעברת תנועת תרגום הדדית ועומס רגיל לשני פני נגד ביולוגיים מגע. מחקר זה מאמץ תצורת סינוביום-על-סחוס, ומדידות מקדמי חיכוך מוצגות לבדיקות המבוצעות באמבט מי מלח עם אגירת פוספט (PBS) או בנוזל סינוביאלי (SF). הבדיקה בוצעה עבור מגוון של לחצים במגע, תוך הדגשת תכונות הסיכה של SF תחת עומסים גבוהים. מכשיר בדיקת חיכוך זה יכול לשמש כביוריאקטור ביומימטי לחקר הוויסות הפיזי של רקמות מפרקים חיות בתגובה להעמסה פיזיולוגית יישומית הקשורה לביטוי מפרק היומן.
דלקת מפרקים ניוונית (באנגלית: Osteoarthritis או OA) היא מחלת מפרקים ניוונית מתישה הפוגעת ביותר מ-32 מיליון מבוגרים אמריקאים, עם עלות בריאותית וסוציו-אקונומית של יותר מ-16.5מיליארד דולר. המחלה התאפיינה באופן קלאסי בהתדרדרות של סחוס מפרקי ועצם תת-כונדרלית; עם זאת, שינויים בסינוביום זכו לאחרונה להערכה מכיוון שסינוביטיס נקשרה לתסמיני OA ולהתקדמות 2,3,4. ב-OA ראשוני (אידיופטי), 'בלאי' תקין הקשור להזדקנות מעכב את יכולתו של הסחוס לקיים את תפקודי נושא העומס והשימון שלו. הלחצים הנוצרים על ידי מגע החלקה ממושך של שכבות סחוס מפרקיות או מגע מחליק של סחוס כנגד חומרי שתל הוכחו כמקלים על שחיקת דלמינציה באמצעות כשל עייפות תת-קרקעי 5,6. מכיוון שקיימת סביבה מכנית דינמית בתוך המפרק 7,8, האינטראקציות החיכוך של סחוס מפרקי וסינוביום עשויות להשפיע על הומאוסטזיס משותף באמצעות שחיקת רמת הרקמה ומכנוטרנסדוקציה תאית. כדי לחקור תהליכים מכניים ומכנוביולוגיים אלה, תוכנן מכשיר לשכפל את תנועת המפרק עם שליטה הדוקה על העמסה דחיסה וחיכוך 5,6,9,10,11,12,13.
הפרוטוקול הנוכחי מתאר מכשיר לבדיקת חיכוך המספק חומר גומלין, המתרגם תנועה ועומס דחיסה למשטחי מגע של רקמות חיות. המכשיר הנשלט על ידי מחשב מאפשר למשתמש לשלוט במשך כל בדיקה, בעומס המופעל, בטווח התנועה של שלב התרגום ובמהירות התרגום. המכשיר הוא מודולרי, ומאפשר בדיקה של גופנים נגדיים שונים, כגון רקמה על רקמה (סחוס על סחוס וסינוביום-על-סחוס) ורקמות על זכוכית. בנוסף למדידות הפונקציונליות המתקבלות על ידי הבודק, ניתן להעריך רכיבי אמבט רקמות ושימון לפני ואחרי הבדיקה כדי להעריך את השינויים הביולוגיים המועברים על ידי משטר ניסוי נתון.
מחקרים על טריבולוגיה של סחוס נעשו במשך עשרות שנים, וכמה טכניקות פותחו כדי למדוד מקדמי חיכוך בין סחוס לזכוכית וסחוס על סחוס14,15. הגישות השונות מונעות על ידי המפרק ו/או מנגנון הסיכה המעניין. לעתים קרובות יש פשרה בין שליטה על משתנים ניסיוניים לבין סיכום של פרמטרים פיזיולוגיים. התקנים בסגנון מטוטלת משתמשים במפרקים שלמים כ-fulcrum של מטוטלת פשוטה שבה משטח משותף אחד מתורגם בחופשיות על פני המשטח השני 14,16,17,18. במקום להשתמש במפרקים שלמים, ניתן לקבל מדידות חיכוך על ידי החלקת חומרי סחוס על פני משטחים רצויים 14,19,20,21,22,23,24,25. מקדמי החיכוך המדווחים של הסחוס המפרקי השתנו על פני טווח רחב (מ-0.002 ל-0.5) בהתאם לתנאי ההפעלה14,26. התקנים נוצרו כדי לשכפל תנועה סיבובית 23,27,28. Gleghorn et al.26 פיתחו טריבומטר מותאם אישית רב-באר כדי לצפות בפרופילי שימון סחוס באמצעות ניתוח עקומת סטריבק, ותנועת הזזה מתנדת ליניארית הופעלה בין סחוס כנגד פני נגד זכוכית שטוחים.
מכשיר זה נועד לבודד תגובות חיכוך ולחקור את המכנוביולוגיה של רקמות חיות בתנאי טעינה שונים. המכשיר משתמש במערך בדיקה פשוט המדמה את ביטוי המפרק באמצעות החלקה דחיסה, אשר יכול להעריך הן את תנועת הגלגול והן את תנועת ההחלקה מתוך הבנה שההתנגדות בתנועת גלגול טהורה היא זניחה ביחס למקדם החיכוך הנמדד של סחוס מפרקי29. הבודק, שנבנה במקור כדי לחקור את ההשפעות של לחץ נוזל אינטרסטיציאלי על תגובת החיכוך של סחוס מפרקי9, שימש מאז כדי לחקור נושאים כגון השפעות חיכוך של הסרת האזור השטחי של סחוס10, השפעות סיכה של נוזל סינוביאלי11, השערות שחיקת סחוס 5,6,30, ומדידות חיכוך סינוביום עלרקמה 13 . הביוריאקטור לבדיקת חיכוך יכול לערוך ניסויי חיכוך בתנאים סטריליים, ולספק מנגנון חדשני לחקור כיצד כוחות החיכוך משפיעים על התגובות המכנוביולוגיות של סחוס חי וסינוביום. תכנון זה יכול לשמש כביוריאקטור ביומימטי כדי לחקור את הוויסות הפיזי של רקמות מפרקים חיות בתגובה להעמסה פיזיולוגית יישומית הקשורה לביטוי מפרקים של יומן.
מחקר זה מציג תצורה לבדיקת חיכוך סינוביום על סחוס על פני מגוון של עקות מגע ובאמבטיות סיכה שונות. שטח הפנים המפרקי של רוב המפרקים הוא, במידה רבה, רקמה סינוביאלית31. בעוד שהחלקה של סינוביום על סחוס אינה מתרחשת במשטחים נושאי עומס ראשוניים, לאינטראקציות החיכוך בין שתי הרקמות עדיין עשויות להיות השלכות חשובות על תיקון רמת הרקמה ועל מכניוטרנסדוקציה של תאים. בעבר הוכח כי סינוביוציטים דמויי פיברובלסטים (FLS) השוכנים על השכבה האינטימית של הסינוביום הם מכניזנסיטיביים, ומגיבים ללחץ גזירה המושרה בנוזל32. כמו כן, הוכח כי מתיחהשל 33,34 ולחץ גזירה המושרה בנוזל35 מווסתים את ייצור חומרי הסיכה של FLS. לפיכך, מגע החלקה ישיר בין סינוביום לסחוס עשוי לספק גירוי מכני נוסף לתאים המתגוררים בסינוביום.
רק דיווחים מעטים על מקדמי חיכוך סינוביום פורסמו31,36. Estell et al.13 ביקשו להרחיב על האפיון הקודם על ידי שימוש בגופי נגד רלוונטיים מבחינה ביולוגית. עם יכולתו של מכשיר בדיקת החיכוך לבחון רקמות חיות, ניתן לחקות אינטראקציות של רקמות פיזיולוגיות במהלך ביטוי המפרקים כדי להבהיר את תפקידו של לחץ גזירה במגע על תפקוד הסינוביוציטים ואת תרומתו להצלבה בין סינוביום לסחוס. זה האחרון היה מעורב בתיווך דלקת מפרקים סינוביאלית בדלקת פרקים ולאחר פציעה. בשל הקרבה הפיזית של סחוס לסינוביום ונוזל סינוביאלי, המכילים סינוביוציטים המציגים יכולת מולטיפוטנטית, כולל כונדרוגנזה, ההנחה היא כי סינוביוציטים ממלאים תפקיד בהומאוסטזיס של סחוס ותיקון על ידי השתלה למשטח המפרקי. בהקשר זה, מגע פיזי וגזירה הדדית של סחוס-סינוביום וסינוביום-סינוביום עשויים להגביר את הנגישות של סינוביוציטים לאזורים של נזקי סחוס 37,38,39,40. מחקרים המשתמשים בתצורות של סינוביום על סחוס לא רק יספקו תובנות על מכניקת הרקמות הגסות והטריבולוגיה של המפרקים, אלא גם יובילו לאסטרטגיות חדשות לשמירה על בריאות המפרקים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מפרקי ברכיים של בקר צעירים, שהתקבלו מאבטויר מקומי, שימשו למחקר הנוכחי. מחקרים עם דגימות שור כאלה פטורים מהוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים בקולומביה (IACUC).
1. תכנון התקן בדיקת החיכוך
הערה: ייצוג סכמטי של התקן בדיקת החיכוך מוצג באיור 1. המכשיר בנוי על לוחית בסיס קשיחה (לא מוצגת), המשמשת כפלטפורמה לתמיכה מבנית.
2. הכנת דגימה והרכבה
3. בדיקת חיכוך
הערה: תוכנית LabVIEW מותאמת אישית וחומרה משויכת (ראה קבצי קידוד משלימים) משמשות לבדיקות אלה. שים לב שהקוד המותאם אישית נבנה ב- LabVIEW 2010 ונשמר על אותה גרסה מדור קודם. כתוצאה מכך, ייתכן שהקוד לא יהיה תואם קדימה לגרסה העדכנית ביותר של התוכנה. שביתות הלחצנים הבאות והפניות לממשק משתמש יהיו רלוונטיות רק לקוד המותאם אישית. אם עובדים עם גרסת תוכנה אחרת, ניתן לכתוב תוכנית מותאמת אישית דומה על ידי שינוי הקוד.
4. עיבוד נתונים
הערה: תוכנית MATLAB מותאמת אישית משמשת לעיבוד נתונים (ראה קבצי קידוד משלימים). הקוד קורא לקבצי הפלט שצוינו על-ידי קוד LabVIEW המותאם אישית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תצורת סינוביום-על-סחוס שימשה לבדיקת חיכוך של חומרי בטן צעירים. הסינוביום הורכב על לוחית טעינה אקרילית בקוטר 10 מ"מ כך שהשכבה האינטימית תהיה במגע עם הסחוס הבסיסי. רצועה טיביאלית שימשה כנקודת הנגד של הסחוס (איור 6A). רצועות טיביאליות נחתכו בעומק של כ-1.4 מ"מ ובגודל של 10 מ"מ על 30 מ"מ. הדגימות נבדקו במשך שעה אחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באמבט מלוחים עם מאגר פוספט (PBS) או באמבטיית נוזל סינוביאלי של בקר (SF). אמבט ה- SF כלל תערובת של 50/50 של PBS ו- SF בקר. תאוצת הבמה הייתה 100 מ"מ לשנייה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
סביבה מכנית דינמית קיימת בתוך המפרק כאשר הסחוס נתון לכוחות דחיסה, מתיחה וגזירה, וללחצים הידרוסטטיים ואוסמוטיים44,45. למרות שהסחוס הוא הרקמה נושאת העומס העיקרית של המפרק, הסינוביום עובר גם אינטראקציות חיכוך עם משטח הסחוס ועם עצמו באזורים שבהם הרקמה מתקפלת. האינטראקציות הפיזיות בין הסחוס לסינוביום אחראיות ככל הנראה להעברת תאים ולשחרור תאי גזע מזנכימליים לסביבת המפרקים, ומציעות מקור תאי פוטנציאלי לתרום למנגנוני תיקון סחוס מפרקיים (מוגבלים) 37,38,39,40.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן למחקר מדעי אורתופדי, NIH 5R01 AR068133, NIH TERC 5P41EB027062, ו- NIGMS R01 692 GM083925 (מזהה מממן: 10.13039/100000057).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| רדיד אלומיניום | אחזקות קבוצת | ריינולדס ריינולדס לעטוף | קציר רקמות סטריליות |
| מארז אקרילי ממוסגר אלומיניום בהתאמה | רכיב בודק חיכוך | ||
| שקיות עיקור איטום מיידי הניתנות לחיטוי | פישרברנד | 01-812-54 | עיקור כלים |
| חיטוי | בקסטון | עיקור כלים | |
| (250 מ"ל) | פיירקס ויסטה | 70000 | קציר רקמות |
| בטדין (תמיסת הכנה ליוד פובידון) | Medline Industries, LP | MDS093906 | קציר רקמות סטרילי |
| ארון בטיחות ביולוגי | Labconco | Purifier Logic+ Class II, סוג A2 BSC | קציר רקמות סטרילי |
| Biospy punch | Steritool Inc. | 50162 | חותך קופסאות קציר רקמות |
| חברת סכיני הגילוח האמריקאית | 94-120-71 | קציר רקמות | |
| עמוד אקריליק-סיליקון עגול (סינוביום) | בהתאמה | תרבית הרכבה לרקמות | |
| בהתאמה | (מס' קט' 11-965-118; Gibco) בתוספת 50 μ גרם/מ"ל L-פרולין (Cat. מס' P5607; Sigma), 100 μ גרם/מ"ל נתרן פירובט (Cat. מס' S8636; Sigma), 1% ITS (Cat. מס' 354350; קורנינג), ו-1% אנטיביוטיקה; אנטי-פטרייתי (Cat. מס' 15-240-062, Gibco) | ||
| ציאנואקרילט (Loctite 420 Clear) | Henkel | 135455 | הרכבה לרקמות |
| משקלים מתים | OHAUS | עומס רגיל | |
| אתנול 200 הוכחה | Decon Labs, Inc. | 2701 | דילול ל-70% |
| בסיס קבוע | ThorLabs, Inc. | רכיב בודק חיכוך | SB1T |
| מלקחיים (קציר סינוביום) | Fine Science Tools | 11019-12 | מלקחיים לקצירת רקמות |
| (הרכבה על סינוביום) | Excelta | 3C-S-PI | הרכבה על רקמות |
| מקודד ליניארי אופקי (לתרגום שלב) | RSF Electronics, Inc. | MSA 670.63 | רכיב בודק חיכוך; רזולוציית מערכת של 1 ומיקרו; m |
| אקדח דבק חם ודבק | FPC Corporation | Surebonder Pro 4000A | הרכבה לרקמות |
| LabVIEW | National Instruments Corporation | LabVIEW 2010 | תוכנית בדיקת חיכוך |
| תא עומס | JR3 Inc. | 20E12A-M25B | ; רזולוציה של 0.0019 פאונד ב-x& y, רזולוציה של 0.0038 ק"ג ב-z |
| משטח טעינה | בהתאמה | הרכבה על רקמות | |
| טבעת O פרקר | S1138AS568-009 | צלחת פטרי להרכבת רקמות | |
| (60 מ"מ) | Falcon | 351007 | הרכבה על רקמות |
| מיקום עבודה PivotLok (מחזיק שוקה) | מחסן תעשיה, Pivot Lok | PL325 | קצירת רקמות |
| בסיס נשלף | ThorLabs, Inc. | SB1B | רכיב בודק חיכוך |
| מעמד | קציר רקמות | ||
| להבי אזמל | Havel's Inc. | FSC22 | קציר רקמות |
| ידית אזמל | FEATHER בטיחות סכין גילוח ושות', בע"מ | מס' 4 | מברג קציר רקמות |
| Wera | 3334 | קציר רקמות | |
| JMAR | רכיב בודק חיכוך | ||
| מנוע צעד | Oriental Motor Co., Ltd. | PK266-03B | רכיב בודק חיכוך |
| כלי יניקה | Virtual Industries, Inc. | PEN-VAC עט ואקום | הרכבה לרקמות |
| מוט תמיכה | בהתאמה | רקמות הרכבה | |
| מספריים כירורגיים | Fine Science Tools | 14061-09 | הרכבה על רקמות |
| נוזל סינוביאלי (בקר) | Animal Technologies, Inc. | אמבט בדיקת חיכוך | |
| אמבט בדיקה בהתאמה | אישית | תמיסת מלח עם פוספט בופר (PBS) עם מעכבי פרוטאז: 0.04% ביוציד על בסיס איזותיאזולון (Proclin 950 Cat. מס' 46878-U; סיגמא) ומעכב פרוטאז 0.1% - 0.05 M חומצה אתילנדיאמינטטראצטית, EDTA (Cat. מס' 0369; סיגמא) | |
| חממת תרבית רקמות | פישר סיינטיפיק | איזוטמפ | תרבית סטרילית |
| מקודד ליניארי אנכי (לשלב טעינה) | Renishaw | T1031-30A | ; רזולוציה של 20 ננומטר |
| מפעיל סליל קול | H2W Technologies | NCC20-15-027-1RC | רכיב בודק חיכוך |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה