מאמר שיטה

הדמיה של המאפיינים המורפולוגיים של צומת נוירומוסקולרי בשריר גסטרוקנמיוס מדיאלי של חולדה

DOI:

10.3791/63954

⸱

17 במאי 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול מראה שיטה לבחינת קורלציה מרחבית בין ההדקים הקדם-סינפטיים, הקולטנים הפוסט-סינפטיים ותאי שוואן הפרי-סינפטיים בשריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי של החולדה באמצעות אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית עם סמנים ביולוגיים שונים, כלומר נוירופילמנט 200, טרנספורטר אצטילכולין שלפוחיתי, אלפא-בונגארוטוקסין ו-S100.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הצומת הנוירומוסקולרי (NMJ) הוא מבנה מורכב המשרת את תקשורת האותות מהנוירון המוטורי לשריר השלד ומורכב משלושה מרכיבים היסטולוגיים חיוניים: מסופי האקסון המוטורי הטרום-סינפטיים, קולטני אצטילכולין ניקוטיניים פוסט-סינפטיים (AchRs) ותאי שוואן פרי-סינפטיים (PSCs). על מנת להדגים את המאפיינים המורפולוגיים של NMJ, שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי של החולדה נבחר כרקמה המטרה ונבדק על ידי שימוש בכתמים פלואורסצנטיים מרובים עם סוגים שונים של סמנים ביולוגיים, כולל נוירופילמנט 200 (NF200) וטרנספורטר אצטילכולין שלפוחיתי (VAChT) עבור סיבי העצב המוטוריים וההדקים הטרום-סינפטיים שלהם, אלפא-בונגארוטוקסין (α-BTX) עבור ה-AchRs הניקוטיניים הפוסט-סינפטיים, ו-S100 עבור ה-PSCs. במחקר זה בוצעו הכתמים בשתי קבוצות: בקבוצה הראשונה, הדגימות הוכתמו ב-NF200, VAChT ו-α-BTX, ובקבוצה השנייה הוכתמו הדגימות ב-NF200, α-BTX ו-S100. הוכח כי שני הפרוטוקולים יכולים להדגים ביעילות את המבנה המפורט של NMJ. באמצעות המיקרוסקופ הקונפוקלי, נראו מאפיינים מורפולוגיים של ההדקים הטרום-סינפטיים, הקולטנים הפוסט-סינפטיים וה-PSC, ותמונות ערימות ה-Z שלהם שוחזרו בתבנית תלת-ממדית כדי לנתח עוד יותר את המתאם המרחבי בין התוויות השונות. מנקודת המבט של המתודולוגיה, פרוטוקולים אלה מספקים התייחסות רבת ערך לחקר המאפיינים המורפולוגיים של NMJ בתנאים פיזיולוגיים, אשר עשויים להתאים גם להעריך את השינוי הפתולוגי של NMJ, כגון פגיעה בעצבים היקפיים והתחדשות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כשלושה מרכיבים מבניים חיוניים של הצומת הנוירומוסקולרי (NMJ)1,2,3,4, נחקרו בהרחבה היבטים מורפולוגיים של מסופי האקסון המוטורי הקדם-סינפטי, הממברנה הפוסט-סינפטית המכילה קולטני אצטילכולין ניקוטיניים (AchRs) ותאי שוואן פרי-סינפטיים (PSCs). מקטעים דקים ודגימות שלמות של שרירי השלד נבדקו בטכניקות היסטולוגיות שונות, כגון מיקרוסקופיית אלקטרונים 5,6, מיקרוסקופיה קונפוקלית 7,8 ומיקרוסקופיה של יריעות אור 9,10. למרות המאפיינים המורפולוגיים של NMJ הודגמו על ידי טכניקות אלה מהיבטים שונים, כהשוואה, מיקרוסקופיה קונפוקלית היא עדיין בחירה אידיאלית להדמיה של המורפולוגיה המפורטת של NMJ.

לאחרונה פותחו טכנולוגיות חדשות רבות להצגת הרכיבים המבניים של NMJ. לדוגמה, עכברים פלואורסצנטיים מהונדסים thy1-YFP שימשו ישירות לצפייה באקסונים מוטוריים ובלוחות קצה מנועים in vivo וב- in vitro10,11. בנוסף, הזרקה תוך ורידית של α-BTX פלואורסצנטיים יושמה כדי לחשוף את ההתפלגות המרחבית של לוחות קצה מוטוריים בשרירי שלד בהרכבה מלאה של עכברים פלואורסצנטיים מסוג פראי ומהונדס, על ידי שימוש בטיפול בפינוי אופטי של רקמות לבדיקה עם מיקרוסקופיה של יריעות אור 9,12. עם זאת, מלבד האלמנטים הטרום-סינפטיים והפוסט-סינפטיים שניתן לצפות בהם בשיטות מתקדמות אלה, לא ניתן להדגים את ה-PSCs בו-זמנית.

עדויות מצטברות מצביעות על כך ש- PSCs, כתאי הגליה ההיקפיים, קשורים קשר הדוק עם ההדקים הטרום-סינפטיים התורמים להתפתחות וליציבות של NMJ, לאפנון הפעילות הסינפטית של ה- NMJ במצב הפיזיולוגי, ולהתחדשות של ה- NMJ לאחר פגיעה עצבית 13,14,15 . בהתחשב בארכיטקטורה התאית של NMJ, פרוטוקול זה הוא מועמד ראוי לתייג בו זמנית את PSCs, אלמנטים טרום ואחרי סינפטיים, והוא עשוי לשמש להערכת השלמות והפלסטיות של NMJ בתנאים נורמליים ופתולוגיים. לדוגמה, השווה את עוצמת NMJ, המורפולוגיה והנפח של לוחות קצה מוטוריים פוסט-סינפטיים, עצבנות וניתוק עצבים של NMJ, ומספר PSCs בשרירים בעלי מצב פיזיולוגי ופתולוגי.

שריר הגסטרוקנמיוס הוא השריר הגדול ביותר היוצר את הבליטה בשוק, אשר מנותח בקלות על ידי הסרת העור ושריר הירך האחורי מהגפיים. השריר נבחר לעתים קרובות כדי להעריך ניוון שרירים, ניוון עצבימוסקולרי, ביצועי שרירים וכוח יחידה מוטורית ex vivo או in vivo 16,17,18. עם זאת, הטכניקה מתאימה גם לחשיפת המאפיינים המורפולוגיים של NMJ משרירי שלד שונים. יחד עם זאת, מקטעי השרירים העבים יכולים לחשוף מורפולוגיה מלאה יותר וכמות של NMJ בהשוואה למקטעים דקים 7,8 וסיבי שרירמתגרים 19.

בהתאם למחקרים אלה, שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי של החולדה נבחר כרקמת המטרה במחקר זה ונפרס בעובי של 80 מיקרומטר לצורך צביעה פלואורסצנטית מרובה עם סוגים שונים של סמנים ביולוגיים בהתאם למרכיבים המבניים של NMJ. כאן, נוירופילמנט 200 (NF200)20,21, טרנספורטר אצטילכולין שלפוחיתי (VAChT)22, אלפא-בונגארוטוקסין (α-BTX)23,24, ו-S10025,26 שימשו לסימון סיבי עצב, מסופים טרום-סינפטיים, AchRs פוסט-סינפטיים ו-PSCs בהתאמה. בנוסף, הרקע של רקמת השרירים וגרעיני התאים הוכתמו עוד יותר עם פאלואידין ו-DAPI.

במחקר זה, אנו מצפים לפתח פרוטוקול מעודן להכתמת הארכיטקטורה התאית של NMJ בו-זמנית עם הסמנים הביולוגיים המתאימים להם על דגימות קבועות עבות יותר, אשר נוח יותר לשימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית ומסייע להשיג מידע רב יותר על המבנה המפורט של PSCs, אלמנטים טרום-סינפטיים ופוסט-סינפטיים, כמו גם על המתאם המרחבי שלהם זה לזה. מנקודת המבט של המתודולוגיה, פרוטוקול זה עשוי להועיל להעריך את המאפיינים המורפולוגיים של NMJ בתנאים נורמליים ופתולוגיים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של המכון לדיקור סיני ומוקסיבוסציה, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה (אישור מס '2021-04-15-1). כל ההליכים נערכו בהתאם למדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול בחיות מעבדה ולשימוש בהן (הוצאת האקדמיה הלאומית, וושינגטון הבירה, 1996). נעשה שימוש בשלוש חולדות זכרים בוגרים (ספראג-דאולי, משקל 230 ± 15 גרם). החולדות שוכנו במחזור אור/חושך של 12 שעות עם טמפרטורה ולחות מבוקרות ועם גישה חופשית למזון ולמים. המכשירים והחומרים של מחקר זה מוצגים באיור 1.

1. פרפוזיה

  1. הזריקו 250 מ"ג/ק"ג תמיסת טריברומואתנול תוך-צפקית כדי לגרום להמתת חסד של החולדות.
  2. לאחר הפסקת הנשימה, פתחו את חלל בית החזה כדי לגשת ללב באמצעות מספריים ומלקחיים. החדירו קטטר תוך ורידי מחדר הלב השמאלי לכיוון אבי העורקים, ולאחר מכן חתכו את האוריקל הימני.
  3. מכניסים את החולדות הניסיוניות למכסה המנוע. התחילו ב-100 מ"ל של 0.9% מי מלח רגילים עד שהדם היוצא מהאוריקל הימני יהיה צלול, ואז המשיכו לחדור עם 250-300 מ"ל של 4% פרפורמלדהיד ב-0.1 מ' חיץ פוספט (PB, pH 7.4) במשך כ-10 דקות עד שיהיה קשה לכופף את הזנב.

2. אנטומיה אזורית

  1. לאחר הזלוף, הסירו את העור של הגפה האחורית הדו-צדדית באמצעות להב כירורגי (איור 2A) וחשפו את העצב הסיאטי הדו-צדדי ואת שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי (איור 2B).
  2. נתחו בזהירות את שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי הדו-צדדי מהגפה האחורית באמצעות להב (איור 2C) ולאחר מכן תיקנו את השריר כולו ב-10 מ"ל של 4% פרפורמלדהיד ב-0.1 M PB למשך שעתיים.
  3. הסר את השריר מהתמיסה והגן על השריר ב-10 מ"ל של 25% סוכרוז ב-0.1 M PB במשך יום אחד ב-4 מעלות צלזיוס עד שהשריר שקוע לחלוטין בתמיסה.

3. קריו-וסט של השריר

  1. לאחר שהרקמה השרירית שקועה בתמיסה, לתקן אותה בשלב הקפאה של מערכת מיקרוטום הזזה באמצעות מדיום חתך קפוא. פורסים את השריר אופקית לאורך הציר הארוך של השריר בעובי של 80 מיקרומטר.
  2. הניחו שבעה מקטעי קריו לבאר בצורה מסודרת בצלחת תרבית בת שש בארות עם 10 מ"ל של 0.1 M PB (pH 7.4) באמצעות מברשת.
    הערה: המקטעים ממוקמים לפי הסדר כך שהקטעים בבארות שונות יהיו סמוכים, מה שהופך את החלקים המשמשים לכתמים שונים לעקביים יותר.

4. כתמים פלואורסצנטיים מרובים עם NF200, VAChT, α-BTX ו-Pha

הערה: כתמים פלואורסצנטיים מרובים עם NF200, VAChT, α-BTX ו- Pha יושמו כדי לחשוף את סיבי העצב, ההדקים הטרום-סינפטיים, קולטני אצטילכולין ניקוטיניים פוסט-סינפטיים וסיבי שרירים, בהתאמה.

  1. דגירה של ארבעה חלקים לכל באר עם 1.5 מ"ל של 0.1 M PB המכילים 75 μL של 10% Triton X-100 (0.5%) ו-45 μL של סרום חמור רגיל (3%) על שייקר מסלולי ב-20 סל"ד למשך 30 דקות.
  2. מעבירים את החלקים ל-1.5 מ"ל של תמיסה מעורבת של נוגדנים ראשוניים המכילים אנטי-NF200 ארנב (1:1,000), אנטי-VAChT עזים (1:500) ב-0.1 M PB (pH 7.4) עם 1% סרום חמורים רגיל, ו-0.5% טריטון X-100, ודגירה למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס. למחרת, שטפו את הקטעים 3x למשך 5 דקות כל אחד ב-0.1 M PB (pH 7.4) על שייקר מסלולי ב-20 סל"ד.
  3. דגירו את החלקים ב-1.5 מ"ל של תמיסה מעורבת של נוגדנים משניים המכילים חמור נגד ארנב AF488 (1:500) ונגד חמורים AF546 (1:500), כמו גם את הסמנים הביולוגיים של α-BTX, AF647 (1:500) ופאלואידין 350 (1:500) ב-0.1 M PB (pH 7.4) המכיל 1% סרום חמורים רגיל ו-0.5% טריטון X-100 למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. הגן מפני אור.
  4. לאחר שטיפה של 3x במשך 5 דקות כל אחד ב-0.1 M PB (pH 7.4), הרכיבו את החלקים על שקופיות מיקרוסקופ. יש למרוח זכוכית כיסוי על החלקים באמצעות 50% גליצרין במים מזוקקים לתצפית.

5. צביעה פלואורסצנטית מרובה עם NF200, S100, α-BTX ו-DAPI

הערה: ההליכים דומים לאלה של שלב 4; ההבדל העיקרי הוא בין הנוגדנים הראשוניים לבין הנוגדנים המשניים המתאימים להם.

  1. השתמש בנוגדנים העיקריים הבאים: נגד עוף נגד NF200 (1:6,000), אנטי-S100 ארנב (1:2,500) בשלב 4.2 והנוגדנים המשניים המתאימים להם: חמור נגד עוף AF488 (1:500) וחמור נגד ארנב AF546 (1:500), כמו גם הסמנים הביולוגיים של α-BTX AF647 (1:500) ו- DAPI (1:50000) בשלב 4.3.

6. תצפית וניתוח

  1. צפו בדגימה וצלמו תמונות באמצעות מערכת הדמיה קונפוקלית המצוידת בעדשות האובייקטיביות הבאות: עדשת 20x עם עדשת NA של 0.75 ו-40x עם NA של 0.95.
  2. השתמש באורכי גל של עירור ופליטה של 350 ננומטר (Pha), 488 ננומטר (NF200), 546 ננומטר (VAChT ו- S100), 647 ננומטר (α-BTX), או DAPI המתאים לצביעה הפלואורסצנטית המרובה. הגדר את הרזולוציה של לכידת תמונה ל- 640 x 640 פיקסלים.
    הערה: הרזולוציה של 640 x 640 פיקסלים נבחרה מכיוון שהתמונות צולמו בערימות Z. רזולוציה של 1024 x 1024 פיקסלים גורמת להדמיה איטית ולהלבנת תמונות בערימות Z.
  3. הגדר את מישור המוקד ההתחלתי ואת מישור המוקד הסופי. הגדר את גודל הצעד ל- 1 μm או 2 μm. בחר תבנית עומק, לכידת תמונה וסדרת Z.
  4. עבור תמונות ההגדלה התחתונה שצולמו ב-20x, צלם 40 תמונות (Z-stacks) בגודל צעד של 2 מיקרומטר מכל מקטע בעובי 80 מיקרומטר באמצעות חור סיכה של 105 מיקרומטר. בחר את מצב ההקרנה/טופוגרפיה ואת הקרנת העוצמה מעל ציר Z כדי לשלב את כל התמונות במוקד יחיד.
  5. עבור תמונות ההגדלה הגבוהה יותר שצולמו ב-40x, צלם 80 תמונות (Z-stacks) בגודל צעד של 1 מיקרומטר מכל מקטע בעובי 80 מיקרומטר עם זום המוגדר ל-2 וחור סיכה של 105 מיקרומטר. שלב את כל התמונות במוקד אחד.
  6. שחזר את התמונות בתבנית התלת-ממדית באמצעות מערכת עיבוד התמונה כפי שתואר קודם לכןב-27.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאחר צביעה פלואורסצנטית מרובה, התווית המתאימה הודגמה בצורה מסודרת על החלקים בעובי של 80 מיקרומטר של שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי של החולדה עם סיבי עצב חיוביים ל-NF200, מסופים קדם-סינפטיים חיוביים ל-VAChT, AchRs פוסט-סינפטיים חיוביים α-BTX, PSCs חיוביים ל-S100, סיבי שרירים חיוביים לפאלואידין וגרעיני תאים המסומנים ב-DAPI (איור 3 ואיור 4).

הוכח כי סיבי עצב חיוביים של NF200 רצו בחבילה וחילקו ענפים למסופים הקדם-סינפטיים החיוביים של VAChT שיצר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תיארנו את הפרטים הטכניים הנדרשים לביצוע צביעה מרובה מוצלחת של פרוסות שרירים ושימוש באימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית לחשיפת המאפיינים המורפולוגיים של NMJ על החלקים העבים של שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי של החולדה. על ידי שימוש בגישה זו, ניתן לנתח ולהעריך את הפרטים הקטנים והמתאם המרחבי של ה-PSCs והאלמנטים הטרום-סינפטיים והפוסט-סינפטיים תחת מיקרוסקופיה קונפוקלית, ולשחזר אותם עוד יותר בתבנית תלת-ממדית. כאן, סוגים שונים של סמנים ביולוגיים שימשו כדי לחשוף את המאפיינים המורפולוגיים של NMJ, שבו, NF200 מתבטא מאוד על האקסונים המיאלינים<...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים על היעדר ניגודי עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי קרן החדשנות CACMS (לא. CI2021A03407), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס ' 82004299), וקרנות המחקר הבסיסיות עבור מכוני המחקר המרכזיים לרווחת הציבור (לא. ZZ13-YQ-068; ZZ14-YQ-032; ZZ14-YQ-034; ZZ201914001; ZZ202017006; ZZ202017015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4',6-diamidino-2-phenylindole dihydrochlorideThermoFisherD3571
מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקליOlympusFV1200
חמור נגד עוף AF488Jackson149973 (703-545-155)
חמור נגד עזים AF546ThermoFisherA11056
חמור נגד ארנב AF488ThermoFisherA21206
חמור נגד ארנב AF546ThermoFisherA10040
קטע קפוא בינוניThermoFisherNeg-50
כיסוי מיקרוסקופCitotest10212450C
מיקרוטוםYamatoREM-710
נוירופילמנט 200סיגמא-אולדריץ'N4142ארנב
נוירופילמנט 200Abcamab4680סרום עוף
רגיל לחמורג'קסון מעבדות מחקר ג'קסון017-000-1210 מ"ל
תמיסת מלח רגילהשאנדונג הואלו Co.Ltd תרופותH37022750250 מ"ל
פרפורמלדהידמקליןP804536500 גרם
פלואידין AF350ThermoFisherA22281
משאבה פריסטלטית מדויקתארוכה יותרBT100-2J
S100-ובטא;Abcamab52642ארנב
נתרן פוספט dbasic dodecahydrateמקליןS818118500 גרם
נתרן פוספט מונו-בייסי דיהידראטמקליןS817463500 גרם
סוכרוזמקליןS818046500 גרם
סופרפרוסט פלוס מיקרוסקופ שקופיותThermoFisher4951PLUS-001E
Triton X-100Solarbio מדעי החיים9002-93-1100 מ"ל
טרנספורטר אצטילכולין שלפוחיתמיליפורANB100עז
ואלפא;-בונגרוטוקסין AF647 מצומדThermoFisherB35450
חסר צבע זכוכית

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kawabuchi, M., et al. The spatiotemporal relationship among Schwann cells, axons and postsynaptic acetylcholine receptor regions during muscle reinnervation in aged rats. TheAnatomical Record. 264 (2), 183-202 (2001).
  2. Nishimune, H., Shigemoto, K. Practical anatomy of the neuromuscular junction in health and disease. Neurologic Clinics. 36 (2), 231-240 (2018).
  3. Guarino, S. R., Canciani, A., Forneris, F. Dissecting the extracellular complexity of neuromuscular junction organizers. Frontiers in Molecular Biosciences. 6, 156(2020).
  4. Cruz, P. M. R., Cossins, J., Beeson, D., Vincent, A. The neuromuscular junction in health and disease: molecular mechanisms governing synaptic formation and homeostasis. Frontiers in Molecular Neuroscience. 13, 610964(2020).
  5. Matthews-Bellinger, J., Salpeter, M. Fine structural distribution of acetylcholine receptors at developing mouse neuromuscular junctions. The Journal of Neuroscienc : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 3 (3), 644-657 (1983).
  6. Desaki, J., Uehara, Y. Formation and maturation of subneural apparatuses at neuromuscular junctions in postnatal rats: a scanning and transmission electron microscopical study. Developmental Biology. 119 (2), 390-401 (1987).
  7. Marques, M., Santo Neto, H. Imaging neuromuscular junctions by confocal fluorescence microscopy: individual endplates seen in whole muscles with vital intracellular staining of the nerve terminals. Journal of Anatomy. 192, 425-430 (1998).
  8. Magill, C. K., et al. Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: a confocal microscopic study in transgenic mice. Experimental Neurology. 207 (1), 64-74 (2007).
  9. Yin, X., et al. Spatial distribution of motor endplates and its adaptive change in skeletal muscle. Theranostics. 9 (3), 734-746 (2019).
  10. Cai, R., et al. Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections. Nature Neuroscience. 22 (2), 317-327 (2019).
  11. Feng, G., et al. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
  12. Chen, W. T., et al. In vivo injection of -bungarotoxin to improve the efficiency of motor endplate labeling. Brain and Behavior. 6 (6), 00468(2016).
  13. Sugiura, Y., Lin, W. Neuron-glia interactions: the roles of Schwann cells in neuromuscular synapse formation and function. Bioscience Reports. 31 (5), 295-302 (2011).
  14. Alvarez-Suarez, P., Gawor, M., Proszynski, T. J. Perisynaptic schwann cells - The multitasking cells at the developing neuromuscular junctions. Seminars in Cell & Developmental Biology. 104, 31-38 (2020).
  15. Walker, C. L. Progress in perisynaptic Schwann cell and neuromuscular junction research. Neural Regeneration Research. 17 (6), 1273-1274 (2022).
  16. Michaud, M., et al. Neuromuscular defects and breathing disorders in a new mouse model of spinal muscular atrophy. Neurobiology of Disease. 38 (1), 125-135 (2010).
  17. Sharma, S., et al. Heat-induced endoplasmic reticulum stress in soleus and gastrocnemius muscles and differential response to UPR pathway in rats. Cell Stress Chaperones. 26 (2), 323-339 (2021).
  18. Raikova, R., Celichowski, J., Angelova, S., Krutki, P. A model of the rat medial gastrocnemius muscle based on inputs to motoneurons and on an algorithm for prediction of the motor unit force. Journal of Neurophysiology. 120 (4), 1973-1987 (2018).
  19. Marinello, M., et al. Characterization of neuromuscular junctions in mice by combined confocal and super-resolution microscopy. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (178), e63032(2021).
  20. Perrot, R., Berges, R., Bocquet, A., Eyer, J. Review of the multiple aspects of neurofilament functions, and their possible contribution to neurodegeneration. Molecular Neurobiology. 38 (1), 27-65 (2008).
  21. Yuan, A., Rao, M. V., Nixon, R. A. Neurofilaments and neurofilament proteins in health and disease. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 9 (4), 018309(2017).
  22. Petrov, K. A., Proskurina, S. E., Krejci, E. Cholinesterases in tripartite neuromuscular synapse. Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 811220(2021).
  23. Karlin, A. Emerging structure of the nicotinic acetylcholine receptors. Nature Reviews. Neuroscience. 3 (2), 102-114 (2002).
  24. Rudolf, R., Straka, T. Nicotinic acetylcholine receptor at vertebrate motor endplates: Endocytosis, recycling, and degradation. Neuroscience Letters. 711, 134434(2019).
  25. Barik, A., Li, L., Sathyamurthy, A., Xiong, W. C., Mei, L. Schwann cells in neuromuscular junction formation and maintenance. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 36 (38), 9770-9781 (2016).
  26. Kang, H., Tian, L., Thompson, W. J. Schwann cell guidance of nerve growth between synaptic sites explains changes in the pattern of muscle innervation and remodeling of synaptic sites following peripheral nerve injuries. Journal of Comparative Neurology. 527 (8), 1388-1400 (2019).
  27. Wang, J., et al. A new approach for examining the neurovascular structure with phalloidin and calcitonin gene-related peptide in the rat cranial dura mater. Journal of Molecular Histology. 51 (5), 541-548 (2020).
  28. Hughes, B. W., Kusner, L. L., Kaminski, H. J. Molecular architecture of the neuromuscular junction. Muscle Nerve. 33 (4), 445-461 (2006).
  29. Boehm, I., et al. Comparative anatomy of the mammalian neuromuscular junction. Journal of Anatomy. 237 (5), 827-836 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Z Stack200

מאמרים קשורים