הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל חדשני של פצעי עור Ex Vivo Ovine בתפוקה גבוהה לבדיקת אנטיביוטיקה מתפתחת

2.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64041

⸱

16 בספטמבר 2022

 ,  , 
1Sheffield Collaboratorium for Antimicrobial Resistance and Biofilms (SCARAB), University of Sheffield, 2Department of Chemical and Biological Engineering, University of Sheffield

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול מתאר שיטה שלב אחר שלב להגדרת מודל עור פצוע ex vivo ovine הנגוע בסטפילוקוקוס אאורוס. מודל תפוקה גבוהה זה מדמה טוב יותר זיהומים in vivo בהשוואה לטכניקות מיקרוביולוגיה קונבנציונליות ומציג לחוקרים פלטפורמה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית לבדיקת היעילות של מיקרוביאלים מתפתחים.

תקציר

פיתוח של מיקרוביאלים הוא תהליך יקר עם שיעורי הצלחה נמוכים יותר ויותר, מה שהופך את ההשקעה הנוספת במחקר גילוי מיקרוביאלי לפחות אטרקטיבית. גילוי תרופות אנטי-מיקרוביאליות והמסחור שלאחר מכן יכולים להיות משתלמים יותר אם ניתן ליישם גישה של כישלון מהיר ונכשל בזול בשלבי אופטימיזציה של עופרת שבהם לחוקרים יש שליטה רבה יותר על תכנון וניסוח תרופות. במאמר זה, ההגדרה של מודל עור פצוע ex vivo ovine נגוע Staphylococcus aureus מתואר, שהוא פשוט, חסכוני, תפוקה גבוהה, וניתן לשחזור. הפיזיולוגיה החיידקית במודל מחקה שבזמן ההדבקה התפשטות חיידקית תלויה ביכולתו של הפתוגן לפגוע ברקמה. הקמת זיהום הפצע מאומתת על ידי עלייה בספירת חיידקים קיימא בהשוואה לאינוקולום. מודל זה יכול לשמש כפלטפורמה לבדיקת היעילות של מיקרוביאלים מתפתחים בשלב אופטימיזציה של עופרת. ניתן לטעון כי זמינותו של מודל זה תספק לחוקרים המפתחים חומרים אנטי-מיקרוביאליים מודל של כישלון-מהיר-וכישלון-זול, אשר יסייע להגדיל את שיעורי ההצלחה בניסויים הבאים בבעלי חיים. המודל גם יאפשר הפחתה ועידון של השימוש בבעלי חיים למחקר ובסופו של דבר יאפשר תרגום מהיר וחסכוני יותר של חומרים אנטי-מיקרוביאליים חדשים לזיהומים בעור וברקמות רכות למרפאה.

מבוא

זיהומי עור הם נושא עולמי חשוב, עם עלויות כלכליות גדולות לספקי שירותי בריאות ברחבי העולם. הפיתוח של עמידות רב-תכליתית ויצירת ביופילם על ידי פתוגנים ממלא תפקיד מפתח בשכיחות של פצעים שאינם מחלימים 1,2,3,4. כתוצאה מכך, זיהומים בעור וברקמות רכות הם אחת הסיבות השכיחות יותר לאשפוז ממושך ולאחר מכן לאשפוז חוזר5. עיכובים בריפוי פצעים עולים ביוקר הן למטופלים והן לספקי שירותי הבריאות, כאשר חלק מההערכות גורסות כי כ-6.5 מיליון מטופלים נפגעים מדי שנה בארה"ב. בבריטניה, זיהומי עור וסיבוכים נלווים גורמים לכ-75,000 מקרי מוות בשנה 2,4,6.

סטפילוקוקוס אאורוס (S. aureus) הוא פתוגן פצע אימתני המבודד לעתים קרובות מפצעי מטופלים 2,7. קצב הופעתה של עמידות multidrug גדל באופן דרסטי בשנות ה -2000. במהלך תקופה זו, כ-60% מהזיהומים החריפים בעור ובמבנה העור היו חיוביים לתרבית עבור S. aureus1 העמיד למתיצילין. המספר ההולך וגדל של זנים עמידים למולטי-דרוג בקרב סטפילוקוקים, ואכן פתוגנים אחרים, במהלך 2 העשורים האחרונים מצביע על צורך דחוף בפיתוח מהיר של אנטיביוטיקה עם דרכי פעולה חדשות שיכולות להתגבר על עמידות.

עם זאת, מאז תחילת שנות ה-2000, תוכניות גילוי אנטיביוטיקה נשלטו על ידי זמני התפתחות ארוכים יותר ושיעורי הצלחה נמוכים, כאשר רק 17% מהאנטיביוטיקה החדשנית שנכנסה לניסויים קליניים בארה"ב השיגה אישור שוק8. זה מצביע על פער בין התוצאות של בדיקות חוץ גופיות של אנטיביוטיקה מתפתחת לבין התוצאות הקליניות שלהן. ניתן לטעון כי פער זה נובע במידה רבה מהבדלים בפיזיולוגיה של חיידקים במהלך זיהומים in vivo ובמהלך שיטות מיקרוביולוגיות קונבנציונליות בעת בדיקת היעילות של אנטיביוטיקה בשלבים הפרה-קליניים במבחנה . לכן, יש צורך בשיטות מעבדה חדשניות המייצגות יותר את הפיזיולוגיה של חיידקים במהלך ההדבקה כדי לשפר את שיעורי ההצלחה בתוכניות גילוי אנטיביוטיקה.

השיטות הנוכחיות לחקר זיהומי עור כוללות מחקרים בחיות חיות (למשל, עכברים), מודלים של עור ex vivo (למשל, חזיר), ומודלים תלת-ממדיים של עור מהונדסים על ידי רקמות (למשל, בני אדם)9,10,11,12. מחקרים בבעלי חיים חיים מוסדרים בקפדנות ובעלי תפוקה נמוכה יחסית. במודלים של בעלי חיים, פציעות וזיהומים גורמים למצוקה משמעותית לבעלי החיים ומעוררים חששות אתיים. מודלים של עור אנושי, ex vivo או מהונדסים רקמות, דורשים אישור אתי, עמידה בחקיקה מקומית ועולמית (חוק הרקמות האנושיות, הצהרת הלסינקי), ויש קושי ברכישת רקמות, כאשר חלק מהבקשות לוקחות שנים כדי למלא13,14. שני סוגי המודלים הם עתירי עבודה ודורשים מומחיות משמעותית כדי להבטיח הצלחה ניסיונית. חלק מהמודלים הנוכחיים של זיהום עור ex vivo דורשים דיסקים ותוספים מחוסנים מראש למיטת הפצע כדי לאפשר זיהום; למרות שמודלים אלה שימושיים להפליא, ישנן מגבלות בתהליך ההדבקה שכן תוספים מגבילים את השימוש במיטת הפצע כמקור תזונתי10,15,16,17. המודל המתואר במחקר זה אינו משתמש בתוספים למיטת הפצע, מה שמבטיח כי הפתולוגיה של זיהום וספירת תאים בת קיימא הם תוצאה של ניצול ישיר של מיטת הפצע כמקור ההזנה היחיד.

לאור הצורך בשיטות מעבדה חדשות, פותח מודל ex vivo ovine חדשני בעל תפוקה גבוהה של זיהומי עור לשימוש בהערכת היעילות של אנטיביוטיקה מתפתחת. מחקרים על דלקות עור מתמודדים עם אתגרים רבים - עלויות גבוהות, חששות אתיים ומודלים שאינם מראים תמונה מלאה20,21. מודלים של Ex vivo ומודלים תלת-ממדיים מאפשרים הדמיה טובה יותר של תהליך המחלה וההשפעה שיכולה להיות לטיפולים ממודל רלוונטי יותר מבחינה קלינית. כאן מתוארת ההגדרה של מודל עור שחלות חדשני, שהוא פשוט, ניתן לשחזור, ורלוונטי מבחינה קלינית ובעל תפוקה גבוהה. עור הביצית נבחר מכיוון שכבשים הן אחד היונקים הגדולים המשמשים בדרך כלל למודלים של תגובות לזיהומים in vivo. יתר על כן, הם זמינים בקלות מ abattoirs, הבטחת אספקה קבועה של העור למחקר, ואת הפגרים שלהם הם לא צרוב, מה שמבטיח איכות רקמות טובה. מחקר זה השתמש ב- S. aureus כפתוגן המופתי; עם זאת, המודל עובד היטב עם מיקרואורגניזמים אחרים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

ראשיהם של כבשים מ-R.B אליוט וסון אבטויר שימשו כמקור לדגימות עור בפרויקט זה. כל הטלאים נשחטו לצריכה כמזון. במקום להשליך את הראשים, אלה שימשו מחדש למחקר. לא היה צורך באישור אתיקה מכיוון שהרקמה מקורה בפסולת שהושלכה מאבטוארים.

1. עיקור

  1. יש לחטא מלקחיים לפני איסוף הראשים על ידי לקיחת מלקחיים נקיים וביצוע עיקור בחום יבש בתנור בטמפרטורה של 200 מעלות צלזיוס למשך שעה. יש להשתמש בכל כלי הזכוכית בטמפרטורה של 121°C למשך 15 דקות לפני השימוש.
  2. לבצע את כל העבודות המתוארות בתוך ארון מיקרוביולוגיה בכיתה 2. הכינו את כל הריאגנטים בהתאם להוראות היצרן.

2. איסוף דגימות

  1. באבטואר, כבשי סוואלדייל נטבחו על ידי מהמם באמצעות חשמל או אקדח בשבי והוצאו. לאסוף ראשי כבש לא יותר מ 4 שעות לאחר השחיטה.

3. הכנת הראשים

  1. יש לחטא את חלק המצח של הכבש על ידי שפיכת כ-100 מ"ל של תמיסת כלור דו-חמצני של 200 ppm על אזור הדגימה. לגלח את החלק המצח של הראש באמצעות קוצץ חשמלי לשטוף את האזור עם 200 מ"ל של 200 ppm כלור דו חמצני פתרון.
  2. נגבו את האזור באתנול ובגליל כחול וכסו את אזור הדגימה בקרם להסרת שיער למשך 35 דקות. יש לגרד בעדינות את הקרם להסרת שיער באמצעות כלי גירוד ולהעריך את אזור הדגימה. אם נותרה כמות משמעותית של שיער, חזור על תהליך הסרת השיער.
  3. השתמש עוד 200 מ"ל של תמיסת כלור דו חמצני כדי לשטוף את האזור, ולאחר מכן לשטוף עם אתנול ולנגב עם גליל כחול.
  4. באמצעות אגרוף ביופסיה סטרילי בקוטר 8 מ"מ, יש לגזור דגימות עור בקוטר 8 מ"מ מהאזור המוכן. הסר את הדגימות באמצעות מלקחיים סטריליים ואזמל בעל 15 להבים, כדי להבטיח שכל השומן העורי יוסר.
  5. מניחים את הדגימות בצנצנת סטרילית של 0.5 ליטר מלאה בתמיסת מלח סטרילית עם אגירת פוספט (PBS), ולאחר מכן מעבירים אותן לצינורות סטריליים של 50 מ"ל עם תמיסת 50 מ"ל של 200 ppm כלור דו-חמצני, הופכים פעמיים ומשאירים לעיקור למשך 30 דקות.
  6. הסר את הדגימות מתמיסת הכלור הדו-חמצני ושטוף אותן על ידי הצבתן בצינור של 50 מ"ל מלא ב-40 מ"ל של PBS סטרילי. לאחר השטיפה, יש להניח כל דגימת עור בנפרד בבאר נפרדת של צלחת בת 24 בארות.
  7. הוסף 350 μL של מדיום מחומם מראש תוך שמירה על הדגימה בממשק אוויר-נוזל. הרכב המדיה הוא כדלקמן: מדיה MK (בינוני 199 עם מלחי הנקס, L-גלוטמט, ו-1.75 מ"ג/מ"ל נתרן ביקרבונט) ו-F12 של Ham ביחס של 1:1, עם תוספת FBS (10% v/v), EGF (10 ננוגרם/מ"ל), אינסולין (5 מיקרוגרם/מ"ל), פניצילין-סטרפטומיצין (100 U/mL) ואמפוטריצין B (2.5 מיקרוגרם/מ"ל).
  8. אטמו את 24 לוחות הבאר עם אטם צלחת חדיר גז ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור רקמות לחות של 5% CO2 למשך עד 24 שעות.

4. תחזוקת דגימות עור

  1. לאחר הדגירה, להסיר את מדיום התרבית ולשטוף את הדגימות ב 500 μL של PBS סטרילי. הוסיפו מדיה נטולת אנטיביוטיקה לכל דגימה ודגרה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור רקמות לחות של 5% CO2 למשך 24 שעות כדי להסיר שאריות אנטיביוטיקה בדגימה.
  2. אם עכירות או זיהום פטרייתי מתפתחים במדיה נטולת אנטיביוטיקה לאחר 24 שעות, יש להשליך את הדגימה.

5. הכנת האינוקולום

  1. הכינו צינור 50 מ"ל עם 10 מ"ל של מרק סויה טריפטי סטרילי. קח צלחת אגר טרייה של S. aureus והשתמש במטוש כדי להעביר כמה מושבות לתוך המרק. דגירה במשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס ב-150 סל"ד.
  2. צנטריפוגה ב 4,000 x גרם במשך 3 דקות. הסר את supernatant ו להשעות את גלולת התא ב 10 מ"ל של PBS סטרילי. חזרו על הפעולה פעמיים כדי להבטיח שטיפה מספקת של התאים.
  3. התאם את האינוקולום ל- 0.6 OD600 ב- PBS סטרילי. אשר את עומס האינוקולום על ידי ביצוע ספירת צלחות ידנית בת קיימא.

6. זיהום של דגימות עור

  1. הכינו צלחת טרייה של 24 בארות עם 400 מיקרוליטר של מדיה נטולת אנטיביוטיקה שחוממה מראש והוסיפו את 24 הבארות באמצעות מלקחיים סטריליים.
  2. הסר את המדיה מדגימות העור, לשטוף עם 500 μL של PBS סטרילי, ולהסיר את הכביסה. השתמש מלקחיים סטריליים כדי להחזיק בעדינות את הדגימה בתחתית הבאר.
  3. השתמש בביופסיית אגרוף בקוטר 4 מ"מ כדי ליצור דש פצע מרכזי, החודר לעומק גס של 1-2 מ"מ. לאחר מכן, השתמש באזמל בעל 15 להבים ומלקחיים של רקמת allis שיניים סטריליות כדי להסיר את השכבה העליונה של דש הפצע. השתנות בממדי הפצע עשויה להשפיע על תוצאות הזיהום ועל היחידות היוצרות את מושבת הקצה (CFU).
  4. לאחר שכל הדגימות נפגעו, העבירו אותן לתוספות 24 הקידוחים באמצעות מלקחיים סטריליים. פיפטה 15 μL של האינוקולום החיידקי לתוך מיטת הפצע. לאחר מכן, דגירה במשך 24 שעות ב 37 מעלות צלזיוס באינקובטור רקמות לחות 5% CO2 .
  5. אם יש צורך בתקופות דגירה ארוכות יותר, מוציאים את המדיה ומחליפים אותה במדיה טרייה כל 24 שעות ודוגרים באותם תנאים.

7. קביעת העומס החיידקי

  1. הסר את המדיה מתחתית הבארות. עם מלקחיים סטריליים, להעביר כל דגימה לתוך צינור נפרד 50 מ"ל מלא 1 מ"ל של PBS סטרילי.
  2. השתמש בהומוגנייזר בעל קצה דק כדי ליצור הומוגניזציה של פני השטח של הדגימה. היזהר כדי להבטיח כי המיטה הפצע הוא במגע ישיר עם קצה של homogenizer.
  3. הומוגני כל דגימה במשך 35 שניות על בינוני/גבוה. ההומוגנייזר מנתק את החיידקים מפני השטח של מיטת הפצע כדי לאפשר ספירה של עומס החיידקים.
  4. לאחר עיבוד כל הדגימות, מערבלים כל דגימה, בתורו, לפני הפיפטה. זאת כדי להבטיח שההומוגנט החיידקי מעורבב.
  5. פיפטה 20 μL של הומוגנט מערבולת לתוך הבאר המקבילה של צלחת 96 באר המכילה 180 μL של PBS סטרילי.
  6. יש לדלל באופן סדרתי כל דגימה הומוגנית ל-1 x 10−7 ופיפטה 10 μL של ההומוגנט המדולל על צלחת אגר סויה טריפטית במשולש.
  7. דגירה צלחת אגר במשך 18 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, ספור את מספר המושבות כדי לקבוע את CFU עבור כל דגימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

זיהוי מסלול לעיקור העור לפני הגדרת מודל זיהום הפצע היה מאתגר. האתגר היה לעקר את העור מבלי לפגוע בשכבות העור השונות, מה שעלול לגרום להשלכות לא מכוונות על תוצאות הזיהום. כדי לזהות משטר עיקור מתאים, נוסו טיפולים שונים לפרקי זמן משתנים, כמפורט בטבלה 1. זיהום נרשם כהתפתחות עכירות לאחר 48 שעות במדיום MK המשמש לשמירה על דגימות העור. שלמות הרקמות נותרה על ידי היסטולוגיה ולאחר מכן הכתמה עם המטוקסילין ואוזין (H&E) מיד לאחר הטיפול (איור 1). טיפול של 30 דקות בכלור דו-חמצני הוכח כיעי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פיתוח מיקרוביאלים הוא מיזם חשוב אך יקר, שעלותו מוערכת בכמיליארד דולר ונמשכת כ-15 שנה. מעל 90% מגילוי תרופות אנטי-מיקרוביאליות ומחקרים פרה-קליניים של יעילות תרופות אנטי-מיקרוביאליות מתבצעים על ידי חוקרים אקדמיים וחברות קטנות עד בינוניות עם בדרך כלל פחות מ-50 עובדים22. צוותים אלה מוגבלים מאוד מבחינה כלכלית, מה שהופך את הכישלון של מולקולות עופרת בשלבים מאוחרים יותר של מחקר תרגומי לאסון. העלייה בעמידות האנטי-מיקרוביאלית עולה על התפתחותם של חומרים אנטי-מיקרוביאליים חדשים, מה שמעצים עוד יותר את הצורך לנ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף

תודות

המחברים רוצים להודות ל-EPSRC (EP/R513313/1) על המימון. המחברים רוצים להודות גם לר.ב. אליוט וסון אבטויר בקאלואו, צ'סטרפילד, על כך שסיפקו את ראשיהם של הטלאים ועל כך שהיו כל כך נעימים בשלבים המוקדמים של הפרויקט, לקסיה אמרי על תמיכתה לאורך כל פיתוח הפרוטוקול הזה, ולפיונה רייט מהמחלקה לזיהום, חסינות ומחלות לב וכלי דם באוניברסיטת שפילד על עיבוד דגימות ההיסטולוגיה ועל היותם כל כך מועילים להפליא לאורך כל הפרויקט הזה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
24 צלחת נלווית היטבSLS 
4 מ"מ ביופסיה פונץ'וויליאמס מדיקלD7484
צינורות צנטריפוגה 50 מ"לפישר סיינטיפיק 
8 מ"מ ביופסיה פונץ'וויליאמס מדיקלD7488
תמיסת אמפוטריצין B,סיגמא סטרילית A2942
Colour Pro Style קוצץ שיער אלחוטיWahl9639-2117Xקוצץ שיער
חממת תנור כפולSLSOVe1020תנור עיקור
גורם גדילה אפידרמיס SLSE5036-200UG
אתנולHoneywell458600-2.5L
F12 HAMSigmaN4888
סרום בקר עוברי Labtech InternationalCA-115/500
מלקחייםפישר 15307805
להסרת שיער קרםVeetלא ישים
Heracell VIOS 160iThermo Scientific15373212 חממת תרבית רקמות
Heraeus Megafuge 16RVWR521-2242הומוגנייזר צנטריפוגה
220,15575809פישר סיינטיפיק
220, קונוסים למיזוג פלסטיקפישר סיינטיפיק 
הכנס פרט 24 באר 0.4um ממברנהVWR International353095
אינסולין, רקומביננטי אנושיSLS91077C-1G
בינוני 199 (MK media)SigmaM0393
Microplate, תרבית תאים Costar 96 בארFisher Scientific10687551
MultitronInforsלא ישיםחממת חיידקים
טבליות PBSSigma P4417-100TAB
פניצילין-סטרפטומיציןSLS P0781
חותמות צלחתפישר סיינטיפיקESI-B-100
בטוח 2020פישר סיינטיפיק1284804Class II ארון בטיחות מיקרוביולוגיה
להב אזמל מספר 15פישר סיינטיפיקO305
אזמל סוואן מורטוןפישר11849002
מדעי נתרן ביקרבונטסיגמאS5761-1KG
מלקחיים לרקמות אליס משוננותRocialleRSPU500-322
אגר סויה טריפטיתMerck Life Science UK Limited14432-500G-F
מרק סויה טריפטיMerck Life Science UK Limited41298-500G-F
טבליות VimobaQuip LabsVMTAB75BX
35350410788561מדעי הומוגנייזר כף יד 15585819

מקורות

  1. Claeys, K. C., et al. Novel application of published risk factors for methicillin-resistant S. aureus in acute bacterial skin and skin structure infections. International Journal of Antimicrobial Agents. 51 (1), 43-46 (2018).
  2. Rahim, K., et al. Bacterial contribution in chronicity of wounds. Microbial Ecology. 73 (3), 710-721 (2017).
  3. Guest, J. F., Fuller, G. W., Vowden, P. Costs and outcomes in evaluating management of unhealed surgical wounds in the community in clinical practice in the UK: A cohort study. BMJ Open. 8 (12), 022591(2018).
  4. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: A major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).
  5. Wilcox, M. H., Dryden, M. Update on the epidemiology of healthcare-acquired bacterial infections: Focus on complicated skin and skin structure infections. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 76, Supplement 4 (2021).
  6. Han, G., Ceilley, R. Chronic wound healing: A review of current management and treatments. Advances in Therapy. 34 (3), 599-610 (2017).
  7. Percival, S. L., Hill, K. E., Malic, S., Thomas, D. W., Williams, D. W. Antimicrobial tolerance and the significance of persister cells in recalcitrant chronic wound biofilms. Wound Repair and Regeneration. 19 (1), 1-9 (2011).
  8. Dheman, N., et al. An analysis of antibacterial drug development trends in the United States, 1980-2019. Clinical Infectious Diseases. 73 (11), 4444-4450 (2021).
  9. MacNeil, S., Shepherd, J., Smith, L. Production of tissue-engineered skin and oral mucosa for clinical and experimental use. Methods in Molecular Biology. 695, 129-153 (2011).
  10. Yang, Q., et al. Development of a novel ex vivo porcine skin explant model for the assessment of mature bacterial biofilms. Wound Repair and Regeneration. 21 (5), 704-714 (2013).
  11. Malachowa, N., Kobayashi, S. D., Lovaglio, J., Deleo, F. R. Mouse model of Staphylococcus aureus skin infection. Methods in Molecular Biology. 1031, 109-116 (2013).
  12. Brandenburg, K. S., Calderon, D. F., Kierski, P. R., Czuprynski, C. J., Mcanulty, J. F. Novel murine model for delayed wound healing using a biological wound dressing with Pseudomonas aeruginosa biofilms. Microbial Pathogenesis. 122, 30-38 (2018).
  13. Bledsoe, M. J., Grizzle, W. E. The use of human tissues for research: What investigators need to know. Alternatives to Laboratory Animals. , (2022).
  14. Danso, M. O., Berkers, T., Mieremet, A., Hausil, F., Bouwstra, J. A. An ex vivo human skin model for studying skin barrier repair. Experimental Dermatology. 24 (1), 48-54 (2015).
  15. Torres, J. P., et al. Ex vivo murine skin model for B. burgdorferi biofilm. Antibiotics. 9 (9), 1-18 (2020).
  16. Zhao, G., et al. Delayed wound healing in diabetic (db/db) mice with Pseudomonas aeruginosa biofilm challenge: A model for the study of chronic wounds. Wound Repair and Regeneration. 18 (5), 467-477 (2010).
  17. Schierle, C. F., Dela Garza, M., Mustoe, T. A., Galiano, R. D. Staphylococcal biofilms impair wound healing by delaying reepithelialization in a murine cutaneous wound model. Wound Repair and Regeneration. 17 (3), 354-359 (2009).
  18. Trøstrup, H., et al. Pseudomonas aeruginosa biofilm aggravates skin inflammatory response in BALB/c mice in a novel chronic wound model. Wound Repair and Regeneration. 21 (2), 292-299 (2013).
  19. Thompson, M. G., et al. Evaluation of gallium citrate formulations against a multidrug-resistant strain of Klebsiella pneumoniae in a murine wound model of infection. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (10), 6484-6493 (2015).
  20. Maboni, G., et al. A novel 3D skin explant model to study anaerobic bacterial infection. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 404(2017).
  21. Macneil, S. Progress and opportunities for tissue-engineered skin. Nature. 445 (7130), 874-880 (2007).
  22. Theuretzbacher, U., Outterson, K., Engel, A., Karlén, A. The global preclinical antibacterial pipeline. Nature Reviews Microbiology. 18 (5), 275-285 (2019).
  23. Miethke, M., et al. Towards the sustainable discovery and development of new antibiotics. Nature Reviews Chemistry. 5 (10), 726-749 (2021).
  24. Guedes, G. M. M., et al. Ex situ model of biofilm-associated wounds: Providing a host-like environment for the study of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms. Journal of Applied Microbiology. 131 (3), 1487-1497 (2021).
  25. Johnson, C. J., et al. Augmenting the activity of chlorhexidine for decolonization of Candida auris from porcine skin. Journal of Fungi. 7 (10), 804(2021).
  26. Horton, M. V., et al. Candida auris Forms High-Burden Biofilms in Skin Niche Conditions and on Porcine Skin. mSphere. 5 (1), 00910-00919 (2020).
  27. Ashrafi, M., et al. Validation of biofilm formation on human skin wound models and demonstration of clinically translatable bacteria-specific volatile signatures. Scientific Reports. 8, 1-16 (2018).
  28. Brackman, G., Coenye, T. In vitro and in vivo biofilm wound models and their application. Advances in Experimental Medicine and Biology. 897, 15-32 (2016).
  29. Rumbaugh, K. P., Carty, N. L. In Vivo Models of Biofilm Infection. Biofilm Infections. , Springer. New York, NY. 267-290 (2011).
  30. Boase, S., Valentine, R., Singhal, D., Tan, L. W., Wormald, P. J. A sheep model to investigate the role of fungal biofilms in sinusitis: Fungal and bacterial synergy. International Forum of Allergy & Rhinology. 1 (5), 340-347 (2011).
  31. Williams, D. L., et al. Experimental model of biofilm implant-related osteomyelitis to test combination biomaterials using biofilms as initial inocula. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 100 (7), 1888-1900 (2012).
  32. Scheerlinck, J. P. Y., Snibson, K. J., Bowles, V. M., Sutton, P. Biomedical applications of sheep models: From asthma to vaccines. Trends in Biotechnology. 26 (5), 259-266 (2008).
  33. Metcalfe, A. D., Ferguson, M. W. J. Tissue engineering of replacement skin: The crossroads of biomaterials, wound healing, embryonic development, stem cells and regeneration. Journal of the Royal Society Interface. 4 (14), 413-417 (2007).
  34. Kazemi-Darabadi, S., Sarrafzadeh-Rezaei, F., Farshid, A. A., Dalir-Naghadeh, B. Allogenous skin fibroblast transplantation enhances excisional wound healing following alloxan diabetes in sheep, a randomized controlled trial. International Journal of Surgery. 12 (8), 751-756 (2014).
  35. Martinello, T., et al. Allogeneic mesenchymal stem cells improve the wound healing process of sheep skin. BMC Veterinary Research. 14 (1), 1-9 (2018).
  36. Roberts, C. D., Windsor, P. A. Innovative pain management solutions in animals may provide improved wound pain reduction during debridement in humans: An opinion informed by veterinary literature. International Wound Journal. 16 (4), 968(2019).
  37. Mazzone, L., et al. Bioengineering and in utero transplantation of fetal skin in the sheep model: A crucial step towards clinical application in human fetal spina bifida repair. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (1), 58-65 (2020).
  38. Olkowska, E., Gržinić, G. Skin models for dermal exposure assessment of phthalates. Chemosphere. 295, 133909(2022).
  39. Couto, N., et al. Label-free quantitative proteomics and substrate-based mass spectrometry imaging of xenobiotic metabolizing enzymes in ex vivo human skin and a human living skin equivalent model. Drug Metabolism and Disposition. 49 (1), 39-52 (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל פצע ex vivoמודל עור כבשיםיעילות אנטימיקרוביאליתזיהום ב-Staphylococcus aureusמודל זיהום פצעיםאופטימיזציה של תרכיבים מוביליםסריקה בסריקה רחבה (High Throughput Screening)סטריליזציה של עורספירת תאי viable על מצעצביעה היסטולוגית
מודל חדשני של פצעי עור Ex Vivo Ovine בתפוקה גבוהה לבדיקת אנטיביוטיקה מתפתחת
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.