מאמר שיטה

הזרקה דו-נקודתית מבוססת ביציבות של מודל דה-מילינציה מוקדית המושרה על-ידי ליזופוספטידילכולין בעכברים

DOI:

10.3791/64059

⸱

11 במאי 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הזרקה דו-נקודתית של ליזופוספטידילכולין באמצעות מסגרת סטריאוטקסית כדי ליצור מודל דמילינציה יציב וניתן לשחזור בעכברים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איתות ליזופוספוליפידים בתיווך קולטן תורם לפתופיזיולוגיה של מחלות נוירולוגיות מגוונות, במיוחד טרשת נפוצה (MS). ליזופוספטידילכולין (LPC) הוא ליזופוספוליפיד אנדוגני הקשור לדלקת, והוא עלול לגרום לנזק מהיר עם רעילות לשומנים של המיאלין, מה שמוביל לדה-מילינציה מוקדית. כאן, מוצג פרוטוקול מפורט להזרקת LPC סטריאוטקטית דו-נקודתית שעלולה לגרום ישירות לדה-מילינציה חמורה ולשכפל את הפגיעה הניסיונית בדה-מילינציה במהירות וביציבות בעכברים על ידי הליך כירורגי. לפיכך, מודל זה רלוונטי מאוד למחלות דמילינציה, במיוחד טרשת נפוצה, והוא יכול לתרום למחקר הרלוונטי מבחינה קלינית. כמו כן, שיטות הכתם הכחולות המהירות של לוקסול ולוקסול שימשו לתיאור מהלך הזמן של דה-מילינציה בקורפוס קלוסום של עכברים שהוזרקו להם LPC. בנוסף, השיטה ההתנהגותית שימשה להערכת התפקוד הקוגניטיבי של עכברים לאחר מודלים. באופן כללי, הזרקה דו-נקודתית של ליזופוספטידילכולין באמצעות מסגרת סטריאוטקסית היא שיטה יציבה וניתנת לשחזור ליצירת מודל דה-מילינציה בעכברים לצורך מחקר נוסף.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איתות ליזופוספוליפידים בתיווך קולטן כולל תהליכים פיזיולוגיים מגוונים של כמעט כל מערכות האיברים1. במערכת העצבים המרכזית (CNS), איתות זה ממלא תפקיד קריטי בפתוגנים של מחלות נוירולוגיות אוטואימוניות כגון טרשת נפוצה (MS). טרשת נפוצה היא הפרעה כרונית בתיווך מערכת החיסון המאופיינת בדה-מיאלינציה פתולוגית ובתגובה דלקתית, הגורמת לתפקוד לקוי נוירולוגי ולפגיעה קוגניטיבית 2,3. לאחר הישנות מתמשכת והעברה במהלך המחלה המוקדמת, רוב החולים מתקדמים בסופו של דבר לשלב המשני-מתקדם, מה שעלול לגרום נזק בלתי הפיך למוח ולנכות 4 וכתוצאה מכך לנכות4. הוא האמין כי סימן ההיכר הפתולוגי של הקורס המשני-פרוגרסיבי הוא demyelinating פלאקים הנגרמים על ידי נגעים דלקתיים5. טיפולים קיימים בטרשת נפוצה יכולים להפחית באופן משמעותי את הסיכון להישנות המחלה. עם זאת, עדיין אין טיפול יעיל לנזקי דה-מילינליזציה ארוכי טווח הנגרמים על ידי טרשת נפוצה6 מתקדמת. לפיכך, נדרש מודל מבוסס ביציבות וניתן לשחזור בקלות כדי לחקור טיפולים פרה-קליניים המתמקדים בניוון החומר הלבן.

Demyelination ו remyelination הם שני תהליכים פתולוגיים עיקריים בפיתוח טרשת נפוצה. Demyelination הוא אובדן של נדן מיאלין סביב אקסונים המושרה על ידי מיקרוגליה עם פנוטיפים פרו דלקתיים7, וזה מוביל הולכה איטית של דחפים עצביים ומביא לאובדן נוירונים והפרעות נוירולוגיות. רמילינציה היא תגובת תיקון אנדוגנית המתווכת על ידי אוליגודנדרוציטים, שבה הפרעות עלולות להוביל לניוון עצבי ולפגיעה קוגניטיבית8. התגובה הדלקתית חיונית לכל התהליך, ומשפיעה הן על מידת הנזק למיאלין והן על התיקון.

לפיכך, מודל חייתי יציב של דה-מילינציה דלקתית מתמשכת הוא בעל משמעות להמשך חקירה של אסטרטגיות טיפוליות לטרשת נפוצה. בשל המורכבות של טרשת נפוצה, סוגים שונים של מודלים של בעלי חיים הוקמו כדי לחקות נגעים דה-מיאליננטים in vivo, כולל אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE), מודלים רעילים-דמילינה, קופריזון (CPZ) וליזופוספטידילכולין (LPC)9 . LPC הוא ליזופוספוליפיד אנדוגני הקשור לדלקת, והוא עלול לגרום לנזק מהיר עם רעילות לשומנים במיאלין, מה שמוביל לדה-מילינציה מוקדית. בהתבסס על דוחות קודמים ומחקר10,11, פרוטוקול מפורט של הזרקה דו-נקודתית עם כמה שינויים מסופק. באופן כללי, מודל ההזרקה הקלאסי של LPC בנקודה אחת מייצר רק דמילינציה מקומית באתר ההזרקה ומלווה לעתים קרובות ברמילינציה ספונטנית12,13. עם זאת, מודל ההזרקה הדו-נקודתית של LPC יכול להדגים כי ה-LPC יכול לגרום ישירות לדה-מילינציה בקורפוס קלוסום של העכבר ולגרום לדמילינציה עמידה יותר עם מעט התחדשות מיאלין.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים של המכון לטיפול בבעלי חיים של המכללה הרפואית טונג'י, אוניברסיטת הואז'ונג למדע וטכנולוגיה, סין. בוגרים C57BL/6 זכרים ונקבות עכברים (סוג בר, WT; 20-25 גרם; 8-10 שבועות) שימשו למחקר הנוכחי. העכברים התקבלו ממקורות מסחריים (ראו טבלת חומרים). עכברים שוכנו במתקן מסוים לבעלי חיים ללא פתוגנים (SPF) עם מים ומזון שסופקו עד ליביטום. הם נשמרו בתקופה מתחלפת של 12 שעות של מחזור אור וחושך בתנאים הסטנדרטיים של טמפרטורת 22 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 55%-60%.

1. הכנת תמיסת LPC

  1. ממיסים 25 מ"ג אבקת LPC (ראו טבלת חומרים) בתמיסה מעורבת של 250 μL של כלורופורם ומתנול (1:1) כדי ליצור תמיסת LPC של 10% ולהעביר אותה לצינור צנטריפוגה של 500 μL.
    הערה: אם ה- LPC אינו מומס לחלוטין, מקם את שפופרת הצנטריפוגה בחומר ניקוי קולי ואולטרה-סוניקט ב- 40 קילוהרץ במשך כשעה אחת כדי לקבל פתרון אחיד.
  2. חלקו את התמיסה ל-3 μL/tube ואחסנו ב-−80°C.
    הערה: ניתן לאחסן את הפתרון למשך כשנתיים.
  3. לפני הניתוח, דיללו את התמיסה (שלב 1.2)ב-27 μL של תמיסת NaCl של 0.9%, ושמרו על התמיסה באמבט מים בטמפרטורה קבועה של 37 מעלות צלזיוס.
    הערה: הכן את הפתרון רגע לפני תחילת ההזרקה.

2. הכנה כירורגית

  1. השתמש במחט של 32 G, 2 כדי להתחבר למזרק של 5 μL (ראה טבלת חומרים). ודא שהמזרק המיקרוליטר אינו מופרע. למשוך 5 μL של תמיסת LPC להכנת ההזרקה.
  2. הרדמה את העכבר בתא אינדוקציה המחובר לאידוי איזופלורן עם 3% איזופלורן מעורבב עם 100% חמצן בקצב של כ-0.3 ליטר לדקה.
  3. אשרו את עומק ההרדמה על ידי היעדר רפלקס צביטה בבוהן בזמן שהנשימה חלקה.
  4. לגלח את ראש העכבר בין האוזניים באמצעות מכונת גילוח חשמלית. יש למרוח טיפות עיניים משמן כדי למנוע יובש בקרנית במהלך ההליך.
  5. לאחר מכן, מקם את העכבר במסגרת סטריאוטקסית (ראה טבלת חומרים) עם הצד הגבי למעלה, והאבטח את הראש באמצעות חרוט אף ומהדק שיניים. לשמור על הרדמה עם 1.2%-1.6% איזופלורן דרך האף.
    הערה: ניתן להתאים את ריכוז האיזופלוראן בהתאם למצב הנשימה של העכברים.

3. הליך כירורגי

הערה: בעלי חיים מונחים על כרית חימום במהלך כל ההליכים.

  1. תקן את העכבר למנגנון הסטריאוטקסי עם מוטות אוזניים דו-צדדיים. ודאו כי מוטות האוזניים מישוריים והראש אופקי ויציב.
  2. יש לחטא את העור שעל הראש על ידי ניגוב מספר פעמים עם יודופור ואחריו אלכוהול בתנועה מעגלית. לאחר מכן השתמש באזמל כדי לחתוך חתך קטן של כ 1.5 ס"מ לאורך קו האמצע של הקרקפת כדי לחשוף את הגולגולת.
  3. נגבו את הגולגולת עם צמר גפן טבול במי חמצן של 1% עד שנחשפו הברגמא, למבדה והפונטנלה האחורית. הניחו את המזרק על המנגנון הסטריאוטקסי.
    הערה: השתמש במי חמצן בזהירות והימנע מלגעת ברקמות הסובבות אותה.
  4. הקפידו על מיקום אופקי של ראש החיה (מלפנים ומאחור ושמאל וימינה).
    1. התאם את ידית ציר ה- Z של המסגרת הסטריאוטקסית כך שקצה המחט והגולגולת פשוט יגעו ללא כיפוף, ולאחר מכן מדוד את קואורדינטת ציר ה- Z. בדוק את קואורדינטות Z של bregma ופונטנל אחורי.
    2. התאם את מוט האוזן כך שההפרש בין קואורדינטות Z של bregma לבין פונטנל אחורי הוא לא יותר מ- 0.02 מ"מ. לאחר מכן, בצע את אותה שיטה כדי למדוד את קואורדינטות Z של המיקומים המתאימים בצד שמאל וימני של קו האמצע. התאם את מוט האוזן כדי לוודא שהשמאל והימני נמצאים באותה רמה.
  5. אתר את הקורפוס קלוסום. הגדר את מקור ה- XYZ ל- bregma.
    הערה: אתר ההזרקה הראשון הוא 1.0 מ"מ רוחבי לברגמה, עומק 2.4 מ"מ ו-1.1 מ"מ קדמי. אתר ההזרקה השני הוא 1.0 מ"מ רוחבי לברגמה, עומק 2.1 מ"מ ו-0.6 מ"מ קדמי. לדוגמה, הקואורדינטות של הברגמה הן (0,0,0). מדוד את קואורדינטות Z של המיקום המתאים המסומן כ- (-1, 1.1, X) ו- (-1, 0.6, Y). ניתן לקבוע כי קואורדינטת אתר ההזרקה הראשונה של קורפוס קלוסום היא (-1, 1.1, −[X + 2.4]), ואתר ההזרקה השני הוא (-1, 0.6, −[Y + 2.1]).
  6. לאחר קביעת אתר ההזרקה, יש להטביע חותם עם סמן סטרילי על הגולגולת ולרשום את הקואורדינטות.
  7. קודחים בעדינות את האתר המסומן באמצעות מקדחת גולגולת (ראו טבלת חומרים). הקפידו למנוע דימום.
  8. הזיזו באיטיות את המחט לקואורדינטות הנתונות והתחילו את ההזרקה. כדי לגרום לקורפוס קלוסום דמילינציה, הזריקו 2 μL של תמיסת LPC (שלב 1.) בכל אתר הזרקה (שלב 3.5.) בקצב של 0.4 μL/min.
  9. לאחר ההזרקה, שמור את המחט בכל אתר למשך 10 דקות נוספות.
    הערה: ודא שהמרווח של שתי זריקות הוא לא יותר מ -20 דקות.
  10. לתפור את העור עם תפר 4-0 ולחכות שהחיה תתעורר תוך 10 דקות. ניהול משככי כאבים לאחר הניתוח בהתאם לתקנות המוסדיות לטיפול בבעלי חיים.
    הערה: ניתן לקבוע את הזמן המומלץ להמתת חסד בהתאם למטרת הניסוי.

4. מיצוי דגימה לדה-מילינציה מוקדית

הערה: לפרטים אודות שלב זה, עיין בדוח14 שפורסם בעבר.

  1. ממיסים צבע אדום נייטרלי (ראו טבלת חומרים) בתמיסה של 1% בתמיסה של 1% בתמיסת מלח עם חציית פוספט (PBS).
  2. שעות לפני הקרבת העכברים (לפרטים, ראו הפניה קודמת10), הזריקו 500 μL של 1% צבע אדום נייטרלי ב-PBS על ידי הזרקה תוך-צפקית לכל עכבר.
  3. בצעו פרפוזיה לבבית12 עם 30 מ"ל של 0.1% PBS מצופה מראש ב-4 מעלות צלזיוס.
  4. פורסים את המוח ל-1 מ"מ עם תבנית מוח (ראו טבלת חומרים).
  5. דמיינו את הנגע המוכתם באדום נייטרלי מתחת למיקרוסקופ ונתקו את הנגע.
    הערה: הסר כמה שיותר רקמות נורמליות מסביב כדי לשפר את הדיוק של הניתוח הבא. ניתן לבחון את רקמת הנגע באמצעות RT-PCR, מיקרוסקופיית אלקטרונים וניתוחי כתמים מערביים.

5. צביעה היסטולוגית ואימונופלואורסצנציה

  1. עבור צביעה היסטולוגית ואימונופלואורסצנציה12, לאחר זלוף לב (שלב 4.3.), להסיר את המוח10, לתקן 4% PFA לילה (ב 4 מעלות צלזיוס), ולהתייבש לחלוטין ב 30% סוכרוז.
  2. חותכים למקטעי מוח קורונליים בקוטר 20 מ"מ באמצעות פרוסה קפואה10 בטמפרטורה קבועה (−20 מעלות צלזיוס).
  3. השתמשו בפרוסות עבור צביעת לוקסול בכחול מהיר (LFB), אימונופלואורסצנציה וכתם מערבי10.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הזרקה דו-נקודתית של ה-LPC הביאה לדה-מילינציה עמידה יותר
LPC מוביל בעיקר לנזק מהיר עם רעילות למילין ומחשוף של שלמות האקסון15. יום ההזרקה נחשב ליום 0. העכברים הוחזקו לתקופה של 10-28 ימים (10 dpi ו-28 dpi). לוקסול צביעה כחולה מהירה (LFB)10 שימשה להערכת אזור הדמילינציה בעכברים בנקודות זמן אלה. במודל ההזרקה הדו-נקודתית, הייתה דמילינציה משמעותית ב-10 dpi בהשוואה לקבוצת ה-sham, מה שמראה כי הזרקה מקומית של LPC יכולה לנטרל בהצלחה את הקורפוס קלוסום. רמה גבוהה יחסי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טרשת נפוצה, מחלה כרונית של מערכת העצבים המרכזית, היא אחד הגורמים השכיחים ביותר לתפקוד נוירולוגי של מבוגרים צעירים בני20. מבחינה קלינית, כ-60%-80% מחולי הטרשת הנפוצה חווים את מעגל ההישנות וההפוגות לפני שהם מפתחים טרשת נפוצה משנית-מתקדמת21,22, ובסופו של דבר היא מובילה לליקויים בתנועה מצטברים ולליקויים קוגניטיביים לאורך זמן23. נכון לעכשיו, אין מודל ניסיוני אחד המכסה את כל מגוון המאפיינים הקליניים, הפתולוגיים או החיסוני...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענקים: 82071380, 81873743).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
L-α-Lysophosphatidylcholine מחלמוןביצה Sigma-AldrichL4129-25MG
32 מד מחטHAMILTON7762-05
10 μ l מזרקHAMILTON80014
מקדחת גולגולת במהירות גבוההחזקה, קוריאהחזקה 204
מקדחהHager & Meisinger, גרמניה REF 500 104 001 001 005
Matrx Animal Aneathesia VentilatorMIDMARKVMR
מכשיר סטריאוטקסי נייד לתגמול עכבר68507
תגמול מזרק מיקרוKDS LEGATO 130
Isoflurane VETEASY
ParaformaldehydeServicebioG1101
מאגר פוספטBOSTERPYG0021
LuxoL מהיר bLueServicebioG1030-100ML
תפרFUSUNPHARMA20152021225
עובש מוחפרס68707
מקבע מיקרוסקופ אלקטרוניםServicebioG1102-100ML
אדום ניטרלי (CI 50040), למיקרוסקופיה CertistainSigma-Aldrich1.01376
נוגדן חלבון בסיסי אנטי-מיאלין Millipore#AB5864
Anti-GST-P pAbMBL#311
Ki-67 נוגדן חד שבטי (SolA15)Thermo Fisher  מדעי14-5698-95
בטא אקטין נוגדן חד שבטיProteintech66009-1-IG 
חלבון בסיסי מיאלין נוגדן פוליקלונליProteintech10458-1-AP
OLIG2 נוגדן פוליקלונליProteintech13999-1-AP
Alexa Fluor 488  אפיניפיור  חמור נגד ארנב  IgG (H+L)YEASEN34206ES60
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat Anti-Rat IgG (H+L) YEASEN34412ES60
אלקסה פלואור 594  AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) YEASEN34212ES60
HRP עז נגד ארנב IgG (H+L)אבקלונליAS014
HRP עז נגד עכבר IgG (H+L) abclonalAS003
בוגר C57BL/6 עכברים זכרים ונקבותהונאן SJA מעבדה בעלי חיים בע"מ

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gaire, B. P., Choi, J. W. Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses. International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864(2021).
  2. Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).
  3. Dobson, R., Giovannoni, G. Multiple sclerosis - a review. European Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).
  4. Mahad, D. H., Trapp, B. D., Lassmann, H. Pathological mechanisms in progressive multiple sclerosis. The Lancet Neurology. 14 (2), 183-193 (2015).
  5. Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43(2018).
  6. Villoslada, P., Steinman, L. New targets and therapeutics for neuroprotection, remyelination and repair in multiple sclerosis. Expert Opinion on Investigational Drugs. 29 (5), 443-459 (2020).
  7. Lassmann, H. Multiple sclerosis pathology. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (3), 028936(2018).
  8. Franklin, R. J., Ffrench-Constant, C. Remyelination in the CNS: From biology to therapy. Nature Reviews Neuroscience. 9 (11), 839-855 (2008).
  9. Gentile, A., et al. Immunomodulatory effects of exercise in experimental multiple sclerosis. Frontiers in Immunology. 10, 2197(2019).
  10. Chen, M., et al. Deficiency of microglial Hv1 channel is associated with activation of autophagic pathway and ROS production in LPC-induced demyelination mouse model. Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 333(2020).
  11. Luo, Q., et al. A stable and easily reproducible model of focal white matter demyelination. Journal of Neuroscience Methods. 307, 230-239 (2018).
  12. Blakemore, W. F., Franklin, R. J. Remyelination in experimental models of toxin-induced demyelination. Current Topics in Microbiology and Immunology. 318, 193-212 (2008).
  13. Degaonkar, M. N., Raghunathan, P., Jayasundar, R., Jagannathan, N. R. Determination of relaxation characteristics during preacute stage of lysophosphatidyl choline-induced demyelinating lesion in rat brain: An animal model of multiple sclerosis. Magnetic Resonance Imaging. 23 (1), 69-73 (2005).
  14. Baydyuk, M., et al. Tracking the evolution of CNS remyelinating lesion in mice with neutral red dye. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14290-14299 (2019).
  15. Plemel, J. R., et al. Mechanisms of lysophosphatidylcholine-induced demyelination: A primary lipid disrupting myelinopathy. Glia. 66 (2), 327-347 (2018).
  16. Nave, K. A. Myelination and support of axonal integrity by glia. Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).
  17. Liu, Z., et al. Induction of oligodendrocyte differentiation by Olig2 and Sox10: evidence for reciprocal interactions and dosage-dependent mechanisms. Developmental Biology. 302 (2), 683-693 (2007).
  18. Kassis, H., et al. Histone deacetylase expression in white matter oligodendrocytes after stroke. Neurochemistry International. 77, 17-23 (2014).
  19. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: Procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).
  20. Merkler, D., Ernsting, T., Kerschensteiner, M., Bruck, W., Stadelmann, C. A new focal EAE model of cortical demyelination: multiple sclerosis-like lesions with rapid resolution of inflammation and extensive remyelination. Brain. 129, Pt 8 1972-1983 (2006).
  21. Karussis, D. The diagnosis of multiple sclerosis and the various related demyelinating syndromes: A critical review. Journal of Autoimmunity. 48-49, 134-142 (2014).
  22. Kamma, E., Lasisi, W., Libner, C., Ng, H. S., Plemel, J. R. Central nervous system macrophages in progressive multiple sclerosis: Relationship to neurodegeneration and therapeutics. Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 45(2022).
  23. Kutzelnigg, A., et al. Cortical demyelination and diffuse white matter injury in multiple sclerosis. Brain. 128, Pt 11 2705-2712 (2005).
  24. Lassmann, H., Bradl, M. Multiple sclerosis: Experimental models and reality). Acta Neuropathologica. 133 (2), 223-244 (2017).
  25. Lamport, A. C., Chedrawe, M., Nichols, M., Robertson, G. S. Experimental autoimmune encephalomyelitis accelerates remyelination after lysophosphatidylcholine-induced demyelination in the corpus callosum. Journal of Neuroimmunology. 334, 576995(2019).
  26. Torkildsen, O., Brunborg, L. A., Myhr, K. M., Bo, L. The cuprizone model for demyelination. Acta Neurologica Scandinavica. Supplementum. 188, 72-76 (2008).
  27. Zhan, J., et al. The cuprizone model: Dos and do nots. Cells. 9 (4), 843(2020).
  28. Torre-Fuentes, L., et al. Experimental models of demyelination and remyelination. Neurologia (Barcelona, Spain). 35 (1), 32-39 (2020).
  29. Merkler, D., et al. Myelin oligodendrocyte glycoprotein-induced experimental autoimmune encephalomyelitis in the common marmoset reflects the immunopathology of pattern II multiple sclerosis lesions. Multiple Sclerosis Journal. 12 (4), 369-374 (2006).
  30. Ucal, M., et al. Widespread cortical demyelination of both hemispheres can be induced by injection of pro-inflammatory cytokines via an implanted catheter in the cortex of MOG-immunized rats. Experimental Neurology. 294, 32-44 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Korpous CallosumLuxol Fast BlueWestern Blot

מאמרים קשורים