הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד ותרבית של שלושה סוגים של תאי גזע מזנכימליים בחבל הטבור

2.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64065

⸱

23 באוגוסט 2022

 ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynecology, the Third Affiliated Hospital, Soochow University, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Nanjing First Hospital, Nanjing Medical University, 3Center for Reproductive Medicine and Obstetrics and Gynecology, Nanjing Drum Tower Hospital, Nanjing University Medical School

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול הנוכחי מתאר בידוד ותרבית של תאי גזע מזנכימליים מעורקי חבל הטבור, הווריד והג'לי של וורטון.

תקציר

תאי גזע מזנכימליים של חבל הטבור (UC-MSCs) הם מקור תאים חשוב לרפואה רגנרטיבית. ניתן לבודד UC-MSCs מחבל הטבור מג'לי וורטון, כמו גם מעורקי הטבור ווריד הטבור. הם ידועים כתאי גזע פריוסקולריים המתקבלים מעורקי הטבור (UCA-PSCs), תאי גזע פריוסקולריים המתקבלים מווריד הטבור (UCV-PSCs), ותאי גזע מזנכימליים המתקבלים מג'לי וורטון (WJ-MSCs). UCA-PSCs ו-UCV-PSCs הם פריציטים שמקורם באזורים פריוסקולריים שהם אבות של MSCs. בידוד ותרבית של שלושת סוגי התאים הם מקור חשוב לחקר השתלה ותיקון של תאי גזע. הפרוטוקול הנוכחי מתמקד בבידוד ותרבית של תאים באמצעות הפרדה מכנית, תרבית דבקה וזחילה של תאים החוצה. באמצעות טכניקה זו ניתן להפיק את שלושת הסוגים השונים של תאי גזע. סמני פני התא זוהו על ידי ציטומטריית זרימה. תאי הגזע זוהו כפוטנציאל התמיינות רב-שושלת על ידי התמיינות אדיפוגנית, אוסטאוגנית ודמוית עצבים, העולה בקנה אחד עם הפנוטיפ של MSCs. פרוטוקול ניסיוני זה מרחיב את המקור של UC-MSCs. בנוסף, שיטת בידוד התאים מספקת בסיס למחקר נוסף של רפואה רגנרטיבית ויישומים אחרים.

מבוא

תאי גזע מזנכימליים של חבל הטבור האנושי (UC-MSCs) נמצאים בשימוש נרחב ברפואה רגנרטיבית בגלל פעולתם הלא פולשנית, החיסון הנמוך והיעדר מחלוקת אתית1. במחקרים רבים, UC-MSCs שבודדו מג'לי וורטון (WJ) יכולים להיצמד לקיר, לעבור ריבוי התמיינות ולבטא סמנים של תאי גזע מזנכימליים (MSCs)2. עם זאת, כמעט כל MSCs מקורם באזור הפרי-וסקולרי3. פריציטים, כתת-קבוצה של תאים פרי-וסקולריים, הם תאי אב של MSCs4. לכן, ניתן לבודד UC-MSCs מחבל הטבור WJ, עורקי הטבור (UCAs) ווריד הטבור (UCV), הידועים כ-UCA-PSCs, UCV-PSCs ו-WJ-MSCs, בהתאמה5. שיטה זו נועדה לבודד ולתרבית את שלושת הסוגים השונים של תאי גזע. הבידוד והתרבות של UCA-PSCs, UCV-PSCs ו-WJ-MSCs חשובים מאוד כדי לספק מקורות נוספים ל-MSCs.

המחקר הנוכחי מתאר את הבידוד, התרבות והיישום העתידי של UCA-PSCs, UCV-PSCs ו-WJ-MSCs, בעלי הידבקות תאית, מבטאים את הסמנים של MSCs ובעלי התמיינות רב-כיוונית. תאי הגזע המבודדים נצפו במיקרוסקופיה ועברו תרבית תאים, מעבר תאים, שימור תאים בהקפאה ושחזור תאים. הרציונל מאחורי השימוש בטכניקה זו היה תאים שזוחלים החוצה מהרקמה. בהשוואה לשיטה הקודמת, כגון ציטומטריית זרימה או טכניקות חרוזים אימונומגנטיות, שהיו מורכבות ויקרות6, ניתן לבודד את ה-US-MSCs באופן מסיבי בשיטת ההפרדה הדבקה וזחילת התאים; אלה שימשו במחקר הקודם5. ניתוח זרימה ציטומטרית בוצע על תאי הגזע הנגזרים כדי לזהות אם תאים אלה מבטאים סמני MSC. התמיינות רב-כיוונית של תאי הגזע הוצגה כדי לזהות אם לשלושת סוגי התאים יש פוטנציאל להתמיין לאדיפוציטים, אוסטאובלסטים ונוירובלסטים. הבידוד והתרבית של שלושה סוגים של תאי גזע מחבל הטבור היו חשובים בשימוש קליני ועזרו לחוקרים ליישומים עתידיים מגוונים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הליכי הניסוי אושרו על ידי ועדת האתיקה של המחקר הקליני, בית החולים המסונף השלישי, אוניברסיטת סוצ'ו. הסכמה מדעת בכתב התקבלה מהנבדקים האנושיים. אנשים עם לידה נרתיקית מלאה או ניתוח קיסרי נכללו במחקר הנוכחי כדי להשיג את חבל הטבור. חבל הטבור מגיע מיילודים בריאים ללא הטיה מגדרית. היילוד קיבל ציון אפגר של 8-10. ציון אפגר הוא מבחן מהיר לתינוקות הניתן זמן קצר לאחר לידתם. בדיקה זו בודקת את טונוס השרירים, קצב הלב וסימנים אחרים של התינוק כדי לראות אם יש צורך בטיפול רפואי או חירום נוסף7. מצד שני, חולים עם מחלות קשות, כגון לב, כבד, כליות או מחלות זיהומיות אחרות, לא נכללו במחקר הנוכחי.

1. אוסף חבל הטבור האנושי

  1. הנח את חבל הטבור של היילוד בתמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS) והובל בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
    הערה: במחקר הנוכחי נעשה שימוש בשלושה חבלי טבור משלושה תורמים.
  2. יש להוציא את הדם הטבורי מיד בתנאים סטריליים, ולחתוך לאורך הציר הארוך של כלי הדם ב-20 ס"מ מחבל הטבור. הפרד את 20 הס"מ המתאימים של עורקי הטבור והווריד, והסר את הג'לי של וורטון על פני השטח בזהירות.
    הערה: תרביות אקספלנט התקבלו מכל אזור, טחונות לחתיכות קטנות (1-2 מ"מ3) כדי למנוע זיהום צולב בין שלושת סוגי תאי הגזע.
  3. חותכים את עורקי הטבור, הווריד והג'לי של וורטון לגודל של 1-2 מ"מ3 ומחסנים אותם לכלי תרבית תאים של 100 מ"מ. בצע את החיסון של עורקי הטבור, הווריד והג'לי של וורטון באמצעות פינצטה בעקבות דוחשפורסם בעבר 5. אין לצפות מראש את לוחות התרבות של 100 מ"מ.
    הערה: המרווח בין עורקי הטבור, הווריד או הג'לי של וורטון היה כ-1 ס"מ. זמן איסוף ארוך מדי לפני הפרדת תאים עלול להשפיע על כדאיות התא וכמותו. מומלץ להפריד מיד את העורקים והווריד מחבל הטבור. זמן האיסוף היה עד 4 שעות.

2. בידוד ותרבות של UCA-PSCs, UCV-PSCs ו-WJ-MSCs

  1. מניחים את כלי תרבית התאים הפוכים למשך 3 שעות באינקובטור של 5% CO2 בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי להבטיח שעורקי הטבור, הווריד ורקמת הג'לי של וורטון מתחברים לכלי תרבית התאים בחוזקה לפני הוספת מדיום התרבית.
    1. לאחר 3 שעות, החזר את כלי תרבית התאים למיקום רגיל. הוסף 5 מ"ל של מדיום תרבית תאים (LG-DMEM, 10% FBS, 100 IU/mL של פניצילין ו-100 מיקרוגרם/מ"ל של סטרפטומיצין, ראה טבלת חומרים) לצלחת תרבית התאים.
  2. הוסף 3 מ"ל ו -2 מ"ל ממדיום התרבות לצלחת תרבית התאים ביוםה-3 וה-7 בשבוע הראשון, בהתאמה. היזהר לא לגעת בגושי הרקמות של עורקי חבל הטבור, הווריד והג'לי של וורטון.
  3. החליפו מחצית מהמדיום הנוזלי פעמיים בשבוע השני ואת כל המדיום הנוזלי פעמיים בשבוע השלישי.
  4. התבונן בתאים זוחלים החוצה מגושי הרקמה בערך 7 ימים לאחר התרבית, ולאחר מכן השליך את גושי הרקמה כאשר התאים מאוחים ב-80% לאחר ~2 שבועות.
    1. כאשר התאים מאוחים ב-100%, העבירו אותם ביחס של 1:3 עם 2 מ"ל של 0.05% טריפסין לאחר צנטריפוגה ב-600 x גרם למשך 4 דקות בטמפרטורת החדר.
      הערה: התאים העיקריים שבודדו מחבל הטבור היו כ-2 x 106 UCA-PSCs, 1 x 106 UCV-PSCs ו-2 x 106 WJ-MSCs. 2 x 106 UCA-PSCs, 1 x 106 UCV-PSCs ו-2 x 106 WJ-MSCs בודדו מ-20 ס"מ של חבל הטבור. התאים זחלו החוצה בכל שלושת חבלי הטבור, מה שהצביע על כך שהתוצאות בין הבידוד היו חוזרות על עצמן.
    2. זרעו את התאים, תוך שמירה על ריכוז של 5 x 105/100 ס"מ2 בצלחת התרבות. שמור על 5 x 105 תאים ב-1 מ"ל של תמיסת שימור בהקפאה (90% FBS, 10% DMSO). תאי מעבר שלישי עד חמישי שימשו במחקר הנוכחי.

3. זיהוי סמני משטח MSC על ידי ציטומטריית זרימה

  1. עכל את תאי הדור השלישי עם 0.05% טריפסין לקבלת תרחיף של תא יחיד. צנטריפוגה של התאים ב-600 x גרם למשך 4 דקות בטמפרטורת החדר והשליכו את הסופרנטנט של התא באמצעות פיפטה של פסטר. לאחר מכן השעו מחדש 1 x 105 תאים ב -100 מיקרוליטר של PBS (1% FBS). מעריך את מספר התא על ידי ספירת התאים באמצעות המוציטומטר בעקבות דוח שפורסם בעבר8.
  2. דגרו על 1 x 105 תאים עם נוגדנים שונים של פיקואריתרין כנגד CD13 (FITC, 0.1 מ"ג/מ"ל), CD34 (FITC, 0.1 מ"ג/מ"ל), CD45 (FITC, 0.1 מ"ג/מ"ל), CD73 (FITC, 0.1 מ"ג/מ"ל) ו-HLA-DR (FITC, 0.1 מ"ג/מ"ל) בחושך למשך 30 דקות. לבקרות, דגרו 1 x 105 תאים עם FITC-IgG (FITC Mouse Anti-Human IgG, 0.1 מ"ג/מ"ל) (ראה טבלת חומרים).
  3. צנטריפוגה של התאים ב-600 x g למשך 4 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן השליכו את הסופרנטנט של התא באמצעות פיפטה פסטר. השעו מחדש 1 x 105 תאים ב-500 מיקרוליטר של PBS (1% FBS), זהה על ידי ציטומטריית זרימה ונתח על ידי FlowJo2 (ראה טבלת חומרים).

4. בידול של UCA-PSCs, UCV-PSCs ו-WJ-MSCs לאדיפוציטים

  1. חסנו את תאי הדור השלישי לצלחות של 24 בארות בצפיפות של 6 x 104 תאים/ס"מ2 עם 500 מיקרוליטר של מדיום תאים (LG-DMEM, 10% FBS, 100 IU/mL פניצילין ו-100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין, ראה טבלת חומרים) לבאר בחממה של 5% CO2 ב-37 מעלות צלזיוס.
  2. שנה את מדיום התא לאחר 24 שעות, ושנה את קבוצת הביקורת למדיום התא (LG-DMEM, 10% FBS, 100 IU/mL פניצילין ו-100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין). ערכו את הניסויים לאחר שהתאים התמזגו ב-80% בצלחות של 24 בארות.
    הערה: התאים בקבוצות שגרמו לאדיפוגנזה הוחלפו למדיום אינדוקציה אדיפוגני (ערכת התמיינות אדיפוגנית, ראה טבלת חומרים). המדיום של התאים בשתי הקבוצות השתנה כל 3 ימים.
  3. התבונן בטיפות שומן בתאים כ-21 יום לאחר האינדוקציה בקבוצת האינדוקציה האדיפוגנית ולאחר מכן סיים את האינדוקציה האדיפוגנית.
    הערה: המדיום האדיפוגני הוחלף במדיום תרבית תאים כדי לסיים את האינדוקציה האדיפוגנית 2,5. בנוסף, התאים בקבוצת הביקורת לא הראו שינוי משמעותי.
  4. שטפו את התאים שלוש פעמים עם PBS למשך 5 דקות ולאחר מכן תקנו עם 4% פרפורמלדהיד למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו את התאים שלוש פעמים עם PBS למשך 5 דקות כל אחד.
  5. השליכו את ה-PBS וייבשו את התאים בטמפרטורת החדר למשך כ-20 דקות. לאחר מכן, הוסף 500 מיקרוליטר של תמיסת O אדומה שמן (0.5%) (ראה טבלת חומרים) לבאר למשך 10 דקות.
  6. הסר את תמיסת ה- O האדומה בשמן ושטוף את התאים עם PBS שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד. התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ.

5. התמיינות תאי הגזע לאוסטאובלסטים

  1. מניחים 500 מיקרוליטר של 0.1% ג'לטין (ראה טבלת חומרים) לבאר בצלחות תרבית של 24 בארות וזורקים אותו לאחר 30 דקות.
  2. יש לחסן 6 x 104/cm2 של תאים מהדור השלישי לצלחות תרבית של 24 בארות, ולהוסיף מדיום תרבית תאים של 500 מיקרוליטר או מדיום אינדוקציה אוסטאוגני (ערכת התמיינות אוסטאוגנית, ראה טבלת חומרים) לכל באר בחממה של 5% CO2 ב-37 מעלות צלזיוס. בקבוצת הביקורת, החלף את מדיום תרבית התאים כל 3 ימים, תוך החלפת מדיום האינדוקציה האוסטיאוגני בקבוצת ההתמיינות האוסטיאוגנית כל 3 ימים.
  3. לאחר 3-4 שבועות, בדוק אם יש שקיעת סידן שחור בתאים. שוטפים את הבאר עם PBS שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחת.
  4. מקבעים את התאים בטמפרטורת החדר עם 4% פרפורמלדהיד למשך 15 דקות ושוטפים עם PBS שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד. הוסף תמיסת מכתים אדומה של אליזרין (1%) לבאר למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר, ואז השליך אותה.
  5. לאחר ייבוש למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר, התבונן בתאים במיקרוסקופ.

6. התמיינות תאי גזע לנוירונים

  1. חסנו את תאי הדור השלישי בגודל 6 x 104/cm2 לתוך צלחות תרבית של 24 בארות, שם הונחו שקופיות כיסוי סטריליות שטופלו ב-L-פוליליזין. הניחו את יריעות הטיפוס על התאים (ראו טבלת חומרים) בצלחות של 24 בארות כדי להבדיל את התאים לתאי עצב. תרבית התאים על יריעות הטיפוס על התאים.
  2. לאחר מכן, הוסף 500 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים לבאר, והחלף את מדיום תרבית התאים ב-500 מיקרוליטר של מדיום אינדוקציה נוירוגני9 (ראה טבלת חומרים) לאחר 24 שעות.
  3. לאחר אינדוקציה למשך 24 שעות, הוסף 10-7 מול/ליטר של ATRA ו-10 ננוגרם/מ"ל של bFGF (ראה טבלת חומרים) לתמיסה כדי לשמור על ההתמיינות המושרה של נוירונים.
  4. סיים את האינדוקציה כאשר נוצרות סינפסות תאיות ברורות. בדוק את הסינפסות התאיות הברורות באמצעות טכניקת מיקרוסקופיה (ראה טבלת חומרים).
    הערה: צביעה אימונופלואורסצנטית שימשה לזיהוי סמנים ספציפיים לנוירונים של אנולאז ספציפי לנוירונים (NSE, ראה טבלת חומרים), שהוא סמן של נוירונים2.
  5. בצע הדמיה קונפוקלית על יריעות הטיפוס על התאים.

7. צביעה אימונופלואורסצנטית

  1. לאחר השלכת תמיסת תרבית התאים, שטפו את התאים עם 500 מיקרוליטר PBS שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד.
  2. לאחר מכן, הוסף לבאר 500 מיקרוליטר של 4% פרפורמלדהיד, וקבע את התאים בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות.
  3. שוטפים את התאים עם PBS שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד.
  4. חדירה לתאים עם 100 מיקרוליטר של 0.5% טריטון-X בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות.
  5. שוטפים את התאים עם 500 מיקרוליטר PBS עם 1% BSA שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד.
  6. דגרו על התאים עם 500 מיקרוליטר PBS עם 3% BSA ו-0.1% טריטון X-100 לבאר ב-37 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות כדי לחסום את אתר הקישור הלא ספציפי.
  7. לדלל את הנוגדן העיקרי כנגד NSE (1:100, ראה טבלת חומרים) עם PBS (1:100) המכיל 1% BSA ו-0.1% טריטון X-100, ולדגור על התאים עם הנוגדן העיקרי למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.
  8. לאחר השלכת הנוגדן הראשוני, יש לשטוף את התאים ב-500 מיקרוליטר PBS המכיל 1% BSA שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד.
  9. לדלל את הנוגדן המשני הפלואורסצנטי (עז Anti-Mouse IgG H&L, Alexa Fluor 488, ראה טבל חומרים) עם PBS (1:200) המכיל 1% BSA ו-0.1% טריטון X-100 ב-1:200, ולדגור את התאים עם הנוגדן המשני ב-37 מעלות צלזיוס בחושך למשך 60 דקות.
  10. שטפו את התאים עם 500 מיקרוליטר PBST (PBS המכיל 0.1% Tween-20) לבאר שלוש פעמים בחושך למשך 5 דקות כל אחת.
  11. לאחר מכן, הוסף 200 מיקרוליטר של צביעת DAPI (PBST מדולל, 0.1 מיקרוגרם/מ"ל) לבאר כדי להכתים את הגרעין בטמפרטורת החדר ללא אור למשך 5 דקות.
  12. שוטפים את התאים עם 500 מיקרוליטר PBST שלוש פעמים בחושך למשך 5 דקות כל אחד.
  13. הוסף את חומר המרווה נגד פלואורסצנטי לשקופית ולאחר מכן כסה בעדינות את השקופית בכוס כיסוי. הוסף טיפות לק סביב זכוכית הכיסוי כדי לתקן אותה.
  14. התבונן בזכוכית במיקרוסקופ לייזר קונפוקלי. השתמש בהגדרות המיקרוסקופיה הבאות: ערוץ ירוק עם לייזר 488 ננומטר וערוץ DAPI עם 405 ננומטר.

8. בדיקת התפשטות

  1. זרע 2 x 103 תאים לבאר לצלחות של 96 בארות. הוסף 100 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים לכל באר.
  2. הוסף 10 מיקרוליטר של ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8, ראה טבלת חומרים) לכל באר.
  3. לאחר יומיים של דגירה, מדוד את ערך ה-OD ב-450 ננומטר בקורא מיקרו-פלטות בימים 1-7.
  4. לנתח את ערכי ה-OD של סוגי תאי הגזע השונים באמצעות תוכנה סטטיסטית (ראה טבלת חומרים) ולהציג אותם כאמצעים ±-SD. לבצע ניתוח שונות חד-כיווני (ANOVA). קחו בחשבון שערך P < 0.05 הוא מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בידוד ותרבית של UCA-PSCs, UCV-PSCs ו-WJ-MSCs מחבל הטבור
עורקי הטבור, וריד הטבור והג'לי של וורטון הופרדו מכנית מחבל הטבור ונחתכו ל-2-3 ס"מ3 חתיכות. המרחק בין העורקים, הווריד או גושי רקמת הג'לי של וורטון היה כ-1 ס"מ, מסודרים בצורת קווינקס (איור 1A-C). שלושת סוגי תאי הגזע בודדו בשיטת תרבית מחוברת לרקמה5. לאחר כשבוע אחד של תרבית מחוברת, התאים נצפו זוחלים החוצה בצורה רדיאלית, ומציגים צורת ציר ארוכה והתפשטות מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה בודד שלושה סוגים שונים של תאים מעורקי חבל הטבור, הווריד והג'לי של וורטון. חבל הטבור היה פסולת משלוחים, והשימוש בו היה פשוט, בטוח וללא מחלוקת אתית. UC-MSCs הם מקוריים ובעלי יכולת התמיינות חזקה1. מחקרים קודמים הראו שכמות ה-UC-MSCs שבודדו מחבל הטבור בשיטת העיכול של קולגנאז, טריפסין והיאלורונידאז לא הייתה בשפע; לא ניתן לעבור את תאי הגזע פעמים רבות בכ-70% מהדגימות שאינן יכולות לענות על הצרכים הקליניים10. שיטות ההפ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחברים מבקשים להודות לתמיכה מפרויקט המחקר הבסיסי של לשכת המדע והטכנולוגיה של צ'אנגג'ואו במסגרת מענק מספר CJ20200110 (ל-YJY), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82001629, XQS), תוכנית הנוער של קרן מדעי הטבע של מחוז ג'יאנגסו (BK20200116, XQS) ומימון מחקר פוסט-דוקטורט במחוז ג'יאנגסו (2021K277B, XQS).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת התמיינות אדיפוגניתGibcoA1007001תמיסת התמיינות רב-כיוונית
Alizarin RedStaining SigmaA5533Multidirectional differentiation
נוגדן נגד CD13Thermo Fisher ScientificMA1-12034ניתוח זרימה
נוגדן נגד CD34BD Biosciencesניתוח
נוגדנים נגד CD45BD Biosciencesניתוח זרימה561865
נוגדנים נגד CD73BD Biosciencesניתוח זרימה940294
נוגדנים נגד HLA-DRBD Biosciences555560ניתוח זרימה
חומר מרווה אנטי פלואורסצנטיAbcamAB103748Immunofluorescence
Anti-Mouse IgG H& L (Alexa Fluor 488)abcamab150113התמיינות רב-כיוונית
ATRASTEMCELL Technologies302-79-4תרבית תאים
bFGFGibco13256029התמיינות רב-כיוונית
BSASigmaV900933חממת תאים אימונופלואורסצנטית
תרמו פישר ScientificHERAcell 240iתרבית תאים
ערכת ספירת תאים-8DojindoCK04התפשטות תאים
צנטריפוגהתרמו פישר מדעיSorvall ™ תרבית תאים MTX-150
DAPISigma10236276001אימונופלואורסצנציה
DMSOSigmaD1435תרבית תאים
FBSGibco10099141תרבית תאים
FITC עכבר אנטי-אנושי IgGBD Biosciencesניתוחזרימה
560952 ציטומטר זרימהתרמו פישר מדעיA24864ניתוח זרימה
מיקרוסקופ פלואורסצנטיתרמו פישר מדעיIM-5ניתוח זרימה
ג'לטיןסיגמא48722התמיינות רב כיוונית
מיקרוסקופLeica LeicaDM500התמיינות רב כיוונית
מדיום LG-DMEM Gibco11-885-084תרבית תאים
קורא מיקרופלייטתרמו פישר סיינטיפיקA51119500Cהתפשטות תאים
אינדוקציה נוירוגניתGibcoA1647801התמיינות רב כיוונית
שמן אדום תמיסת OSigmaO1516התמיינות רב כיוונית
אינדוקציה אוסטאוגניתCyagenHUXXC-90021התמיינות רב כיוונית
ParaformaldehydeSangon Biotech30525-89-4תרבית תאים אימונופלואורסצנטית
פסטרBiosharpBS-XG-03L
PBS (תמיסת מלח חוצצת פוספט)תרבית תאיםSH30256.LSהיקלון
פניצילין סטרפטומיציןתרבית תאיםSV30010 Hyclone
נוגדן ראשוני נגד NSESanta Cruz Biotechnologysc-292097התמיינות
רב-כיווניתSPSS 22.0IBMSPSS 22.0ניתוח סטטיסטי
גיליונות טיפוס התאיםCITOTEST Scientific80346-0910התמיינות רב-כיוונית
TritonX-100Sangon Biotech9002-93-1תרבית תאים אימונופלואורסצנטית
טריפסיןגיבקו25300120
זרימה 560942

מקורות

  1. Zhang, Y., et al. Comparison of the biological characteristics of umbilical cord mesenchymal stem cells derived from the human heterosexual twins. Differentiation. 114, 1-12 (2020).
  2. Yang, Y., et al. Transplantation of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells on a collagen scaffold improves ovarian function in a premature ovarian failure model of mice. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 55 (4), 302-311 (2019).
  3. Sepulveda, R. V., et al. Canine umbilical cord perivascular tissue: A source of stem cells for therapy and research. Research in Veterinary Science. 129, 193-202 (2020).
  4. Ahmed, T. A., Shousha, W. G., Abdo, S. M., Mohamed, I. K., El-Badri, N. Human adipose-derived pericytes: biological characterization and reprogramming into induced pluripotent stem cells. Cellular Physiology and Biochemistry. 54 (2), 271-286 (2020).
  5. Xu, L., et al. Different angiogenic potentials of mesenchymal stem cells derived from umbilical artery, umbilical vein, and Wharton's jelly. Stem Cells International. 2017, 3175748(2017).
  6. Garikipati, V. N. S., et al. Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from human fetus heart. PLoS ONE. 13 (2), -192244(2018).
  7. Simon, L. V., Hashmi, M. F., Bragg, B. N. APGAR Score. StatPearls. , Treasure Island, FL. (2022).
  8. Adler, E. M., Gough, N. R., Blundon, J. A. Differentiation of PC12 cells. Science's STKE. 2006 (351), (2006).
  9. Liang, X., et al. Bisphenol A and several derivatives exert neural toxicity in human neuron-like cells by decreasing neurite length. Food and Chemical Toxicology. 135, 111015(2020).
  10. Salehinejad, P., et al. Comparison of different methods for the isolation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord Wharton's jelly. In Vitro Cellular & Developmental Biology Animal. 48 (2), 75-83 (2012).
  11. Ding, D. C., Chang, Y. H., Shyu, W. C., Lin, S. Z. Human umbilical cord mesenchymal stem cells: a new era for stem cell therapy. Cell Transplant. 24 (3), 339-347 (2015).
  12. Han, Y. F., et al. Optimization of human umbilical cord mesenchymal stem cell isolation and culture methods. Cytotechnology. 65 (5), 819-827 (2013).
  13. Esteves, C. L., et al. Equine mesenchymal stromal cells retain a pericyte-like phenotype. Stem Cells and Development. 26 (13), 964-972 (2017).
  14. Nagamura-Inoue, T., He, H. Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells: Their advantages and potential clinical utility. World Journal of Stem Cells. 6 (2), 195-202 (2014).
  15. Mennan, C., et al. Isolation and characterisation of mesenchymal stem cells from different regions of the human umbilical cord. BioMed Research International. 2013, 916136(2013).
  16. Carvalho, M. M., Teixeira, F. G., Reis, R. L., Sousa, N., Salgado, A. J. Mesenchymal stem cells in the umbilical cord: phenotypic characterization, secretome and applications in central nervous system regenerative medicine. Current Stem Cell Research & Therapy. 6 (3), 221-228 (2011).
  17. Harichandan, A., Sivasubramaniyan, K., Buhring, H. J. Prospective isolation and characterization of human bone marrow-derived MSCs. Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 129, 1-17 (2013).
  18. Zhang, H., et al. Acceleration of fracture healing by overexpression of basic fibroblast growth factor in the mesenchymal stromal cells. STEM CELLS Translational Medicine. 6 (10), 1880-1893 (2017).
  19. Caplan, A. I. New MSC: MSCs as pericytes are Sentinels and gatekeepers. Journal of Orthopaedic Research. 35 (6), 1151-1159 (2017).
  20. Caplan, A. I. MSCs: the sentinel and safe-guards of injury. Journal of Cellular Physiology. 231 (7), 1413-1416 (2016).
  21. Tigges, U., Komatsu, M., Stallcup, W. B. Adventitial pericyte progenitor/mesenchymal stem cells participate in the restenotic response to arterial injury. Journal of Vascular Research. 50 (2), 134-144 (2013).
  22. Herrmann, M., et al. Pericyte plasticity-comparative investigation of the angiogenic and multilineage potential of pericytes from different human tissues. European Cells and Materials. 31, 236-249 (2016).
  23. Ahmed, T. A., El-Badri, N. Pericytes: The role of multipotent stem cells in vascular maintenance and regenerative medicine. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1079, 69-86 (2018).
  24. Greenberg, J. I., et al. A role for VEGF as a negative regulator of pericyte function and vessel maturation. Nature. 456 (7223), 809-813 (2008).
  25. Lin, S. L., et al. Targeting endothelium-pericyte cross talk by inhibiting VEGF receptor signaling attenuates kidney microvascular rarefaction and fibrosis. American Journal of Pathology. 178 (2), 911-923 (2011).
  26. Failla, C. M., Carbo, M., Morea, V. Positive and negative regulation of angiogenesis by soluble vascular endothelial growth factor receptor-1. International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), 1306(2018).
  27. Kim, J. M., et al. Perivascular progenitor cells derived from human embryonic stem cells exhibit functional characteristics of pericytes and improve the retinal vasculature in a rodent model of diabetic retinopathy. STEM CELLS Translational Medicine. 5 (9), 1268-1276 (2016).
  28. Mills, S. J., Cowin, A. J., Kaur, P. Pericytes, mesenchymal stem cells and the wound healing process. Cells. 2 (3), 621-634 (2013).
  29. Dar, A., et al. Multipotent vasculogenic pericytes from human pluripotent stem cells promote recovery of murine ischemic limb. Circulation. 125 (1), 87-99 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תאי גזע של חבל השמשג'לי של וורטוןתאי גזע פרי-וסקולרייםבידוד תאיםתרבית הדבקההפרדה מכניתציטומטריה של זרימהוואקוםדיפרנציאציה רב-קויתרפואה רגנרטיבית

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.