הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

2.2K צפיות

DOI:

10.3791/64284

28 בספטמבר 2022

במאמר זה

סיכום

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

תקציר

פיתוח מודלים ניסיוניים של השתלות לב בבעלי חיים תרם להתקדמות רבה בתחומי האימונולוגיה והשתלות איברים מוצקים. בעוד שמודל השתלת הלב ההטרוטופית של כלי הדם ההמוניים שימש בתחילה במחקרים על דחיית שתלים באמצעות שילובים של זני עכברים מולדים שאינם תואמים, גישה לזנים מהונדסים גנטית ולשיטות טיפוליות יכולה לספק תובנות פרה-קליניות חדשות ועוצמתיות. ביסודו של דבר, המתודולוגיה הכירורגית של טכניקה זו לא השתנתה מאז התפתחותה, במיוחד ביחס לגורמים חשובים כגון טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים, אשר משפיעים באופן מהותי על תחלואה ותמותה לאחר ניתוח. בנוסף, שיפורים בניהול הפריאופרטיבי צפויים לספק שיפורים הן ברווחת בעלי החיים והן בתוצאות הניסויים. מאמר זה מדווח על פרוטוקול שפותח בשיתוף פעולה עם מומחה בתחום ההרדמה הווטרינרית ומתאר את הטכניקה הכירורגית בדגש על ניהול פריאופרטיבי. בנוסף, אנו דנים בהשלכות של חידודים אלה ומספקים פרטים על פתרון בעיות בשלבים כירורגיים קריטיים עבור הליך זה.

מבוא

אנו חייבים חלק גדול מהבנתנו באימונולוגיה ובהשתלות למחקר המבוסס על מודלים ניסיוניים של השתלת איברים מוצקים בבעלי חיים. מאז התיאור הראשון של השתלת לב וסקולרית ביונקים1, מודלים כאלה תרמו לידע בתחומים רחבים, כולל היישום הטיפולי של היפותרמיה2, היתרונות של שימוש בתפרים מיוחדים3, וטכניקותלהשתלות ריאה ולב 4. פיתוח מודלים להשתלות לב בחולדות 5,6 סיפק טווח רחב יותר לניסויים אימונולוגיים בשל זמינותם של קווי רבייה שונים. הטווח הרחב משמעותית של זני עכברים מוטנטיים ומוטנטיים זמינים הוביל את Corry et al.7 לפ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה בוצע בהתאם לקוד העיסוק לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות15 ואושר תחת פרוטוקולים אתיקה של בעלי חיים RA/3/100/1568 ו-AE173 (ועדת האתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת מערב אוסטרליה וועדת האתיקה של בעלי חיים במכון הארי פרקינס למחקר רפואי, בהתאמה). עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים על כל החומרים, המכשירים ובעלי החיים המשמשים בפרוטוקול זה.

1. הכנת החיה לניתוח

הערה: הצוות מוקדש לתפקיד של ביצוע ניתוח או מעקב אחר הרדמה לאורך כל ההליך.

  1. עבור שיכוך כאבים לפני הניתוח, לתת מינון של buprenorphine (0.05-0.1 מ"ג / ק"ג, מדולל ל 0.03 מ"ג / מ"ל עם נתרן כלורי 0.....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי לקבוע את יעילות הטכניקה הכירורגית בקידום תוצאות טובות של ריפוי פצעים והתאוששות עכבר, ניסויים מוקדמים במעבדה קבעו את מאפייני ההישרדות של מגוון שתלי לב בעלי אימונוגניות משתנה לנמען. אלה כללו שתלים קונגניים (n = 5) וסינגנים (n = 5), החולקים את אותם סמנים מורכבים היסטו-תאימות עיקריים (MHC) כמו הנמען, ושתלים אי-התאמה עיקריים (n = 9), שבהם לשתל ולמקבל יש סמני MHC שונים. השתמשנו במישוש ישיר של פעימות הלב ההטרוטופיות של הבטן כדי להעריך את תפקוד השתל המתמשך ואת כדאיותו, המשמש כסמן פרוקסי של דחייה לעומת סבילות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מודל השתלת הלב האורתוטופית של מורין הוא מודל פרה-קליני חזק המשמש בעיקר לחקר ההשפעות של חוסר התאמה MHC על רמת ואופי הדחייה החיסונית, ולאחרונה, השפעת ההשתלה על שימור חסינות תושב רקמת השתל16. בתחילה עקבנו מקרוב אחר פרוטוקול Corry et al.7 , אך שיפרנו את הפרוטוקול כך שישלב סטנדרטים של שיטות עבודה מומלצות של טכניקה אספטית, שיכוך כאבים והרדמה. עדכון שיטות עבודה חדשות אלה הושג באמצעות הכשרה נוספת, אספקת כפפות כירורגיות סטריליות, חלוקים ווילונות כירורגיים, יישום הרדמה נוספת ועדכון מ.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

המחברים מבקשים להודות על המאמצים המעולים של צוות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת מערב אוסטרליה ושל מכון הארי פרקינס למחקר רפואי, שמסירותם ומומחיותם תרמו להיתכנות ולהצלחה של ניתוחים אלה.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2030 צינורית השקיה Rycroft 30 GMcFarlane56005HU
משי כירורגי קלוע 7-0
מהדק בולדוג מעוקל - 35 מ"מ רובוזRS-7441-5
בופיבקאין 0.25% 
בופרנורפין
Castroviejo מחזיק מחט לתפוס מעוקל -  145 מ"מHaag-Streit11.62.15
תמיסת כלורהקסידין 5%אבוסJJ61371
אפליקטור עם קצה כותנה - 7.5 ס"מיונהSN109510
אתנול 70% תמיסתEbosWH130192EE
גזה 5 x 5 ס"מ לבןAeroAGS50
Gelfoam 80 מ"מ x 125 מ"מ פייזר7481D
קוצץ שיערWahl9860L
הפרין 1,000 יחב"ל ב -1 מ"ל
איריס מספריים SuperCut ישר - 11.5 ס"מ   אינקה כירורגית 11550.11
אידוי איזופלורןDarvall9176
מהדק מיקרו בולדוג - 3.7 ס"מGreman14119-G
מספריים מיקרו מעוקלים 105 מ"מ 
סרט כירורגי מנייר רגיל Micropore - רוחב 2.5 ס"מEbos7810L
מספריים מיקרוכירורגיים - קצה
תפר פוליפרולן מונופילמנט - 5/0SurgiproP-205-X
Myweigh i101 משקל דיוק 100 גרם x 0.005 גרםMyweighKit00053
מחט - 30 גרם x 0.5 אינץ'BDBD304000
מחזיק מחט 15 ס"מ מעוקל "סופר עדין"מומחים כירורגייםST-B-15-8.2
נילן 10/0 x 15 ס"מ על 3.8 מ"מ 3/8 עיגול גוף עגול מתחדד (קוטר 0.07 מ"מ) CV300
מלקחיים עגולים לתפר גוף מעוקל 0.3 מ"מ 120 מ"מB. בראוןFD281R
מלקחיים עגולים לתפר גוף ישר 0.3 מ"מ 120 מ"מB. בראוןFD280R
מספריים קפיציים עם ידית עגולה-str/12.5 ס"מ15400-12
מספריים קפיציים-להבי Cvd Sm15001-08
מיקרוסקופ
- מזרק592696BD
1 מ"ל - 3 מ"לLeicaM651
מלקחיים עם שינייםBD309657
אוניברסיטת ויסקונסין
כרית חימום אינפרא אדום רחוק 20 x 25 ס"מ
Yasargil קליפ אפליקציה כידוןAesculapFE582K
Yasargil טיטניום קליפ סלסול 6.6 מ"מAesculapA19FT222T
<חזק>שימוש בעכבר
<חזק>מתח/מין/משקל<חזק>תורם<חזק>מתכון
BALB/c, נקבה, 19-23 גרם721
C57BL/6, נקבה, 17-20 גרם7
CD45.1 BALB/c, נקבה, 17-21 גרם5
מכשיר מעוקלמספריים Stevens ישרים קהים 110 מ"מ לוח אחורי כירורגי קרטון למינציה קשיח. 15 x 15 ס"מ וילונות כירורגיים חתוכים לשני גדלים. 25 ס"מ על 25 ס"מ, ו-25 ס"מ על 40 ס"מ מזרק כירורגי כרית חימום תמיסות מספריים קפיציים של Westcott

מקורות

  1. Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. Transplantation of the intact mammalian heart. Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).
  2. Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. Complete homologous heart transplantation. A.M.A. Archives of Surgery.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות