הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

יצירת חולדות היפופאראתירואידיום באמצעות כריתת בלוטת התריס בסיוע פחמן ננו-חלקיקים

2.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64611

⸱

14 ביולי 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Oral Diseases, National Clinical Research Center for Oral Diseases, Department of Cariology and Endodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, 2State Key Laboratory of Oral Diseases, National Clinical Research Center for Oral Diseases, Department of Orthognathic and TMJ Surgery, West China Hospital of Stomatology, 3Guangdong Province Key Laboratory of Stomatology, Hospital of Stomatology, Guanghua School of Stomatology, Sun Yat-Sen University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מודל בבעלי חיים של היפופאראתירואידיזם נרכש (HypoPT) חיוני להבנת האופן שבו HypoPT משפיע על הומאוסטזיס של יונים מינרליים ולאימות היעילות של טיפולים חדשניים. כאן, מוצגת טכניקה ליצירת מודל חולדה היפופאראתירואידיזם נרכש (AHypoPT) על ידי כריתת בלוטת התריס (PTX) באמצעות ננו-חלקיקי פחמן.

תקציר

היפופאראתירואידיזם (HypoPT) היא מחלה נדירה המערבת את בלוטות יותרת התריס המאופיינת בהפרשה או עוצמה מופחתת של הורמון יותרת התריס (PTH), מה שמוביל לרמות זרחן גבוהות בסרום ולרמות סידן נמוכות בסרום. היפופט נובע לרוב מנזק מקרי לבלוטות או הסרתן במהלך בלוטת התריס או ניתוח צוואר קדמי אחר. ניתוחי בלוטת התריס הפכו נפוצים יותר בשנים האחרונות, עם עלייה מקבילה בהופעת היפופט כסיבוך לאחר הניתוח. יש צורך קריטי במודל בעלי חיים של HypoPT כדי להבין טוב יותר את המנגנונים העומדים בבסיס ההשפעות של HypoPT על הומאוסטזיס יונים מינרליים ולאמת את היעילות הטיפולית של טיפולים חדשניים. כאן, דווח על טכניקה ליצירת HypoPT נרכש בחולדות זכרים על ידי ביצוע כריתת בלוטת התריס (PTX) באמצעות ננו-חלקיקי פחמן. מודל החולדות מראה הבטחה גדולה על פני מודלים עכבריים של היפופאראתירואידיזם. חשוב לציין שלאזור הקישור של קולטן PTH האנושי יש דמיון של 84.2% ברצף עם זה של החולדה, שהוא גבוה יותר מהדמיון של 73.7% המשותף לעכברים. יתר על כן, ההשפעות של אסטרוגן, אשר יכול להשפיע על מסלול איתות קולטן PTH/PTHrP, לא נחקרו במלואן בחולדות זכרים. ננו-חלקיקי פחמן הם נותבי לימפה המכתימים את בלוטות הלימפה של בלוטת התריס בשחור מבלי להשפיע על תפקודן, אך הם אינם מכתימים את בלוטות יותרת התריס, מה שמקל על זיהויים והסרתם. במחקר זה, רמות PTH בסרום היו בלתי ניתנות לגילוי לאחר PTX, וזה הביא היפוקלצמיה משמעותית היפרפוספטמיה. לפיכך, המצב הקליני של HypoPT לאחר הניתוח יכול להיות מיוצג להפליא במודל חולדה. PTX בסיוע פחמן ננו-חלקיקים יכול, אם כן, לשמש כמודל יעיל במיוחד וקל ליישום לחקר הפתוגנזה, הטיפול והפרוגנוזה של HypoPT.

מבוא

הורמון יותרת התריס (PTH) מופרש על ידי בלוטות יותרת התריס. זהו אפנן עיקרי של מאזן הסידן, שומר על מטבוליזם פוספט, ומשתתף בתחלופת עצם 1,2. היפופאראתירואידיזם (HypoPT) מתבטא בירידה בהפרשה או אובדן תפקודי של PTH. זוהי הפרעה אנדוקרינית נדירה, עם שכיחות של כ 9-37 לכל 100,000 שנות אדם 3,4,5. HypoPT מאופיין בירידה ברמות PTH בסרום ובסידן המלווה בעלייה בזרחן בסרום 6,7. HypoPT מסווג על פי הגורם לו: היפופאראתירואידיזם נרכש (AHypoPT) או היפופאראתירואידיזם אידיופתי (IHypoPT)8. AHypoPT נפוץ יותר בפרקטיקה הקלינית; כ-75% ממקרי AHypoPT נגרמים כתוצאה מכריתה או פציעה בשוגג של בלוטות יותרת התריס במהלך ניתוחי בלוטת התריס או ניתוחי ראש וצוואר אחרים. סיבות אחרות כוללות הקרנות וכימותרפיה לגידולי ראש וצוואר ורעילות תרופות 1,8. שיטות אבחון משודרגות ועלייה בבדיקות סקר למחלות הקשורות לבלוטת התריס הגדילו את מספר הפעולות הכירורגיות של בלוטת התריס. זה הוביל לעלייה מקבילה בסיבוכים הקשורים בלוטת יותרת התריס 9,10.

יש צורך במודלים בעלי חיים מבוססים בקלות עם מאפיינים יציבים כדי לחקור טוב יותר את AHypoPT ולאמת את היעילות הטיפולית של טיפולים חדשניים. כריתת בלוטת התריס (PTX) המבוצעת על חולדות ועכברים דווחה במחקרים קודמים 6,11; עם זאת, בשל גודלן הקטן מאוד של בלוטות יותרת התריס והשונות בפיזורן האנטומי, אחוזי ההצלחה נמוכים יחסית בפועל. לכן, thyro-parathyroidectomy (TPTX) (כלומר, הסרה מוחלטת של בלוטת התריס ואת בלוטות יותרת התריס) מבוצעת בדרך כלל כדי להבטיח את כריתה של בלוטות יותרת התריס12. עם זאת, רמות התירוקסין הנמוכות כתוצאה מכך עלולות לסבך מחקרים עם מודל בעלי חיים זה13. מודלים של HypoPT שהוקמו בשיטות אחרות, כגון גירוי תרופות ועריכת גנים, אינם יכולים לייצג כראוי את הפתוגנזה הנפוצה ביותר של AHypoPT. הקבוצה שלנו השתמשה בעבר במודלים של עכברי נוקאאוט כדי לתייג את בלוטות יותרת התריס ולאפשר הסרה של בלוטות יותרת התריס מבלי לפגוע בבלוטות התריס ובמבנים האנטומיים שמסביב14,15. עם זאת, שיטה זו משתמשת במודלים של עכברים טרנסגניים, הדורשים זמן התפתחות ארוך יותר בשל דרישות ההזדווגות והרבייה.

לכן, שאפנו להקים מודל שנוצר בקלות של AHypoPT. מחקר זה מתאר מודל חולדות עבור PTX באמצעות תיוג ננו-חלקיקי פחמן. תרחיף ננו-חלקיקי פחמן של 50 מ"ג/מ"ל, המשמש בדרך כלל בניתוחי בלוטת התריס, מתחלק באופן שווה בבלוטות התריס לאחר הזרקה מקומית16. בלוטות התריס הופכות שחורות, אך בלוטות יותרת התריס נותרות ללא כתמים17, ובכך מבדילות בבירור את בלוטות יותרת התריס מבלוטות התריס ומאפשרות לבצע את PTX מבלי להשפיע על בלוטות התריס. שיטה זו מתאימה לחולדות בגילאים שונים. הזרקת תרחיף ננו-חלקיקי הפחמן בטוחה ויש לה השפעה זניחה על תפקוד בלוטת התריס18. מודל החולדות PTX עם תווית ננו-חלקיקי פחמן שנוצר במחקר זה הראה פנוטיפים משמעותיים של היפוקלצמיה והיפרפוספטמיה במהלך תקופת התצפית בת 4 השבועות. לפיכך, מודל AHypoPT זה קל להקים ויש לו פנוטיפ לשחזור.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדת המפתח הממלכתית למחלות אוראליות, אוניברסיטת סצ'ואן. התקבל אישור מסוכנויות מקומיות רלוונטיות לפני הניסוי. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בשמונה חולדות Sprague-Dawley (SD) זכרים בני 8-10 שבועות, במשקל ממוצע של 200-250 גרם. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). מזון ומים סופקו עד לליביטום , לאורך כל תקופת הניסוי.

1. הכנה טרום ניתוחית ליצירת חולדות PTX בסיוע פחמן ננו-חלקיקי

  1. הרדימו חולדות בנות 8-10 שבועות באמצעות שאיפת איזופלורן של 2.0%-2.5%, ולאחר מכן הזרקה תוך-צפקית (כלומר של טריברומואתנול) במשקל גוף של 10 מ"ל/ק"ג. להבטיח עומק מספיק של הרדמה על ידי בדיקת היעדר רפלקס האור אישונים. יש להשתמש במשחה וטרינרית על העיניים כדי למנוע יובש בזמן הרדמה.
    הערה: חולדות בנות 8-10 שבועות מוכרות כחולדות בוגרות. עם זאת, שיטת דוגמנות זו יכולה לשמש על חולדות צעירות כמו 7 ימים.
  2. הכינו את חולדות SD המורדמות לניתוח על ידי גילוח הפרווה של אזור הצוואר הגחוני במצב שכיבה. יש לחטא את אזור הניתוח באמצעות כדורי צמר גפן פובידון-יוד (ראו טבלת חומרים).
  3. כסו את בעל החיים בווילונות כירורגיים (ראו טבלת חומרים), וחשפו את אזור הניתוח, במטרה למזער זיהום מיקרוביאלי.

2. כריתת בלוטת התריס (PTX)

  1. מתחילים בנקודת האמצע בין שתי האוזניים, וחותכים חתך אורכי של 2 ס"מ לכיוון הזנב באמצעות אזמל כירורגי. נתחו את הפאשיה ואת שכבת השומן ברצף בעזרת מלקחיים חדים, מעוקלים ומשוננים.
  2. הפרידו את השרירים הפארא-טרכאליים, וחשפו את קנה הנשימה באמצעות מלקחיים קהים יחסית תחת מיקרוסקופ סטריאופוני בהגדלה של פי 4-5.
  3. אתר את האונות השמאלית והימנית של בלוטות התריס בצורת פרפר לצד קנה הנשימה.
  4. יש להזריק 1 μL של תרחיף ננו-חלקיקי פחמן (ראה טבלת חומרים) מתחת לקרום בלוטות התריס באמצעות מזרק 10 μL עם מחט משופעת 30 גרם. לאחר 5 דקות, השקו את האזור הניתוחי במי מלח כדי לנקות את תרחיף ננו-חלקיקי הפחמן הנוסף המכסה את קרום בלוטת התריס.
    הערה: נקודת ההזרקה המומלצת היא החלק המזיאלי של אונת בלוטת התריס, שבו יש פחות כלי דם. תרחיף ננו-חלקיקי פחמן נפוץ בניתוחי בלוטת התריס בשל יכולתו לזהות את בלוטות הלימפה. צביעת בלוטות התריס והשארת בלוטות יותרת התריס ללא כתמים מקלה על זיהויים של האחרונים.
  5. בדוק כדי לוודא כי בלוטות התריס להפוך שחור בעוד בלוטות יותרת התריס להישאר מוכתמים ~ 5 דקות. התבונן בבלוטות יותרת התריס המודגשות תחת אור רגיל באמצעות אור של מיקרוסקופ סטריאו או מנורת שולחן.
    הערה: בדרך כלל, למכרסמים יש שתי בלוטות יותרת התריס בצורת טיפה הממוקמות על פני השטח השמאלי והימני של בלוטות התריס. לעיתים, בלוטות יותרת התריס נוספות עשויות להיות ממוקמות רחוק יותר.
  6. חותכים במדויק את בלוטות יותרת התריס לא מוכתמות עם מלקחיים מיקרו-כירורגיים ומספריים. השתמש כדורי צמר גפן סטרילי עבור hemostasis או ספוג ג 'לטין אם יש יותר דימום.
  7. סגרו את השרירים, שכבות השומן והעור, שכבה אחר שכבה, בתפר מזרן אופקי קטוע באמצעות 6-0 תפרים פוליגלקטין 910 (ראו טבלת חומרים).
  8. עבור קבוצת דמה, בצע את כל השלבים של ההכנה הטרום ניתוחית ו- PTX למעט שלב 2.6. מרדימים את החולדות, ומפרידים את הרקמות מעל קנה הנשימה. אתר את בלוטות יותרת התריס אך אל תסיר אותן. לבצע התאוששות לאחר הניתוח ותצפית יחד עם חולדות של קבוצת PTX.

3. התאוששות לאחר הניתוח ותצפית

  1. לאחר הניתוח, הניחו את החולדות על שמיכה חשמלית תרמוסטטית (37°C) כדי לשמור על חום גופם. להזריק buprenorphine hydrochloride 0.01 מ"ג / ק"ג תת עורית (s.c) כל 12 שעות כמו שיכוך כאבים לאחר הניתוח. מעבירים את החולדות לכלוב סטרילי כשהן מתחילות לזוז ומנסות לזחול.
  2. התבוננו מקרוב בחולדות לאחר הניתוח במשך שעתיים. החזירו את החולדות לחדר הגידול, צפו בהן באופן שגרתי ותיעדו את מצבן.
  3. יש לשאוב 10 מיקרוליטר דם מווריד הזנב 7 ימים לאחר הניתוח. מדדו את הסרום Ca+2, סרום Pi וסרום PTH באמצעות ערכות מסחריות מתאימות (ראו טבלת חומרים). כריתת בלוטת התריס מוצלחת מייצרת נסיוב מופחת Ca2+ מיונן רמה 2 SD נמוך מזה של חולדות המופעלות על ידי דמה (9.00 mmol / L, n = 16).
    הערה: תוכנת סטטיסטיקה וגרפים (ראה טבלת חומרים) שימשה לניתוח סטטיסטי. מבחן t של סטודנט שימש להשוואת הפרמטרים של הסרום והשתן בין קבוצות הדמה וה- PTX. P < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית. בסרום ובשתן Ca2+ ו-Pi וסרום אוריאה וקריאטינין נמדדו בערכות מסחריות בהתאם להוראות היצרן (ראו טבלת חומרים). סרום C-telopeptide של קולגן מסוג I ואוסטיאוקלצין נמדדו עם ערכות ELISA זמינות מסחרית (ראה טבלת חומרים).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

המיקום והמספר של בלוטות יותרת התריס נצפו בתחילה בחולדות תחת מיקרוסקופ דיסקציה. לפני הזרקת ננו-חלקיקי הפחמן, בלוטות התריס היו בצבע אדום שקוף, ובלוטות יותרת התריס כמעט ולא ניתן היה להבחין במיקרוסקופ (איור 1A). לאחר הזרקת הננו-חלקיקים, בלוטות התריס היו מוכתמות בשחור, בעוד שבלוטות יותרת התריס נותרו ללא כתמים (איור 1B). הדיסקציה הזהירה של בלוטות יותרת התריס הבהירות הותירה את בלוטות התריס ללא פגע (איור 1C). בדרך כלל, בלוטות יותרת התריס הי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

דוחות אפידמיולוגיים מצביעים על כך שאיתור מחלות בלוטת התריס גדל באופן משמעותי, ומספר הניתוחים הקשורים שבוצעו גדל בהתאם19,20. שיעור ההיארעות של היפופאראתירואידיזם לאחר ניתוח הוא כ 7.6%8,21, בעוד התחלואה המוגברת של היפופאראתירואידיזם נרכש גרמה למחלה נדירה זו לזכות בתשומת לב מחקרית רבה יותר. לכן, חשוב במיוחד לבסס מודל מתאים של בעלי חיים כדי לחקור את הפתוגנזה של המחלה, כמו גם לבחון את התוצאות של טיפולים טיפולי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי 81800928 מענק NSFC, מימון מחקר מבית הספר / בית החולים לסטומטולוגיה במערב סין אוניברסיטת סצ'ואן (מס 'RCDWJS2021-1), ומענק המימון הפתוח של מעבדת מפתח המדינה למחלות פה SKLOD-R013.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.9% תמיסת נתרן כלוריKelun Co. סצ'ואן, סין
10 ומיקרו; מזרק L 30G NanoFilWPI
6-0 פוליגלקטין 910 תפר עם מחטEthicon, IncJ510G
סידן LiquiColor מבחןEKF0155-225לניתוח Ca2+
הזרקת ננו-חלקיקי פחמן הזרקת השעיהLummy, צ'ונגצ'ינג, סיןH200732461 מ"ל: 50 מ"ג
ערכת בדיקת קריאטינין (Cr) (סרקוזין אוקסידאז) )Jiancheng, נאנג'ינג, סיןC011-2-1לניתוח קריאטינין
אזמל חד פעמיShinva, סין
Dumstar ביולוגיה מלקחייםShinva, סין
מספריים קפיציים מיקרו ניתוחישינבה, סין
MicroVue Rat שלם PTH ELISAImmunotopics30-2531למדידת PTH בסרום
חולדותמחזיק מחטShinva, סין
זרחן Liqui-UV מבחןEKF0830-125לניתוח Pi
גזהרובד Weian Co. Henan, סין
Povidone-IodineYongan Co.Ltd. צ'נגדו, סין
פריזמה 9.0 (תוכנת סטטיסטיקה וגרפים)GraphPad Software, Inc., סן דייגו, קליפורניה, ארה"בhttps://www.graphpad.com/scientific-software/prism/
עכברוש C-telopeptide של קולגן מסוג I (CTX-I) ELISA KITCUSABIO, ווהאן, סיןCSB-E12776rלניתוח CTX-I
חולדה אוסטאוקלצין/חלבון Gla בעצם (OT/BGP) ELISA KITCUSABIO, ווהאן, סיןCSB-E05129rלניתוח אוסטאוקלצין
בטיחות סכיני גילוח קצה יחידסכיני גילוח אמריקאים66-0089
Sprague-Dawleyבנות 8 עד 10 שבועות
וילונות חתך כירורגייםLiangyou Co. סצ'ואן, סין
ערכת בדיקת אוריאהJiancheng, נאנג'ינג, סיןC013-2-1לניתוח אוריאה
חולדות

מקורות

  1. Bilezikian, J. P., et al. Hypoparathyroidism in the adult: Epidemiology, diagnosis, pathophysiology, target-organ involvement, treatment, and challenges for future research. Journal of Bone and Mineral Research. 26 (10), 2317-2337 (2011).
  2. Bilezikian, J. P. Hypoparathyroidism. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 105 (6), 1722-1736 (2020).
  3. Underbjerg, L., Sikjaer, T., Mosekilde, L., Rejnmark, L. Postsurgical hypoparathyroidism-Risk of fractures, psychiatric diseases, cancer, cataract, and infections. Journal of Bone and Mineral Research. 29 (11), 2504-2510 (2014).
  4. Underbjerg, L., Sikjaer, T., Mosekilde, L., Rejnmark, L. The epidemiology of nonsurgical hypoparathyroidism in Denmark: A nationwide case finding study. Journal of Bone and Mineral Research. 30 (9), 1738-1744 (2015).
  5. Astor, M. C., et al. Epidemiology and health-related quality of life in hypoparathyroidism in Norway. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 101 (8), 3045-3053 (2016).
  6. Rodriguez-Ortiz, M. E., et al. Calcium deficiency reduces circulating levels of FGF23. Journal of the American Society of Nephrology. 23 (7), 1190-1197 (2012).
  7. Davies, B. M., Gordon, A. H., Mussett, M. V. A plasma calcium assay for parathyroid hormone, using parathyroidectomized rats. The Journal of Physiology. 125 (2), 383-395 (1954).
  8. Clarke, B. L., et al. Epidemiology and diagnosis of hypoparathyroidism. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 101 (6), 2284-2299 (2016).
  9. Liu, Y., Shan, Z. Expert consensus on diagnosis and treatment for elderly with thyroid diseases in China. Aging Medicine. 4 (2), 70-92 (2021).
  10. Sulejmanovic, M., Cickusic, A. J., Salkic, S., Bousbija, F. M. Annual incidence of thyroid disease in patients who first time visit department for thyroid diseases in Tuzla Canton. Materia Socio-Medica. 31 (2), 130-134 (2019).
  11. Liao, H. W., et al. Relationship between fibroblast growth factor 23 and biochemical and bone histomorphometric alterations in a chronic kidney disease rat model undergoing parathyroidectomy. PloS One. 10 (7), 0133278(2015).
  12. Russell, P. S., Gittes, R. F. Parathyroid transplants in rats: A comparison of their survival time with that of skin grafts. The Journal of Experimental Medicine. 109 (6), 571-588 (1959).
  13. Sakai, A., et al. Osteoclast development in immobilized bone is suppressed by parathyroidectomy in mice. Journal of Bone and Mineral Metabolism. 23 (1), 8-14 (2005).
  14. Bi, R., Fan, Y., Luo, E., Yuan, Q., Mannstadt, M. Two techniques to create hypoparathyroid mice: parathyroidectomy using GFP glands and diphtheria-toxin-mediated parathyroid ablation. Journal of Visualized Experiments. (121), e55010(2017).
  15. Bi, R., et al. Diphtheria toxin- and GFP-based mouse models of acquired hypoparathyroidism and treatment with a long-acting parathyroid hormone analog. Journal of Bone and Mineral Research. 31 (5), 975-984 (2016).
  16. Huang, Y., et al. Carbon nanoparticles suspension injection for photothermal therapy of xenografted human thyroid carcinoma in vivo. MedComm. 1 (2), 202-210 (2020).
  17. Zhang, R. J., Chen, Y. L., Deng, X., Yang, H. Carbon nanoparticles for thyroidectomy and central lymph node dissection for thyroid cancer. The American Surgeon. , (2022).
  18. Long, M., et al. A carbon nanoparticle lymphatic tracer protected parathyroid glands during radical thyroidectomy for papillary thyroid non-microcarcinoma. Surgical Innovation. 24 (1), 29-34 (2017).
  19. Li, Y., et al. Efficacy and safety of long-term universal salt iodization on thyroid disorders: Epidemiological evidence from 31 provinces of mainland China. Thyroid. 30 (4), 568-579 (2020).
  20. Powers, J., Joy, K., Ruscio, A., Lagast, H. Prevalence and incidence of hypoparathyroidism in the United States using a large claims database. Journal of Bone and Mineral Research. 28 (12), 2570-2576 (2013).
  21. Zihao, N., et al. Promotion of allogeneic parathyroid cell transplantation in rats with hypoparathyroidism. Gland Surgery. 10 (12), 3403-3414 (2021).
  22. Goncu, B., et al. Xenotransplantation of microencapsulated parathyroid cells as a potential treatment for autoimmune-related hypoparathyroidism. Experimental and Clinical Transplantation. , (2021).
  23. Jung, S. Y., et al. Standardization of a physiologic hypoparathyroidism animal model. PLoS One. 11 (10), 0163911(2016).
  24. Chen, W., Lv, Y., Xie, R., Xu, D., Yu, J. Application of lymphatic mapping to recognize and protect parathyroid in thyroid carcinoma surgery by using carbon nanoparticles. Journal of Clinical Otorhinolaryngology, Head, and Neck Surgery. 28 (24), 1918-1920 (1924).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

יצירת חולדות היפופאראתירואידיום באמצעות כריתת בלוטת התריס בסיוע פחמן ננו-חלקיקים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.