פרוטוקול זה מתאר השתלה אורתוטופית של תאים סרטניים שמקורם בחולה בדופן הצקום של עכברים מדוכאי חיסון. המודל משחזר מחלה גרורתית מתקדמת של סרטן המעי הגס והחלחולת ומאפשר הערכה של תרופות טיפוליות חדשות בתרחיש רלוונטי קלינית של גרורות ריאה וכבד.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
השתלה אורתוטופית של תאים סרטניים שמקורם בחולה בעכברים משחזרת סרטן מעי גס מתקדם
במאמר זה
סיכום
תקציר
במהלך העשור האחרון, מודלים פרה-קליניים יותר של סרטן המעי הגס (CRC) הוקמו באמצעות תאי סרטן שמקורם בחולים וגידולים תלת-ממדיים. מכיוון שאורגנואידים סרטניים שמקורם בחולים יכולים לשמור על המאפיינים של הגידול המקורי, מודלים פרה-קליניים אמינים אלה מאפשרים בדיקת תרופות לסרטן וחקר מנגנוני עמידות לתרופות. עם זאת, מוות הקשור ל- CRC בחולים קשור בעיקר לנוכחות של מחלה גרורתית. לכן חיוני להעריך את יעילותם של טיפולים אנטי-סרטניים במודלים רלוונטיים in vivo שבאמת משחזרים את התכונות המולקולריות העיקריות של גרורות סרטניות בבני אדם. הקמנו מודל אורתוטופי המבוסס על הזרקת תאים סרטניים שמקורם בחולי CRC ישירות לתוך דופן הצקום של עכברים. תאי גידול אלה מפתחים גידולים ראשוניים בצקום ששולחים גרורות לכבד ולריאות, דבר שנצפה לעתים קרובות בחולים עם CRC מתקדם. מודל עכבר CRC זה יכול לשמש להערכת תגובות תרופתיות המנוטרות על ידי טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (μCT), שיטת הדמיה בקנה מידה קטן רלוונטית מבחינה קלינית שיכולה לזהות בקלות גידולים ראשוניים או גרורות בחולים. כאן, אנו מתארים את ההליך הכירורגי ואת המתודולוגיה הנדרשת להשתלת תאים סרטניים שמקורם בחולה בדופן הצקום של עכברים מדוכאי חיסון.
מבוא
סרטן המעי הגס והחלחולת (CRC) הוא הגורם השני למוות מסרטן ברחבי העולם1. היכולת ליצור מודלים של גידול in vitro או in vivo הנגזרים מתאי גידול בודדים של מטופל היא בעלת רפואה מדויקת מתקדמת באונקולוגיה. במהלך העשור האחרון, אורגנואידים שמקורם בחולים (PDOs) או xenografts (PDXs) שימשו קבוצות מחקר רבות ברחבי העולם2. PDOs הם מבנים רב-תאיים במבחנה הדומים לתכונות של רקמת הגידול המקורית ויכולים לארגן את עצמם ולחדש את עצמם3. מודלים מבטיחים אלה במבחנה יכולים לשמש בהצלחה לסינון תרופות ולהקל על מחקר תרגומי. בצד השני, מודלים של PDX משחזרים נאמנה את ה-CRC המקור....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
התקבלה הסכמה מדעת בכתב מכל המטופלים. הפרויקט אושר על ידי ועדת האתיקה למחקר של בית החולים האוניברסיטאי Vall d'Hebron, ברצלונה, ספרד (אישור ID: PR(IR)79/2009 PR(AG)114/2014, PR(AG)18/2018). דגימות רקמת המעי הגס האנושי כללו ביופסיות מאזורים לא נמקיים של אדנוקרצינומה ראשונית או גרורות בכבד, המתאימות לחולים עם סרטן המעי הגס והחלחולת שעברו כריתת גידול. הניסויים נערכו בהתאם לדירקטיבה לטיפול בבעלי חיים של האיחוד האירופי (86/609/EEC) ואושרו על ידי הוועדה האתית לניסויים בבעלי חיים של מכון המחקר VHIR-the Vall d'Hebron (ID: 40/08 CEEA, 47/08/10 CEEA ו- 12/18 CEEA).
הערה: נקבה NOD-SCID (הנהון. עכברי CB17-Prkdcscid/NcrCrl) מגיל 8 שבועות נרכשו ממעבדות נהר....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
עכברים שהושתלו בהם תאים סרטניים שמקורם בחולה נוטרו מדי שבוע על ידי סריקת μCT. בתום הניסוי הומתו בעלי החיים. מעיים, צקה (איור 1A,B), כבד, ריאות וכל נגע אפשרי אחר נאספו, נכללו בקלטת ותוקנו עם 4% פורמלין במהלך הלילה. רקמת מעי של עכבר ללא גידול בצקום שימשה כבקרה (איור 1C). לבסוף, קלטות שונו ל 70% אתנול לפחות 3 שעות פרפין מוטבע. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E) מצקה, כבד וריאות בוצעה באמצעות פרוטוקולים סטנדרטיים של מתקן היסטופתולוגי לזיהוי תאי גידו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במהלך העשורים האחרונים, טיפולים אנטי-סרטניים חדשים רבים פותחו ונבדקו בחולים עם סוגי גידולים שונים, כולל סרטן המעי הגס (CRC). למרות שתוצאות מבטיחות במודלים פרה-קליניים נצפו במקרים רבים, היעילות הטיפולית בחולים עם CRC גרורתי מתקדם הייתה מוגבלת לעתים קרובות. לכן, יש צורך דחוף במודלים פרה-קליניים המאפשרים לבחון את יעילותן של תרופות טיפוליות חדשות בתרחיש גרורתי רלוונטי מבחינה קלינית.
כתב היד מתאר בפירוט מודל מתקדם של CRC אורתוטופי PDX המבוסס על השתלת תאי גידול של חולים בדופן הצקום של עכברים מדוכאי .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
אנו מודים לקרן Cellex, לרשת CIBERONC ולמכון סאלוד קרלוס השלישי על תמיכתם. יתר על כן, אנו מודים גם לפלטפורמת הדימות הפרה-קלינית במכון המחקר Vall d'Hebron (VHIR), שם בוצעו הניסויים.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| REAGENT | |||
| Apo-Transferrin | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | T1147-500MG | |
| B27 תוסף | חיים טכנולוגיות S.A (ספרד) | 17504044 | |
| תמיסה מימית כלורהקסידין 2% | חומר DH MÉ DICO, S.L. | ||
| קולגנז | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | C0130-500 מ"ג | |
| D-(+)-גלוקוז | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | G6152 | |
| DMEM /F12 | לייף טכנולוג'יז ס.א. | 21331-020 | |
| DNase I | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | D4263-5VL | |
| EGF | PEPRO TECH EC בע"מ | AF-100-15-500 ומיקרו; g | |
| FGF בסיסי | PEPRO TECH EC LTD. | 100-18B | |
| Fungizone | Life Technologies S.A (ספרד) | 15290026 | |
| Gentamycin | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| מלח נתרן הפרין | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | H4784-250MG | |
| אינסולין | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | I9278-5ML | |
| איזופלורן | |||
| - | - | ||
| Kanamycin | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| L-גלוטמין | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| מטריג'ל מטריקס | CULTEK, S.L.U. | 356235/356234/354234 | |
| Metacam, 5 מ"ג/מ"ל | - | ||
| חומצות אמינו לא חיוניות | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Nystatin | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | N4014-50MG | |
| Pen/Strep | Life Technologies S.A (ספרד) | 15140122 | |
| תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), Labclinics סטרילית | S.A | L0615-500 | |
| פרוגסטרון | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | P0130-25G | |
| פוטרסין | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | P5780-5G | |
| RBC מאגר ליזה | Labclinics S.A | 00-4333-57 | |
| נתרן פירובט | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| נתרן סלניט | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | S5261-25G | |
| <אספקה חיונית>חזקה | |||
| 8 שבועות. עכברי CB17-Prkdcscid/NcrCrl | - | - | |
| BD מיקרו-פיין 0.5 מ"ל U 100 מחט 0.33 מ"מ (29 גרם) x 12.7 מ"מ | בקטון דיקינסון, S.A.U. | להב 320926 | |
| #24 | - | ||
| מסננת תאים 100 ומיקרו; m | Cultek, SLU | 45352360 | |
| מלקחיים ומספריים כירורגיים | - | ||
| כרית חימום | - | ||
| Lacryvisc, 3 מ"ג / גרם, ג'ל עיניים | - | ||
| Surfasafe | - | ||
| תפר פרולן 5-0 | ג'ונסון & ג'ונסון ס, א. | 8720H | |
| <חזק>ציוד/תוכנה | |||
| Quantum FX ומיקרו; מערכת הדמיית CT | פרקין אלמר | פרקין אלמר | http://www.perkinelmer.com/es/product/quantum-gx-instrument-120-240-cls140083 |
מקורות
- Sung, H., et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: a Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Puig, I., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
