הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

העברה מאומצת של מקרופאגים מעוררי IL-33 למודלים של עכברים הנגרמים על ידי בלומיצין כדי לחקור את השפעתם על פיברוזיס ריאתי אידיופתי in vivo

3.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64742

⸱

5 במאי 2023

 ,  , 
1Department of Basic Medicine, Wuxi School of Medicine, Jiangnan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

הודעת תיקון

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

סיכום

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של מקרופאגים אינטרסטיציאליים ריאתיים (IMs) ואת העברתם המאומצת לאחר גירוי IL-33 של נאדיות הריאה במודל עכבר, אשר יכול להקל על מחקר in vivo של פיברוזיס ריאתי אידיופתי (IPF).

תקציר

התגובה הדלקתית הנגרמת על ידי פגיעה ריאתית מוקדמת היא אחד הגורמים החשובים להתפתחות פיברוזיס ריאתי אידיופתי (IPF), המלווה בהפעלת תאים דלקתיים כגון מקרופאגים ונויטרופילים, כמו גם שחרור של גורמים דלקתיים כולל TNF-α, IL-1β ו- IL-6. דלקת מוקדמת הנגרמת על ידי מקרופאגים אינטרסטיציאליים ריאתיים פעילים (IMs) בתגובה לגירוי IL-33 ידועה כממלאת תפקיד חיוני בתהליך הפתולוגי של IPF. פרוטוקול זה מתאר העברה מאומצת של IMs שעוררו IL-33 לריאות של עכברים כדי לחקור את התפתחות IPF. היא כוללת בידוד ותרבית של IMs ראשוניים מריאות עכבר מארח, ולאחר מכן העברה מאומצת של IMs מעוררים לתוך alveoli של עכברים מושתלי IPF המושרה על ידי בלומיצין (BLM) (אשר כבר רוקנו בעבר מקרופאגים alveolar על ידי טיפול עם ליפוזומים clodronate), ואת ההערכה הפתולוגית של עכברים אלה. התוצאות המייצגות מראות כי העברה מאומצת של מקרופאגים מעוררי IL-33 מחמירה פיברוזיס ריאתי בעכברים, דבר המצביע על כך שהקמת ניסוי העברת המקרופאגים המאמצת היא אמצעי טכני טוב לחקר פתולוגיה של IPF.

מבוא

פיברוזיס ריאתי אידיופתי (IPF) היא מחלה דלקתית ריאתית מפושטת הנגרמת על ידי גורמים רבים1. במיקרו-סביבה הציטוקינים של התגובה החיסונית Th1 ו-Th2, מקרופאגים יכולים להיות מקוטבים למקרופאגים המופעלים באופן קלאסי (M1) ולמקרופאגים מופעלים לחלופין (M2). ליפופוליסכרידים (LPS) או הציטוקין IFN- γ גורמים למקרופאגים M1 לקטב ולייצר ציטוקינים מעודדי דלקת, כולל iNOS, IL-1, IL-6, TNF-α ו-IL-12. לעומת זאת, ציטוקינים מסוג II IL-4 ו-IL-13 מניעים את הקיטוב של מקרופאגים M2, אשר יכולים לייצר גורמים שונים המעודדים גדילה של פיברובלסטים, כגון TGF-β ו-PDGF, המקדמים פיברוזיס ריאתי2. התהליך הפתולוגי של IPF מלווה בהפעלת מקרופאגים וחדירה. IPF מתווך תיקון פציעות, דלקת ופיברוזיס באמצעות שחרור ציטוקינים3. מכיוון שרק אפשרויות טיפוליות מוגבלות זמינות, חקירת המנגנונים הפתולוגיים המולקולריים של IPF היא בעלת משמעות רבה לפיתוח אסטרטגיות חדשות למניעה וטיפול ב- IPF. מחקרים קודמים של הקבוצה שלנו וחוקרים אחרים 4,5 אישרו את השחרור המוגבר של IL-33 בחולי IPF ובמודלים של עכברים עם IPF המושרה על ידי בלומיצין (BLM). IL-33 משתחרר על-ידי תאי אפיתל ואנדותל במהלך פיברוזיס ומעורב בהפעלת מקרופאגים, מה שגורם להתרבות חריגה של פיברובלסטים, הסננת לויקוציטים, ובסופו של דבר אובדן תפקוד ריאות5. הפרוטוקול הנוכחי מתאר העברה מאומצת של מקרופאגים אינטרסטיציאליים (IMs) מעוררי IL-33 לתוך הנאדיות כאמצעי לחקר התפתחות IPF במודלים של עכברים. כאן, IMs בודדו מרקמת הריאה של עכברים מארחים, גודלו בתרבית במבחנה, עוררו עם IL-33 במשך 24 שעות, ולאחר מכן הועברו באופן מאומץ לנאדיות של עכברים מושתלים על ידי הזרקת קנה הנשימה. האיסוף הישיר של מקרופאגים עכבריים מעוררים והעברתם המאומצת לנאדיות המקבל נמצא כמחמיר את מידת הפיברוזיס הריאתי ויכול להמחיש בצורה ברורה יותר את ההשפעה של גורמים מעוררים על פיברוזיס בהשוואה למחקרים קודמים6. הטכניקה המתוארת במאמר זה יכולה לאפשר לחוקרים לחקור את תפקודם של מקרופאגים המעוררים על ידי ציטוקינים פוטנציאליים בהתפתחות IPF.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בוצעו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה הניסויית לרווחת בעלי חיים באוניברסיטת ג'יאנגנאן (JN No. 20211130m1720615[501]).

הערה: במחקר זה נעשה שימוש בסך הכל ב-10 עכברים זכרים מסוג C57BL/6 בגילאי 6-8 שבועות ובמשקל 20-25 גרם. שלוש קבוצות הניסוי במחקר כללו שלושה עכברים מושתלים כל אחד, ועכבר מארח אחד שימש לבידוד הודעות מיידיות.

1. דלדול מקרופאגים ריאתיים של עכברים

  1. הוציאו את בקבוקון הליפוזומים של קלודרונט (ראו טבלת חומרים) מהמקרר 30 דקות מראש, חממו אותו לטמפרטורת החדר והפכו אותו מספר פעמים כדי להבטיח ערבוב אחיד.
    הערה: Clodronate liposomes לעטוף את מולקולות הידרופילי dichloromethylene bisphosphonate. כאשר ליפוזומים אלה נצרכים על ידי המקרופאגים, הקלודרונאט משתחרר בהדרגה על ידי פעולת הפוספטאז הליזוזום, והצטברותו גורמת כתוצאה מכך לאפופטוזיס של התא ולדלדול המקרופאגים7.
  2. מרדימים עכברים עם 3% איזופלורן. בדוק את עומק ההרדמה על ידי צביטת רגל אחת כדי לבדוק את ההכרה. יש למרוח משחה וטרינרית על שתי העיניים למניעת יובש בהרדמה.
  3. שאפו 60 μL של ליפוזומים קלודרונט באמצעות פיפטה עם קצה יניקה סטרילי. לתת את התרופה טיפה לתוך חלל האף של העכבר מורדם, כך שכאשר העכבר שואף, התרופה נשאפת לתוך קנה הנשימה. לאחר כל טיפה, ודא שהעכבר שואף את התרופה לחלוטין ונושם באופן שווה. מתן ליפוזומים המכילים PBS בלבד כבקרה8 (איור 2).
  4. הניחו את העכברים על טבלת טמפרטורה קבועה של 38 מעלות צלזיוס להתחממות מחדש כדי להאיץ את התאוששותם. עקוב אחר העכברים עד שהם מתעוררים. לאחר שהעכברים מתאוששים היטב ומשיגים שכיבה עצם החזה, העבירו אותם לכלוב.
  5. השתמש בעכברים עם מקרופאגים מכתשית מדולדלים יומיים לאחר הטיפול בליפוזומים קלודרונט כעכברים המקבלים לניסוי ההעברה.
    הערה: במחקר זה, הידלדלות המקרופאגים בנאדיות אושרה על-ידי בדיקת הביטוי של סמני מקרופאגים כפי שתואר קודם לכן 8,9 לאחר מתן ליפוזומים קלודרונאטים בשאיפה (ראו איור משלים 1).

2. בידוד ותרבות של הודעות מיידיות

  1. מרדימים את העכבר המארח בהזרקה תוך צפקית של קטמין (120 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (16 מ"ג/ק"ג). אשר את עומק ההרדמה באמצעות אובדן רפלקס צביטת הבוהן. יש למרוח משחה וטרינרית על שתי העיניים למניעת יובש בהרדמה. לאחר מכן, לחטא את העור של העכבר מורדם עם 75% אלכוהול ויוד. השתמש מספריים לחתוך דרך העור ולחשוף את רקמת הלב ריאה
  2. שאפו 10 מ"ל של 1x PBS במזרק עם מחט 20 G והכניסו את קצה המחט לאטריום הימני של העכבר (איור 3A). חותכים את הווריד הנבוב התחתון של העכבר עם מספריים כירורגיים, ולאחר מכן ידנית לחורר את העכבר עם PBS במהירות קבועה (10-20 מ"ל / דקה) עד שרקמת הריאה הופכת לבנה. מוציאים את רקמת הריאה ומעבירים אותה ל-PBS קר כקרח בצלחת תרבית (איור 3B).
  3. חותכים את רקמת הריאה לשברים של כ 2 מ"מ x 2 מ"מ x 2 מ"מ. לאחר מכן, הוסף 15 מ"ל של מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM) המכיל 1% collagenase A לרקמת הריאה כדי לבודד את המקרופאגים. יש לדגור ב-100 סל"ד למשך 30 דקות על שולחן ניעור בטמפרטורה של 37°C.
  4. שאפו את מתלה רקמת הריאה דרך מזרק 10 מ"ל לפחות פי 20 כדי שיהיה עדין ככל האפשר. סנן את המתלה דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר. צנטריפוגו את התסנין ב 400 x גרם במשך 10 דקות ולזרוק את supernatant.
  5. לפרוס את תאי הדם האדומים בגלולה על ידי הוספת 3 מ"ל של חיץ ליזיס RBC (ראה טבלת חומרים) על קרח במשך 2-3 דקות.
  6. לאחר צנטריפוגה ב 150 x גרם במשך 5 דקות, להשעות מחדש את גלולת התא עם 10 מ"ל של DMEM (המכיל 100 U/mL פניצילין ו 100 מיקרוגרם / מ"ל סטרפטומיצין). לספור את התאים באמצעות hemocytometer.
  7. זרעו את התאים לתוך 10 ס"מ צלחת תרבית תאים דבק ב 2 x 107 תאים / צלחת, ולדגור במשך 1 שעה ב 37 ° C ו 5% CO2. זה מאפשר IMs הריאה לדבוק צלחת5. לאחר שעה אחת, שאפו את התאים הסופרנאטנטיים והצפים, והוסיפו 10 מ"ל של מדיום תרבית שלם טרי (DMEM המכיל 10% FBS, 100 U/mL פניצילין ו-100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין). יש לדגור במשך יותר מ-8 שעות או למשך הלילה.
  8. קבע את טוהר ההודעות המיידיות המתקבלות באמצעות ציטומטריית זרימה עם צביעה עבור סמני F4/80 ו- CD11c, כפי שתואר קודם לכן5 (ראה איור משלים 1).

3. העברה מאמצת של IMs לתוך alveoli הריאה

  1. החלף את מדיום התרבית מהצלחת המכילה את IMs הריאתיים המבודדים (שלב 2.7) במדיום תרבית שלם המכיל 10 ng/mL IL-33 לגירוי IMs. יש לדגור במשך 24 שעות בטמפרטורה של 37°C ו-5% CO2. השתמש ב- PBS 1x במקום IL-33 כפקד.
  2. לנתק את IMs ריאתי על ידי טיפול בהם עם 1 מ"ל של 0.25% טריפסין במשך 5 דקות. לאחר מכן, להרוות את העיכול על ידי הוספת 3 מ"ל של תרבית טרייה מדיום מלא, ולקצור את המקרופאגים ריאתיים על ידי צנטריפוגה של תרחיף התא ב 150 x גרם ו 4 ° C במשך 5 דקות. ספור את התאים באמצעות המוציטומטר, והשהה מחדש את התאים ב- PBS לריכוז סופי של 5 x 105 תאים / 50 μL.
  3. מרדימים את העכברים המקבלים עם גז איזופלורן 3%. המתן עד שהעכבר יאבד את הכרתו (כמו בשלב 1.2), ולאחר מכן תקן את הגפיים של העכבר המרדים על צלחת אנכית עם סרט רפואי. משוך בעדינות את לשון העכבר לצד אחד באמצעות צמר גפן.
  4. הפעל את מנורת האינטובציה והאיר אותה על גרונו של העכבר כך שניתן יהיה לראות את קנה הנשימה. בדוק כי קנה הנשימה קרוב לבסיס הלשון, הוושט קרוב לחלק האחורי של הצוואר, אך פתח הוושט אינו נראה במהלך הניתוח.
  5. השתמש במנורת האינטובציה (22 G) כדי לסייע באינטובציה של העכבר. יש להנחות את צינורית המחט לתוך קנה הנשימה בעזרת חוט מנחה (קוטר 0.4 מ"מ). הסר את חוט ההנחיה ודחוף את הצינורית לתוך קנה הנשימה של העכבר כדי להשלים את האינטובציה.
  6. לאחר הצינורית הוא ציין להיכנס קנה הנשימה, להזריק 50 μL של תרחיף התא (המכיל 5 x 105 IMs) לתוך העכבר המקבל דרך קנה הנשימה.
  7. הניחו את העכברים על משטח חימום קבוע בטמפרטורה של 38°C לחימום מחדש כדי לזרז את ההתאוששות. עקוב אחר העכברים עד שהם מתעוררים. לאחר שהם מתאוששים היטב ומשיגים שכיבה עצם החזה, מעבירים אותם לכלוב.
  8. לאחר 24 שעות, מתן בלומיצין (BLM) דרך קנה הנשימה (באמצעות ההליך בשלבים 3.3-3.5) במינון של 1.4 U/kg משקל גוף כדי לגרום IPF. לתת כמות שווה של מלוחים לקבוצת הביקורת.
  9. לאחר 21 יום, לקבוע את מידת החומרה של פיברוזיס ריאתי עבור קבוצות שונות של עכברים שהועברו באימוץ עם PBS או השעיית IM מגורה IL-33 על ידי הערכת ביטוי של סמנים עבור פיברוזיס ואת Ashcroft ציונים10.
    1. לחלץ את סך הרנ"א מרקמת הריאה באמצעות מגיב מיצוי RNA (ראה טבלת חומרים).
      הערה: ניתוח כמותי בוצע עם קורא microplate. אם יחס OD260/OD280 הוא 1.8-2.0, טוהר הרנ"א גבוה. כל הדגימות אוחסנו ב -80 מעלות צלזיוס.
    2. בצע PCR כמותי פלואורסצנטי כדי להעריך את הביטוי של אקטין שרירים α חלק (SMA) ופיברונקטין באמצעות פריימרים ספציפיים.
      הערה: הפריימרים ששימשו עבור α-SMA היו קדימה 5'- GACGCTGAAGTATCCGATAGAACACG-3' והפוך 5'-CACCATCTCCAGAGTCCAGCACAAT-3', והפריימרים ששימשו לפיברונקטין היו קדימה 5'-TCTGGGAAATGGAAGAGGGGAATGG-3' והפוך 5'-CACTGAAGCAGTTCCTCGGTTGT-3'.
  10. בצע אימונוהיסטוכימיה כמתואר להלן.
    1. מייבשים את הריאה השמאלית, מטמיעים אותה ופורסים אותה בעזרת פרוסת פרפין לעובי של 4 מיקרומטר.
    2. מניחים את חלקי הרקמה על שקופיות ואופים את המגלשות בתנור ב 65-70 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות עד 1 שעה. הורידו את המגלשות עם אחוז הולך ופוחת של אלכוהול (כלומר, 100%, 95%, 90%, 80% ו-70% אלכוהול) למשך 5 דקות.
    3. מכתימים את המגלשות בתמיסת צבע המטוקסילין (טהורה אנליטית) למשך 5 דקות. לאחר מכן, שטפו את המגלשות במי ברז. השרו את המגלשות ב-1% חומצה הידרוכלורית למשך 3 שניות, שטפו את הצבע הצף והשרו במים זורמים למשך 5 דקות. המקטעים יהפכו כחולים.
    4. לטבול בתמיסת eosin במשך 10 שניות עד 1 דקות (לקבוע את זמן הצביעה בהתאם לצבע), לשטוף עם מי ברז, ומניחים 70%, 80%, 95%, 100%, ו 100% אלכוהול, בהתאמה, במשך 5 דקות כל אחד. לאחר מכן הניחו את המגלשות בתמיסות קסילן I וקסילן II למשך 3 דקות. לאחר הייבוש, התבוננו וצלמו מתחת למיקרוסקופ האנכי עם סרט איטום דביק ניטרלי.
    5. בצע ניקוד Ashcroft על הסעיפים כדי לציין את חומרת פיברוזיס ריאתי10. לבצע ניתוח סטטיסטי של הנתונים באמצעות מבחן t של שני מדגמים בלתי תלויים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הפרוטוקול המשמש כאן מסוכם בתרשים הזרימה באיור 1. שאיפת ליפוזומים קלודרונט דרך האף (איור 2) שימשה לדלדול המקרופאגים הריאתיים של עכברי C57BL/6 בוגרים, וזה יצר מודל טוב של עכבר מושתל. בדיקות מיידיות ריאתיות בודדו מעכבר אחר (מארח) שלא טופל (איור 3A,B) וגודלו בתרבית חוץ גופית. המקרופאגים שבודדו עוררו באמצעות IL-33 במשך 24 שעות, ולאחר מכן הוחדרו תוך קנה הנשימה לעכברים המקבלים (איור 3C

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה מספק שיטה יעילה לדלדול, בידוד, תרבית והעברת מקרופאגים, אשר יכולה לסייע בחקר המנגנונים של פיברוזיס ריאתי בעכברים. ישנן שיטות רבות לדלדול מקרופאגים בעכברים, כגון ניהול קנה הנשימה, הזרקת ורידים בזנב ושאיפת אף11. מחקר זה ייעל את שיטת שאיפת האף, שהיא פשוטה לתפעול ויכולה לרוקן ביעילות מקרופאגים ריאתיים 8,9. לאחר גירוי IL-33 של IMs בתרבית במשך 24 שעות, IMs הועברו באופן מאומץ לריאות של העכברים המקבלים באמצעות נתיב ניהול קנה נשימה לא פולשני...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

המחברים מכירים בנושא המיוחד של ניהול מעבדה באוניברסיטת ג'יאנגנאן: בניית ספריית פרוסה דיגיטלית המבוססת על דגימות פתולוגיות (JDSYS202223) והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81800065).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
  DMEMLife טכנולוגיות ביוטכנולוגיה, ארה"ב1508012
מחט עורקיתB Braun Melsingen AG, גרמניה21G15G8393
BD  אקורי  C6 פלוסבקטון דיקינסון, ארה"ב
BleomycinBiotang, ארה"בAb9465
חממת פחמן דו חמצניThermo Forma, ארה"בThermo Forma370
CD11bR& D Systems, ארה"ב1124F
CD11cR& D Systems, ארה"בN418
צלחת תרבית תאיםThermo Forma, ארה"ב174926
ליפוזומי קלודרונאט ליפוזומי קלודרונאט, הולנדCI-150-150
קולגנאז ASigma-Aldrich, ארה"ב10103578001
F4/80R& D Systems, ארה"ב521204
מסננת תאי פלקוןבקטון, דיקינסון ושות', ארה"ב352340
סרום בקר עוברי (FBS)טכנולוגיות חיים, ארה"ב1047571
המטוקסילין אאוזין נאנג'ינג Jiancheng טכנולוגיה, סין06-570
LightCycler 480 PCR זיהוי מערכתרוש, ארה"ב
גורם רקומביננטי עכברי IL-33פפרוטק, ארה"ב210-33
מיקרוסקופ ניקוןתאגיד ניקון, יפן941185
פניצילין, סטרפטומיציןטכנולוגיות חיים, ארה"877113
פוספט מאגר (PBS)גואנגדונג Huankai טכנולוגיה מיקרוביאלית, סין1535882
RBC מאגר ליזהBeyotime Biotechnology Company, סיןC3702
RNA מבודדVazyme חברה, סיןR401-01-AAסה"כ RNA מיצוי ריאגנט
RWD מכונת הרדמה אינהלציהשנזן Rayward Life Technology, סיןR500
פרפין חצי אוטומטי slicerLeica, גרמניהLeicaRM2245
SYBR Premix Ex TaqTakara, יפן410800
Trypsin 0.25%Life Technologies, ארה"ב1627172
ב

מקורות

  1. Heukels, P., Moor, C. C., vonder Thüsen, J. H., Wijsenbeek, M. S., Kool, M. Inflammation and immunity in IPF pathogenesis and treatment. Respiratory Medicine. 147, 79-91 (2019).
  2. Zhang, Y., Zhang, Y., Li, X., Zhang, M., Lv, J. Microarray analysis of circular RNA expression patterns in polarized macrophages. International Journal of Molecular Medicine. 39 (2), 373-379 (2017).
  3. Lee, J. W., et al. The role of macrophages in the development of acute and chronic inflammatory lung diseases. Cells. 10 (4), 897(2021).
  4. Luzina, I. G., et al. Interleukin-33 potentiates bleomycin-induced lung injury. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (6), 999-1008 (2013).
  5. Nie, Y., et al. AKT2 regulates pulmonary inflammation and fibrosis via modulating macrophage activation. Journal of Immunology. 198 (11), 4470-4480 (2017).
  6. Qian, F., et al. The transcription factor PU.1 promotes alternative macrophage polarization and asthmatic airway inflammation. Journal of Molecular Cell Biology. 7 (6), 557-567 (2015).
  7. Shah, S., Dhawan, V., Holm, R., Nagarsenker, M. S., Perrie, Y. Liposomes: Advancements and innovation in the manufacturing process. Advanced Drug Delivery Reviews. 154 (155), 102-122 (2020).
  8. He, W., et al. Alveolar macrophages are critical for broadly-reactive antibody-mediated protection against influenza A virus in mice. Nature Communications. 8 (1), 846(2017).
  9. Eyal, F. G., Hamm, C. R., Parker, J. C. Reduction in alveolar macrophages attenuates acute ventilator induced lung injury in rats. Intensive Care Medicine. 33 (7), 1212-1218 (2007).
  10. Hübner, R. H., et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. Biotechniques. 44 (4), 507-517 (2008).
  11. Tacke, F., et al. Immature monocytes acquire antigens from other cells in the bone marrow and present them to T cells after maturing in the periphery. The Journal of Experimental Medicine. 203 (3), 583-597 (2006).
  12. Byrne, A. J., Maher, T. M., Lloyd, C. M. Pulmonary macrophages: A new therapeutic pathway in fibrosing lung disease. Trends in Molecular Medicine. 22 (4), 303-316 (2016).
  13. Wendisch, D., et al. SARS-CoV-2 infection triggers profibrotic macrophage responses and lung fibrosis. Cell. 184 (26), 6243-6261 (2021).
  14. Zhang, L., et al. Macrophages: Friend or foe in idiopathic pulmonary fibrosis. Respiratory Research. 19 (1), 170(2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תיקון


Formal Correction: Erratum: Adoptive Transfer of IL-33-Stimulated Macrophages into Bleomycin-Induced Mouse Models to Study Their Effect on Idiopathic Pulmonary Fibrosis In Vivo
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

An erratum was issued for: Adoptive Transfer of IL-33-Stimulated Macrophages into Bleomycin-Induced Mouse Models to Study Their Effect on Idiopathic Pulmonary Fibrosis In Vivo. The Protocol section was updated.

Step 2.1 of the Protocol was updated from:

Anesthetize the host mouse with 3% isoflurane, and then euthanize it by cervical dislocation. Disinfect the skin of the euthanized mouse with 75% alcohol and iodine. Use scissors to cut through the skin and expose the cardiopulmonary tissue

to:

Anesthetize the host mouse with an intraperitoneal injection of Ketamine (120 mg/kg) and Xylazine (16 mg/kg). Confirm the depth of anesthesia via loss of the toe pinch reflex. Apply veterinary ointment to both eyes to prevent dryness under anesthesia. Then, disinfect the skin of the anesthetized mouse with 75% alcohol and iodine. Use scissors to cut through the skin and expose the cardiopulmonary tissue

תגיות

IL 33Ashcroft Score
העברה מאומצת של מקרופאגים מעוררי IL-33 למודלים של עכברים הנגרמים על ידי בלומיצין כדי לחקור את השפעתם על פיברוזיס ריאתי אידיופתי in vivo
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.