הפרוטוקול דבק בקוד האוסטרלי של המועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של אוסטרליה לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות18. ועדת האתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת מערב אוסטרליה אישרה באופן פרוספקטיבי את הפרוטוקול (RA3/100/1596). הכבשים הגיעו מחוות רידג'פילד של אוניברסיטת מערב אוסטרליה (UWA) (2018-2020). הכבשים הוכנסו למתקן בעלי החיים הגדולים של UWA המוסמך על ידי AAALAC 2-3 שבועות לפני ההתערבות הכירורגית. הכבשים שוכנו בתחילה בתוך הבית במכלאות רצפה מוגבהות משותפות, עם מכלאות בודדות ששימשו בתקופה שלפני הניתוח. הכבשים הוזנו בכדורים, מוץ שיבולת שועל ותורמוסים בתערובת מינרלים המחושבת על פי משקל הגוף. החדרים היו מבוקרים לטמפרטורה (20.5-21.5 מעלות צלזיוס) ונשמרו במחזור אור של 12:12 שעות: חושך. הכאב והרווחה הוערכו בתקופה שלאחר הניתוח פעמיים ביום במשך 7 ימים, ולאחר מכן מדי יום עד לסיום המחקר. הפרמטרים המנוטרים לאחר הניתוח כללו סימני כאב, הידוק מסלול, מאמץ נשימתי, טמפרטורה, דופק, אזור הניתוח, תיאבון וצריכת מים, פעילות, צליעה, מצב פרווה, עקביות צואה, לידה מוקדמת, התנהגות וסימני רעלת הריון. הציונים שיוחסו לכל פרמטר הפעילו התערבות במידת הצורך.
הערה: נדרשו שני הליכים כירורגיים להתאוששות: הכנת כבשים, גישה כירורגית וסגירה, והתאוששות כבשים זהות עבור שני ההליכים הכירורגיים. ההליך הראשון הוא יצירה כירורגית של הבקע הסרעפתי בכבש העוברי. ההליך השני הוא להצבת מכשיר ההתערבות העוברית וניטור הלחץ. תכנון המחקר הצריך שני ניתוחי הישרדות כדי לאפשר לתוכן הבטן לנוע לחלל החזה לאחר יצירת הבקע הסרעפתי כך שהיפופלזיה ריאתית תוכל להתפתח לפני ניתוח ההתערבות הבא.
1. יצירה כירורגית של הבקע הסרעפתי בכבש העוברי
- הכנת כבשים
- ב~80 יום הריון, יש לטפל בכבשה עם זריקה תוך שרירית של אצפרומזין (0.04 מ"ג/ק"ג) ומורפיום (0.3 מ"ג/ק"ג).
- יש להשרות הרדמה תוך ורידית עם קטמין (5 מ"ג/ק"ג) ומידזולם (0.25 מ"ג/ק"ג).
- החדרת קנה הנשימה של הכבשה עם צינור אנדוטרכאלי (קוטר פנימי של 8 מ"מ [ID]). שמור על הרדמה עם איזופלורן (1%-3% בחמצן) המועבר על ידי אוורור בלחץ חיובי (10-12 נשימות לדקה, נפח גאות 8-10 מ"ל/ק"ג).
- קבע ניטור כבשים באמצעות אלקטרוקרדיוגרמה (ECG), לחץ דם עורקי פולשני דרך קטטר עורקי אוזן, CO2 שפג תוקפו, ריווי חמצן היקפי וטמפרטורה במהלך הניתוח.
- הניחו את הכבשה על האלונקה. לולאה חבלים סביב רגלי הכבשה והדק בעדינות לשולחן.
- גזור צמר מהבטן והצד של הכבשה ולאחר מכן הצמד אותו קרוב לעור.
- הסר לכלוך ולנולין מהבטן, האגף והמפשעה של הכבשה במים וסבון.
- יש לתת צפזולין (20 מ"ג/ק"ג) תוך ורידי כל 90 דקות במהלך הניתוח.
- העבירו את הכבשה לחדר הניתוח על אלונקה.
- העבירו את הכבשה מאלונקת ההובלה לשולחן הניתוחים.
- הנח כבשה בתנוחת שכיבה גבית על שולחן הניתוחים.
- אבטח את כל הגפיים לשולחן הניתוחים בעזרת קשרי חבל רכים.
- הכנה אספטית של הבטן החשופה: יש לשטוף 3 פעמים עם קרצוף כירורגי כלורהקסידין 4%, ולהסיר תמיסה מזוהמת בין כל שטיפה עם 70% אלכוהול.
- הכנה סטרילית מלאה על ידי ריסוס קל של תמיסת יוד 10% על הבטן, האגף והמפשעות.
- מכסים את הכבשה בווילון כירורגי סטרילי כך שרק אתר החתך בבטן ייחשף. ודא שכל המכשירים הכירורגיים, הצנתרים, המזרקים והתמיסות המשמשות במהלך הניתוח הם סטריליים.
- גישה כירורגית
- יש לבסס הרדמה מקומית על ידי הסננה מקומית תת-עורית ושרירית של בופיבקאין (5%; 9.5 מ"ל) עם מזרק של 10 מ"ל ומחט של 22 גרם.
- חשוף את הרחם על ידי חתך בטן פרה-אמצע (8-11 ס"מ) דרך עור הכבשה, הרקמה התת עורית ולינאה אלבה העשויה מלהב כירורגי בגודל 10 עם צריבה כנדרש כדי למזער דימום חתך.
- יצירת בקע סרעפתי
- אתר את ראש/בית החזה של העובר באמצעות מישוש.
- מכסים את הרחם בניילון סטרילי.
- השתמש במספריים כירורגיים כדי ליצור חלון (6 ס"מ על 4 ס"מ) בניילון.
- בצע חתך רחם של 5-7 ס"מ דרך הרחם ושק מי השפיר עם חיתוך צריבה והימנעות מכלי דם ברחם וקוטילונים בשליה.
- להוציא את ראש העובר והגפיים הקדמיות.
- השתמש ברחם Babcock clamps כדי לאטום את קצוות החתך ברחם ולעטוף ניילון סטרילי בחוזקה סביב בטן העובר כדי למנוע אובדן מי שפיר.
- מקם את העובר על צדו הימני ואבטח ניילון סטרילי שני מעל העובר החיצוני כדי להפחית את אובדן החום והלחות. זהה את המרווח הבין-צלעיבין הצלעות ה-9 וה-10 משמאל וחתוך חור בניילון עם מספריים כירורגיים כדי לגשת לאתר החתך העוברי המיועד.
- יש לבסס הרדמה מקומית בעובר על ידי הסננה מקומית תת-עורית ושרירית של בופיבקאין (5%; 0.25 מ"ל מדולל ל-0.5 מ"ל עם מי מלח סטריליים; מזרק סטרילי של 1 מ"ל ומחט 27 גרם) בחלל הבין-צלעיהתשיעי הסמוך לגבול העליוןשל הצלע ה-10 כדי להימנע מכלי דם תת-צלעיים.
- השתמש במזרק סטרילי של 60 מ"ל כדי לרחוץ את עור העובר החשוף בתמיסת הרטמן חמה (5-10 מ"ל כל 5-10 דקות) כדי לשמור על עור העובר לח לאורך השלבים הבאים.
- צור כריתת בית חזה אחורית שמאלית על ידי ביצוע חתך עור של 2-4 ס"מ עם צריבה חשמלית בחלל הבין-צלעי התשיעי הסמוך לגבול הגולגולת של הצלע העשירית.
- השתמש בהמוסטטים של יתושים כדי לנתח בצורה בוטה את הרקמה התת עורית, השרירים הבין-צלעיים והקרום הצדר כדי לגשת לסרעפת.
- השתמש בשני המוסטטים קטנים של יתושים כדי להרים את הסרעפת בכל קצה של אתר הבקע המיועד באורך 1 ס"מ והרם את הסרעפת בגולגולת כדי להרחיק אותה מהקיבה, הכבד והטחול הבסיסיים.
- בצע חתך של 1 ס"מ בין שני ההמוסטטים בעזרת מספריים זוויתיים קטנים.
- שחרר את ההמוסטטים המחזיקים את הסרעפת.
- השתמש במלקחיים פוטס אטראומטיים כדי למשוך את הקיבה בצורה מעולה דרך החור בסרעפת.
- השתמש בעניבה אחת של מונופילמנט 5-0 פולידיוקסנון נספג (מחט נקודת התחדדות RB-1) כדי לעטוף בזהירותאת הצלעות ה-9 וה-10 כדי להתנגד לצלעות העובר, תוך הימנעות מהריאה הבסיסית.
- סגור חתך בית החזה עם תפר מזרן (מונופילמנט 5-0 פולידיוקסנון נספג).
- סגירה כירורגית
- החזר את העובר לשק מי השפיר.
- יש לתת מלוקסיקם תוך ניתוחי (0.25 מ"ג/ק"ג; תת עורי) לכבשה לשיכוך כאבים לאחר הניתוח.
- החלפת מי שפיר שאבדו באמצעות תמיסת הרטמן מחוממת (~50 מ"ל) יחד עם פיפרצילין/טזובקטם תוך מי שפיר (1000 מ"ג/125 מ"ג).
- יש להצמיד את המשטחים המנוגדים של הכוריואמניון ודפנות הרחם הסמוכות ולהשתמש בתפר קלוע 2-0 פוליגלקטין 910 נספג עם תפר מזרן הפוך כדי לסגור את הרחם ושק מי השפיר יחד.
- סגור את הלינאה אלבה, הרקמה התת עורית והעור של הכבשה (מונופילמנט פולידיוקסנון נספג 1, פוליגלקפרונט 25 מונופילמנט 3-0 נספג ופוליפרופילן מונופילמנט 2-0 שאינו נספג בהתאמה).
- שחזור וניטור כבשים
- רססו את פצע הבטן לאחר הניתוח עם סרט החזקת חבישה עמיד למים וכסו אותו בתחבושת כדי להפחית את הסיכון לזיהום בפצע לאחר הניתוח.
- יש למרוח מדבקת פנטניל טרנסדרמלי (100 מיקרוגרם/שעה) על המפשעה לשיכוך כאבים נוסף לאחר הניתוח.
- החזר את הכבשה והוציא צינורות בעת נשימה ספונטנית, ואז אפשר לה להתעורר.
- עקוב אחר כבשים מדי יום עד ללידה לניתוח התערבות עוברית.
- הסר תפרים לאחר 14 יום.
2. מיקום מכשיר ההתערבות העוברי וניטור הלחץ
- הכנת כבשים לניתוח התערבות עוברית לאחר 101 ימי הריון
- יש להזריק מדרוקסיפרוגסטרון (1 מ"ל) תוך שרירי ב~85 ימי הריון (תקופה ~147 ימים) כדי להפחית את הסיכון ללידה מוקדמת.
- השתמש באותו הליך הרדמה והכנה כירורגית המשמש לניתוח יצירת הסרעפת הראשוני.
- עקוב אחר הגישה הניתוחית בשלבים 2.1.2.2 ו-2.1.2.3, בדומה לשלבים 1.2.1-1.2.2.
- יש לבסס הרדמה מקומית על ידי הסננה מקומית תת-עורית ושרירית של בופיבקאין (5%; 9.5 מ"ל) עם מזרק של 10 מ"ל ומחט של 22 גרם.
- עם חתך בטן פרה-אמצע (8 - 11 ס"מ) בסמוך לאתר החתך בבטן המשמש לניתוח יצירת הסרעפת, יש לחשוף את הרחם באמצעות עור הכבשה, רקמה תת עורית ולינאה אלבה העשויה מלהב כירורגי בגודל 10 עם צריבה כנדרש כדי למזער דימום חתך.
- בנוסף, יש לתת אוקסי-טטרציקלין (20 מ"ג/ק"ג) תוך שרירי לכבשה כדי לספק הגנה אנטי-מיקרוביאלית עוברית מפני מכשיר הניטור המושתל כרוני.
- הפעלת מכשיר
- הפעל מכשיר מדידת לחץ19.
- צינורות מדידת לחץ מהדק עם המוסטטים.
- הנח את המכשיר כולו בקערה סטרילית המכילה תערובת של 0.08% חומצה פראצטית ו-1% מי חמצן למשך שעה אחת לפחות, כדי להבטיח שהמכשיר כולו מכוסה.
- בעזרת סטרילי clamp, העבירו את המכשיר לקערה סטרילית המכילה מים סטריליים למשך 10 דקות לפחות לפני השתלת העובר. ודא שהמכשיר כולו מכוסה במים סטריליים.
- גישה כירורגית והתערבות עוברית
- להוציא את ראש העובר על ידי כריתת רחם באותה גישה כירורגית ששימשה לניתוח הראשוני אך עם חתכים סמוכים ברחם (שלבים 1.1-2.2).
- שמור על ראש וצוואר העובר החיצוניים עטופים בווילון הפלסטיק הסטרילי כדי למזער את אובדן הטמפרטורה והנוזלים.
- מכשיר את קנה הנשימה עם קטטר למדידות לחץ (איור 1).
- עבור קנה נשימה לא חסום, בצע את השלבים 2.3.3.2-2.3.3.3.
- החדרו את הכבש העוברי עם קטטר יניקה 5 צרפתי (1.67 מ"מ ID) כאשר מחבר היניקה הוסר לעומק של 14 ס"מ בזווית פיו של הכבש.
- חבר את הקצה החיצוני של הצנתר עם מחבר 1.59 מ"מ (קוטר חיצוני, OD) עד 3.18 מ"מ (OD) לצינורות סיליקון באורך 30 ס"מ (ID).
- עבור קנה הנשימה הסגור, בצע את השלבים 2.3.3.5-2.3.3.6.
- החדרו את הכבש העוברי עם צינור אנדוטרכיאלי 3.0 מיקרו-שרוול כשהמחבר מוסר לעומק של 14 ס"מ לזווית פיו של הטלה.
- חבר את הקצה החיצוני של הצנתר עם מחבר 3.18 מ"מ (OD) עד 3.18 מ"מ (OD) לצינורות סיליקון באורך 30 ס"מ (ID).
- חבר את הקצה השני של צינור הסיליקון באורך 30 ס"מ (ID) 3.18 מ"מ (ID) למכשיר מדידת הלחץ באמצעות מחבר 3.18 מ"מ (OD) עד 1.59 מ"מ (OD) במכשיר מדידת הלחץ.
- לתפור את הקטטר בזווית הפה והצוואר של הכבש (מונופילמנט ניילון שאינו נספג 4-0).
- הצמידו את מכשיר מדידת הלחץ לעור הטלה על החזה (מונופילמנט ניילון לא-נספג 4-0) (איור 2).
- סגור את החתכים הכירורגיים של העובר והכבשה לפי ניתוח ראשוני ליצירת בקע סרעפתי (שלבים 1.4-1.5).
- מכשיר בדיקה
- בדוק אם המכשיר משדר אות19.
- שחזור וניטור כבשים
- שחזר את הכבשה לפי הניתוח הראשוני.
- יש לעקוב אחר הכבשים מדי יום עד הלידה.
- תן מנה שנייה של מדרוקסיפרוגסטרון (0.5 מ"ל) תוך שרירית ב~120 ימי הריון.
- יש לתת בטאמטזון (5.7 מ"ג) תוך שרירי 48 שעות ו-24 שעות לפני לידה קיסרית כדי לקדם את התבגרות העובר לטיפול לאחר הלידה.
- משלוח כבש
- ב~142 ימי הריון (תקופה ~147-150 ימים), כבשה לפני תרופות על ידי הזרקה תוך שרירית של אצפרומזין (0.03 מ"ג/ק"ג) ומורפיום (0.3 מ"ג/ק"ג).
- השראת הרדמה תוך ורידית עם תיופנטל (10-15 מ"ג/ק"ג), אינטובציה של הכבשה עם צינור אנדוטרכיאלי (גודל 8.5 מ"מ), ושמירה על הרדמה על ידי איזופלואורן עם ניטור מתאים לכל הרדמה מוקדמת יותר.
- המשך בלידה כירורגית של העובר באמצעות כריתת רחם לפי ניתוחים קודמים, עם כבשה בשכיבה גבית (שלבים 1.1 - 2.2).
- הסר את מכשיר הניטור. נקה את המכשיר במים ואתנול 70%.
- הרוג את הכבשה באופן אנושי עם הזרקה תוך ורידית של 160 מ"ג/ק"ג של תמיסת נתרן פנטוברביטון.
- יש להחיות ולאוורר את הכבש למשך 2-3 שעות ולאחר מכן להרוג באופן אנושי (160 מ"ג/ק"ג תמיסת נתרן פנטוברביטון, הזרקה תוך ורידית).
- נתונים
- הורד נתונים למחשב נייד ונתח19. סנן את נתוני הלחץ באמצעות חלון של 6 שעות. חשב את ההבדל בלחץ בין לחץ מי שפיר ללחץ קנה הנשימה.