בדיקת יעילות In Vitro ו-In Vivo של ננו-חלקיקי mRNA-ליפידים שנוסחו על ידי ערבוב מיקרופלואידי

ננו-חלקיקי שומנים (LNPs) הוכיחו הבטחה גדולה בשנים האחרונות בתחום הטיפול הגנטי שאינו ויראלי. בשנת 2018, מנהל המזון והתרופות האמריקני (FDA) אישר את הטיפול הראשון אי פעם בהפרעות RNA (RNAi), Onpattro by Alnylam, לטיפול בעמילואידוזיס טרנסתירטין תורשתי 1,2,3,4. זה היה צעד חשוב קדימה עבור ננו-חלקיקי שומנים וטיפולים מבוססי RNA. לאחרונה, מודרנה ופייזר/ביונטק קיבלו אישורי FDA לחיסוני mRNA-LNP שלהם נגד SARS-CoV-2 ^4,5. בכל אחד מטיפולי חומצות הגרעין מבוססי LNP, LNP משמש להגנה על המטען שלו מפני פירוק על ידי נוקלאזות ולהקל על משלוח תוך-תאי חזק ^6,7. בעוד LNPs ראו הצלחה בטיפולי RNAi ויישומי חיסונים, mRNA-LNPs נחקרו גם לשימוש בטיפולים תחליפי חלבונים⁸, כמו גם להעברה משותפת של Cas9 mRNA ומנחה RNA להעברת מערכת CRISPR-Cas9 לעריכת גנים⁹. עם זאת, אין נוסחה ספציפית אחת המתאימה היטב לכל היישומים, ושינויים עדינים בפרמטרים של נוסחת LNP יכולים להשפיע מאוד על העוצמה וההפצה הביולוגית in vivo 8,10,11. לפיכך, יש לפתח ולהעריך mRNA-LNPs בודדים כדי לקבוע את הנוסחה האופטימלית עבור כל טיפול מבוסס LNP.

LNPs מנוסחים בדרך כלל עם ארבעה רכיבי שומנים: ליפיד מיונן, פוספוליפיד, כולסטרול ופוליאתילן-גליקול מעוגן שומנים (PEG) מצומד (ליפיד PEG)^11,12,13. ההעברה התוך-תאית רבת העוצמה המתאפשרת על ידי LNPs מסתמכת, בחלקה, על רכיב השומנים המיוננים¹². מרכיב זה הוא נייטרלי ב- pH פיזיולוגי אך הופך להיות טעון חיובי בסביבה החומצית של אנדוזום¹¹. שינוי זה במטען היוני נחשב כתורם מרכזי לבריחה אנדוזומלית^12,14,15. בנוסף לשומנים המיוננים, מרכיב הפוספוליפידים (ליפיד עוזר) משפר את האנקפסולציה של המטען ומסייע בבריחה אנדוזומלית, הכולסטרול מציע יציבות ומשפר את איחוי הממברנה, והליפידים-PEG ממזער צבירה ואופסוניזציה של LNP במחזור^{הדם 10,11,14,16}. כדי לגבש את LNP, רכיבי שומנים אלה משולבים בפאזה אורגנית, בדרך כלל אתנול, ומעורבבים עם פאזה מימית המכילה את מטען חומצת הגרעין. תהליך ניסוח LNP הוא מאוד תכליתי בכך שהוא מאפשר להחליף בקלות רכיבים שונים ולשלב אותם ביחסים מולאריים שונים על מנת לגבש נוסחאות LNP רבות עם שפע של תכונות פיסיקוכימיות^10,17. עם זאת, כאשר בוחנים מגוון עצום זה של LNPs, חיוני שכל ניסוח יוערך באמצעות הליך סטנדרטי כדי למדוד במדויק את ההבדלים באפיון ובביצועים.

כאן, זרימת העבודה המלאה עבור ניסוח של mRNA-LNPs ואת הערכת הביצועים שלהם בתאים ובבעלי חיים מתואר.

הערה: יש לשמור תמיד על תנאים נטולי RNase בעת גיבוש mRNA-LNPs על ידי ניגוב המשטחים והציוד עם מזהם פני השטח עבור RNases ו- DNA. השתמש רק טיפים וריאגנטים ללא RNase.

כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה באוניברסיטת פנסילבניה ולפרוטוקול שאושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) באוניברסיטת פנסילבניה.

1. הכנה מוקדמת לפורמולציה

1. מלאו נקייה בנפח 4 ליטר במי מלח טריים חוצצים בפוספט (PBS) בנפח 200-300 מ"ל.
   1. דללו את 10x PBS בכד פי 10 עם מים טהורים במיוחד כדי לקבל של 1x PBS. ודא שהנפח הסופי של PBS 1x הוא בין 2-3 ליטר.
   2. הניחו את קלטות הדיאליזה (חיתוך משקל מולקולרי של 20 kDa [MWCO]) בעלות הקיבולת המתאימה לפורמולציית LNP לתוך הכד הממולא כדי ללחלח אותן.
      הערה: קלטות דיאליזה דורשות מינימום של 2 דקות כדי להתייבש לפני השימוש.
   3. מניחים מוט ערבוב לתוך הכד, ומכסים את הכד ברדיד אלומיניום.
   4. הניחו את הכד המכוסה על צלחת ערבוב מגנטית. הפעל את צלחת הערבוב, והגדר אותו להסתובב ב 300-400 סל"ד.
2. יש לדלל מאגר של 100 mM חומצת לימון (pH 3) פי 10 במים טהורים במיוחד כדי ליצור את מאגר חומצת הלימון של 10 mM המשמש לדילול mRNA.
3. הפוך C12-200 שומנים מיוננים, שומנים עוזרים, כולסטרול ושומנים מעוגני שומנים PEG (ליפידים-PEG) על ידי המסת כל ליפיד באתנול 100%. ריכוזי מרכיבי השומנים מפורטים בטבלה 1.
   1. חממו וערבבו את תמיסות המלאי בטמפרטורה של 37°C כדי להבטיח שהן מומסות במלואן.

2. הכנת תערובות שומנים וחומצות גרעין

1. חשב את הנפחים הנדרשים של שומנים מיוננים, שומנים מסייעים, כולסטרול וליפיד-PEG בהתבסס על היחס המולרי הרצוי ויחס משקל השומנים המיוננים ל-mRNA (טבלה 1). הכינו 10% נפח נוסף של השלב האורגני כדי להתחשב בנפח מת במזרקים במהלך הפורמולה.
   1. שלב את הכרכים המחושבים של רכיבי השומנים השונים בצינור חרוט.
   2. לדלל את השומנים עם 100% אתנול עד נפח סופי, V, המייצג 25% מהנפח הסופי של LNP.
2. חשב את כמות ה-mRNA הנדרשת לניסוח בהתבסס על יחס משקל השומנים המיוננים ל-mRNA והנפח הכולל של mRNA-LNP הדרוש (טבלה 1).
   1. הפשירו את ה-mRNA המקודד לוציפראז על קרח.
   2. מדללים את ה-mRNA לנפח סופי, 3וולט, פי שלושה מנפח הפאזה האורגנית, במאגר חומצה ציטרית של 10 מילימול.
      הערה: כל נפח שומנים, V, חייב להכיל מספיק שומנים מיוננים עבור mRNA מדולל ב 3V. זה מתאים ליחס השומנים המיוננים הרצוי למשקל mRNA.

3. ניסוח מיקרופלואידי של mRNA-LNPs

1. רססו מגבון משימה עדין עם מזהם פני השטח עבור RNases ו- DNA, ונגבו היטב את פנים המכשיר המיקרופלואידי.
   1. פתח מחסנית מיקרופלואידית חדשה והכנס אותה כאשר תעלות הכניסה פונות כלפי מטה והחוצה.
   2. ודא שזרוע הצינור החרוטי מחזיקה שני צינורות חרוטיים של 15 מ"ל ונמצאת במיקום הרחוק ביותר מימין.
   3. הגדר שני צינורות חרוטיים סטריליים של 15 מ"ל על המחזיק כשהמכסים כבויים.
2. מלאו מזרק 5 מ"ל בתמיסת mRNA המכילה mRNA מדולל במאגר חומצת לימון 10 mM.
   1. ממלאים מזרק 3 מ"ל בתמיסת השומנים המכילה את השומנים המדוללים באתנול טהור 100%.
   2. הפוך את מחזיק המחסנית במכשיר המיקרופלואידי.
   3. הכנס את מזרק 5 מ"ל, ללא המחט, המכיל mRNA לתוך הכניסה השמאלית של המחסנית.
   4. הכנס את מזרק 3 מ"ל, ללא המחט, המכיל שומנים לתוך הכניסה הימנית של המחסנית.
   5. הפוך את מחזיק המחסנית בחזרה כלפי מטה, וסגור את מכסה המכשיר המיקרופלואידי.
3. הפעל את המכשיר המיקרופלואידי באמצעות המתג הממוקם בגב המכשיר.
   1. בחר הפעלה מהירה.
   2. בחר את סוגי המזרקים הנכונים עבור מזרקים 5 מ"ל ו -3 מ"ל שהוכנסו.
   3. הזן את הפרמטרים עבור ניסוח mRNA-LNP ביחס קצב זרימה מימי לאורגני של 3:1 כמתואר בטבלה 2.
   4. לחץ על הלחצן הבא כדי לעבור למסך הבא.
   5. ודא שהפרמטרים הנכונים הוזנו.
   6. לחץ על לחצן התחל כדי לנסח את mRNA-LNPs.

4. עיבוד ואפיון לאחר ניסוח של mRNA-LNPs

1. טען את mRNA-LNPs שנאספו בצינור החרוטי הימני לתוך קלטות דיאליזה hydrated בעבר.
   הערה: אין לנקב או לפגוע בקרום הקלטת בעת טעינת mRNA-LNPs. אם הממברנה ניזוקה, mRNA-LNPs יאבדו בעת הטעינה.
   1. הניחו את קלטות הדיאליזה המכילות את ה-mRNA-LNPs בחזרה לתוך הכד המכיל PBS 1x, והניחו אותן לדיאליזה למשך שעתיים לפחות.
   2. לאחר הדיאליזה, הביאו את קלטות הדיאליזה המכילות את ה-mRNA-LNPs לארון בטיחות ביולוגי סטרילי, והוציאו את ה-mRNA-LNPs באמצעות מזרק עם מחט.
   3. מסננים סטריליים את ה-mRNA-LNPs באמצעות מסנן מזרק 0.22 מיקרומטר, ואוספים אותם בצינור חרוטי סטרילי.
   4. מניחים 65 μL של תמיסת mRNA-LNP לתוך מיקרו-צינור 1.5 מ"ל למטרות אפיון.
2. לדלל 10 μL של mRNA-LNPs 1:100 ב 990 μL של 1x PBS בקובט למדידת גודל הידרודינמי ואינדקס polydispersity באמצעות פיזור אור דינמי.
3. להעריך את יעילות הריכוז והאנקפסולציה של mRNA-LNPs באמצעות בדיקת פלואורסצנטיות (כלומר, RiboGreen).
   1. הכינו תמיסת מלאי של 1x TE buffer על ידי דילול חיץ TE 20x עם מים ביולוגיים מולקולריים.
   2. הכן תמיסת מלאי של 1% מאגר Triton X-100 על ידי דילול Triton X-100 עם מאגר TE אחד.
   3. הכן את מגיב פלואורסצנטי על ידי דילול מלאי מגיב 1:200 עם 1x TE buffer.
   4. לדלל את mRNA-LNPs 1:100 ב 1x TE חיץ 1% 1% Triton X-100 בלוח שחור דופן 96 באר ב 100 μL.
   5. הכינו עקומת תקן לטווח נמוך על ידי דילול תקן הרנ"א בהתאם להוראות היצרן, ולוחמו את העקומה הסטנדרטית בלוח 96 הקידוחים.
   6. הוסף 100 μL של מגיב פלואורסצנטי מדולל לכל באר המכילה mRNA-LNP מדולל או תקן מדולל.
   7. מניחים את הצלחת בת 96 הבארות בתוך קורא צלחות, ומנערים במשך דקה, ולאחר מכן 4 דקות המתנה.
   8. מדוד את עוצמת הפלואורסצנטיות של כל באר בהתאם לפרוטוקול היצרן בעירור/פליטה של 480 ננומטר/520 ננומטר.
4. השתמש בעקומה הסטנדרטית כדי להמיר את ערכי הפלואורסצנטיות לריכוזים.
   1. חישוב יעילות האנקפסולציה על ידי הפחתת הערך המתקבל מדילול LNPs במאגר TE (mRNA unencapsulated) מהערך המתקבל מדילול LNPs ב-1% Triton X-100 (סה"כ mRNA) וחלוקה בערך המתקבל מדילול LNPs ב-1% Triton X-100, על פי משוואה 4.4.
   2. חשב את ריכוז mRNA-LNP המשמש למחקרים בתאים ובבעלי חיים על ידי הפחתת הערך המתקבל מדילול LNPs במאגר TE (mRNA unencapsulated) מהערך המתקבל מדילול LNPs ב- 1% Triton X-100 (סך mRNA).
5. למדוד את pK_a של mRNA-LNPs על ידי ביצוע 6-(p-toluidino)-2-naphthalenesulfonyl כלוריד (TNS) בדיקה.
   1. הכן את מגיב TNS על ידי יצירת תמיסה של 0.16 מילימטר של TNS במים טהורים במיוחד.
      הערה: בעת השימוש בריאגנטים, הקפד לשמור אותו על קרח והרחק מאור כדי למנוע התפרקות.
   2. הכינו תמיסות חוצצות של 150 מ"מ נתרן כלורי, 20 מ"מ נתרן פוספט, 25 מ"מ אמוניום ציטראט ו-20 מ"מ אמוניום אצטט המותאמות לערכי pH שונים הנעים בין 2 ל-12 במרווחים של 0.5.
   3. הוסף 2.5 μL של LNP לכל תמיסת חיץ מותאמת pH בלוח שחור עם תחתית של 96 בארות.
   4. הוסף מגיב TNS לכל באר כך שהריכוז הסופי של TNS הוא 6 מיקרומטר.
   5. דוגרים על הצלחת בת 96 הבארות במקום חשוך למשך 5 דקות.
   6. מדוד את הפלואורסצנטיות בעירור/פליטה של 322 ננומטר/431 ננומטר באמצעות קורא לוחות פלואורסצנטיים.
   7. התאימו את הנתונים לעקומה סיגמואידית, וחשבו את pK_a באמצעות המשוואה המותאמת כדי למצוא את ה- pH שבו נצפתה 50% מהעוצמה המקסימלית.
6. תוצאות מייצגות עבור גודל הידרודינמי mRNA-LNP, PDI, יעילות אנקפסולציה ו-pK_a מוצגות בטבלה 3.

5. טרנספקציה חוץ גופית של תאי HepG2

הערה: קווי תאים שונים אחרים, כגון תאי HeLa או תאי HEK-293T, עשויים לשמש להערכת יעילות הטרנספקציה של LNPs במבחנה. כל התאים צריכים לבדוק שלילי עבור mycoplasma לפני מחקרי טרנספקציה LNP.

1. צלחת 5,000 תאי HepG2 בכל באר של צלחת בעלת דופן לבנה בעלת תחתית שקופה של 96 בארות ב-100 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים שלם (DMEM בתוספת 10% נסיוב בקר עוברי ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין)
   1. השאירו את התאים להיצמד למשך הלילה באינקובטור CO 2 מבוקר בטמפרטורה של 37°C ו-5% CO₂.
2. לדלל את mRNA-LNPs בתווך תרבית תאים מלאה, כך המינון הכולל מועבר ב 100 μL.
   1. הסר את המדיום המלא מהבארות.
   2. טפל בתאים עם mRNA-LNPs מדוללים בתווך תרבית תאים מלאה במינונים הרצויים או בתווך מלא (בקרה).
   3. הניחו את צלחת 96 הקידוחים המכילה את התאים המטופלים בחזרה לאינקובטור CO₂ המבוקר למשך 24 שעות.
3. להעריך את יעילות transfection על ידי ביצוע בדיקת luciferase.
   1. הכן את מגיב luciferase ואת 1x תא lysis buffer בהתאם להוראות היצרן.
   2. הוציאו את צלחת 96 הקידוחים המכילה את התאים מהאינקובטור, והכניסו אותה לארון בטיחות ביולוגית.
   3. הסר את מדיום תרבית התאים מכל באר של צלחת 96 בארות.
   4. הוסף 20 μL של חיץ ליזיס 1x לכל באר, ואחריו 100 μL של מגיב הבדיקה luciferase שהוכן בעבר.
   5. הגן על הצלחת מפני אור, והנח את הצלחת בקורא לוחות כדי למדוד את האות הביו-לומינסנטי של כל באר.
      הערה: תוצאות מייצגות המדגימות את הטיפול בתאי HepG2 עם C12-200 mRNA-LNPs שנוסחו בעבר מוצגות באיור 1.

6. הערכה In vivo של mRNA-LNPs בעכברים לאחר הזרקת וריד הזנב

1. לדלל את תמיסת mRNA-LNP עם PBS סטרילי 1x כך 2 מיקרוגרם של mRNA הכולל נמצא בנפח הזרקת 100 μL ורידי זנב, אשר מתאים למינון משקל גוף של כ 0.1 מ"ג / ק"ג עבור עכבר 20 גרם.
2. יש לרסן כל עכבר בשיטה מאושרת, ולנגב את הזנב עם פד טבול ב-70% אלכוהול.
   1. מלא מזרק אינסולין 29 גרם עם 100 μL של mRNA-LNP (2 מיקרוגרם) או 100 μL של 1x PBS. הסר את כל הבועות מהמזרק.
   2. הכנס את המחט עם השיפוע הפונה כלפי מעלה לתוך וריד הזנב הצידי של העכבר, והזריק לאט את 100 μL של mRNA-LNP או 1x PBS.
   3. הסר את המחט ולהפעיל לחץ עד hemostasis מושגת.
3. הכינו תמיסת ציר של 15 מ"ג/מ"ל מלח אשלגן d-luciferin ב-PBS סטרילי 1x 6 שעות לאחר ההזרקה.
   1. הפעל את מערכת ההדמיה in vivo (IVIS) ופתח את תוכנת ההדמיה.
   2. הקש Initialize כדי להכין את המכשיר לרכישת נתונים.
   3. סמן את התיבה לצד עוצמת האור והגדר את זמן החשיפה לאוטומטי. ודא שנבחר שדה הראייה הנכון למספר העכברים המצולמים.
   4. מתן 200 μL של d-luciferin intraperitoneally (150 מ"ג של luciferin לכל ק"ג משקל גוף) לעכברים שטופלו בעבר.
   5. הכניסו את העכברים לתא הרדמה המוגדר ל-2.5% איזופלורן וקצב זרימת חמצן של 2.0 ליטר/דקה.
   6. המתינו 10 דקות עד שאות הלוציפראז יתייצב לפני הדמיה של עכברים שטופלו ב-mRNA-LNP.
   7. ודא שהעכברים מורדמים לחלוטין, והפנה את קו ההרדמה למתן איזופלורן דרך חרוטי אף בתוך תא ההדמיה.
   8. העבירו את העכברים לקונוסים באף, וודאו שהם על הגב כשהבטן חשופה.
   9. סגור את דלת התא ולחץ על הלחצן Purchase בתוכנה כדי לקבל תמונות bioluminescence.
      הערה: תוצאות מייצגות עבור הדמיית כל הגוף של עכבר לאחר טיפול mRNA-LNP או 1X PBS מוצגות באיור 2.

mRNA-LNPs נוסחו באמצעות מכשיר מיקרופלואידי בעל קוטר הידרודינמי ממוצע של 76.16 ננומטר ומדד פיזור של 0.098. pKa של mRNA-LNPs נמצא 5.75 על ידי ביצוע בדיקת TNS18. יעילות האנקפסולציה עבור mRNA-LNPs אלה חושבה להיות 92.3% באמצעות בדיקת פלואורסצנטיות שונה ומשוואה 4.4. ריכוז הרנ"א הכולל ששימש לטיפול בתאים ולמינון בבעלי חיים היה 40.24 ננוגרם/מיקרוליטר. ערך זה התקבל מבדיקת הפלואורסצנטיות המתוקנת 19, במיוחד מהמרת הפלואורסצנטיות המתקבלת על ידי דילול ה- LNPs עם 1% Triton X-100 ו-1x TE buffer לריכוזים מסוימים וחישוב כמות ה- mRNA העטוף.

משוואה 4.4

CTX = ריכוז mRNA מ-LNPs מדולל ב-1% Triton X-100

C TE = ריכוז mRNA מ-LNPs מדוללים ב-1x TE buffer

הגדלת bioluminescence נצפתה עם מינונים הולכים וגדלים עם הטיפול של 5,000 תאי HepG2 לכל באר עם מינונים שונים של mRNA-LNP. ביטוי לוציפראז זוהה בקלות במינון הנמוך ביותר (5 ננוגרם/באר) ששימש במחקר זה. עם זאת, קווי תאים אחרים עשויים לדרוש כמויות שונות של mRNA-LNP כדי לראות בקלות הבדלים באור בין מינונים.

עכברים טופלו ב-2 מיקרוגרם של mRNA-LNP והוערכו כעבור 6 שעות עבור ביולומינסנציה של כל הגוף. מכיוון ש-C12-200 mRNA-LNPs מדביקים בעיקר את הכבד20, נצפה אות ביולומינסנטי חזק בבטן העליונה של העכברים שטופלו ב-LNPs שנוסחו. באמצעות תוכנת ההדמיה, אזורים מעניינים נמשכו סביב אותות הכבד כדי לחשב את שטף האור הכולל. בניסוי זה, שטף האור הכולל היה בערך 5 x 109, אשר עולה בקנה אחד עם מחקרים אחרים שנערכו עם ניסוח LNPזה 4,21.

טבלה 1: הרכב פאזה אורגני. מתוארים ריכוזי תמיסות מלאי השומנים הבודדות והנפחים שכל רכיב תורם לשלב האורגני של 1.3 מ"ל. שומנים משולבים ביחס מולארי של 35/16/46.5/2.5 (C12-200:DOPE:כולסטרול:C14-PEG2000). נפח נוסף של 10% הוכן כדי לקחת בחשבון נפחים מתים של מזרקים במהלך הפורמולה. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה 2: הגדרות מכשיר מיקרופלואידי עבור ניסוח mRNA-LNP ביחס קצב זרימה מימי לאורגני של 3:1. מזרק 5 מ"ל המכיל mRNA מדולל בחיץ חומצת לימון 10 מ"ל הוכנס לתעלה המרכזית, ואילו מזרק 3 מ"ל המכיל שומנים הוכנס לתעלה הימנית. LNPs נוסחו ביחס משקל של 10:1 של שומנים מיוננים:mRNA. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה 3: נתוני אפיון mRNA-LNP שנקבעו על ידי פיזור אור דינמי, בדיקה פלואורסצנטית שונה ובדיקת 2-(p-toluidino) naphthalene-6-sulfonic acid (TNS). אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

איור 1: תאי HepG2 שטופלו ב-mRNA mRNA-LNP של הגחלילית. בסך הכל, 5,000 תאי HepG2 נזרעו לכל באר בצלחת של 96 בארות והורשו להיצמד בן לילה. התאים גודלו בתרבית DMEM בתוספת 10% נסיוב בקר עוברי ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין. מדיום תרבית התאים הוסר לפני שהתאים טופלו במינונים של 5 ננוגרם, 10 ננוגרם ו-20 ננוגרם של פורמולציית LNP המכילה C12-200 המקפלת mRNA מקודד גחליליות לוציפראז (ב-100 מיקרוליטר של תווך תרבית תאים). לאחר 24 שעות הטיפול, מדיום תרבית התאים הוסר, ו 20 μL של חיץ ליזה 1x נוסף על התאים לפני תוספת של 100 μL של מגיב בדיקת luciferase. הביולומינסנציה מכל באר נמדדה באמצעות קורא לוחות לאחר תקופת דגירה של 5 דקות. עליות הקיפול מתוכננות ביחס לבארות בקרה שהורכבו מתאי HepG2 לא מטופלים. המובהקות הסטטיסטית הוערכה באמצעות ANOVA חד-כיווני עם מבחן Tukey פוסט-הוק. NS, לא משמעותי; עמ' < 0.0001., אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2: עכברי C57BL/6 שטופלו ב-mRNA-LNP של גחלילית. בעבודה זו, 2 מיקרוגרם של mRNA-LNP כולל ב-100 μL או 100 μL של 1x PBS ניתנו לעכברי C57BL/6 דרך וריד הזנב הצידי. (A) ביולומינסנציה של כל הגוף של עכברים שטופלו ב-mRNA-LNP או ב-1X PBS נמדדה באמצעות מערכת הדמיה in vivo (IVIS) 6 שעות לאחר מתן התרופה. תוכנת IVIS Spectrum Living Image שימשה לניתוח ורכישה של תמונות הגוף כולו. N = 3. (B) שטף האור הכולל כומת ושורטט. המובהקות הסטטיסטית הוערכה באמצעות מבחן t דו-זנבי של סטודנט. **, עמ' < 0.01. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

אין ניגודי עניינים להצהיר.