כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשלמת דיסקציה של מערכת העצבים המרכזית וההיקפית של עכברים. הרקמות המנותחות מנותחות עוד יותר ביישומים במורד הזרם, כגון צילום תמונות גסות או היסטולוגיה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשלמת דיסקציה של מערכת העצבים המרכזית וההיקפית של עכברים. הרקמות המנותחות מנותחות עוד יותר ביישומים במורד הזרם, כגון צילום תמונות גסות או היסטולוגיה.
מודלים של בעלי חיים מייצגים את סוס העבודה של תחום מדעי המוח. למרות זאת, כיום, עדיין אין פרוטוקול שלב אחר שלב לניתוח מערכת עצבים שלמה של מכרסמים, וגם אין סכימה שלמה המייצגת אותה הזמינה באופן חופשי. קיימות רק שיטות לקצירת המוח, חוט השדרה, גנגליון שורש גבי ספציפי והעצב הסיאטי (בנפרד). כאן, אנו מספקים תמונות מפורטות וסכימה של מערכת העצבים של העכברים המרכזית וההיקפית. חשוב מכך, אנו מתארים הליך חזק לביצוע הנתיחה שלו. השלב שלפני הדיסקציה של 30 דקות מאפשר לבודד את מערכת העצבים השלמה בתוך החוליה עם שרירים נקיים מקרביים ועור. דיסקציה של 2-4 שעות עוקבת אחריו תחת מיקרוסקופ מיקרו-דיסקציה כדי לחשוף את חוט השדרה ועצבי בית החזה, ולבסוף לקלף את כל מערכת העצבים המרכזית וההיקפית מהפגר. פרוטוקול זה מייצג צעד משמעותי קדימה בחקר האנטומיה והפתופיזיולוגיה של מערכת העצבים ברחבי העולם. לדוגמה, ניתן לעבד עוד יותר את גנגליוני השורש הגבי המנותחים ממודל עכברים מסוג נוירופיברומטוזיס מסוג I לצורך היסטולוגיה כדי לחשוף שינויים בהתקדמות הגידול.
המטרה הכוללת של שיטה זו היא לבודד את מערכת העצבים המרכזית וההיקפית של העכבר בחתיכה אחת. כיום אין פרוטוקול לניתוח כל מערכת העצבים של מכרסם כדי לחקור אותו ברמה גלובלית. מדעני מוח משתמשים בדרך כלל בעצב הסיאטי כתחליף לכל עצב היקפי1, ובגנגליונים L3 עד L52 כתחליף לכל גנגליון. באמצעות שיטות אלה, לא ניתן להסיק אם התוצאות ספציפיות לעצב/גנגליון המסוים. מכיוון שידוע שלפחות חלק מהפתולוגיות העצביות אינן משפיעות על כל העצבים והגנגליונים באותה מידה 3,4,5, יש לפתח טכניקה שתאפשר בידוד של מערכת העצבים השלמה של המ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הפרוטוקולים ששימשו במחקר זה אושרו על ידי Comité Institutionnel des Animaux de l'Université de Sherbrooke, מוסד מוסמך של המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים.
1. הכנה למיקרו-דיסקציה (טרום דיסקציה)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מכרסמים היו חיוניים להבנתנו את הביולוגיה והפתופיזיולוגיה של מערכת העצבים10. באופן מעניין, אף שיטה אינה מציגה את הדיסקציה המלאה של מערכת העצבים המרכזית וההיקפית של מכרסם כדי להעריך את האנטומיה והשונות הפתולוגית במודל בזמן אמת 1,2,11. איור 1 מציג סקירה כללית של שלב 1 עד שלב 4 (ההכנה למיקרו-דיסקציה, חשיפה לחוט השדרה, חשיפה לעצב בית החזה וקילוף עצב היקפי). בשלב 1, כל הקרביים מוסר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כדי למנוע את התייבשות השרירים והעצבים, יש להשרות את הפגר ב- PBS כל 10 דקות. בעת פריקת הגפיים התחתונות (שלב 1.12.6), חשוב תמיד לראות את מקלעת העצב הסיאטית ו-L2 באופק כדי למנוע נזק/קריעה. כאשר מנתחים את המוח (שלב 1.14.4), זה קריטי להימנע מלהיכנס עמוק מדי כדי לא לפגוע במוח. כאשר מנתחים את גנגליוני השורש הגבי והעצבים ההיקפיים בכלל, קריטי להשתמש במיני מלקחיים איכותיים (לא פגומים) של Dumont כדי למנוע פגיעה במבני העצבים.
במקום שלב קיבוע פורמלין של 15 דקות 10%, זלוף פ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים לא הצהירו על ניגודי אינטרסים.
JPB הוא חוקר FRSQ J1 וזוכה פרס המחקר לחוקרים מוקדמים ממשרד ההגנה האמריקאי. LQL מחזיקה בפרס קריירה למדעני רפואה מקרן Burroughs Wellcome ופרופסור לדרמטולוגיה ע"ש תומאס ל. שילדס.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Dumont מיני מלקחיים | כלים מדעיים עדינים | #11200-10 | |
| מספריים נוספים של בון | כלים מדעיים עדינים | #14084-08 | |
| פורמלין 10% | פישר מדעי | #22-046-361 | |
| PBS 1x | BioShopCanada | #PBS404.500 | |
| מלקחיים אנטומיים סטנדרטיים | כלים מדעיים עדינים | #91100-12 | |
| מספריים כירורגיים | כלי מדע עדינים | #140001-12 | |
| מספריים קפיצים של Vannas | קנט סיינטיפיק | #INS600124 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה פורסם
הסרטון יגיע בקרוב