בפרוטוקול הנוכחי פותחה אינדוקציה של היצרות שופכה בחולדות וויסטאר, ואחריה שחזור שופכה עם שתל רירית בוקאלית. בוצעה בדיקת אורתרוגרמה לאחור ובדיקת דופלר לייזר, המאמתת שחזור שופכה (לאחר היווצרות קשיחות) ומיקום השתל.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בפרוטוקול הנוכחי פותחה אינדוקציה של היצרות שופכה בחולדות וויסטאר, ואחריה שחזור שופכה עם שתל רירית בוקאלית. בוצעה בדיקת אורתרוגרמה לאחור ובדיקת דופלר לייזר, המאמתת שחזור שופכה (לאחר היווצרות קשיחות) ומיקום השתל.
שחזור שופכה הוא תחום התמחות חשוב עבור אורולוגים. רירית buccal נחשב האפשרות הטובה ביותר כאשר השתלת השופכה יש צורך, אם כי במקרים מסוימים, זה לא מתאים או צריך להיות אופטימיזציה כדי לתקן צרות נתונה. לכן, פיתוח הליכים חדשניים והערכת הצלחתם המשוערת במודלים ניסיוניים הוא חיוני כדי להתאים לצורך הקליני. עם מטרה זו, מחקר זה מתאר פרוטוקול שבו היצרות השופכה נגרמה על ידי electrocautery בחולדות Wistar. שחזור שופכה בוצע שבוע לאחר מכן עם שתל רירית buccal, שנקצר מהשפה התחתונה, והוכנס בצורה משובצת גחון. בדיקת אורתרוגרמה מדרדרית הראתה שיפור משמעותי בקוטר השופכה לאחר ניתוח שופכה בהשוואה לערך בהתאמה לאחר השראת היצרות. בנוסף, מיקום השתל הוערך על ידי ניתוח זילוח דם באמצעות דופלר לייזר. כצפוי, אזור כחול כהה התאים להשתלת רירית הבוקלית הלא וסקולרית. הליך זה יכול לדמות בהצלחה את התהליך הפתופיזיולוגי הרגיל של פגיעה בשופכה ומודולציה של רקמות, כמו גם שחזור שופכה באמצעות שתל רירית בוקאלית באופן הניתן לשחזור, ולשמש בסיס למחקר עתידי המבוסס על הנדסת רקמות או שתלי שופכה.
שחזור שופכה הוא אתגר גדול עבור מנתחים אורולוגיים בניהול פגיעה בשופכה במצב של צרות, טראומה או מומים מולדים1. עם כוונה מרפאת, urethroplasty הוא הטיפול המועדף על רוב החולים, עם פגמים ארוכים (>2 ס"מ) ואת השופכה הקדמית הדורשים צורה כלשהי של החלפת urethroplasty2. רקמות רבות שימשו כתחליפי שופכה, כולל שתלי עור בעובי מלא או מפוצל של אזורים באברי המין או מחוץ לאיברי המין, רירית דופן שלפוחית השתן, או רירית buccal2 הנפוצה. לשתלי רירית בוקלית יש מספר יתרונות, כגון הגעה מסביבה רטובה וחסרת שיער, קלות לקציר, עמידות בפני זיהום, אפיתל עבה, סבירות מופחתת להיווצרות פסאודו-דיברטיקולום, ולמינה דקה, המאפשרת אימביציה מוקדמת וחיסון3. בניגוד לדשים, לשתלים אין אספקת דם, תלוי במיטת כלי הדם של המקבל כדי לשרוד4.
מודלים של בעלי חיים של שתלים או דשים שימשו באופן נרחב לפיתוח או שכלול טכניקות כירורגיות, לימוד והבנה של הפיזיולוגיה של הרקמות, המנגנונים הבסיסיים והסיבות לכישלון, והערכת אסטרטגיות טיפול חדשניות 5,6. למרות שבעלי חיים גדולים יותר מאפשרים ביצוע טכני, מכרסמים, כלומר חולדות ועכברים, קלים יותר לטיפול ותחזוקה, עמידים למחלות, חסכוניים יותר, וחשוב מכך, עם הכלים לחקור מנגנונים מולקולריים, החיוניים לבדיקת טיפולים חדשניים 5,6. מספר מודלים של דשים ושתלים תוארו בחולדות באמצעות רקמות שונות, כלומר עור, עצם, שריר6, כלי דם5, ואפילו איברים מוצקים7. עם זאת, יש מחקר נדיר במודלים של מורין לשתלים לשחזור שופכה או הנדסת רקמות.
אף על פי כן, ההתקדמות במדע התרגום תלויה במודלים של בעלי חיים המחקים מחלות. עד כה, הסביבה הפתופיזיולוגית המקומית לא טופלה, שכן שחזור השופכה מבוצע מיד לאחר הצרות שלה. מחקר זה נועד לבצע שחזור שופכה באמצעות השתלת רירית בוקאלית בסביבה פתופיזיולוגית מקומית. עם מטרה זו, היצרות השופכה הושרה 1 שבוע לפני השחזור שלה. מודל ניסיוני זה, המבוצע בחולדות, מאפשר לבחון טיפולים חדשניים ולחקור את המנגנונים המולקולריים שלהם ואת היתרונות הקליניים שלהם בעתיד.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיה 2010/63/EU. הנהלים אושרו על ידי הגוף המוסדי לרווחת בעלי חיים, המורשה על ידי DGAV, הרשות הפורטוגלית המוסמכת להגנה על בעלי חיים (מספר רישיון 0421/000/000/2021). זכר Wistar Han IGS (Crl:WI(Han) חולדות (400-500 גרם) בגיל 12-14 שבועות שימשו במחקר הנוכחי. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים).
1. הכנת פתרונות
2. אינדוקציה כירורגית של היצרות השופכה
הערה: הניתוחים בוצעו באמצעות מיקרוסקופ סטריאו (10x) (ראה טבלת חומרים).
3. הליך כירורגי של urethroplasty עם השתלת רירית buccal
הערה: הניתוחים בוצעו באמצעות מיקרוסקופ סטריאו (10x) (ראה טבלת חומרים).
4. ניטור לאחר הניתוח
5. הערכת זילוח דם
הערה: זרימת הדם נמדדת מיד לפני השראת קשיחות, מיד לפני ניתוח שופכה, ומיד לאחר ניתוח שופכה.
6. הערכה רדיוגרפית
הערה: אישור אינדוקציה מחמירה ופתרון מחמיר לאחר ניתוח שופכה מאושרים עם אורתרוגרמה מדרדרת. הערכה זו מבוצעת שבוע לאחר אינדוקציה מחמירה (לפני urethroplasty) ו 2 שבועות לאחר urethroplasty.
7. המתת חסד
הערה: המתת חסד מבוצעת 3 שבועות לאחר ניתוח השתנה (4 שבועות לאחר השראת קשיחות), מיד לאחר הערכת הזלוף האחרונה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בסך הכל 12 חולדות וויסטאר זכריות, במשקל 400-500 גרם ובנות 12-14 שבועות, שימשו להשראת היצרות שופכה. אורתרוגרמה מדרדרית (RUG1) בוצעה שבוע לאחר מכן8, ואישרה את הצלחת הטכניקה. קוטר השופכה נמדד במילימטרים ברמת השראת ההיקשות. לאחר מכן, urethroplasty עם השתלת רירית buccal בוצע בפנים הגחון של השופכה חולדה. אותן חולדות הוגשו לשופכה מדרדרית שנייה (RUG2) 14 יום לאחר ניתוח השתן, וקוטר השופכה נמדד במילימטרים ברמת מיקום השתל. הקטרים הממוצעים של RUG1 ו-RUG2 היו 1.04 מ"מ ו-1.52 מ"מ, בהתאמה, מה שמראה שיפור משמעותי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
Urethroplasty עם שתלי רירית buccal הוא אבן פינה מרכזית בשחזור השופכה. עם זאת, יש לפתח נהלים חדשניים כדי לייעל את אלה שכבר תוארו ולהקים חדשים, כגון חומרים מהונדסים רקמות ושתלים ביולוגיים, כדי להפחית סיבוכים ותחלואה. פורסמו מספר נהלים לביסוס מודלים פרה-קליניים ולהגדרת טכניקות כירורגיות. Souza et al.1 ערכו מחקר שכלל 12 ארנבים ניו זילנדים. בוצע חתך עור אורכי גחוני, והשופכה גויסה מהטוניקה אלבוגינאה, ואחריה כריתה של קטע גבי של השופכה, מה שיצר פגם. במקביל, השתלת רירית בוקאלית נלקחה מהלחי והושמה כשיבוץ גב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
אנו מודים לז'ואאו לייטאו, ראש מחלקת הרדיולוגיה של Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte, ולקטיה פרננדס, טכנאית המחלקה לרדיולוגיה של Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte, על שיתוף הפעולה במימוש אורתרוגרמות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אטיפאמזולה | אוריון פארמה | אנטיסדאן (אטיפמזול) מיועד להפיכת ההשפעות המרגיעות ומשככי הכאבים. | |
| בופרנורפין | ריכטרפארמה | בופרנורפין הוא נגזרת של האלקלואיד האופיואידי תבאין, שהוא משכך כאבים חזק יותר (פי 25-40) ועמיד יותר ממורפין. | |
| מיקרוסקופ סטריאוסקופ כירורגי Carl Zeiss Opmi-1 FC | מיקרוסקופיית קרל צייס, גרמניה | OPMI 1 FC של ZEISS מסמל איכות, דיוק ואמינות. המערכת הידנית קלה לשימוש ומספקת תמונות באיכות גבוהה עם האופטיקה האגדית של ZEISS. | |
| קרפרופן | זואטיס | קרפרופן הוא תרופה אנטי-דלקתית שאינה סטרואידית (NSAID) מקבוצת חומצה פרופיונית. | |
| קטטר 22 G. x 1'' | ב. בראון | בטיחות אינטרוקן | קטטר IV של אתילן פרופילן פלואורי (FEP) עם מבנה יציב יותר לגישה לעורקים. |
| אנרופלוקסצין | באייר | אנרופלוקסצין הוא אנטיביוטיקה פלואורוקינולון. | |
| פנטניל | בראון | 3644960 | פנטניל הוא משכך כאבים סינתטי אופיאטי חזק. |
| פלומאזניל | פרסניוס קבי | אנטגוניסט בנזודיאזפינים משמש להפיכה מלאה או חלקית של ההשפעות המרגיעות שנגרמו על ידי בנזודיאזפינים. | |
| צריבה בטמפרטורה גבוהה | פיאב | F7244 | צריבה חד-פעמית, סטרילית, טמפרטורה גבוהה (1200 & מעלות; C), קצה דק של 28 מ"מ. |
| ג'ל אינסטילאגל | פארקו-פארמה | חומר סיכה מבוסס תאית, עם תכונות הרדמה וחיטוי מקומיות. | |
| איופרומיד | באייר | חומר ניגוד להזרקה לא-יוני, עם יוד. | |
| מערכת הדמיית לייזר דופלר (מדלמת פרפוזיה moorLDI2-HIR ותוכנה ייעודית) | MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, אקסמינסטר, בריטניה | 5710 | מודלי האנגיוגנזה משתמשים בהדמיית לייזר דופלר להערכת זרימת דם בגפיים האחוריות, כאשר אחת מהן קשורה בניתוח. תוכנת מדידה והשוואה ייעודית מאפשרת להגדיר אזורים רלוונטיים להערכת זרימת הדם בגפה איסכמית לעומת לא-איסכמית, כדי לקבוע "יחס רפרפוזיה" שניתן להעריך בתדירות הנדרשת ועל פני מספר ימים באותו נושא. |
| ג'ל עיניים לשמן | דקרה | ג'ל עיניים המשמש בבעלי חיים למניעת יובש בעיניים במהלך הרדמה. פעולה של סיכה ולחות על הקרנית והלחמית. | |
| זכר ויסטאר האן IGS (Crl:WI(Han) עכברים | מעבדות נהר צ'ארלס, ספרד | גיל שתים עשרה עד ארבעה עשר שבועות | |
| מתדומידין | וירבאק | 037/01/07RFVPT | מדטומידין הוא תרופה סינתטית המשמשת כהרדמה כירורגית. |
| מידאזולאם | לבספאל | תרופות בנזודיאזפין משמשות להרדמה ולהרדמה פרוצדורלית. | |
| מערכת אנגיוגרפיה מונופלן | פיליפס מדיקל סיסטמס | אזוריון 7 M20 | מערכת צילום רנטגן פלואורוסקופית נייחת שנועדה לאופטימיזציה של המשתמשים להעריך חזותית וכמותית את האנטומיה והתפקוד של כלי דם בלב, במוח ואיברים נוספים, וכן במערכת הלימפה. |
| מלקחי יתושים | הנרי שיין | 102-4346 | הרטמן-מוסקיטו מלקח המוסטטי מעוקל מפלדת אל-חלד 3-1/2" |
| מחזיק המחט | הנרי שיין | 100-2570 | מחזיק מחט מאיו-היגר, נירוסטה, 14 ס"מ |
| מחזיק מחט עיניים | אסיקו | AE-6143 | מחזיק מחט ברנקר העדין ביותר ללא מנעול |
| נתרן פנטוברביטל | אקופר | פנטוברביטל נתרן הוא מלח הנתרן של פנטוברביטל המשמש להמתת חסד. | |
| מלקחיים מחודדים | אסקולאפ | BD335R | מיקרופורספס, קצה 0.30 מ"מ |
| פוליסורב 6.0 | מדטרוניק (Covidien) | UL-101 | תפר מצופה סינתטי נספג נועד להפחית את התגובה הדלקתית ברקמות, ואחריה עטיפה הדרגתית של התפר על ידי רקמת חיבור סיבית. |
| פרובידון-יוד | מיילן | פובידון-יוד 10% הוא תרופה חיטוי, המשמשת כחומר חיטוי לפני ואחרי הניתוח. | |
| להב סכין nº 11 | ב. בראון | BB511 | פלדת פחמן, סטרילית |
| מספריים אביביים | הנרי שיין | 600-4826 | מספריים כירורגיים 31 castroviejo |
| מלקחיים כירורגיים | אסקולאפ | BD33R | מיקרופוספס, קצה 0.20 מ"מ |
| מספריים כירורגיים | אסקולאפ | MA873R | מספריים מיקרו איריס, קצות שרפ מעוקלים |
| SurgiPro 7.0 | מדטרוניק (קובידן) | VP-702-X | תפר פוליפרופילן מונופילמנט לא נספג מיועד לשימוש בקשירת רקמות רכות כלליות. |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.