הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הגנה על תאי שריר הלב H9c2 מפני עקה חמצונית על ידי קרוצטין באמצעות מיטופגיה בתיווך מסלול PINK1/Parkin

2.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/65105

⸱

26 במאי 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, 2Fangshan Chinese Medicine Hospital, Beijing University of Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

בהתבסס על ניסויים במבחנה , מחקר זה חשף את המנגנון של קרוצטין בתיקון נזקי עקה חמצונית של קרדיומיוציטים על ידי השפעה על מיטופגיה, שבה מסלול האיתות PINK1/Parkin ממלא תפקיד חשוב.

תקציר

מחקר זה נועד לחקור את ההשפעה החמצונית המגנה על עקה של קרוצטין על תאי שריר הלב H9c2 בתיווךH 2 O2באמצעות ניסויים במבחנה, ולחקור עוד יותר אם המנגנון שלו קשור להשפעה של מיטופגיה. מחקר זה נועד גם להדגים את ההשפעה הטיפולית של חומצה חריע על עקה חמצונית בקרדיומיוציטים ולחקור האם המנגנון שלה קשור להשפעת מיטופגיה. כאן, מודל עקה חמצונית מבוסס H 2 O2נבנה והעריך את מידת הפגיעה בעקה חמצונית של קרדיומיוציטים על ידי זיהוי רמות של לקטט דהידרוגנאז (LDH), קריאטין קינאז (CK), מלונדיאלדהיד (MDA), סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD), קטלאז (CAT) וגלוטתיון פרוקסידאז (GSH Px). מיני חמצן תגובתי (ROS) - זיהוי צבע פלואורסצנטי DCFH-DA, JC-1 צבע וצבע טונל שימשו להערכת נזק מיטוכונדריאלי ואפופטוזיס. שטף אוטופגי נמדד על ידי הדבקת אדנווירוס Ad-mCherry-GFP-LC3B. חלבונים הקשורים למיטופגיה זוהו לאחר מכן באמצעות כתמים מערביים ואימונופלואורסנציה. עם זאת, קרוצטין (0.1-10 מיקרומטר) יכול לשפר באופן משמעותי את כדאיות התא ולהפחית אפופטוזיס ונזקי עקה חמצונית הנגרמים על ידי H 2 O2. בתאים עם הפעלה אוטופגית מוגזמת, קרוצטין יכול גם להפחית את זרימת האוטופגיה ואת הביטוי של חלבונים הקשורים למיטופגיה PINK1 ופרקין, ולהפוך את העברת פרקין למיטוכונדריה. קרוצטין יכול להפחית את נזקי העקה החמצונית בתיווך H 2 O2ואת האפופטוזיס של תאי H9c2, והמנגנון שלו היה קשור קשר הדוק למיטופגיה.

מבוא

אוטם שריר הלב חריף (AMI) הוא נמק שריר הלב מסכן חיים הנגרם על ידי איסכמיה חמורה ומתמשכת והיפוקסיה לעורקים הכליליים 1,2. התערבות כלילית מלעורית (PCI) היא אחת האסטרטגיות הטיפוליות הקו הראשון עבור AMI, ובדרך כלל מגנה על קרדיומיוציטים מפני נזק איסכמי 3,4. שריר הלב הדיסטלי יהיה חסר אספקת דם וחמצן אם לא יטופל במהירות וביעילות לאחר AMI, מה שמוביל לנמק איסכמי וסיבוכים קרדיווסקולריים נוספים 5,6. קידום התאוששות קרדיומיוציטים ומזעור נזק בלתי הפיך לשריר הלב לאחר החמצת ההזדמנות הניתוחית PCI היה נקודה חמה מחקרית. לאחר AMI, קרדיומיוציטים נמצאים במצב של איסכמיה והיפוקסיה, וכתוצאה מכך עיכוב של זרחן חמצוני מיטוכונדריאלי, הפחתה של NAD+ ל-NADPH, והפחתה מוגברת של אלקטרונים בודדים7. כתוצאה מכך, תגובת ההפחתה החלקית של חמצן יוצרת עודף של מיני חמצן תגובתי (ROS) ובסופו של דבר מובילה לנזק לעקה חמצונית לקרדיומיוציטים8. הצטברות מוגזמת של ROS גורמת לחמצון שומנים, ומשבשת עוד יותר את המבנה והתפקוד של קרומי המיטוכונדריה. התוצאה היא פתיחה מתמשכת של נקבוביות המעבר בחדירות המיטוכונדריה וירידה בפוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית, מה שגורם לאפופטוזיס ונמק.

מעכבי אנזים ממיר אנגיוטנסין (ACE), חוסמי קולטן אנגיוטנסין (ARBs), מעכבי β-אדרנוצפטורים, אנטגוניסטים לאלדוסטרון ותרופות סטנדרטיות אחרות ב-AMI יכולים לסייע בשיפור תפקוד הלב לאחר אוטם שריר הלב ולמנוע התרחשות של אירועים ממאירים, כגון הפרעות קצב ועיצוב מחדש של החדר השמאלי9. עם זאת, הישרדות לאחר אוטם ופרוגנוזה מושפעים מאוד מגודל האוטם, ולא הושגו תוצאות משביעות רצון להפחתת אפופטוזיסקרדיומיוציטים 10,11. לפיכך, פיתוח תרופות לקידום התאוששות קרדיומיוציטים לאחר אוטם שריר הלב הפך לנושא דחוף.

הרפואה המסורתית מהווה מקור השראה למחקר הפרמצבטי המודרני מזה שניםרבות 12,13,14,15. לרפואה הסינית המסורתית (TCM) יש היסטוריה ארוכה בטיפול ב- AMI, וסדרה של מחקרי בקרה אקראיים בשנים האחרונות אישרו כי TCM אכן יכול לשפר את הפרוגנוזה של חולים16,17. על פי תיאוריית TCM, AMI נגרמת על ידי קיפאון דם18,19, ולכן תרופות לקידום זרימת הדם משמשות בדרך כלל לטיפול ב- AMI בשלב החריף20. ביניהם, זעפרן הוא האמין יש השפעה חזקה על הפעלת הדם קיפאון, והוא משמש לעתים קרובות בטיפול חריף של AMI. Crocetin, מרכיב עיקרי של זעפרן, עשוי לשחק תפקיד מפתח בהגנה cardiomyocytes21.

במחקר זה, תאי שריר הלב H9c2 הושרו על ידי H 2 O2כדי לדמות איסכמיה / רפרפוזיה של שריר הלב, הגורמת לפגיעה קרדיומיוציטים של AMI, וקרוצטין שימש כהתערבות כדי לחקור את השפעתו המגנה מפני פגיעה חמצונית הנגרמת על ידי לחץ שריר הלב. המנגנון של קרוצטין המגן על קרדיומיוציטים נחקר עוד יותר באמצעות מיטופגיה. חשוב מכך, מאמר זה מספק התייחסות לגישה הטכנית לחקר המיטופגיה ומתאר בפירוט את כל הליך הניסוי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הניסויים בוצעו במעבדה לפיזיולוגיה באוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית, סין. כל שיטות הלימוד בוצעו בהתאם להנחיות ולתקנות הרלוונטיות של אוניברסיטת בייג'ינג.

1. תרבית תאים

  1. הוסף 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין למדיום הבסיסי Eagle medium (DMEM) של Dulbecco (עם 4.5 גרם/ליטר D-גלוקוז, 4.g.g/L L-גלוטמין ו-110 מ"ג/ליטר נתרן פירובט; ראה טבלת חומרים) כדי להכין מדיום DMEM מלא.
  2. הפשירו את תאי שריר הלב H9c2 הקפואים בחנקן נוזלי (ראו טבלת חומרים) במים חמים בטמפרטורה של 37°C תוך ערבוב מהיר ואחיד עד שהקרח נמס.
  3. מעבירים את התאים לצינור צנטריפוגה ומוסיפים פי ארבעה מנפח התווך המלא של ה-DMEM. צנטריפוגה ב 358 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר ולהשליך את supernatant באמצעות פיפטה.
  4. לדלל את תרחיף התא המתקבל עם מדיום תרבית, לנשוף בעדינות, ולחסן את התאים בבקבוק תרבית. תרבות באינקובטור ב 37 °C עם 5% CO2.

2. קביעת כדאיות התא

  1. המסת קרוצטין (ראה טבלת חומרים) בדימתיל סולפוקסיד (DMSO) לריכוזים של 0.05 מילימול, 0.1 מילימול, 0.5 מילימול, 1 מילימול, 5 מילימול, 10 מילימול, 50 מילימול, 100 מילימטר ו-200 מילימול.
  2. לנתק את תאי שריר הלב H9c2 על ידי טריפסין, ולאחר מכן לנטרל את התערובת עם מדיום DMEM מלא.
  3. מעבירים את התאים לצינור צנטריפוגה וצנטריפוגה במהירות 179 x גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. השליכו את הסופרנאטנט וערבבו את התאים במדיום המלא של DMEM על ידי נשיפה עדינה.
  4. ספור את התאים באמצעות צלחת ספירת תאי דם22 (ראה טבלת חומרים) ודלל אותם ל 5 × 104 תאים / מ"ל עם DMEM תווך מלא.
  5. חלקו את התאים לתשעה חלקים שווים. הוסף DMSO (מדולל ביחס של 1:1,000 עם מדיום שלם DMEM) לקבוצת הביקורת והוסף ריכוזים שונים של קרוצטין לקבוצות הנותרות ביחס של 1:1,000.
  6. זרעו את התאים בצלחות 96 באר ב 100 μL לכל באר. יש להשליך את הסופרנאטנט לאחר הדגירה במשך 24 שעות ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.
  7. לאחר הוספת 100 μL של מדיום בסיסי DMEM, לדגור על התאים במשך 4 שעות ולהוסיף 20 μL של MTS (ראה טבלה של חומרים).
  8. לדגור על התאים עוד שעתיים, למדוד את הבליעה באורך גל של 490 ננומטר, ולחשב את כדאיות התא.
    הערה: כדאיות התא = (OD מטופל - OD ריק) / (פקד OD - OD ריק) × 100.

3. קביעת לקטט דהידרוגנאז (LDH), קריאטין קינאז (CK), מלונדיאלדהיד (MDA), סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD), גלוטתיון פרוקסידאז (GSH Px) וקטלאז (CAT)

  1. זרעו את תאי H9c2 בצלחת 6 בארות בצפיפות של 1 × 105 תאים. יש לאסוף את הסופרנאטנט לאחר ההתערבות ולזהות רמות LDH ו-SOD, בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת חומרים).
  2. אספו את הסופרנאטנט ושטפו אותו במי מלח חוצצי פוספט (PBS) פעם אחת. מוסיפים את התא ליזט לצלחת התרבית ומניחים לו לשבת על קרח במשך 20 דקות. אוספים את הנוזל מצלחת התרבית לתוך צינור צנטריפוגה.
  3. זיהוי רמות CK, MDA, GSH-PX ו-CAT בהתאם להוראות היצרן23 (ראה טבלת חומרים וקובץ משלים 1).
  4. זהה את ריכוז החלבון הכולל של הליזיס בשיטת חומצה ביכומונית (BCA) כדי לתקן את הריכוז של CK, MDA, GSH-PX ו- CAT24 (ראה טבלת חומרים).

4. קביעת ROS

  1. זרעו את תאי H9c2 בצלחת של 48 בארות בצפיפות של 5 × 103 תאים. יש לדלל DCFH-DA (ראו טבלת חומרים) ביחס של 1:1,000 עם התווך נטול הסרום. יש להשליך את הסופרנאטנט של התא ולשטוף את התא פעמיים עם מדיום ללא סרום.
  2. הוסיפו 150 μL של DCFH-DA מדולל לכל באר ודגרו בטמפרטורה של 37°C למשך 20 דקות. שטפו את התאים שלוש פעמים במדיום נטול סרום וצלמו תמונות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי (ראו טבלת חומרים).

5. איתור פוטנציאל של קרום המיטוכונדריה

  1. זהה את פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית באמצעות ערכת בדיקת פוטנציאל קרום מיטוכונדריאלי JC-125 (ראה טבלת חומרים). השליכו את מדיום התרבית ושטפו אותם פעם אחת עם מדיום ללא סרום.
  2. הוסף פתרון עבודה JC-1 לכל צינור וערבב אותם היטב. יש לדגור בטמפרטורה של 37°C למשך 20 דקות ולשטוף את התאים פעמיים עם חיץ צביעה JC-1. הוסף מדיום שלם לכל באר וצלם תמונות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

6. בדיקת צביעת טונל

  1. השתמש בערכת בדיקת אפופטוזיס TUNEL (ראה טבלת חומרים) כדי לקבוע שיעורי אפופטוזיס26. יש להשליך את הסופרנאטנט ולשטוף את הגלולה פעם אחת עם מדיום ללא סרום.
  2. הוסף תמיסת קיבוע תאים ושטוף אותם עם PBS פעם אחת לאחר הדגירה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות.
  3. מוסיפים 0.3% טריטון-100 לכל באר ודגרים בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות. שטפו את התאים עם PBS פעמיים. הוסף פתרון עבודה לזיהוי TUNEL ודגור בטמפרטורה של 37°C בחושך למשך 60 דקות.
  4. הוסף טבלית איטום מרווה נגד פלואורסצנטיות המכילה 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; ראה טבלת חומרים) וצלם תמונות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

7. ניטור זרימה אוטופגית על ידי טרנספקציה של mCherry GFP-LC3B אדנווירוס

  1. החליפו מחצית מהמדיום בכל באר במדיום טרי. הוסף Ad-mCherry GFP-LC3B adenovirus (ריבוי זיהום [MOI] של 2) למדיום התרבית והוסף 5 מיקרוגרם / מ"ל פוליברן (ראה טבלת חומרים) כדי לשפר את יעילות הזיהום.
  2. החלף את המדיום הטרי לאחר 24 שעות והתבונן בביטוי החלבון הפלואורסצנטי תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.
  3. תרבית את התאים עם אותם תנאים כמו סעיף 1 לאחר אישור זיהום מוצלח וירוס וללכוד תמונות תחת מיקרוסקופ קונפוקלי27.
    הערה: יותר מ-20% מהתאים הראו פלואורסצנטיות של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP), מה שמצביע על זיהום מוצלח.

8. ניתוח כתמים מערביים

  1. אספו תאים למיצוי חלבון מלא וערכו אותם (RIPA, מעכב פרוטאז ומעכב פוספטאז = 100:1:1; ראו טבלת חומרים) על קרח למשך 30 דקות.
  2. הוסף מאגר העמסת חלבון 5x לדגימת החלבון לאחר כימות החלבון והרתיח את הדגימות במשך 10 דקות.
  3. אלקטרופורזה הדגימות המכילות כמויות שוות של חלבון עם נתרן דודציל-סולפט פוליאקרילאמיד ג'ל אלקטרופורזה (SDS-PAGE) ג'ל28. לאחר מכן, העבירו את הדגימות לקרומי פוליווינילידן דיפלואוריד (PVDF).
  4. חסמו את קרומי PVDF למשך שעה אחת עם אבקת חלב רזה 5% ודגרו עם הנוגדן הראשוני (PINK1, פרקין; ראו טבלת חומרים) ב-4°C למשך הלילה והנוגדן המשני בטמפרטורת החדר למשך שעה.
  5. זהה את רצועות המטרה באמצעות פתרון chemiluminescence משופר (ECL) ומערכת זיהוי chemiluminescence. השתמש בתוכנת Image J כדי לכמת את הפסים באמצעות צפיפות,28.

9. זיהוי טרנסלוקציה מיטוכונדריאלית של פרקין על ידי immunofluorescence

  1. שימו לב ללוקליזציה של פרקין עם מיטוכונדריה על ידי צביעה אימונופלואורסצנטית כפולה. השליכו את הסופרנאטנט של התא מכל קבוצה ושטפו אותם שלוש פעמים עם PBS.
  2. תקן את התאים במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר עם 4% paraformaldehyde ולהוסיף 0.1% triton-100 ב- PBS.
  3. חסום עם תמיסת בלוקים ללא בעלי חיים (ראה טבלת חומרים) למשך שעה אחת כדי למנוע קשירה לא ספציפית בין חלבונים ונוגדנים ולהפחית את הרקע הפלואורסצנטי.
  4. יש לדגור עם נוגדן ראשוני (פרקין ו-Tom20; ראו טבלת חומרים) ב-4°C למשך הלילה.
  5. מוסיפים נוגדן משני פלואורסצנטי (ראו טבלת חומרים) ודגרים בחושך למשך שעה.
  6. הוסף את טבליות המרווה נגד פלואורסצנטיות המכילות DAPI וצלם תמונות תחת המיקרוסקופ הקונפוקלי.

10. ניתוח סטטיסטי

  1. ביצוע ניתוח סטטיסטי באמצעות תוכנת גרפים וניתוח (ראה טבלת חומרים).
  2. השווה משתנים רציפים בין קבוצות באמצעות ANOVA חד-כיוונית. P < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השפעות של crocetin על כדאיות התא
קרוצטין ב-0.1 מיקרומטר, 0.5 מיקרומטר, 1 מיקרומטר, 5 מיקרומטר, 10 מיקרומטר, 50 מיקרומטר ו-100 מיקרומטר השפיע באופן משמעותי על התאים, בעוד שלקרוצטין בריכוזים מעל 200 מיקרומטר הייתה השפעה משמעותית על השגשוג של תאי H9c2 (איור 1A). לאחר 4 שעות של טיפול עם 400 מיקרומטר H 2 O2, כדאיות התא הופחתה במידה ניכרת, וקרוצטין יכול היה להפוך את השינוי הזה במידה מסוימת (איור 1B). מאחר שלא נצפה הבדל משמעותי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

חקר מרכיבים יעילים מתרכובות מורכבות של תרופות טבעיות באמצעות טכנולוגיה מתקדמת היה מוקד חם של מחקר TCM29, והוא יכול לספק ראיות מעבדה לפיתוח תרופות עתידיות לאחר אימות. חריע היא תרופה מייצגת בטיפול ב"קידום זרימת הדם ומזעור קיפאון הדם" והיא נמצאת בשימוש נרחב בטיפול באוטם שריר הלב30,31. מאמינים כי לזעפרן יש השפעות דומות לחריע והשפעתו בקידום זרימת הדם ובהסרת קיפאון הדם טובה משמעותית מחריע31,32...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי הקרן למדעי הטבע של בייג'ינג (מס '7202119) והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '82274380).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.25% טריפסיןGibco2323363
1% פניצילין-סטרפטומיציןSigmaV900929
5x מאגר העמסת חלבוןבייג'ינג Pulilai Gene TechnologyB1030-5
Ad-mCherry GFP-LC3B אדנו-וירוסBeyotimeC3011
Alexa Fluor 488 מצומד עז נגד ארנב IgG (H+L) ג'ונגשאן גשר הזהב ביוטכנולוגיה ושות', בע"מZF-0514
Alexa Fluor 594-מצומד עז נגד עכבר IgG (H+L)Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.ZF-0513
תמיסת חסימה ללא בעלי חייםCST15019s
נוגדן נגד פרקיןסנטה קרוזsc-32282
נוגדן אנטי-ורוד1ABclonalA11435
נוגדן נגד TOM20ABclonalA19403
אנטי-&בטא;-אקטין  נוגדןABclonalAC026
ערכת בדיקת חלבון BCAKeyGEN BiotechKGP902
צלחת ספירת תאי דםServicebioWG607
ערכות בדיקת CATנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA007-1-1
מערכת זיהוי כימילומינסנציהשנחאי Qinxiang מפעל מכשירים מדעייםChemiScope 6100
CK ערכות בדיקהנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA032-1-1
קו-אנזים Q10 (CoQ 10)מקליןC6129
CrocetinChengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd.RFS-Z01802006012
טבליות מרווה אנטי-פלואורסצנטיות המכילות DAPIZhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.ZLI-9557
DCFH-DABeyotimeS0033S
DMSOSolarbioD8371
מדיום הנשר השונה (DMEM) שלGibco8122091
תמיסת כימילומינסנציה משופרת (ECL)NCM BiotechP10100
סרום בקר עוברי (FBS)Corning-Cellgro35-081-CV
פריזמה GraphPad 7.0 ערכות בדיקת https://www.graphpad.com/
GSH-Px נאנג'ינגג'יאנצ'נג מכון ביו-הנדסהA005-1-2
H9c2 תאי שריר הלבבייג'ינג Dingguochangsheng Biotech Co., Ltd.CS0062
חזרת פרוקסידאז (HRP)-מצומד עז נגד עזים IgG (H+L) ג'ונגשאן גשר הזהב ביוטכנולוגיה ושות', בע"מZB-2305
חזרת פרוקסידאז (HRP) - מצומד עז נגד עכבר IgG (H+L) ג'ונגשאן גשר הזהב ביוטכנולוגיה ושות', בע"מZB-2301
JC-1 ערכת בדיקת פוטנציאל ממברנה מיטוכונדריאליתLABLEADJ22202
ערכות בדיקת LDHנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA020-2-2
ערכות בדיקת MDAנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA003-2-2
מתנולאלאדיןA2114057
בדיקת MTSPromegaG3581
PerhydrolG-cloneCS7730
מעכב פוספטאזCWBIOCW2383
PolybreneBeyotimeC0351
ממברנות פוליווינילידן דיפלואוריד (PVDF)MilliporeISEQ00010
מאגר ליזה של בדיקת רדיו-אימונופרזיציה (RIPA)SolarbioR0010
SDS-PAGE ג'ליםשנחאי Epizyme טכנולוגיה ביו-רפואיתPG112
SDS-PAGE ריצה אבקת מאגרServicebioG2018-1L
SDS-PAGE העברת אבקת מאגרServicebioG2017-1L
ערכות בדיקת SODנאנג'ינג Jiancheng מכון ביו-הנדסהA001-2-2
אבקת מלח Tris-bufferedServicebioG0001-2L
Triton X-100Sigma
TUNELBeyotimeC1086
Tween-20SolarbioT8220
ערכת בדיקת אפופטוזיס SLCC9172

מקורות

  1. Anderson, J. L., Morrow, D. A. Acute myocardial infarction. The New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).
  2. Samsky, M. D., et al. Cardiogenic shock after acute myocardial infarction: a review. JAMA. 326 (18), 1840-1850 (2021).
  3. Abbate, A., et al. Survival and cardiac remodeling benefits in patients undergoing late percutaneous coronary intervention of the infarct-related artery: evidence from a meta-analysis of randomized controlled trials. Journal of the American College of Cardiology. 51 (9), 956-964 (2008).
  4. Santoro, G. M., Carrabba, N., Migliorini, A., Parodi, G., Valenti, R. Acute heart failure in patients with acute myocardial infarction treated with primary percutaneous coronary intervention. European Journal of Heart Failure. 10 (8), 780-785 (2008).
  5. Dhruva, S. S., et al. Association of use of an intravascular microaxial left ventricular assist device vs intra-aortic balloon pump with in-hospital mortality and major bleeding among patients with acute myocardial infarction complicated by cardiogenic shock. JAMA. 323 (8), 734-745 (2020).
  6. Wang, Y., et al. Risk factors associated with major cardiovascular events 1 year after acute myocardial infarction. JAMA Network Open. 1 (4), e181079(2018).
  7. Jou, M. J., et al. Melatonin protects against common deletion of mitochondrial DNA-augmented mitochondrial oxidative stress and apoptosis. Journal of Pineal Research. 43 (4), 389-403 (2007).
  8. La Piana, G., Fransvea, E., Marzulli, D., Lofrumento, N. E. Mitochondrial membrane potential supported by exogenous cytochrome c oxidation mimics the early stages of apoptosis. Biochemical and Biophysical Research Communications. 246 (2), 556-561 (1998).
  9. De Filippo, O., et al. Impact of secondary prevention medical therapies on outcomes of patients suffering from Myocardial Infarction with NonObstructive Coronary Artery disease (MINOCA): A meta-analysis. International Journal of Cardiology. 368, 1-9 (2022).
  10. Davidson, S. M., et al. Multitarget strategies to reduce myocardial ischemia/reperfusion injury: JACC review topic of the week. Journal of the American College of Cardiology. 73 (1), 89-99 (2019).
  11. Caricati-Neto, A., Errante, P. R., Menezes-Rodrigues, F. S. Recent advances in pharmacological and non-pharmacological strategies of cardioprotection. International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 4002(2019).
  12. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of rhizoma drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Design, Development, and Therapy. 16, 1743-1766 (2022).
  13. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. Journal of Ethnopharmacology. 300, 115748(2023).
  14. Zhi, W., Liu, Y., Wang, X., Zhang, H. Recent advances of traditional Chinese medicine for the prevention and treatment of atherosclerosis. Journal of Ethnopharmacology. 301, 115749(2023).
  15. Liu, M., et al. Hypertensive heart disease and myocardial fibrosis: How traditional Chinese medicine can help addressing unmet therapeutical needs. Pharmacological Research. 185, 106515(2022).
  16. Zhang, X. X., et al. Traditional Chinese medicine intervenes ventricular remodeling following acute myocardial infarction: evidence from 40 random controlled trials with 3,659 subjects. Frontiers in Pharmacology. 12, 707394(2021).
  17. Hao, P., et al. Traditional Chinese medicine for cardiovascular disease: evidence and potential mechanisms. Journal of the American College of Cardiology. 69 (24), 2952-2966 (2017).
  18. Delgado-Montero, A., et al. Blood stasis imaging predicts cerebral microembolism during acute myocardial infarction. Journal of the American Society of Echocardiography. 33 (3), 389-398 (2020).
  19. Lu, C. Y., Lu, P. C., Chen, P. C. Utilization trends in traditional Chinese medicine for acute myocardial infarction. Journal of Ethnopharmacology. 241, 112010(2019).
  20. Gao, Z. Y., Xu, H., Shi, D. Z., Wen, C., Liu, B. Y. Analysis on outcome of 5284 patients with coronary artery disease: the role of integrative medicine. Journal of Ethnopharmacology. 141 (2), 578-583 (2012).
  21. Huang, Z., et al. Crocetin ester improves myocardial ischemia via Rho/ROCK/NF-kappaB pathway. International Immunopharmacology. 38, 186-193 (2016).
  22. Green, M. R., Sambrook, J. Estimation of cell number by hemocytometry counting. Cold Spring Harbor Protocols. 2019 (11), (2019).
  23. Zeng, Q., et al. Assessing the potential value and mechanism of Kaji-Ichigoside F1 on arsenite-induced skin cell senescence. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2022, 9574473(2022).
  24. Chazotte, B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (9), (2011).
  25. Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M., Kioussi, C. Detection of apoptosis by TUNEL assay. Methods in Molecular Biology. 887, 41-47 (2012).
  26. Yuan, Y., et al. Palmitate impairs the autophagic flux to induce p62-dependent apoptosis through the upregulation of CYLD in NRCMs. Toxicology. 465, 153032(2022).
  27. Kurien, B. T., Scofield, R. H. Western blotting. Methods. 38 (4), 283-293 (2006).
  28. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of rhizoma drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-κB and PI3K/AKT pathways. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 6634837(2021).
  29. Amin, A., Hamza, A. A., Bajbouj, K., Ashraf, S. S., Daoud, S. Saffron: a potential candidate for a novel anticancer drug against hepatocellular carcinoma. Hepatology. 54 (3), 857-867 (2011).
  30. Kamalipour, M., Akhondzadeh, S. Cardiovascular effects of saffron: an evidence-based review. The Journal of Tehran Heart Center. 6 (2), 59-61 (2011).
  31. Mani, V., Lee, S. K., Yeo, Y., Hahn, B. S. A metabolic perspective and opportunities in pharmacologically important safflower. Metabolites. 10 (6), 253(2020).
  32. Broadhead, G. K., Chang, A., Grigg, J., McCluskey, P. Efficacy and safety of saffron supplementation: current clinical findings. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 56 (16), 2767-2776 (2016).
  33. Gao, H., et al. Insight into the protective effect of salidroside against H2O2-induced injury in H9C2 cells. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 1060271(2021).
  34. Chen, G. Y., et al. Prediction of rhizoma drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 5233462(2021).
  35. Reers, M., et al. Mitochondrial membrane potential monitored by JC-1 dye. Methods in Enzymology. 260, 406-417 (1995).
  36. Radovits, T., et al. Poly(ADP-ribose) polymerase inhibition improves endothelial dysfunction induced by reactive oxidant hydrogen peroxide in vitro. European Journal of Pharmacology. 564 (1-3), 158-166 (2007).
  37. Song, M., et al. Interdependence of parkin-mediated mitophagy and mitochondrial fission in adult mouse hearts. Circulation Research. 117 (4), 346-351 (2015).
  38. Gan, Z. Y., et al. Activation mechanism of PINK1. Nature. 602 (7896), 328-335 (2022).
  39. Nguyen, T. N., Padman, B. S., Lazarou, M. Deciphering the molecular signals of PINK1/Parkin mitophagy. Trends in Cell Biology. 26 (10), 733-744 (2016).
  40. Yamada, T., Dawson, T. M., Yanagawa, T., Iijima, M., Sesaki, H. SQSTM1/p62 promotes mitochondrial ubiquitination independently of PINK1 and PRKN/parkin in mitophagy. Autophagy. 15 (11), 2012-2018 (2019).
  41. Klionsky, D. J., et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition). Autophagy. 17 (1), 1(2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

טיפול ב-Crocetinויסות מיטופגיהפוטנציאל ממברנה מיטוכונדריאליתמיני חמצן רעיליםשטף אוטופגיWestern Blottingמיקרוסקופיה קונפוקלית
הגנה על תאי שריר הלב H9c2 מפני עקה חמצונית על ידי קרוצטין באמצעות מיטופגיה בתיווך מסלול PINK1/Parkin
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.