מאמר זה מתאר בפירוט את נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בטיפול בספונדיליטיס ankylosing בעכברי ניסוי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מאמר זה מתאר בפירוט את נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בטיפול בספונדיליטיס ankylosing בעכברי ניסוי.
Ankylosing spondylitis (AS) היא צורה מחמירה ומשביתה בהדרגה של דלקת פרקים המשפיעה בעיקר על השלד הצירי. מחלה זו מערבת בעיקר את עמוד השדרה ואת המפרק sacroiliac. איחוי עמוד השדרה והמפרק הסקרואיליאק עלול להתרחש בשלב מאוחר יותר של המחלה, וכתוצאה מכך נוקשות בעמוד השדרה וקיפוזיס, כמו גם קושי בהליכה, המשפיע קשות על איכות העבודה ופעילויות היומיום ומטיל נטל כבד על החולה, המשפחה והחברה. תשומת לב גוברת הוקדשה ללא טיפול תרופתי כטיפול אלטרנטיבי עבור AS. מוקסיבציה היא טכניקה טיפולית עתיקה המשמשת ברפואה הסינית המסורתית (TCM). טיפול Du-moxibustion, טיפול חיצוני ייחודי וחדשני שפותח על בסיס moxibustion רגיל, יש השפעה טיפולית מובהקת על AS. Du-moxibustion משלב במיומנות את הטכניקות התואמות של TCM כדי לשלב מרידיאנים, acupoints, צמחי מרפא סיניים, ו moxibustion. מאמר זה מתאר בפירוט את נהלי הפעולה ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בעכברי ניסוי כדי לספק בסיס ניסיוני לחקר מנגנון Du-moxibustion בטיפול ב- AS.
Ankylosing spondylitis (AS) היא צורה מחמירה ומשביתה בהדרגה של דלקת פרקים המשפיעה בעיקר על השלד הצירי. על פי הסקר האפידמיולוגי האחרון, ~ 0.01%-1.8% מהאנשים בעולם סובלים ממצב זה1, רובם גברים צעירים (יחס זכר לנקבה הוא ~ 2-3: 1)2. שכיחות AS באוכלוסייה הסינית היא 0.2%-0.4%. מחלה זו מערבת בעיקר את עמוד השדרה ואת המפרק sacroiliac. איחוי עמוד השדרה ומפרק העצה עלול להתרחש בשלבים מאוחרים יותר של המחלה, וכתוצאה מכך נוקשות בעמוד השדרה וקיפוזיס, כמו גם קושי בהליכה, המשפיע קשות על איכות העבודה ופעילויות היומיום ומטיל נטל כבד על החולה, המשפחה והחברה1. נכון לעכשיו, אין פתרון מוחלט עבור AS, והטיפולים הניתנים, הן תרופתיים והן לא תרופתיים, מתמקדים בעיקר בהקלה על כאב, האטת התקדמות המחלה, ושיפור איכות החיים. בשנים האחרונות, מכיוון שהאפשרויות הפרמקותרפיות היו מוגבלות מאוד3, תשומת לב גוברת הוקדשה לטיפול לא תרופתי, שהפך לטיפול אלטרנטיבי עבור AS. בסין, מטופלים מעדיפים לעתים קרובות טיפול חיצוני המורכב מרפואה סינית מסורתית (TCM), שיש לו תופעות לוואי קלות ונוחות רבה במהלך הטיפול.
מוקסיבציה היא טכניקה טיפולית עתיקה המשמשת ברפואה סינית מסורתית. Du-moxibustion היא טכניקת טיפול חיצונית המורכבת מ"מוקסיבציה תרופתית עם קצף" על קטע עמוד השדרה של מרידיאן דו. הוא משמש בעיקר לטיפול ב- AS והראה בטיחות ויעילות. בהשוואה למוקסיבציה רגילה, Du-moxibustion יש את המאפיינים של אזור moxibustion רחב, חרוט מוקסה גדול, כוח אש חזק, טמפרטורה גבוהה4. סקירה שיטתית ומטא-אנליזה מציעות כי מוקסיבציה היא טיפול משלים יעיל עבור AS5. מחקר שנערך לאחרונה אישר כי הסימפטומים הקליניים וכמה גורמים דלקתיים של חולי AS השתפרו על ידי moxibustion6. מחקרים גילו כי Du-moxibustion יכול להגדיל את התוכן במוח של β-אנדורפין ולהפעיל אפקט משכך כאבים מרכזי7, לווסת את הביטוי של הגן HLA-B27 8, ולעכב את שיעור ההישנות של AS. Du-moxibustion יש גם השפעה משפרת על התקדמות AS על ידי הפחתת אינדקס דלקתי ESR (ESR) ורמות של חלבון מגיב C (CRP), פפטיד C-terminal של קולגן מסוג I (CTX-I), וחלבון Dickkopf1 (DKK1)9,10.
מחקר קליני אחר הראה כי Du-moxibustion יכול להתאים עוד יותר את תת-קבוצות תאי T הלא מסודרות, Ig, ולהשלים C3 כדי לאזן את מנגנון החיסון11. במונחים של חילוף חומרים בעצמות, מוקסיבציה יכולה לעכב את עליית פוספטאז אלקליין בסרום (ALP) וזרחן בסרום (S-P), להגדיל את רמת הסידן בסרום (S-Ca), צפיפות מינרלים בעצם (BMD) וחוזק העצם12. יתר על כן, Du-moxibustion יכול לתקן את תפקוד עמוד השדרה במספר נקודות כדי להקל על תסמיני עייפות בחולי AS13. כמה מחקרים בבעלי חיים חשפו את המנגנון הפוטנציאלי של מוקסיבציה בטיפול ב- AS. מחקר הצביע על כך שמוקסיבציה שיפרה באופן משמעותי את המצב הבריאותי הכללי, הפחיתה את רמות עובי כפות הרגליים והפחיתה את רמות IL-1β, PGE2, IL-6 ו-TNF-α בדגימות רקמת הרצועה בעמוד השדרה. ניתוח מסלולים מטבוליים קישר את המטבוליטים שזוהו למחזור TCA, כמו גם שומנים, חומצות אמינו, פלורת מעיים ומטבוליזם של פורין14. מחקר אחר הראה כי מוקסיבציה דיכאה את הביטוי של ציטוקינים מעודדי דלקת, IL-1β, TNF-α, IL-17 ו-IL-6; הפחתת רמות ה-mRNA של RANKL, RANK, ALP ו-OCN; ושיפר את התכונות ההיסטופתולוגיות בעכברי AS15.
בעוד מחקרים אלה מציעים כי moxibustion עשוי להיות יעיל בטיפול AS, מחקר נוסף נדרש כדי לאשר ממצאים אלה ולקבוע את פרוטוקול הטיפול האופטימלי עבור moxibustion בחולים עם AS. הצוות שלנו יצר ושינה את הטיפול במוקסיבציה בהתבסס על התיאוריה הבסיסית והפעולה המעשית של מוקסיבציה סינית מסורתית, אשר בוצעה באופן נרחב ויושמה בפרקטיקה הקלינית הסינית במשך למעלה מ -35 שנה. למרות שיש מעט מחקרים באיכות גבוהה על הטיפול ב- AS על ידי Du-moxibustion, האינדיקציה שלה בטיפול ב- AS נתמכה בראיות. עם זאת, מנגנון הטיפול ב- AS עם Du-moxibustion ראוי למחקר נוסף. מחקר בבעלי חיים הוא שיטה חשובה לחקור את המנגנון של Du-moxibustion בטיפול ב- AS. הפעולה הקלינית של Du-moxibustion היא בוגרת יחסית, אך משמשת לעתים רחוקות בחקר המנגנון בניסויים בבעלי חיים. מאמר זה מתאר בפירוט את הפעולות ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בטיפול בעכברי ניסוי AS.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה הניסויית לרווחת בעלי חיים של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית (לא. SDUTCM20230831301).
1. הכנת בעלי חיים
2. הקמת מודל עכבר AS
הערה: מודל AS הושרה עם פרוטאוגליקן סחוס (PG), שהיא שיטת מידול קלאסית 16,17,18,19,20,21. עכברים מזן BALB/c חוסנו שוב ושוב ב-PG כדי לגרום לדלקת בגידים וספונדיליטיס. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים הקשורים לחומרים, ריאגנטים ומכשירים המשמשים בפרוטוקול זה.
3. דו-מוקסיבציה
הערה: הכינו מראש את שלושת חומרי הגלם החשובים ביותר עבור Du-moxibustion (איור 1).
4. הערכת מדד דלקת פרקים (AI)
5. מבחן רוטרוד
הערה: מבחן הרוטרוד משמש להערכת קואורדינציה מוטורית ושיווי משקל על ידי רישום הזמן שהעכברים מבלים על התוף המסתובב. ניסוי זה כלל שלושה ניסויים המופרדים במרווחים של 20 דקות. נתוני המבחן הרשמיים נרשמו מהניסוי השלישי, כאשר שני הראשונים שימשו כתרגילי אימון.
6. בדיקת שדה פתוח (OFT)
הערה: OFT משמש להערכת מצב התנועה האוטונומית, במטרה לזהות התנהגות פתולוגית. ארבע זירות שדה פתוחות מרובעות (50 ס"מ x 50 ס"מ x 40 ס"מ) הוצבו יחד כדי ליצור את המנגנון. תחתית הקופסה חולקה לתשעה ריבועים שווים.
7. המתת חסד ואיסוף דגימות
8. ניתוח היסטולוגי
9. בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA)
10. ניתוח סטטיסטי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
עכברי מודל הנגרמים על ידי PG פיתחו תסמינים של דלקת מפרקים היקפית, המאופיינת באדמומיות ונפיחות של הגפיים והבהונות, ופיתחו בהדרגה דלקת מפרקים צירית כבר בשבוע 14, הדומה מאוד לביטוי של AS. לכן, מודל העכבר AS נחשב מוצלח אם מדד דלקת פרקים (AI) היה מעל 3 נקודות ב 14 שבועות לאחר הזריקה האחרונה22. כאשר כפות העכברים נראו נפוחות, הטיפול Du-moxibustion בוצע פעם בשבוע בסך הכל 3x. לאחר הטיפול, העכברים הומתו על ידי נקע צוואר הרחם תחת הרדמה עמוקה isoflurane, הדם שלהם נאסף, ואת הקרסוליים נכרתו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
AS מתבטא קלינית בכאבי נפיחות בגב, במותניים ובמפרקים, ועיוות בעמוד השדרה ונוקשות המפרקים עלולים להתרחש במקרים חמורים26. אבחון וטיפול מוקדם יכולים לשפר את איכות החיים, להפחית את שיעורי הנכות ולשפר את הפרוגנוזות של חולים עם AS. על פי הרפואה הסינית המסורתית (TCM), AS הוא האמין להיגרם על ידי מחסור של יאנג בכליה דו מרידיאן, כמו גם הצטברות של רוע קר פנימי. TCM מחזיקה בדעה כי מוקסיבציה, המבוססת על הרעיון של מרידיאנים, יכולה ליצור צ'י שמחמם את פני השטח של הגוף. לאחר מכן צ'י זה נע כלפי מטה לאורך המרידיאנים ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.
עבודה זו נתמכה על ידי התוכנית הכללית של הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '82174491) ופרויקט הירושה של בית הספר האקדמי לרפואה סינית מסורתית Qilu (No. לו וייהאן [2020]132). תודה למרכז חיות המעבדה של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית שסיפק לנו תנאים ניסיוניים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 10% EDTA | שנחאי מקלין ביוכימיה ושות', בע"מ, שנחאי, סין | ||
| רפידות אלכוהול | HYNAUT, צ'ינגדאו Hainuo הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, צ'ינגדאו, סין | ||
| מכונת הרדמה | ציוד רפואי & שירותים INT. בע"מ, קיילי, צינורות | ||
| Axygen, Corning, NewYork, כטב"ם | |||
| להשלים את האדג'ובנט של Frech (CFA) | aladdin, שנחאי, סין | F393378 | |
| צמר גפן כדור | הנאן RUIKE ציוד רפואי ושות', בע"מ, Xinxiang, סין | ||
| גזה כותנה | Henan RUIKE ציוד רפואי ושות', בע"מ, Xinxiang, סין | ||
| קרש חיתוך | דקורין להכנה | ||
| מסחוס מפרקי בקר | סיגמא-אולדריץ', MO, ארה"ב | D8428 | |
| קרם אפילציה | Veet, רקיט בנקיזר (סין) השקעות ושות' בע"מ, שנחאי, סין | ||
| בקנה מידה אלקטרוני | שנחאי Yajin אלקטרונית טכנולוגיה ושות', בע"מ, שנחאי, סין | ||
| צינור | אפנדורףAxygen, קורנינג, ניו-יורק, חומר | ||
| בייג'ינג Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., בייג'ינג, סין | |||
| ג'ינג'ר | הכנה | ||
| GraphPad פריזמה 7 תוכנה | GraphPad תוכנה, בוסטון, ארה"ב | ||
| קוצץ שיער | סופר אנושי קבוצה ושות' בע"מ, Jinhua, סין | ||
| רפידות | חימוםShenzhen Leshuo Tech Co., Ltd., שנזן, סין | ||
| פרוינד לא שלם s אדג'ובנט (IFA) | אלאדין, שנחאי, סין | F393371 | |
| הזרקה מזרק | שאנדונג Xinhua Ande ציוד רפואי ושות', בע"מ, Zibo, סין | ||
| isoflurane | שנזן Rayward Life Technology Co., LTD, שנזן, סין | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu ריחני תעשיה ושות', בע"מ, Shijiazhuang, סין | ||
| מסחטה | בראון (שנחאי) ושות', בע"מ, שנחאי, סין | ||
| סכין | מצית הכנה | ||
| Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | |||
| מרגמה | Luoyang Yinai קרמיקה טכנולוגיה ושות', בע"מ, Luoyang, סין | ||
| עכבר IL-17 ELISA ערכת | אבסין, שנחאי, סין | abs520009-96T | |
| עכבר TNF ואלפא; אליסה קיט | ווהאן Sanying, ווהאן, סין | KE10002 | |
| תות נייר | Yishui County Mulinsang נייר ושות', בע"מ, Linyi, סין | ||
| OFT | Xinruan, שנחאי, סין | XR-XZ301 | |
| נייר | הכנה | ||
| עצמית | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC., אוקספורד, בריטניה | ||
| מעודן מוקסה קטיפה | הכנה | עצמית | |
| rotarod | Xinruan, שנחאי, סין | XR-6C | |
| scientz-48L מטחנת רקמות קריוגנית בתפוקה גבוהה | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| מספריים | שאנדונג Jiaren ציוד רפואי ושות', בע"מ, Zibo, סין | ||
| מכונת חיתוך פרפין חצי אוטומטית | Leica Camera AG, Watznach, גרמניה | ||
| SPSS 25.0 תוכנה | International Business Machines Corporation, ניו-יורק, UAS | ||
| TCM אבקת | טיפים להכנה | ||
| Biosharp, Labgic, בייג'ינג, סין | |||
| מברשת כתיבה | Yishui County Mulinsang נייר ושות', בע"מ, Linyi, סין |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.