פרוטוקול זה מתאר שיטה להקל על איסוף דגימות מדגימות כריתת ערמונית רדיקלית. המטרה היא למפות, לאפיין ולנתח במיקרו-מאקרו דגימות רקמה מהדגימות על סמך קריטריונים אנטומופתולוגיים לפני אחסונן בביובנק.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שיפור האמינות הביו-בנקאית של גידול הערמונית באמצעות טכניקת דגימה משופרת ואפיון היסטולוגי
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
רכישת דגימות רקמת גידול טריות ומאופיינות היטב היא קריטית לביצוע מחקרי "אומיקס" איכותיים. עם זאת, זה יכול להיות מאתגר במיוחד בהקשר של סרטן הערמונית (PC) בשל האופי הייחודי של איבר זה ואת ההטרוגניות הגבוהה הקשורים גידול זה. מצד שני, אפיון היסטופתולוגי של דגימות לפני אחסונן מבלי לגרום לשינויים משמעותיים ברקמה הוא גם אתגר מסקרן. במסגרת זו אנו מציגים שיטה חדשה לרכישה, מיפוי, אפיון וניתוח מיקרו של רקמת ערמונית מנותחת על פי קריטריונים אנטומופתולוגיים.
בניגוד לפרוטוקולים שפורסמו בעבר, שיטה זו מפחיתה את הזמן הדרוש לניתוח היסטופתולוגי של דגימת הערמונית מבלי לפגוע במבנה שלה, שהוא קריטי להערכת שולי הניתוח. יתר על כן, הוא מאפשר תיחום ודיסקציה מיקרו-מאקרו של דגימות רקמת ערמונית טריות, תוך התמקדות באזורים גידוליים היסטולוגיים המוגדרים על ידי קריטריונים פתולוגיים כגון ציון גליסון, נגעים מקדימים (neoplasia intraepithelial intraepithelial בדרגה גבוהה - PIN), ונגעים דלקתיים (prostatitis). דגימות אלה מאוחסנות לאחר מכן בביובנק לצורך ניתוחי מחקר עוקבים.
מבוא
סרטן הערמונית (PC) הוא הסרטןהשני בשכיחותו בקרב גברים וגורם המוות המובילהחמישי בעולם1. הטיפול והפרוגנוזה של המטופל תלויים בבימוי ובדירוג (ציון גליסון) של הגידול, כפי שמעידים שיעורי ההישרדות הגבוהים יותר של 5 שנים של גידולים מקומיים ונמוכים (דירוג גליסון 6) (99%) בהשוואה לציוני גליסון גבוהים וגידולים גרורתיים (31%)2.
הישנות מקומית של PC וכישלון טיפול נקשרו להטרוגניות הגנטית הגבוהה האופיינית של גידול זה מסוג3. בנוסף, PC נחשבת למחלה מולטיפוקלית עם מספר מוקדי גידול בעלי מאפיינים מורפולוגיים, היסטולוגיים ומולקולריים שונים4, אשר עש....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
שיטה זו פותחה באמצעות מאמצים משותפים הכוללים שירותים קליניים שונים (אורולוגיה, פתולוגיה וביובנק בית החולים לה פה). המחקר נערך בהתאם להנחיות מוסדיות, לאומיות ובינלאומיות לרווחת האדם, והוא קיבל אישור מוועדת האתיקה למחקר ביו-רפואי בבית החולים לחקירת סניטריה Universitario y Politécnico La Fe (ולנסיה, ספרד). כל הדגימות אוחסנו בביובנק של בית החולים לה פה (PT13/0010/0026). הנוהל הכולל מפורט באיור 1.
איור 1: תכנית ההליך ה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התוצאות מראות כי טכניקה זו אפשרה להשיג חומר גידולי ב-61% מהמקרים שנחקרו (25 מתוך 41 מקרים) (טבלה 1).
טבלה 1: נתונים היסטופתולוגיים של דגימות מחקר. סיכום נתונים היסטופתולוגיים עבור הדגימות ששימשו במחקר. גליל האבחון מתייחס לדגימת ביופסיית הערמונית המתקבלת למטרות אבחון, ואילו הגליל המעובד מתאים לגליל המתקבל מדגימת כריתת הערמונית למטרות מחקר. ND: אין נתונים; LL: לובולה שמאלית; RL: לובולה ימנית; TTB: נטל הגידול הכולל.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בכל מחקר, השגת דגימות איכותיות היא דרישה חיונית להפחתת הטיות שיטתיות ולהשגת תוצאות אמינות22. לכן, יש לקחת בחשבון בקרה על משתנים פרה-אנליטיים כגון הטמפרטורה שבה הדגימות מעובדות ומאוחסנות, הזמן שחלף מאיסוף הדגימות ועד לאחסון, השימוש בחומרים מעוקרים או ההשפעות שיכולות להיות להוספת חומרים משמרים או תוספים אחרים על הדגימות בכל פרוטוקול הכולל דגימות ביולוגיות. לא רק מפתח זה, אלא גם זיהוי נכון וקודיפיקציה של דגימות, כמו גם אפיון פתולוגי שלהם, הם קריטיים. אחרת, ייתכן שיהיה מספר גדול של דגימות באיכות גבוהה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים.
תודות
א.ל. מאשר חוזה פוסט-דוקטורט "מרגריטה סאלאס" (מספר 21-076), ו-MAM-T חוזה מחקר "מריה זמבראנו" (מספר MAZ/2021/03 UP2021-021). שני החוזים מומנו על ידי האיחוד האירופי - הדור הבא של האיחוד האירופי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מלקחיים של Cadiere | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 471049. 18 שימושים. |
| שקופיות קונבנציונליות | Knittel Glass | 2021 | טחון/קצה חלבי |
| Cryostat microtome | Thermo Fisher Scientific | --- | Criostato CryoStar NX50 |
| Cryotubes | Greiner Bio-One GmbH | Ref.: 122280. | CRYO S. PP, עם מכסה בורג, סטרילי. |
| מערכת כירורגית דה וינצ'י | אינטואיטיבית | PN1052082-US 10/2021 | XI |
| דגם מכשירי דיסקציה | באייר | --- | שתי פינצטה ולהב כירורגי |
| DPX יוקיט | Medizin- und Labortechnik GmbH | 6.00.01.0001.0001.06.01.01 | |
| Eosin | Agilent | 157252 | |
| מלקחיים דו-קוטביים Fenestrated | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 471205. 14 חיים. |
| כוח דו קוטבי | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 471405. 12 שימושים. |
| מקפיאים | תרמו סיינטיפיק | דגם 907. -80 º C | |
| Hematoxylin | Agilent | 157251 | |
| Inmunohistochemistry Slides | Agilent-Dako | K802021-2 | |
| נהג מחט גדול | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 471006. 15 שימושים. |
| מלקחיים דו קוטביים של מרילנד | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 471172. 14 שימושים. |
| מיקרוסקופ | אולימפוס | --- | אולימפוס cx40 |
| להבי מיקרוטום | PFM רפואי | a35 | |
| מספריים מעוקלים מונופולאריים | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 470179. 10 שימושים. |
| OCT compound | NEG-50 | LOT.117340 | |
| PlusSpeed S מכשיר ביופסיה חד פעמי עם קצה משופע | Peter Pflugbeil GmbH | PSS-1825-S | |
| מלקחיים ProGasp | אינטואיטיבי | PN1052082-US 10/2021 | מספר חלק: 471093. 18 שימושים. |
| מחזיק מדגם דיסק | Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts | 30 מ"מ | |
| דיו טישו | Pelikan | 2021 | דיו 4001 שחור מבריק (301168) |
| Xylol | Quimipur | Ref. 169 |
מקורות
- Rawla, P. Epidemiology of prostate cancer. World Journal of Oncology. 10 (2), 63-89 (2019).
- Epstein, J. I. The 2019 Genitourinary Pathology Society (GUPS) white paper on contemporary grading of prostate cancer. Archives of Pat....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
