כאן, אנו מציגים שיטת קיבוע מתלים משופרת באמצעות מעיל חולדות כדי לשתק חולדות ביעילות במהלך ניסויי דיקור. יתר על כן, המבנה והיישום של מנגנון קיבוע זה, כמו גם הוראות והערכה לשימוש בו בטיפול אלקטרואקופונקטורה, מובהר.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מציגים שיטת קיבוע מתלים משופרת באמצעות מעיל חולדות כדי לשתק חולדות ביעילות במהלך ניסויי דיקור. יתר על כן, המבנה והיישום של מנגנון קיבוע זה, כמו גם הוראות והערכה לשימוש בו בטיפול אלקטרואקופונקטורה, מובהר.
במחקר ניסיוני בסיסי בדיקור, חולדות משמשות בדרך כלל כחיות מעבדה. עם זאת, קשה להם לשמור על יציבה קבועה. במהלך הליכי אלקטרואקופונקטורה, אימוביליזציה נכונה של חולדות היא חיונית. כיום נעשה שימוש בשיטות שונות של קיבוע חולדות, כולל קיבוע בהרדמה, קיבוע פלטפורמה גבוהה, קיבוע קשירה וקיבוע עם מעיל חולדה מתוצרת עצמית. עם זאת, שיטות אלה יש מגבלות שלהם, אשר עשויים להשפיע על יעילות ויכולת ההפעלה של הניסוי במידה מסוימת. פרוטוקול זה מציג שיטה להשעיה ותיקון של חולדות באמצעות בגדי חולדות. ראשית, חולדות לבושות במעילי חולדות התואמים את צורת גופן, תוך ניצול העדפתן לחושך ולהתחפרות. פעולת המחט יכולה להתבצע לאחר שהחולדות לבשו בגדי חולדות. כאשר הן מושעות, החולדות דוממות יחסית, מכיוון שגפיהן אינן יכולות לזוז. שיטת קיבוע זו מציעה לא רק יתרונות חסכוניים וידידותיים למשתמש, אלא גם מבטיחה קיבוע יציב ואמין של החולדות במצב רגוע ונוח. זה גם ממזער ביעילות את צריכת הזמן, שטח ניסיוני ומשאבי כוח אדם. בנוסף, שיטה זו מאפשרת חשיפה של רוב נקודות הדיקור המשמשות לדיקור סיני בחולדות. מאמר זה מתרכז בעיקר בהרכב המכשיר, הכולל מעיל חולדה שעוצב במיוחד, מתלה קיבוע מוגבה ומבני החיבור ביניהם. בנוסף, תוצג דוגמה להמחשה כדי להדגים את היישום של שיטת קיבוע תרחיף המבוססת על בגדי חולדות בהליכי דיקור אלקטרואקופונקטורה של חולדות.
דיקור סיני הוא טיפול מסורתי המאופיין על ידי מחט בנקודות דיקור ספציפיות או עמדות אחרות כדי למנוע ולטפל במחלות. אלקטרואקופונקטורה משלבת מחטי פיליפורם עם גירוי חשמלי1, המאפשר שליטה מדויקת על כמות הגירוי על ידי התאמת פרמטרים רלוונטיים, ומקדם סטנדרטיזציהשל טיפול בדיקור 2. בשנים האחרונות, המחקר על מנגנוני הדיקור האלקטרואקופונקטורי המשיך להתרחב ולהעמיק 3,4, מה שהוביל לעלייה שנתית במחקרים המתמקדים במנגנוני אלקטרואקופונקטורה5.
במחקר בסיסי על אלקטרואקופונקטורה, חולדות הן החיות הנפוצות ביותר. במהלך טיפול אלקטרואקופונקטורה, על המושתל להישאר ללא תזוזה כדי להבטיח הליך חלק. שלא כמו בניסויים קליניים עם בני אדם, בעלי חיים קטנים המשמשים בניסויים בבעלי חיים אינם יכולים לעקוב אחר פקודות באופן מודע במהלך הליכי אלקטרואקופונקטורה ארוכים של 15-30 דקות. זה מציב בפני החוקרים אתגר עיקרי של השגת קיבעון יציב ואמין. קיבעון לא נכון עלול להוביל לרגשות שליליים כגון חרדה, דיכאון ופחד אצל בעלי חיים6, מה שלא רק מגביר את הסיכון לפגיעה בחולדות ואת הסיכוי להינשך עבור צוות הניסוי, אלא גם משפיע על היציבות והשכנוע של תוצאות המחקר.
במחקרים קודמים, חוקרים השתמשו לעתים קרובות בקיבוע הרדמה7, קיבוע פלטפורמה גבוהה8, קיבוע קשירה6,9, או קיבוע מעיל חולדה10 לפני פעולות דיקור או אלקטרואקופונקטורה. עם זאת, בהתחשב בהשפעות ההרדמה על הגוף11 ותפקוד המוח12, ובהתחשב בכך שדיקור סיני מבוצע על חולים בהכרה במקרים קליניים, הרדמה עשויה להשפיע במידה מסוימת על תוצאות המחקר. לכן, בהשוואה לקיבוע בהרדמה, קיבוע נוח של חולדות במצב ער הוא אפשרות טובה יותר.
עם זאת, במצב הלא מורדם, גם לשיטות קיבוע שונות יש מגבלות משלהן, כולל חשיפה מוגבלת לדיקור עקב כיסוי מעיל החולדה על חולדות 10, הצורך של לפחות שני פרטים לבצע את הפעולה13, קיבוע לא מתכוונן בגודל14, או מצב הלחץ של חולדות בתנוחה כפויה6. כדי לטפל בבעיות טכניות אלה, עיצבנו מעיל חולדה ומתלה קיבוע המתאים לטיפול בדיקור סיני ברוב חלקי גוף החולדה. זה יכול לעזור לחוקרים לבצע ביעילות הליכי דיקור עם חולדות.
הרציונל מאחורי פרוטוקול זה הוא כדלקמן: ראשית, כיסוי הראש הסגור על מעיל החולדה מנצל את הנטייה הטבעית של החולדות לחושך ולהתחפרות, ובכך מגביל את טווח פעילותן. שנית, חבלי הקשירה ליד מפרקי הגפיים של החולדות מספקים ריסון דחיסה פיזי, ומטילים מגבלות מסוימות על תנועותיהן. עם זאת, חולדות עדיין מסוגלות לקפוץ ולנוע אופקית אפילו בזמן שהן לובשות את הז'קט. לבסוף, מאחר שחולדות אינן יכולות לגעת בקרקע ללא נקודת כוח קבועה כאשר הן משעות, הוספנו מכשיר קיבוע מתלה למעיל החולדות, מה שהגביל עוד יותר את תנועותיהן והבטיח שימור מחטים. הרכב התקן הקיבוע מוצג באיור 1.

איור 1: תרשים סכמטי של מעיל החולדה וקיבוע התלייה. (A) המראה הכללי של מעיל החולדה במבט שטוח. (B) מבט תלת-ממדי על מעיל החולדה. (C) מעיל חולדה מותאם במיוחד עם חתך ליד נקודות הדיקור בראש ובגב. (D) איור של מספר חולדות התלויות בו זמנית על המדף המוגבה. 1: מבט כולל על בד; 2: שקע Forelimb; 3: מוצא גפיים אחוריות; 4: קשירת חבל; 5: חלל שנוצר לאחר תפירה; 6: חתך לחשיפת נקודות דיקור ראש; 7: חתך לחשיפת נקודות דיקור בגב ובמותניים. 8: תנוחת תפרים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים שנערכו על החולדות במחקר זה עמדו בתקן הלאומי להנחיות לרווחת חיות מעבדה ואתיקה (2018) שאומץ רשמית על ידי הרפובליקה העממית של סין והמדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה מהוצאת האקדמיות הלאומיות15. פרוטוקול זה מורכב משלושה שלבים עיקריים. ראשית, מעילי החולדות מותאמים ומותאמים על פי צורות הגוף האינדיבידואליות של חולדות במשקלים שונים. לאחר מכן, מניפולציה דיקור מתבצעת בעקבות הליכים סטנדרטיים. לבסוף, החולדות תלויות במעילים שלהן בזמן שהמחטים נשארות במקומן כדי לענות על הצורך בהתערבויות סימולטניות בקרב חולדות באותה קבוצה.
1. הכנה מראש מחט

איור 2: תרשים תואם של צורת הגוף של חולדה וגודל מעיל חולדה תואם. בתרשים, הפרמטר a מייצג את המרחק הרוחבי בחלק האחורי של המפרק בין הגפיים העליונות לתא המטען של החולדה. ערך זה משמש כמדידת הריווח בין החורים החודרים לגפיים העליונות של מעיל החולדה. באופן דומה, פרמטר b מייצג את המרחק הרוחבי בגב שבו הגפיים התחתונות הדו-צדדיות של החולדה מתחברות עם תא המטען. מדידה זו קובעת את המרווח בין החורים החודרים לגפיים התחתונות של מעיל החולדה. הפרמטר c מסמל את היקף החלק העבה ביותר בבטנה של החולדה, שניתן להשתמש בו כמדידת רוחב לבד מעיל החולדה. הפרמטר d מייצג את המרחק מבית השחי של החולדה לקדמת האיליום שלה, וקובע את המרחק האורכי בין החורים העליונים והתחתונים של הז'קט. הפרמטר e מתאים למרחק האורכי מקצה אפה של החולדה לבסיס זנבה, ומשמש כמדידת האורך של בד הז'קט של החולדה. הפרמטר f מציין את היקף המפרק המחבר בין הגפה העליונה לגזע החולדה, ומשמש כהיקף החור שדרכו עוברות הגפיים העליונות. הפרמטר g מייצג את היקף המפרק המחבר בין הגפיים התחתונות לתא המטען של החולדה, וקובע את היקף החור שדרכו עוברות הגפיים התחתונות. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
| משקל גוף (g) | פרמטרים של צורת גוף (cm) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
טבלה 1. תוצאות המדידה של פרמטרים של צורת גוף של חולדות עם משקלי גוף שונים.

איור 3: דיאגרמה המתארת את המראה הפיזי של מעיל החולדה ואת השימוש בו . (A) מבט חיצוני מישורי על מעיל החולדה. צורת המעיל של החולדה דומה לטרפז ישר זווית, עם פתחים נפרדים בצד שמאל ובצד ימין כדי שהגפיים העליונות והתחתונות של החולדה יוכלו לעבור דרכם. (B) מבט חיצוני פתוח על מעיל החולדה. סגירת כיסוי הראש יוצרת חלל סגור למחצה, המשמש מרכיב חיוני לפיתוי חולדות להיכנס. (C) מבט מהצד על חולדה לבושה במעיל. ברגע שגפי החולדה עוברות דרך פתחי הבגדים, הרצועות מוצלבות על פני השטח הגחוני של תא המטען ומהודקות היטב מאחור במתח מתאים. זה מבטיח שהחולדה משותקת יחסית. (D) מבט בטני של חולדה לבושה במעיל חולדה. המשטח הגחוני של הז'קט חושף את עור הבטן של החולדה, ומאפשר גישה נוחה לדיקור סיני בנקודות הגחון. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
סרטון 1: לבישת מעיל העכברושים. סרטון זה מראה תהליך אופייני של הלבשת החולדה בז'קט. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.

איור 4: דיאגרמה המתארת את המראה הפיזי והשימוש במתלה הקיבוע המוגבה. (A) מתלה קיבוע מוגבה. מתלה זה מורכב בעיקר משני עמודי ברזל אנכיים (60 ס"מ אורך) המרותכים לכל מגש, יחד עם מוט ברזל אופקי ארוך (145 ס"מ אורך) הממוקם במקביל לקרקע. ברגים משמשים לאבטחת המקל האופקי באותו גובה כמו העמודים האנכיים. (B) מתלה חולדה על מתלה הקיבוע. חולדות שלובשות את מעילי החולדות מהודקות היטב למתלה הקיבוע באמצעות שני ווים בצורת S לכל חולדה. (C) טיפול סימולטני בדיקור חשמלי במספר חולדות. כדי למנוע הפרעות פוטנציאליות כתוצאה מתנועת הזנב, היה צורך לשמור על ריווח נכון בין החולדות, שווה ערך לאורך זנבה של חולדה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
2. הליך אלקטרואקופונקטורה
וידאו 2. דיקור דיקור באזור המותני. סרטון זה מדגים את ההליך המקיף והקוהרנטי הכולל את לבוש החולדה בז'קט, החדרת מחטי דיקור לנקודות דיקור במותניים, והחיבור הבא של מכשיר אלקטרואקופונקטורה. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
וידאו 3. דיקור נקודות דיקור בבטן ובגפה התחתונה. סרטון זה מדגים את ההליך המקיף והקוהרנטי הכולל את לבוש החולדה בז'קט, החדרת מחטי דיקור לנקודות דיקור הממוקמות בבטן ובגפה התחתונה, והחיבור הבא של מכשיר אלקטרואקופונקטורה. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
וידאו 4. הסרת מעיל החולדה. סרטון זה מציג את המנהג המקובל להסיר את המעיל מהחולדה. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בניסוי זה נבחרו בסך הכל 12 חולדות לטיפול באלקטרואקופונקטורה, ונצפו תגובותיהן בשיטת הקיבוע (כפי שמוצג בטבלה 2). מבין 12 החולדות, רק חולדה אחת הפגינה מאבק עז במהלך תקופת שימור מחטי הדיקור החשמלי שנמשכה 15 דקות. כתוצאה מתנועותיה הנמרצות, המחט ירדה באמצע הדרך, והיוותה 8.33% מכלל החולדות. תוצאה זו מצביעה על כך ששיטת הקיבוע בה נעשה שימוש מפגינה בדרך כלל מידה ניכרת של יציבות ומהימנות. למרות המאבק שהפגינה חולדה אחת, רוב החולדות בקבוצה שמרו על קיבוע מחטים תקין לאורך כל הטיפול. יתר על כן, במהלך תקופת הניסוי בת החו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
אלקטרואקופונקטורה הוכחה כבעלת השפעות טיפוליות טובות על מחלות שונות כגון פגיעה קוגניטיבית 16,17, פגיעה בשריר הלב18 וכאב דלקתי19. כדי להבין את מנגנון הפעולה שלה, נערכו ניסויים בבעלי חיים בעיקר באמצעות חולדות. קיבוע בעלי החיים במהלך ההליכים הוא קריטי לתוצאות מדויקות. בעוד שמחקרים רבים נתנו אלקטרואקופונקטורה לאחר הרדמה של בעלי חיים, פרקטיקה זו עלולה לעכב את תפקוד המוח ולפגוע בדיוק הניסוי. יתר על כן, מתן ארוך טווח של הרד...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל המחברים לא הצהירו על ניגודי עניינים פוטנציאליים.
המחברים רוצים להביע את תודתם לפלטפורמת ציור המחקר המדעי Figdraw של הבית לחוקרים על שסיפקה את החומר ששימש ליצירת איור 2 במאמר זה, עם מזהה רישיון מורשה: URUUO5699e. עבודה זו קיבלה תמיכה ממענקים הניתנים על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81873380, 82074566), הקרן למדעי הטבע של מחוז חוביי (2022CFCO43), ופרויקט הבנייה הלאומי המפורסם של הסטודיו למורשת הרפואה הסינית המסורתית של המנהל הלאומי לרפואה סינית מסורתית ([2022] מס '5, [2022] מס '75).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 75% אלכוהול | שאנדונג לירקון טכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ | 2002-0059 | מחטי דיקור חיטוי |
| בייג'ינג לואו יה שאן צ'ואן ציוד רפואי ושות', בע"מ | מחט | ||
| בוגר Sprague-Dawley (SD) חולדות | Liaoning Changsheng ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | SCXK 2020-0001 | הנמען נתון לקיבוע |
| מתלה קיבוע מוגבה | Taizhou shiai מכשירים וציוד למחקר מדעי והוראה ושות', בע"מ | / | Fix חולדות |
| הנס מכשיר דיקור אלקטרוני | בייג'ינג Huayun Ante מדע וטכנולוגיה ושות 'בע"מ | HANS-200A | אלקטרו דיקור |
| סיני כדור כותנה רפואי | ג'יאנגסו מיסאווה ציוד רפואי ושות', בע"מ | 20172142357 | חיטוי |
| קוצץ חשמלי לחיות מחמד | Fenghua Xikou Lubao סכינים & מספריים מפעל מכשירי חשמל | / | לגלח את שיער החולדות |
| פינצטה | צ'ינגדאו שולץ ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | קמצוץ כדורי כותנה |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה