שיפור ההתפתחות והצמיחה של חולדות שיתוק מוחין תינוקות באמצעות מניפולציות סלקטיביות בעמוד השדרה

סיכום

מחקר זה ממחיש את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין, תוך שימת דגש על ההליך הספציפי והפרוטוקול הסטנדרטי. מדידת משקל גוף, בדיקת רוטרוד, ציון תקלה בכף הרגל, בדיקות התנהגותיות אחרות וזיהוי הורמון גדילה בוצעו כדי להעריך את הפרוטוקול.

תקציר

שיתוק מוחין (CP) היא מחלת ילדים עקשנית עם שכיחות גבוהה, שיעור נכות גבוה וטיפול קשה. כיום משתמשים במגוון טיפולים לשיתוק מוחין. הטיפול כולל טיפול תרופתי ולא תרופתי. טיפול חיצוני ברפואה הסינית המסורתית הוא שיטת טיפול ייחודית מאוד בטיפול שאינו תרופתי. כאחד הטיפולים החיצוניים של הרפואה הסינית המסורתית, עיסוי משמש לטיפול בשיתוק מוחין ובעל יעילות טובה, תופעות לוואי קטנות ויכולת פעולה חזקה. כחלק מטיפול חיצוני ברפואה הסינית המסורתית, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לקדם ביעילות את הצמיחה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. הניתוח חולק בעיקר לארבעה שלבים: ראשית, שיטת השפשוף יושמה על עמוד השדרה ומשני צידי עמוד השדרה למשך דקה. שיטת הלחיצה והלישה יושמה על עמוד השדרה למשך 5 דקות, ועל השרירים משני צידי עמוד השדרה למשך 5 דקות. שנית, בוצעו לחיצה ולישה של נקודות הדיקור המקומיות הרגישות בעמוד השדרה למשך 2 דקות. שלישית, הגפה הפגועה טופלה בשיטת פיתול למשך דקה אחת. רביעית, שיטת השפשוף יושמה על קו אמצע מהמצח לחלק האחורי של המוח למשך דקה אחת. מחקר זה נועד להשתמש במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה כדי לטפל בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. המשקל, מבחן רוטרוד, ציון תקלה בכף הרגל והורמון הגדילה של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין זוהו כדי להבין את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. התוצאות הראו שהוא יכול לקדם עלייה במשקל, לשפר את יכולת שיווי המשקל והתפקוד המוטורי, לקדם צמיחה והתפתחות של חולדות עם שיתוק מוחין בתינוקות, לקדם הפרשת הורמון גדילה ולהעלות את הטמפרטורה של חלקים רגישים בגב.

מבוא

שיתוק מוחין (CP), הנגרם על ידי נזק לא מתקדם למוח בעובר או בינקות, הוא קבוצה של הפרעות המאופיינות בהתפתחות מוטורית ויציבה לא תקינה¹, הפרעות התפתחותיות כולל עלייה איטית במשקל ^2,3,4 ותפקוד מוטורי לקוי. שכיחות שיתוק מוחין בסין היא 2.48%, והשכיחות היא 2.46‰ (גילאי 1-6)⁵, בהתאמה. מחקרים זרים דיווחו על שכיחות של 2.4%-3.6%⁶. שיתוק מוחין הוא גורם עיקרי לפציעות פיזיות ונכות בילדים, ביניהן הפרעות שיווי משקל ותנועה משפיעות באופן משמעותי על פעילויות החיים היומיומיות¹. שיתוק מוחין יכול להיגרם על ידי לידה מוקדמת, זיהום, גנטיקה, איסכמיה והיפוקסיה של יילודים, צהבת יילודים וגורמים פתוגניים מורכבים ומגוונים אחרים⁷. מטרת הטיפול בשיתוק מוחין היא לשפר את התפקוד הגופני ואיכות החיים ⁸. נכון לעכשיו, שיטות הטיפול בשיתוק מוחין כוללות גירוי מוחי עמוק⁹, אימון הליכה בעזרת רובוט¹⁰, דיקור שורש כף היד והקרסול¹¹ ודיקור מרידיאן בשילוב עיסוי¹².

הרפואה הסינית המסורתית (TCM) משמשת יותר ויותר כטיפול יעיל ל-CP^13,14. עיסוי, כחלק ממנו, ממלא גם תפקיד מסוים. לדוגמה, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לווסת את מצב ההידרוקסימתילציה של ה-DNA כדי לווסת את ההתפתחות העצבית ולשפר את תפקוד הלמידה והזיכרון¹⁵. בטיפול בחולדה תינוקת עם שיתוק מוחין, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה עשויה לשפר את ההומאוסטזיס הדלקתי של קליפת המוח וההיפוקמפוס על ידי ויסות רמת המתילציה של ציטוקינים דלקתיים TNF-α ואזור מקדם הגן IL-10¹⁶ ולמלא תפקיד טיפולי חיובי ביכולת האיזון של חולדה תינוקת עם שיתוק מוחין¹⁶. מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר את התפקוד הקוגניטיבי של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין¹⁷. נעשה שימוש במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה בטיפול בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין, ונצפה כי יש לה גם השפעות טיפוליות על צמיחתן והתפתחותן¹⁸.

מטרת מחקר זה היא להמחיש את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה על גדילה והתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין על ידי מדידת משקל הגוף, מבחן רוטרוד¹⁹, ציון תקלת כף רגל^20,21, ובדיקות התנהגות אחרות וזיהוי הורמון גדילה, ולספק רעיונות מחקר לאנשי צוות רלוונטיים.

פרוטוקול

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של חיות ניסוי של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית. כל פעולות הניסוי בבעלי חיים עקבו אחר עקרון 3R של הפחתה, אופטימיזציה והחלפה של חיות ניסוי (מס' R-06202018). בניסוי זה נעשה שימוש בחולדות Sprague Dawley (SD) בריאות (14 זכרים ו-7 נקבות) בדרגה נטולת פתוגנים ספציפיים (SPF) עם משקל גוף ממוצע של 250-300 גרם. החולדות גודלו בחדר החיות SPF של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית, מספר תעודה: SYXK (Yunnan) K2022-0004. כל החולדות שוכנו במחזור אור/חושך של 12 שעות עם סביבה מבוקרת אור טבעי בטמפרטורת החדר של 22-26 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 40%-50%. לאחר שבוע אחד של הזנה אדפטיבית, היחס בין זכר לנקבה נשמר על 1:2. לאחר שבוע, החולדות ההרות שוכנו בכלוב יחיד, הוזנו כרגיל, אכלו ושתו בחופשיות. לאחר הלידה הטבעית, נבחרו החולדות הבריאות שנולדו לחולדות ההרות. החולדות התינוקות חולקו לקבוצות דמה, ביקורת וטיפול כדי לבחון את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. מכל קבוצה נבחרו 6 גורים זכרים לניסוי. קבוצת הטיפול טופלה במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה החל מהיום^החמישי לאחר הלידה, והטיפול ניתן במשך 6 ימים ולאחר מכן מנוחה למשך יום אחד.

1. ביסוס מודל שיתוק מוחין

1. יש לעקר את המיקרוסקופ, מספריים לעיניים, מלקחיים, תפרים, צלחת ניתוחית, מספריים, צמר גפן וכפפות הנדרשות לניתוח, ולהניח אותם בחדר הניתוח.
2. הפרידו גור באופן זמני מאמו ביום השלישי לחייו, הניחו אותו במסגרת אחת והעבירו אותו לחדר הניתוח הסטרילי.
3. מדוד את משקל הגוף. כלול במחקר חולדות תינוקות עם משקל גוף שנע בין 7-9 גרם, והוציא את אלה שלא התאימו למשקל הגוף. חלקו באופן אקראי את החולדות התינוקות לקבוצות דמה, ביקורת וטיפול.
4. השראת הרדמה עם איזופלורן בריכוז של 2% ושמירה על הרדמה של 1% באמצעות מכונת הרדמה בגז אינהלציה של בעלי חיים קטנים.
   הערה: ניסוי זה נועד בעיקר לבחון את ההשפעות של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. ההרדמה בוצעה בהתאם לדרישות הכלליות במהלך תהליך המידול, ומשככי כאבים נוספים ישפיעו על תוצאות התצפית.
   1. חבר את חומר ההרדמה הקטן לבעלי חיים לאספקת החשמל ופתח את השסתום המחובר לתיבת האינדוקציה.
   2. הכניסו את החולדה התינוקת לקופסת האינדוקציה, סובבו את כפתור כוונון הריכוז והתאימו את ריכוז האיזופלורן ל-2% כדי לגרום להרדמה.
   3. כאשר החולדה התינוקת מחוסרת הכרה, הוציאו אותה מתיבת האינדוקציה. הנח אותו על לוחית הניתוח וסגור את ערוץ 1 של מכונת ההרדמה.
   4. הניחו את החולדה התינוקת בשכיבה. תקן את מסכת שאיפת ההרדמה כדי לשמור על ההרדמה.
   5. פתח את התעלה המחוברת למסכת שאיפת ההרדמה. שמור על ההרדמה על ידי סיבוב כפתור כוונון הריכוז והתאמת ריכוז האיזופלורן ל-1%.
      הערה: לאחר ההרדמה, העריכו את עומק ההרדמה על ידי הרמה וצביטה בכוח של אצבעות הרגליים והזנב של החולדות התינוקות. אי תגובה כאשר אצבעות הרגליים והזנב הורמו וצבטו מאשרת שעומק ההרדמה הגיע.
5. יש לחטא את עור הצוואר של החולדה התינוקת שלוש פעמים ב-75% אלכוהול ולחתוך חתך אורכי של 1 ס"מ בעור הצוואר כדי לחשוף את הרקמה התת עורית.
   הערה: חתך אורכי של עור הצוואר אינו גורם למום בעור.
6. חתכו את עור הצוואר השמאלי תחת מיקרוסקופ מנתח, והשתמשו בפינצטה עיניים כדי להפריד בצורה בוטה בין שריר הסטרנוהיואיד לשריר הסטרנומסטואיד השמאלי.
   1. מצא את עורק הצוואר המשותף השמאלי ועצב הנרתיק, והפרד את עורק הצוואר המשותף השמאלי ועצב הנרתיק.
   2. בקבוצת המודל, חתכו את עורק הצוואר המשותף השמאלי בעזרת עט קרישה חשמלי. נקה ותפור את חתך הצוואר.
   3. בקבוצת השאם, הפרד את עורק הצוואר המשותף השמאלי מהעצב התועה.
7. לאחר הניתוח, הניחו את החולדה התינוקת באמבט המים התרמוסטטי במצב נוטה להחייאה למשך שעה.
   הערה: לאחר החלמה טבעית, צבע העור של הגפיים ושל כל הגוף היה אדמדם. החולדה התינוקת יכלה להזיז את גפיה באופן אוטונומי ולזחול באופן עצמאי.
8. הנח את החולדות שעברו החייאה מקבוצות הביקורת והטיפול באינקובטור סגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במצב שכיבה. הכניסו תערובת של 5% חמצן ו-95% גז חנקן כדי לגרום להיפוקסיה, והוציאו את החולדות לאחר שעתיים.
9. הסר את החולדה התינוקת שהשלימה את תהליך ההיפוקסיה מקופסת ההיפוקסיה והנח אותה במצב שכיבה בקופסה עם תכולת חמצן אטמוספרית רגילה. הניחו אותם באמבט מים תרמוסטטי של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר החלמה מלאה, העבירו את החולדה התינוקת בחזרה לכלוב האם.
   הערה: לאחר ההחלמה הטבעית, צבע העור של הגפיים וכל הגוף היה אדום. חולדה תינוקת יכלה להזיז את גפיה באופן אוטונומי ויכלה לזחול באופן עצמאי.
10. הנח את החולדה התינוקת מקבוצת השאם בקופסה אחת עם תכולת חמצן אטמוספרית רגילה, והנח את הקופסה באמבט מים תרמוסטטי של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר החלמה מלאה, החזירו את החולדה לכלוב האם להאכלה.
    הערה: לאחר ההחלמה הטבעית, צבע העור של הגפיים וכל הגוף היה אדום. חולדה תינוקת יכלה להזיז את גפיה באופן אוטונומי ויכלה לזחול באופן עצמאי. כל תהליך הניתוח הושלם בחדר הניתוח המיוחד של חדר החיות SPF של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית. במהלך החייאה והיפוקסיה, המפעיל מתבונן בחולדה התינוקת בכל עת כדי למנוע מוות הנגרם כתוצאה מיציבה לא נכונה. נקבות חולדות מניקות הוזנו במזון רבייה ללא פתוגנים ספציפיים (SPF), וכאשר הגורים הצליחו להאכיל את עצמם, הגורים נגמלו (יום 21 לאחר הלידה) והוזנו במזון תחזוקה של SPF.

2. ניסוי רפלקס יישור

1. ^ביום הרביעי לאחר הלידה (היום^השני לאחר המידול), בצעו את ניסוי הרפלקס הימני כדי לוודא אם המודל הצליח (איור 1 וטבלה 1).
   1. הרימו את הזנב של החולדה התינוקת, הניחו את גבה על קרש אופקי והשתמשו באגודל ובאצבע המורה כדי לאבטח את בטנה וצווארה. בדוק אם החולדה יכולה לחזור למצבה הרגיל. חוסר היכולת של החולדה לחזור למצב הרגיל מהמיקום החריג עקב אובדן רפלקס היישור נרשם כמודל מוצלח^16,22.
   2. רשמו את הזמן שלוקח לכל קבוצת גורים להפוך ממצב שכיבה למצב שכיבה. התחל לתעד את הזמן שבו האגודל והאצבע המורה משתחררים בו זמנית במצב שכיבה, אפשר לחולדה התינוקת להסתובב למצב שכיבה, והפסק להקליט כאשר הכפות הקדמיות והאחוריות מונחות על הרצפה. אם החולדה התינוקת לא יכלה לחזור למצב הרגיל במשך יותר מ-20 שניות, רשום את זמן היישור כ-20 שניות.

3. הכנה לפני הניתוח

1. לאחר הדוגמנות, הפרד את החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין מאמה והביאו אותה לחדר ניתוח עם טמפרטורת חדר קבועה של 22-26 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות כדי להסתגל לסביבה שמסביב.
2. ללבוש כפפות חד פעמיות כדי לשמור על כף היד עדינה ורכה ועל הטמפרטורה בין 36-37 מעלות צלזיוס.
3. הניחו את החולדה בעדינות בכף יד שמאל. כופפו את האגודל השמאלי כדי לכסות את עיני החולדה למשך 2 דקות כדי ליצור שדה ראייה כהה כך שהחולדה תוכל להסתגל לסביבת כף היד של המפעיל. השתמש באצבע המורה והאמצעית הימנית למניפולציה.
   הערה: כיסוי העיניים של החולדה התינוקת יכול ליצור סביבה חשוכה. זה ימנע מהחולדה התינוקת להיות נסערת בגלל הסביבה הלא בטוחה וחסרת הוודאות המשפיעה על תוצאות הניסוי.

4. חלוקת החולדות לקבוצות הביקורת והטיפול

1. ביום השני לאחר הדוגמנות (P5), בדקו את המודל על ידי מבחן רפלקס הימני וחלקו באופן אקראי את החולדות התינוקות לקבוצות הביקורת והטיפול. לבצע מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה על חולדות תינוקות בקבוצת הטיפול.
2. הנח את החולדה התינוקת במצב שכיבה. ודא שעמוד השדרה נשמר תמיד ברמה ישרה (איור 2A).
3. עסו את עמוד השדרה ושני צידי עמוד השדרה למשך דקה בשיטת השפשוף, והשתמשו בשיטת הלחיצה והלישה לעמוד השדרה ולשרירים משני צידי עמוד השדרה למשך 5 דקות.
   1. עסו את עמוד השדרה והעור משני הצדדים בשיטת השפשוף כדי להרגיע את החולדה התינוקת ולהפיג את המתח שלה באופן מלא. ודא שתדירות השפשוף היא 100-120 פעמים לדקה למשך דקה אחת לאחר שהחולדה התינוקת שקטה וללא תסיסה.
      1. השתמש באצבע המורה הימנית, האצבע האמצעית והאצבע הקמיצה כמשטח המגע, ובצע תנועת שפשוף מעגלית על פני העור של עמוד השדרה הצווארי, עמוד השדרה החזי ועמוד השדרה המותני מכף רגל ועד ראש מבלי להפריע לרקמה התת עורית.
      2. עם האצבע המורה הימנית, האצבע האמצעית והאצבע הקמיצה כמשטחי מגע, בצע תנועה מעגלית על פני העור של שריר הטרפז, שריר העכוז השטחי, שריר המעוין הצווארי, שריר מעוין החזה, שריר הלטיסימוס דורסי והשריר האלכסוני החיצוני לפי הסדר מהראש ועד הזנב על פי התקן האנטומי של בעלי חיים²³, מבלי להפריע לרקמה התת עורית.
   2. יש לטפל בעמוד השדרה תחילה בלחיצה ולישה למשך 5 דקות, ולאחר מכן לחיצה ולישה של השרירים משני צידי עמוד השדרה למשך 5 דקות.
      1. יש למרוח את שיטת הלישה על עמוד השדרה בתדירות של 120 פעמים לדקה למשך 5 דקות. השתמש באצבע המורה או האמצעית הימנית כמשטח המגע. מכף רגל ועד ראש יש לבצע לישה מעגלית על פני העור של חוליות צוואר הרחם, בית החזה והמותני, בשילוב עם לחיצה כלפי מטה (1.77 ± 0.54 N). ודא שהכוח מגיע לחוליות צוואר הרחם, חוליות בית החזה, החוליות המותניות והרצועות העל-ספינות.
      2. יש ליישם את שיטת הלחיצה והלישה על השרירים משני צידי עמוד השדרה בתדירות של 120 פעמים לדקה למשך 5 דקות. השתמש באצבע המורה הימנית או באצבע האמצעית כמשטח המגע. על פי התקן האנטומי של בעלי חיים²³, לחץ כלפי מטה על פני העור של הטרפז, העכוז השטחי, הצוואר המעוין, החזה המעוין, הלטיסימוס דורסי ושרירי הבטן האלכסוניים החיצוניים בתנועת לישה עגולה מהראש לזנב, בכוח של 1.77 ± 0.54 N, כך שהכוח יגיע לטרפז, גלוטאוס שטחי, צוואר מעוין, חזה מעוין, חזה מעוין, latissimus dorsi, ושרירי בטן אלכסוניים חיצוניים (איור 2B)²³.
4. לחץ ולוש את נקודות הדיקור הרגישות בעמוד השדרה (כגון Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu ו-Feishu²⁴) בתדירות של 100-120 פעמים לדקה למשך 2 דקות. באמצעות האצבע המורה או האמצעית הימנית כמשטח המגע, בצע לישה מעגלית ולחיצה כלפי מטה (1.77 ± 0.54 N) על פני העור של נקודות דיקור מקומיות (כגון Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu ו- Feishu) בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין.
   הערה: נקודות הדיקור נבחרו על פי "מפת נקודות הדיקור של בעלי חיים" שנוסחה על ידי ענף המחקר לדיקור ניסיוני של האגודה הסינית לדיקור סיני) (איור 3)²⁵.
5. גירוי מקומי של הגפה הפגועה בשיטת הפיתול בתדירות של 25 פעמים לדקה למשך דקה.
   1. בעזרת האגודל הימני והאצבע המורה, צבט את האיבר הפגוע של החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין, והפעיל כוח סימטרי על שתי האצבעות. ודא שהכוח עדין והפעולה קלה ועדינה. שפשפו את המאריך הימני carpi radialis, extensor digitorum נפוץ, extensor carpi ulnaris, פלנקס, מפרק בין-פלנגיאלי, שריר גסטרוקנמיוס, שריר חצי גיד, עצם מטטרסל ומפרק בין-מטטרסלי של חולדה תינוקת קדימה ואחורה.
6. יש למרוח את שיטת השפשוף על קו האמצע של המצח בחלק האחורי של המוח בתדירות של 100-120 פעמים לדקה למשך דקה. השתמשו באצבע המורה הימנית כמשטח המגע, והשתמשו בשיטת השפשוף על קו דמיוני מהמצח ועד לאמצע המוח האחורי של החולדה התינוקת (כלומר, קו אחד של Baihui, Fengfu ו-Dazhui) (איור 3).
   הערה: העיסוי מוחל בעיקר על העור. זוהי תנועה מעגלית על פני העור של ראש החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין. זה לא צריך להניע את תנועת השרירים התת עורית של חולדה תינוקת עם שיתוק מוחין.
7. בתום ההליך, השאירו את החולדה התינוקת לבד למשך 30 דקות לפני החזרתה לכלוב האם.
   הערה: עם הגיל, שיער החולדות התינוקות הופך עבה, ולכן יש צורך להסיר את השיער האחורי של כל קבוצות החולדות התינוקות במהלך פעולת העיסוי כדי למנוע השפעה על אפקט הניסוי.

5. זיהוי הטמפרטורה של נקודות הדיקור המקומיות

1. השתמש בהדמיה תרמית אינפרא אדום כדי לזהות את הטמפרטורה של אזור הדיקור המקומי לפני ואחרי הפעולה.
   1. לפני עיסוי עמוד שדרה סלקטיבי, חבר את ממשק Type-C של הטלפון הנייד לממשק ה-USB של מכשיר ההדמיה האינפרא אדום באמצעות כבל נתונים, והפעל את לחצן ההפעלה.
   2. נקישה נתח כדי להיכנס למסוף הטלפון הנייד של התוכנה, בחר תמונה כדי להיכנס למצב הצילום ולחץ על תמונה במצב תמונה בפינה השמאלית התחתונה.
   3. מקדו את המצלמה באזורי נקודות הדיקור של נקודות הדיקור Dazhui, Xinshu ו-Shenshu (איור 3) על גב החולדה התינוקת כדי לצלם צילומי טמפרטורה. נקישה תמונה כדי להשלים את לכידת התמונה ולשמור אותה בפורמט JPG.
   4. חבר את המחשב באמצעות כבל נתונים והעלה את התמונה השמורה למחשב המותקן עם תוכנת Fotric לניתוח.
      1. פתח את תוכנת Fotric במחשב, פתח את הקובץ המקומי ומצא את מיקום התמונה.
      2. בחר את סביבת העבודה Thermogram, בחר את התמונה לניתוח והיכנס לממשק הניתוח.
      3. במסך ניתוח , בחר את התמונה בתיבה תמונה תרמית משמאל ופתח את הנעילה.
      4. בחר את פונקציית הזום, התאם את גודל התמונה התרמית ואת התיבה השמאלית תמונת רקע כך שתתאים זה לזה, וכבה את המנעול בצד ימין.
      5. מצא את הגדר מלבן מדידה בסרגל הכלים למעלה וסמן את נקודת הדיקור שתזוהה באיור.
      6. לחץ על דוח בצד ימין כדי לרשום את ערך הטמפרטורה.

6. איתור תפקוד האיזון המוטורי של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין

1. השתמש במבחן רוטרוד התנהגותי¹⁹ כדי לזהות את התפקוד המוטורי של חולדות בקבוצות השאם, הביקורת והטיפול ביום^ה-61 לאחר הלידה.
   1. הגדרות פרמטרים: הפעל את מתג ההפעלה, בחר בצע ניסוי כדי להיכנס לשלב הבא, בחר חיובי, חולדות, תזמון 5 דקות כדי להיכנס לשלב הבא, ובחר זמן Acc: 10 שניות, מהירות: 10 סל"ד.
   2. לאחר מכן, הניחו את החולדות על מסלול הריצה והתחילו את המבחן על ידי לחיצה על Run לאחר שהן עומדות איתן. התאם את מצב הריצה של כל ריצה ל-ON. אמן כל חולדה פעם אחת למשך 5 דקות, ולאחר מכן התחל לבצע את הבדיקה שלוש פעמים.
   3. לאחר האימון, הניחו את החולדות התינוקות על מסלול הריצה של הרוטרוד. לאחר שהוא יציב, לחץ על הפעלה והתאם את מצב הריצה ל-ON. בתום 5 דקות, בחר תאריך כדי לתעד את הזמן והמהירות של כל חולדה שנופלת ממסלול הריצה של הרוטארוד בפעם הראשונה, כלומר, נתוני זמן הריצה.
2. השתמש במבחן תקלת כף הרגל^20,21 כדי להעריך את התפקוד המוטורי של שיווי המשקל של הגפה הקדמית הימנית של קבוצות ה-Sham, Control ו-Treatment ביום^ה-61 לאחר הלידה.
   1. הניחו את החולדות התינוקות בקצה ההתחלתי של הסולם האופקי והקליטו סרטון שלהן חוצות אותו לקצה השני (100 ס"מ אורך, והמרחק בין כל סולם הוא 2 ס"מ). לאחר אימון אחד, בצעו את המבחן הרשמי שלוש פעמים עבור כל חולדה במרווח של 5 דקות.
   2. התבונן בגפה הקדמית הימנית כאשר החיה חוצה את הסולם באמצעות השמעה במהירות נמוכה כדי ליצור ניקוד, כפי שמוצג בתקן הניקוד (טבלה 2).

7. כתמים מערביים

1. בצע ניתוח כתמים מערביים של דגימות הרקמה כמתואר קודם לכן²⁶.
   הערה: כמות הליזאט נקבעה בהתאם לגודל גוש הרקמה. הנוגדנים ששימשו היו כדלקמן: נוגדן ראשוני נגד הורמון גדילה (0.5 מיקרוגרם [0.5 ננוגרם/נתיב]); נוגדן נגד קולטן הורמון גדילה (1/1000); נוגדן אקטין ייחוס פנימי (1/2000) לנוגדנים ראשוניים; עז נגד ארנבIgG H&L (HRP) (1/10000) לנוגדנים משניים.

8. זיהוי חוזק היד

1. ללבוש את המכשיר המשמש לזיהוי כוח המניפולציה על היד המשמשת לעיסוי. התקן את האצבע המשמשת לעיסוי החולדה התינוקת עם שבב החיישן של המכשיר, והפעל את לחצן ההפעלה .
2. חבר את ממשק הדיסק הקשיח המאחסן את תוכנת הבודק הידני למחשב, והזן את כתובת ה-IP הייעודית של הבודק הידני בתיבת קלט ה-URL .
3. התקן את לקוח SpringVR במחשב, לחץ כדי להיכנס לממשק האיסוף ובחר את דפוס האצבע בפינה השמאלית התחתונה כדי לבדוק את כוח המניפולציה.
4. בחר באפשרות לחץ ולחץ על התחל כדי להתחיל להקליט את הכוח הידני של המפעיל במהלך הפעולה. התוכנה תתעד אוטומטית את עוצמת המניפולציה ותייצר טבלת נתונים בדיסק המקומי בה יימצאו הנתונים בשם הקובץ PressureSensor .

9. סטטיסטיקת נתונים

הערה: תוכנת SPSS26.0 שימשה לניתוח סטטיסטי, Graphpad Prism9.0.0 לייצור תרשימי עמודות, ותמונה J לניתוח ערך אפור של רצועות חלבון.

1. לנתח ולהציג את כל הנתונים כממוצע ± סטיית תקן (ממוצע ± SD).
   הערה: תקן הבדיקה היה α = 0.05, ו-P ≤ 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית. המבחן של פישר שימש מכיוון שהנתונים נותחו על ידי ניתוח שונות ונורמליות והתאימו למאפייני ההתפלגות הנורמלית והומוגניות השונות.

תוצאות

מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לקדם עלייה במשקל הגוף אצל חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין.
במהלך הטיפול נמדד משקל הגוף בימים 3, 14, 28, 42 ו-61 לאחר הלידה (איור 4, טבלה 3). ביום השלישי לאחר הלידה, משקל הגוף של קבוצת השאם היה 5.53 ± 0.035 גרם, ומשקל הגוף של קבוצת הביקורת היה 3.15 ± 0.43 גרם. משקל הגוף של קבוצת הטיפול היה 4.42 ±-0.13 גרם, והוא לא היה שונה משמעותית מזה של קבוצות השאם והביקורת לפני המודל.

ביום ה-14 לאחר הלידה, משקל הגוף של קבוצת השאם היה 35.97 ±-1.019 גרם, משקל הגוף של קבוצת הביקורת היה 28.00 ±-0.7403 גרם, ומשקל הגוף של קבוצת הטיפול היה 33.78 ±-3.705 גרם. לא היה הבדל משמעותי במשקל הגוף בין קבוצת הטיפול לקבוצת השאם. משקלה של קבוצת הטיפול בהשוואה לקבוצת הביקורת היה מובהק סטטיסטית (P < 0.01).

ביום^ה-28 לאחר הלידה, משקל הגוף של קבוצת השאם היה 104.9 ±-3.534 גרם, משקל הגוף של קבוצת הביקורת היה 80.35 ±-6.767 גרם, ומשקל הגוף של קבוצת הטיפול היה 96.73 ±-7.638 גרם. קבוצת הטיפול הושוותה לקבוצת הביקורת, והיא הייתה מובהקת סטטיסטית (P < 0.01).

ביום ה-42 לאחר הלידה, משקל הגוף של קבוצת השאם היה 194.1 ±-4.333 גרם, משקל הגוף של קבוצת הביקורת היה 138.0 ±-6.029 גרם, ומשקל הגוף של קבוצת הטיפול היה 173.9 ±-5.433 גרם. היה הבדל מובהק סטטיסטית במשקל הגוף בין קבוצת הטיפול לקבוצת הביקורת (P < 0.0001).

ביום ה-61 לאחר הלידה, משקל הגוף של קבוצת השאם היה 321.5 ±-5.675 גרם, משקל הגוף של קבוצת הביקורת היה 230.3 ±-5.198 גרם, ומשקל הגוף של קבוצת הטיפול היה 268.9 ±-15.22 גרם . P < 0.0001 נחשב למובהק סטטיסטית. היה הבדל מובהק סטטיסטית במשקל הגוף בין קבוצת הטיפול לקבוצת הביקורת ב-P <-0.0001.

מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר את תפקוד האיזון המוטורי היעיל של שיתוק מוחין.
ביום^ה-61 לאחר הלידה, לאחר סיום הטיפול, ביצענו את בדיקת רוטרוד העייפות. זמן הנפילה הראשון של כל קבוצה היה 296.1 ±-1.65 שניות בקבוצת השאם, 102.7 ±-7.73 שניות בקבוצת הביקורת, ו-220.1 ±-8.04 שניות בקבוצת הטיפול. היה הבדל משמעותי בין קבוצת השאם לקבוצת הביקורת (P < 0.0001). ההבדל בין קבוצת הטיפול לקבוצת הביקורת היה מובהק סטטיסטית (P < 0.0001), וההבדל בין קבוצת הטיפול לקבוצת השאם היה מובהק סטטיסטית (P < 0.0001) (איור 5, טבלה 4)

ביום^ה-61 לאחר הלידה, לאחר סיום הטיפול, ציוני כף הרגל של קבוצות השאם והביקורת היו 5.53 ± 0.03 ו-3.15 ±-0.43, בהתאמה. הציון של קבוצת הטיפול, 4.42 ±-0.13, היה נמוך משמעותית מזה של קבוצת השאם (P < 0.0001). הציון של קבוצת הטיפול היה גבוה משמעותית מזה של קבוצת הביקורת (P < 0.0001). בהשוואה לקבוצת הטיפול וקבוצת השאם, ההבדל היה מובהק סטטיסטית (P < 0.0001) (איור 6, טבלה 5).

מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה יכולה לווסת את רמת הפרשת הורמון הגדילה בשיתוק מוחין.
דגימות רקמה נלקחו ביום ה-32 לאחר הלידה, וההיפותלמוס של חולדות עם שיתוק מוחין נבחר לכתם המערבי, ונבחרו הנוגדנים הראשוניים והמשניים המתאימים: הנוגדנים ששימשו היו נוגדן ראשוני נגד הורמון גדילה, נוגדן נגד קולטן הורמון גדילה, נוגדן ייחוס פנימי אנטי-בטא אקטין לנוגדנים ראשוניים ונוגדן עז RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) לנוגדנים משניים. מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לקדם את הצמיחה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין על ידי ויסות הביטוי של הורמון גדילה (GH) וקולטן הורמון גדילה (GHR) (איור 7, טבלה 6)²⁶.

קידום הצמיחה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין יכול לשפר את תכולת הסרוטונין והנוראדרנלין בהיפוקמפוס, ובכך לשפר את יכולת הלמידה והזיכרון²⁷.

מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר ביעילות את טמפרטורת נקודת הדיקור המקומית (איור 8, טבלה 7).
הדמיה תרמית אינפרא אדום שימשה לאיתור הטמפרטורה של אזור הדיקור המקומי לפני ואחרי הטיפול בקבוצת הטיפול. נמצא כי הטמפרטורה נשמרה על 32.92 ±-0.55 מעלות צלזיוס לפני הטיפול, 36.32 ±-0.15 מעלות צלזיוס מיד לאחר הטיפול, ו-35.32 ±-0.28 מעלות צלזיוס 2 דקות לאחר הטיפול. הטמפרטורה הייתה 34.61 ± 0.17 מעלות צלזיוס 5 דקות לאחר סיום הטיפול ו-34.28 ± 0.60 מעלות צלזיוס 10 דקות לאחר סיום הטיפול. ההבדלים היו מובהקים סטטיסטית בהשוואה לטמפרטורה המיידית לפני סיום הטיפול ואזור הדיקור המקומי 2 דקות, 5 דקות ו-10 דקות לאחר הטיפול (P < 0.05). לאחר מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה, הטמפרטורה של אזור הדיקור המקומי בקבוצת הטיפול הועלתה ונשמרה במידה מסוימת.

איור 1: רפלקס ישור. (A) ייצוג סכמטי של ניסוי רפלקס היישור. בדיקת רפלקס הימני בוצעה ביום^הרביעי לאחר הלידה (היום השני לאחר הדוגמנות) כדי לוודא את הצלחת הדוגמנות. (B) גרף עמודות של מבחן רפלקס יישור בכל קבוצה (n = 6, ממוצע ± SD). הערה: ns מציין P > 0.05 ואין הבדל סטטיסטי. מציין P < 0.0001, מה שמצביע על הבדל משמעותי ביותר. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2: מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה. (A) טיפול בגורים לפני מניפולציה. החולדות התינוקות הונחו בכף ידו של המפעיל ושמרו על שקט, וזו הייתה הסביבה במחנה. (B) ייצוג של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה. לחץ ולוש את השרירים משני צידי עמוד השדרה. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: מפה של נקודות דיקור על הגב של חולדה אנושית לעומת חולדת SD. (A) חולדה אנושית ו-(B) חולדת SD. C7: חוליה צווארית שביעית; GV14: Dazhui (GV14), מיקום: בין חוליית צוואר הרחם השביעית לחוליית בית החזה הראשונה, קו האמצע הגבי; T3: חוליית בית החזה השלישית; BL13: פיישו (BL13), מיקום: בין שתי הצלעות מתחת לחוליה השלישית של בית החזה; T5: חוליית בית החזה החמישית; BL15: נקודת שינשו, הממוקמת בין שני צידי הצלע התחתונה של חוליית בית החזה החמישית; T7: חוליית בית החזה השביעית; BL17: נקודת גשו, מיקום: צלעות תחתונות ותחתונות של חוליית בית החזה השביעית; BL18: נקודת גנשו, מיקום: צלעות תחתונות ותחתונות של חוליית בית החזה השביעית; T11: חוליית בית החזה האחת עשרה; GV6: נקודת ג'יז'ונג, הממוקמת בין התהליך הקוצני האחד עשר והשתים עשרה של חוליית בית החזה; BL20: נקודת פישו, הממוקמת בין שתי הצלעות מתחת לחוליית בית החזה השתים עשרה; L2: עמוד שדרה מותני שני; GV4: מינגמן (GV4), מיקום: הקו החציוני הגבי, השקע בתהליך הקוצני המותני השני; BL23: נקודת שנשו, הממוקמת משני צידי עמוד השדרה המותני השני. GV20: Baihui (GV20), מיקום: עצם קודקודית חציונית; GV16, נקודת פנגפו, מיקום: שקע גבי מפרק עורפי-אטלנטואקסיאלי מאחורי הפסגה העורפית. מיקום נקודות הדיקור בגוף האדם תואם מאוד את מיקום נקודות הדיקור בבעלי חיים מהמיקום האנטומי. נקודת התגובה החריגה הייתה קרובה לנקודת ההקרנה של פני הגוף העצבניים. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 4: תרשים עמודות של מדידת משקל בכל קבוצה (n = 6, ממוצע ± SD). הערה: ns P >0.05, אין הבדל סטטיסטי; **P < 0.01, ***P < 0.001,****P < 0.0001, ההבדל היה מובהק סטטיסטית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 5: גרף עמודות של זמן הטיפה הראשונה של מבחן מוט הנדידה בכל קבוצה (n = 6, ממוצע ± SD). הערה: ****P < 0.0001, ההבדל היה מובהק סטטיסטית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 6: תרשים עמודות של ציוני תקלות כף הרגל בכל קבוצה (n = 6, ממוצע ± SD). הערה: ****P < 0.0001, ההבדל היה מובהק סטטיסטית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 7: רצועות כתמים מערביות של קולטני GH ו-GH. כתם מערבי שימש לאיתור הפרשת הורמון גדילה ברמה הביולוגית המולקולרית בכל קבוצה, ונצפתה ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הורמון הגדילה. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 8: ניטור טמפרטורה לפני ואחרי הטיפול. (פאנל עליון) תמונות תרמיות שצולמו על ידי מצלמת תרמית אינפרה-אדום. הטמפרטורה (°C) של אזור נקודת הדיקור המקומית נרשמה על ידי הדמיה תרמית אינפרא אדום לפני ואחרי הטיפול בטווינה. (א) לפני טיפול בטווינה. (B) טמפרטורה מיד בסוף הטיפול. (C) טמפרטורת נקודת דיקור מקומית 2 דקות לאחר הטיפול. (D) טמפרטורת נקודת דיקור מקומית 5 דקות לאחר סיום הטיפול. (E) טמפרטורת נקודת דיקור מקומית 10 דקות לאחר הטיפול. (פאנל תחתון) תרשים עמודות של ניטור טמפרטורה לפני ואחרי הטיפול (n = 3, ממוצע ± SD). *P < 0.05, P < 0.01, * * * * *P < 0.001, * * * * P < 0.0001, ההבדל מובהק סטטיסטית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

קבוצה	מספר המקרים (n)	רפלקס יישור
שאם	6	0.77 ± 0.10
לשלוט	6	19.00 ± 2.04*
טיפול	6	19.77 ± 0.55#

טבלה 1: סטטיסטיקת הזמן של רפלקס יישור בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין (ממוצע ± SD; n = 6). גורים בכל קבוצה עברו מבחן רפלקס ימני^ביום הרביעי לאחר הלידה (היום^השני לאחר הדוגמנות) כדי לוודא אם המודל הצליח. * בהשוואה לקבוצת שאם, P < 0.0001; # בהשוואה לקבוצת הביקורת, P < 0.0001.

הציון	תקן להערכה
1	כאשר החולדה הצעירה מונחת על הסולם האופקי, כף הרגל מחליקה בעת נשיאת משקל, ומשפיעה על ההליכה
2	כאשר מניחים את החולדה הצעירה על הסולם, כף הרגל מחליקה בעת נשיאת משקל, אך אינה משפיעה על ההליכה
3	כאשר החולדה הצעירה מונחת על הסולם האופקי, החולדה מזיזה את כף הרגל במהירות לשלב הבא של משקל הסולם הנושא
4	כאשר החולדה הצעירה מונחת על הסולם האופקי, החולדה מניחה את כף הרגל באופן חלקי, ונעה על פני הסולם הנושא משקל
5	כאשר החולדה הצעירה מונחת על הסולם האופקי, החולדה מניחה את רגלה על מדרגה אחת ועוברת במהירות למדרגה אחרת
6	כאשר החולדה הצעירה מונחת על הסולם האופקי, החולדה מניחה את כריות כפות הרגליים שלה בצורה נכונה ונושאת את משקל הגוף במלואו

טבלה 2: טבלה סטנדרטית של ציון מבחן תקלות ברגל

שעה (יום)	מספר המקרים (n)	קבוצה
		שאם	לשלוט	טיפול
עמ3	6	8.52 ± 0.27	8.60 ± 0.08	8.45 ± 0.28D
עמ' 14	6	35.97 ± 1.01	28.00 ± 0.74*	33.78 ± 3.70Ñ
עמ' 28	6	104.9 ± 3.53	80.35 ± 6.76*	96.73 ± 7.63Ñ
עמ' 42	6	194.1 ± 4.33	138.0 ± 6.02*	173.9 ± 5.43#D
עמ' 61	6	321.5 ± 5.67	230.3 ± 5.19*	268.9 ± 15.22#D

טבלה 3: תוצאות בדיקת המשקל של כל קבוצה (ממוצע ± SD) (g). הערה: Ñ בהשוואה לקבוצת הביקורת, P < 0.01; ° בהשוואה לקבוצת דמה, P < 0.01; à בהשוואה לקבוצת הביקורת, P < 0.001; * בהשוואה לקבוצת שאם, P < 0.0001; # בהשוואה לקבוצת הביקורת, P < 0.0001; D בהשוואה לקבוצת דמה, P < 0.0001.

קבוצה	מספר המקרים (n)	מוט סיבוב/זמן/שניות
שאם	6	296.1 ± 1.65
לשלוט	6	102.7 ± 7.73*
טיפול	6	220.1 ± 8.04#D

טבלה 4: מבחן Rotarod של חולדות תינוקות בכל קבוצה (ממוצע ± SD). הערה: * בהשוואה לקבוצת השאם, P < 0.0001; # בהשוואה לקבוצת הביקורת, P < 0.0001; D בהשוואה לקבוצת השאם, P < 0.0001.

קבוצה	מספר המקרים (n)	ציון Foot-Fault
שאם	6	5.53 ± 0.03
לשלוט	6	3.15 ± 0.43*
טיפול	6	4.42 ± 0.13#D

טבלה 5: ציוני שגיאת כף הרגל של כל קבוצה (ממוצע ± SD). הערה: * בהשוואה לקבוצת השאם, P < 0.0001; # בהשוואה לקבוצת הביקורת, P < 0.0001; D בהשוואה לקבוצת השאם, P < 0.0001.

קבוצה	ג"ה	GHR
שאם	2.325 ± 0.830	1.469 ± 0.265
לשלוט	1.563 ± 0.070#	1.563 ± 0.070Ñ
טיפול	2.471 ± 0.956*	2.471 ± 0.956&

טבלה 6: הורמון גדילה וקולטן הורמון גדילה נתוני ערך אפור של פס כתם מערבי (n = 10). GH:* ההשוואה הזוגית בין קבוצת הטיפול לקבוצת הביקורת (P = 0.020 < 0.05) הראתה הבדל מובהק סטטיסטית; # השוואה זוגית בין קבוצת השאם לקבוצת הביקורת (P = 0.022 < 0.05) הראתה הבדל משמעותי; ההשוואה הזוגית בין קבוצת הטיפול לקבוצת השאם לא הראתה מובהקות סטטיסטית (P = 0.076 > 0.05); GHR: & השוואה זוגית בין קבוצת הטיפול לקבוצת הביקורת (P = 0.024 < 0.05) הראתה הבדל משמעותי; Ñ השוואה זוגית בין קבוצת Sham לקבוצת המודל (P = 0.021 < 0.05) הראתה הבדל מובהק סטטיסטית; השוואה זוגית בין קבוצת הטיפול לקבוצת השאם לא הראתה מובהקות סטטיסטית (P = 0.085 > 0.05).

זמן הטיפול	מספר המקרים (n)	טמפרטורה
לפני הטיפול	3	32.92 ± 0.55
מיד	3	36.32 ± 0.15*
לאחר 2 דקות	3	35.32 ± 0.28#
לאחר 5 דקות	3	34.61 ± 0.17Ñ
לאחר 10 דקות	3	34.28 ± 0.60ד'

טבלה 7: תוצאות ניטור טמפרטורה לפני ואחרי הטיפול (ממוצע ± SD) (°C). הערה: * בהשוואה לאלו שלפני הטיפול, P < 0.0001; # בהשוואה לזה לפני הטיפול, P < 0.001; D בהשוואה ל-0 דקות לאחר הטיפול, P <0.001; Ñ בהשוואה ללפני הטיפול, P < 0.01; à בהשוואה לטיפול מקדים, P < 0.05.

דיון

מכיוון שאיסכמיה והיפוקסיה הם גורמים פתוגניים חשובים לשיתוק מוחין, השיטה המוכרת בעולם לביסוס מודל שיתוק מוחין משולבת עם היפוקסיה להכנת מודל שיתוק מוחין 16,28,29,30. כאשר מתפתח שיתוק מוחין, הוא גורם לעיכוב התפתחותי כללי, כולל משקל ותפקוד מוטורי, שעשוי להיות קשור לרמת הפרשת הורמון הגדילה³¹. מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה שימשה לטיפול בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. משקל הגוף נוטר במהלך הטיפול, ובוצעו בדיקות התנהגותיות כגון מבחן רוטרוד, ציון תקלה בכף הרגל והורמון גדילה. הטמפרטורה של נקודות הדיקור המקומיות נצפתה לפני ואחרי הטיפול. לאחר קביעת מודל האיסכמיה-היפוקסיה, החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין ירדה במשקל. ובכל זאת, עם הרחבת העיסוי, נמצא כי העלייה במשקל של קבוצת הטיפול הייתה טובה משמעותית מזו של קבוצת הביקורת. היו לו גם יתרונות ברורים בוויסות הפרשת הורמון הגדילה. תוצאות אלו מצביעות על כך שמניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר ביעילות את הצמיחה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. יתר על כן, מכיוון שעורק הצוואר המשותף השמאלי שימש לביסוס המודל של איסכמיה וקרישה בשילוב עם היפוקסיה, חייב להיות נזק לקליפת המוח השמאלית, מה שמוביל לתפקוד מוטורי לקוי. לאחר הטיפול, השתמשנו במבחן Rotarod ובציון Foot-fault כדי לזהות את היכולת ההתנהגותית של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין 32,33,34. נמצא כי התפקוד המוטורי של חולדות עם שיתוק מוחין השתפר לאחר מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה³⁵. מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר ביעילות את התפתחות הצמיחה והתפקוד המוטורי של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין.

עיסוי סיני מסורתי מבוסס על נקודות דיקור ומערכת המרידיאנים. תכנון הניסוי הזה הוא בעיקר לבחון את ההשפעה של העיסוי הסיני המסורתי על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. טיפול בעיסוי מבוצע בעיקר על מרידיאן שלפוחית השתן של כף הרגל-טאיאנג קו הצד הראשון והשני ומרידיאן הדו, אך בשונה מדיקור סיני, יש מיקום ברור של נקודת הגירוי. עיסוי הוא מעין גירוי פנים בו אצבעות המפעיל משמשות לניתוח הבטן, ולמשטח המגע טווח שטח מסוים, קוטר של כ-1.0 ס"מ עגול. גם למרידיאנים יש טווח מסוים; עם זאת, משטח המגע של האצבע האנושית רחב יותר מאזור הדיקור של חולדת SD. המשמעות היא שיש נוהל תפעולי בלתי נמנע בכמה מקומות שאינם דיקור. לכן, לא הגדרנו קבוצת עיסוי שאינה מרידיאנית בנפרד כבקרה בעת הקצאת הקבוצות למחקר זה.

עיסוי עמוד שדרה סלקטיבי בוחר את עמוד השדרה והשרירים משני צידי עמוד השדרה לגירוי במהלך הניתוח, מה שיכול להקל על התכווצויות שרירים מקומיות, לקדם את זרימת הדם המקומית ולשפר את תפקוד אזור העצבוב המתאים כדי להשיג את האפקט של הקלה על מרידיאן ובטחונות וויסות וטיפול כוללים. הוא מגלם באופן מלא את השילוב של התפיסה ההוליסטית של הרפואה הסינית המסורתית, תורת המרידיאנים של הרפואה הסינית המסורתית, ועקרון העצבוב של עצב עמוד השדרה, והוא נותן את הדעת על המכלול תוך ביצוע טיפול מקומי בשיתוק מוחין⁸.

בהליך, שיטת העיסוי על עמוד השדרה והשרירים והרצועות משני צידי הטיפול, כלומר מרידיאן דו ושלפוחית השתן של כף הרגל-טאיאנג קווי הצד הראשון והשני של גירוי העיסוי, יכולה למלא תפקיד בחיבור נקודות הדיקור האחוריות, חוט השדרה והמוח. לכן, כאשר אנו מבצעים פעולות מניפולטיביות בנקודות האחוריות של חולדה תינוקת, אנו יכולים לעורר את הנקודות האחוריות והמרידיאנים להריץ צ'י ודם, לווסת את תפקודי הקרביים של הגוף, ובכך להשפיע על תפקודי חוט השדרה והמוח כדי לקדם את הצמיחה וההתפתחות של חולדה תינוקת. בסך הכל, על ידי גירוי מרידיאן דו ומרידיאן שלפוחית השתן של קו הצד הראשון והשני של כף הרגל-טאיאנג, ניתן לגייס את היאנג של כל הגוף, ולשפר את העמידות הכללית למחלות של הגוף, מה שמשקף את התפיסה הכוללת של הרפואה הסינית המסורתית 16,26,35,36,37,38. מרידיאן דו מקורו בבטן התחתונה של גוף האדם ומגיע לחלק העליון של הראש לאורך עמוד השדרה, ומווסת את היאנג צ'י של גוף האדם³⁶. מרידיאן שלפוחית השתן של Foot-Taiyang עובר בעיקר לאורך שני צידי כלי המושל, ונקודות ה-back-shu של חמישה איברי זאנג ממוקמות בקו הצדדי הראשון של מרידיאן שלפוחית השתן Foot-Taiyang, המעורב בטיפול במחלות של איברי הזנג-פו^39,40. המרידיאנים והביטחונות מחולקים לביטחונות צפים, ביטחונות זעירים ואזורים עוריים. לכן, כאשר אנו מבצעים את ההליך על העור האחורי של חולדה תינוקת עם שיתוק מוחין, אנו יכולים לפעול בכיוון המרידיאנים ולעורר ביעילות בטחונות צפים, בטחונות זעירים ואזורים עוריים. לכן, על ידי גירוי נקודות הדיקור והמרידיאנים להפעלת הצ'י והדם, תפקוד הקרביים של הגוף מווסת ומביא לעלייה במשקל של הגורים⁸.

מצאנו נקודות תגובה דמויות חוט על מרידיאן שלפוחית השתן של כף הרגל-טאיאנג על גבם של ילדים עם שיתוק מוחין, ונעשה שימוש בתרמוגרפיה אינפרא אדום כדי לזהות את הטמפרטורה החריגה של כמה נקודות דיקור. בשילוב עם העיקרון של עצבוב עצב עמוד השדרה, מצאנו שנקודות תגובה אלה היו קרובות לנקודות ההקרנה על פני העצבוב העצבי, מה שעולה בקנה אחד גם עם העיקרון של כריתת שורש עצב עמוד השדרה סלקטיבית לטיפול בשיתוק מוחין (איור 3)⁴¹. נקודות דיקור מזריקות מרידיאנים, צ'י ודם ומחברות את פני הגוף ואיברי זאנג-פו^42,43. לכן, בטיפול בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין, משתמשים במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה לניתוח נקודות הדיקור בגב, הפעלת נקודות הדיקור המקומיות, פתיחת חסימת המרידיאנים, הצ'י והדם, ונקודות הדיקור במצב רגיש לחום⁴⁴. לאחר הניתוח והטיפול עדיין ניתן לשמור על טמפרטורה מסוימת.

שימוש בשיטת הסיבוב בגפה ימין יכול להקל על העווית של רקמת השריר המקומית, להפחית את המרידיאנים המקומיים ולשפר את התפקוד הלקוי המקומי. לבסוף, אנו בוחרים לבצע טיפול בעיסוי על הראש מכיוון שהראש הוא הראש של כל היאנג, שם מתכנסים המהות צ'י והדם של חמשת איברי הזאנג-פו. הטיפול בחלק זה יכול ליישב את יין ויאנג ולהשיג את האפקט של שיקום כולל^16,18. לסיכום, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר ביעילות את משקל הגוף, התפקוד המוטורי והורמון הגדילה של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין כדי לקדם צמיחה והתפתחות.

יש עדיין כמה נקודות חשובות שכדאי לשים לב אליהן במהלך הניתוח. ראשית, יש לציין כי החולדה התינוקת צריכה להסתגל לטמפרטורת כף היד ומצב התסיסה יציב לפני הטיפול. מפעילים צריכים להשתמש בכפפות חד פעמיות כדי למנוע נטישת חולדות נקבות עקב חריגות לאחר מגע ישיר עם עור המפעילים. לפני הפעולה, המפעילים חייבים להיות מאומנים באופן אחיד במניפולציות שלהם ויכולים לפעול לאחר שעברו את ההערכה. כאן, השתמשנו בבודק מניפולציה ספציפי כדי לבדוק כדי להבטיח את הסטנדרטיזציה של הפעולה. מכיוון שראינו שינויים במשקל במהלך הגדילה בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין, יש לבדוק את המניפולציה באופן קבוע. בעת לחיצה ולישה, הלחץ כלפי מטה צריך להיות אנכי, והכוח צריך להיות מקל לכבד, יציב ומתמשך כך שתחושת הגירוי תוכל להגיע במלואה לרקמות העמוקות של הגוף. אל תשתמש באלימות מהירה. טווח הלישה צריך להיות קטן וגדול, והכוח צריך להיות קל וכבד תחילה. טווח הלישה צריך להיות קטן וגדול, והכוח צריך להיות קל וכבד תחילה. פעולת שיטת הלישה צריכה להגיע לשכבת השריר והרצועה. הכוח הידני היה 1.77 ± 0.54 N כאשר הוא מנוטר על ידי הבוחן הידני. לעומת זאת, רק משטח העור מטופל בעת ביצוע שפשוף. בנוסף, עורם של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין הוא עדין, ופעולה לא נכונה עלולה להוביל לנזק לעור.

כטיפול חיצוני ברפואה הסינית המסורתית, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה היא תוספת יעילה לשיטות הטיפול הקיימות בשיתוק מוחין, והיא שיטת טיפול מגוונת בשיתוק מוחין. הוא שוקל טיפול כולל ומקומי כאחד, שיכול להעניק לילדים עם שיתוק מוחין שיקום מקיף ויכול להביא יתרונות כלכליים טובים יותר והשפעות חברתיות למשפחה ולחברה של הילדים. עם זאת, לטכניקה זו יש גם כמה חסרונות מכיוון שלמפעילים יש הבנות שונות ושליטה בטכניקה, מידת האחדות של הטכניקה נמוכה, סטיית ההשפעה הטיפולית עלולה להתרחש והאפקט המרפא אינו מדויק. השלב הבא הוא לגרום למניפולציה להגיע לסטנדרט אחיד. למרות שאישרנו כי מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה משפיעה לטובה על הצמיחה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין ויכולה למלא תפקיד טיפולי על ידי ויסות הומאוסטזיס דלקתי, עדיין יש ללמוד את מנגנון הפעולה שלה על נוירופלסטיות והתחדשות החומר הלבן.

בגלל הוודאות של ההשפעה המרפאת והתיאוריה המדעית של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה, המבוססת על תורת הפעולה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה, ניתן להרחיב את מערך המניפולציות הזה לטיפול במחלות ילדים אחרות, כגון פיגור בגדילה של ילדים, פיגור בהתפתחות השפה וכו'. מתן רעיונות מחקריים מעשיר את מערכת הטיפול עבור רוב העובדים הרפואיים והחוקרים. לכן, מאמר זה תורם לפופולריות ויישום הטכניקה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צלחות 96 בארות	בייג'ינג Lanjieke ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ	11510	קביעת ריכוז החלבון
נוגדן אנטי בטא אקטין	Abacm	Ab8227	דילול: 1/2000
נוגדן הורמון גדילה	Abacm	Ab126882	0.5 ומיקרו; g (0.5 ng/lane)
נוגדן נגד קולטן הורמון גדילה	Abacm	Ab202964	דילול: 1/1000
מיקרוסקופ הפעלה בסיסי	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. Ltd	SM-101	עורק הצוואר המשותף בודד תחת מיקרוסקופ במהלך מידול
מפתח BCA	Biyuntian Biological Engineering Co., LTD	P0010	קביעת ריכוז
החלבוןמערכת הדמיה כימילומינסנציה	שנחאי Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD	100240073	הדמיית רצועות חלבון
עומס ישיר צבע Prestained Marker	בייג'ינג Kangrunchengye ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ (GenStar)	M221	Western Blot
DK-30יצרנית קרח שלג אוטומטית	האחים הנאן ציוד מכשירים ושות', בע"מ	SHDX0023
ערכת מצע זוהר ECL	בייג'ינג Lanjieke Biotechnology Co., LTD	BL520B	המרת תמונות סמויות בסרט חשוף לתמונות גלויות
אמבט מים תרמוסטטי מחומם חשמלי	TAISITE INSTRUMENT	DK-98-II	החולדות הצעירות עברו החייאה לאחר מידול
מאזניים אלקטרוניים	Kunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. Ltd	CN-LQC10002	נמדד
משקל גופן של החולדות הצעירותעט קרישה חשמלי לבן לבן גרמני hemostat	Haohang	L55× W125 ופעמים; H37	הוא שימש לקרישת עורק הצוואר המשותף השמאלי
כפפה	ג'יאנגסו YANGzi LiDE מכשיר רפואי ושות 'בע"מ	Q / 320684 YZYL001-2017	לפעולת עיסוי
גליצין	בייג'ינג Soleibao Technology Co., Ltd.	Cat#G8200	תמיסה אלקטרופורטית, הגדר את נוזל ההעברה
עז אנטי-ארנבIgG H& L (HRP)	Abacm	Ab6721	דילול: 1/10000
מעבדה אינטליגנטית מכונת מים טהורים במיוחד	צ'ונגצ'ינג huachuag הנדסת טיפול במים ושות', בע"	מ N / A	סינון (15 ליטר)
Isoflurane	Shandong Ante Animal Farmry Technology Co. Ltd	15198	ההרדמה נשמרה על ידי אינדוקציה בחולדות צעירות
LinkIR	FOTIRC	V1.3.2.134	תוכנת ניתוח תמונה אינפרא אדום
מטחנת רקמות במהירות גבוהה בטמפרטורה נמוכה	ווהאן Servicebio טכנולוגיה ושות', בע"מ	SKZ3F20200191	טחינת רקמות
מתנול	גואנגדונג גואנגהואה Sci-Tech ושות', בע"מ	20220519	להגדיר את נוזל ההעברה
Mini-PROTEAN Tetra	Bole Life Medical Products (שנחאי) ושות', בע"מ	552BR 233193	אלקטרופורזה
ספקטרופוטומטר ספקטרופוטומטר ספקטרום Multiskan Spectrum Microplate		TECAN Spark	זוהו הספיגה והריכוז של חלבון הרקמה
כפפות חכמות לחישת לחץ	Jinan Super Sense Intelligent Technology Co. Ltd	Miiglove	הוא משמש למדידת החוזק המניפולטיבי של המפעיל
קרום PVDF	MerckMillipore Corporation	IPVH00010	כתם מערבי
צנטריפוגה מקוררת	Hettich דיוק טכנולוגיה (Zhuhai) ושות', בע"מ	MIKRO 220R	צנטריפוגה
מחקר צילום תרמי שלושה באחד	FOTIRC	226S (384 x 288)	מדידת טמפרטורה
RIPA lysate	בייג'ינג Solaibao טכנולוגיה ושות', בע"מ (Solarbio)	R0010	רקמה ליטית
SHA-CA תצוגה דיגיטלית אמבט מים מתנד תרמוסטטי	Changzhou Aohua מכשירים ושות' בע"מ	SHA-CA	חולדות צעירות שימשו בהיפוקסיה
שש עכברושים עייפות רוטרוד מנגנון	שנחאי Duoyi תעשיה ושות', בע"מ	DO01104RT703	תפקוד מנוע CP זוהה
אבקת חלב רזה	גואנגג'ואו Saiguo ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ (BIOFROXX)	1172GR500	הגבלת
נוזל SPF רבייה הזנה	SPF (בייג'ינג) ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ.	A1EC30005A1S4285266	נקבות חולדות מניקות הוזנו
SPF הזנת תחזוקה	SPF (בייג'ינג) ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ.	A1EC30005A1S4285267	הגורים הוזנו לאחר גמילה
צלחת כירורגית	שנחאי YuYAN Scientific Instrument Co. Ltd	51002	שולחן הניתוחים המודל הוקם בחולדות צעירות
TS-200 Orbital shaker	Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.	TS-8S	קיבוע ג'ל
Tween 80	MedChemExpress	HY-Y1819	הגדר TBST
מכונת הרדמה ניידת ZS-MV	ZHONGSHI SCIENCE & טכנולוגיה	ZS-MV-I	ההרדמה הושרה ונשמרה בחיות ניסוי