מאמר שיטה

קביעת פעילות הקרישה של שלפוחית חוץ-תאית (EV) באמצעות זמן קרישה המופעל על ידי EV (EV-ACT)

DOI:

10.3791/65661

⸱

4 באוגוסט 2023

 ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Post-Neurotrauma Neurorepair and Regeneration in Central Nervous System, Ministry of Education and Tianjin Neurological Institute, Tianjin Medical University General Hospital, 2Department of Neurosurgery, Tianjin Medical University General Hospital, 3Department of Neurosurgery, Tianjin Huanhu Hospital, 4Department of Medical Oncology, Tianjin Medical University General Hospital

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה חוקר את השימוש בפלזמה עשירה בשלפוחית חוץ-תאית (EV) כאינדיקטור ליכולת הקרישה של EV. פלזמה עשירה ב- EV מתקבלת באמצעות תהליך של צנטריפוגה דיפרנציאלית והסתיידות לאחר מכן.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תפקידן של שלפוחיות חוץ-תאיות (EV) במחלות שונות זוכה לתשומת לב מוגברת, במיוחד בשל פעילותן החזקה כחומר קרישה. עם זאת, יש צורך דחוף בבדיקה ליד המיטה כדי להעריך את פעילות הקרישה של EV במסגרות קליניות. מחקר זה מציע להשתמש בזמן הפעלת תרומבין של פלזמה עשירה ברכב חשמלי כמדד לפעילות הקרישה של EV. נהלים סטנדרטיים ננקטו כדי להשיג דם שלם נתרן ציטרלי, ואחריו צנטריפוגה דיפרנציאלית כדי לקבל פלזמה עשירה EV. הפלזמה העשירה ברכב חשמלי וסידן כלורי נוספו לכוס הבדיקה, והשינויים בצמיגות נוטרו בזמן אמת באמצעות אנלייזר. זמן הקרישה הטבעי של פלזמה עשירה ב-EV, המכונה EV-ACT, נקבע. התוצאות הראו עלייה משמעותית ב-EV-ACT כאשר EV הוסר מפלזמה שהתקבלה ממתנדבים בריאים, בעוד שהיא ירדה משמעותית כאשר EV הועשר. יתר על כן, EV-ACT קוצר במידה ניכרת בדגימות אנושיות מרעלת הריון, שבר בירך וסרטן ריאות, מה שמצביע על רמות גבוהות של EV פלזמה וקידום קרישת יתר בדם. עם ההליך הפשוט והמהיר שלו, EV-ACT מראה הבטחה כמבחן ליד המיטה להערכת תפקוד הקרישה בחולים עם רמות גבוהות של EV בפלזמה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פקקת, הנגרמת על ידי קרישיות יתר, ממלאת תפקיד משמעותי במחלות שונות, כולל טראומה מוחית1, רעלת הריון2, גידולים3 וחולי שבר4. המנגנון העומד בבסיס קרישיות יתר הוא מורכב, ולאחרונה הושם דגש על תפקידן של שלפוחיות חוץ-תאיות (EV) בהפרעות קרישה. כלי רכב חשמליים הם גופים דמויי שלפוחית בעלי מבנה דו-שכבתי המתנתקים מקרום התא, בקוטר שבין 10 ננומטר ל-1000 ננומטר. הם קשורים למגוון תהליכי מחלה, במיוחד הפרעות קרישה5. מספר מחקרים זיהו רכבים חשמליים כמנבא מבטיח לסיכון לפקקת 6,7. פעילות הקרישה של כלי רכב חשמליים תלו....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איסוף דגימות האדם אושר על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים הכללי של האוניברסיטה הרפואית בטיאן-ג'ין. איסוף הדם הוורידי האנושי עקב בקפדנות אחר ההנחיה שפורסמה על ידי ועדת הבריאות הלאומית של סין, כלומר WS/T 661-2020 Guideline for Collection of Venous Blood Specimens. בקצרה, נאסף דם מאנשים בריאים בהסכמה מדעת מווריד האזור הברכיאלי הקדמי, והדגימות עורבבו באמצעות נוגד קרישה נתרן ציטראט 3.2% ביחס של 1:9. כאשר נאספו רק דגימות נוגדות קרישה של נתרן ציטראט, כלי האיסוף הראשון הושלך לפח. זרימת העיבוד החלה תוך 0.5 שעות מאיסוף הדגימה. נבדקים בריאים בוגרים גויסו לאיסוף דגימות לאחר קבלת הסכמה מדעת. קריטריוני אי הכללת המטופל היו: (1) פקקת תוך וסקולרית לאחרונה, (2) פגיעה בתפקוד הכבד ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זמן הפעלת הטרומבין של פלזמה עשירה ברכב חשמלי נמדד באמצעות מנתח שיטה ויסקו-אלסטית למדידת זמן קרישת פלזמה. המכונה מורכבת מארבעה רכיבים עיקריים: ממיר אותות אלקטרוניים, גשוש, מיכל גילוי וגוף חימום (איור 1A,B). הגשושית משתמשת בתנודות בתדירות גבוהה ומשרעת נמוכה כדי לזהות שינויים בצמיגות הפלזמה. בקרת איכות יומית כוללת בעיקר בקרת איכות אוויר כדי להעריך את יציבות פלטפורמת הבדיקה ולזהות הפרעות פיזיות לבדיקה. בקרת איכות הביצועים כוללת בדיקה עם שמן צמיגות סטנדרטי כדי להבטיח שערך ההתנגדו.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה תוארה הכנת פלזמה עשירה ב-EV, ורציונליות השיטה אומתה באמצעות ציטומטריית זרימה. לאחר מכן, דגימות הפלזמה המסוידות נותחו במשך זמן ACT באמצעות מנתח קריש המבוסס על עקרונות צמיגות24. כפי שניתן לראות באיור 3A, נמצא כי ריכוז כלי הרכב החשמליים המתקבלים באמצעות אולטרה-צנטריפוגה מקצר את זמן ה-EV-ACT, בעוד שהסופרנאטנט לאחר אולטרה-צנטריפוגה, אשר הפחית את רמות ה-EV, הציג זמני EV-ACT ממושכים. ממצאים אלה מצביעים על קשר הדוק בין תוצאות EV-ACT לבין רמות הרכב החשמלי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל המחברים הצהירו כי אין ניגודי עניינים פוטנציאליים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין, מענק מס '81930031, 81901525. בנוסף, אנו מודים לטיינג'ין Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd. על שסיפקה לנו מכונות והדרכה טכנית.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
חלקיקים פלואורסצנטיים AccuCount Ultra Rainbow3.8 מיקרום; Spherotech, לייק פורסט, אילינוי, ארה"בלזיהוי כמותי של MP
סידן כלורידוורפן (סין)002000680020 מ"מ
מנתח קריש המאהטיאנג'ין המאה Yikang פיתוח טכנולוגיה רפואית ושות', בע"מהעיקרון הוא למדוד צמיגות פלזמה בשיטה ויסקו-אלסטית
בדיקה חד פעמית וכוס בדיקהטיאנג'ין המאה Yikang פיתוח טכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ
LSR Fortessa זרימה ציטומטרBD, ארה"במשמש לאיתור
חרוזי פוליסטירן MP MegamixBiocytex, מרסיי, צרפת7801המגה-מיקס מורכב מתערובת של מיקרו-חרוזים בקטרים נבחרים: 0.5 ומיקרו; m, 0.9 ומיקרו; m ו-3 µm.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhang, J., Zhang, F., Dong, J. F. Coagulopathy induced by traumatic brain injury: systemic manifestation of a localized injury. Blood. 131 (18), 2001-2006 (2018).
  2. Han, C., Chen, Y. Y., Dong, J. F. Prothrombotic state associated with preeclampsia. Current Op....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

EV

מאמרים קשורים