פלטפורמת ניסוי המוקסיבציה יכולה לתקן את החולדות ללא הגבלה, והחולדות יכולות לעבור מוקסיבציה רב-דיקורית במצב ערות, להבטיח את רווחת החולדות, להגן על בטיחות המפעילים, להבטיח יעילות טיפולית ולשפר את יעילות הניסוי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שימוש במוקסיבציה מופרדת על ידי עוגות צמחי מרפא לטיפול בחולדות עם אי ספיקת כליות כרונית
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
בתהליך של moxibustion בפועל קליני, הנבדקים צריכים להיות במצב רוח יציב יציב יציב כדי למנוע בעיות כגון אפר מוקסה נופל, עור רותח, אפקט מרפא ירוד. בעיות כאלה קיימות גם בניסוי מוקסיבציה של חולדות. כדי לדמות פרקטיקה קלינית, יש צורך להציג מכשיר ניסיוני בניסויים בבעלי חיים, כלומר, מכשיר moxibustion עם חולדות קבועות וסנכרון טיפול moxibustion, אשר יכול לגרום חולדות ניסיוני לקבל טיפול moxibustion בשקט ובנוחות תחת ללא הרדמה.
קבוצת המחקר שלנו עיצבה פלטפורמה ניסיונית למוקסיבציה של חולדות. המכשיר מוסגר על ידי לוח עץ עם לוח בסיס תומך, מספר רכיבים קבועים ורכיבים מחולקים. המכשיר יכול להשיג את מצב הפעולה של moxibustion בחולדות ללא קשירה, הימנעות הרדמה ו crading ובו זמנית לחשוף נקודות דיקור מרובות על הגב. פעולה זו יכולה למנוע פגיעה פיזית ונפשית בחולדות ובמפעילים, מה שמשפר את יעילות המחקר ומקדם עוד יותר את הפיתוח והמחקר של ניסויים בבעלי חיים מוקסיבציה.
המכשיר בעל מבנה פשוט, קל לתפעול ולפופולריזציה, מתוכנן באופן מקיף וחדשני, ניתן לשימוש חוזר ומתאים לניסויים בחולדות המבוססים בעיקר על מוקסיבציה. מאמר זה מציג בעיקר את מבנה מכשיר הפלטפורמה הניסיונית למוקסיבציה של חולדות, ההליך הבסיסי של מוקסיבציה של עוגות צמחים-מופרדות בחולדות ניסוי באמצעות המכשיר ומתאר את הקמת מודל החולדות של אי ספיקת כליות כרונית (CRF) ותוצאות ניסוי מייצגות.
מבוא
Moxibustion הופיע עם היישום של אש. רופאים עתיקים מצאו בטעות כי חלקים מסוימים של הגוף הבוער באש יכולים להקל על הסימפטומים של אי נוחות. לאחר תרגול ארוך טווח, "Artemisiae Argyi Folium" נבחר בהדרגה כחומר moxibustion העיקרי1. מוקסיבציה היא אחד המרכיבים החשובים של הרפואה הסינית המסורתית, ובשילוב עם מרתח ודיקור אקופוינט ברפואה הסינית המסורתית, שלושת הטיפולים העיקריים הללו ברפואה הסינית המסורתית נמצאים בשימוש נרחב במחלות רבות.
רופאים סינים השתמשו לעתים קרובות במוקסיבציה לטיפול במחלות כבר בתקופת חואנגדי נייג'ינג (הקלאסיקה הפנימית של הקיסר הצהוב). Artemisiae Argyi Folium הוא סוג של צמחי מרפא סיניים עם פונקציה של חימום מרידיאנים כדי לעצור דימום, להפיג הצטננות, ולהקל על כאב. הוא נפוץ בטיפול החיצוני של הרפואה הסינית המסורתית וניתן להשתמש בו גם בטיפול במרתח של הרפואה הסינית המסורתית. מוקסיבציה היא סוג של טיפול חיצוני2 שבו מוקסה או תרופות אחרות ממוקמות על נקודות דיקור על פני הגוף כדי לשרוף ולהשתמש בחום המתון של אש מוקסיבציה ואת ההשפעה של תרופות לטיפול במחלות3.
כאחת משיטות הטיפול הנפוצות, מוקסיבציה נמצאת בשימוש נרחב בפרקטיקה הקלינית. עם ההתרחבות המתמשכת בטיפול במוקסיבציה, מספר גדל והולך של מחקרים חקרו את מנגנון המוקסיבציה וביצעו ניסויים רבים בבעלי חיים 4,5.
ניתן לסווג את שיטת המוקסיבציה כמוקסיבציה ישירה ומוקסיבציה עקיפה. השיטה של הנחת moxibustion על העור של הגוף נקרא moxibustion ישיר. מוקסיבציה עקיפה מפרידה את פני השטח של חרוט המוקסה ואת נקודות הדיקור עם תרופות או חומרים אחרים. מוקסיבציה יכולה לטפל במחלות שונות, כגון תסמונת המעי הרגיז6, תסמונת התשישות הכרונית7 ודלקת מפרקים ניווניתבברך 8.
מאמר זה דן בעיקר במנגנון של צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה. צמחי מרפא-עוגה-מופרדים-מוקסיבציה שייכת לשיטת המוקסיבציה העקיפה, שבה מניחים קונוס מוקסה על העוגה הרפואית כדי להחיל מוקסיבציה. מחקרים עכשוויים הראו כי ההשפעות האינפרא אדום וההתחממות הנוצרות על ידי שריפת חרוט מוקסה, ההרכב הכימי של זפת עלי מוקסה וגירוי אקופוינט יכולות להשיג מניעה וטיפול במחלות9 על ידי הגברת חדירת התרופות לנקודות דיקור. לכן, צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה מייצרת בעיקר "אפקט מקיף" באמצעות מוקסיבציה, תרופות ונקודות דיקור10.
מחקרים קודמים הראו כי מוקסיבציה היא שיטה יעילה לטיפול ב- CRF 11,12,13,14,15, אך המנגנון הבסיסי עדיין אינו מוגדר. עבדנו על מחקרים קליניים וניסויים בבעלי חיים על CRF. כיום, אנו עורכים מחקר ניסיוני של מוקסיבציה על חולדות CRF המבוסס על מסלול איתות של קינאז דמוי RNA דמוי רשתית אנדופלסמית (PERK) של עקה אנדופלסמית ברשתית הרשתית האנדופלסמית. באמצעות ניסוי זה בבעלי חיים, אנו שואפים להסביר באופן ראשוני את המנגנון הפוטנציאלי של מוקסיבציה בטיפול במחלת כליות כרונית. בניסוי זה, הטיפול במוקסיבציה של חולדות המופרדות מעוגת צמחים הוא פעולה מרכזית.
בניסוי הקודם16 השתמשו במכסה של כלוב הגידול כדי לקשור ולתקן את החולדות. כדי להגן על המפעיל, יש להרדים את החולדות לפני הקשירה. עם זאת, קל לחשוש מחולדות ספראג-דוולי (SD) ולהבהיל. פעולת הקשירה יכולה בקלות לגרום לאי שקט אצל החולדות. בעיות כגון קיבוע יציבה לקוי של חולדות, סטייה של מיקום אקופוינט, זמן ניסוי מוגבר ופגיעה במפעיל התרחשו לעתים קרובות.
בנוסף, אם הקשירה הדוקה מדי, היא יכולה בקלות לגרום לקשיי נשימה בחולדות, מה שאינו תורם לרווחת בעלי החיים. אם הקשירה רופפת מדי, החולדות נוטות להיאבק ולהזיז את גופן, מה שגורם לקונוסים של מוקסיבציה ליפול ולשרוף את עורם, מה שמשפיע על תוצאות הניסוי. בהתבסס על הספרות, ניסויים בבעלי חיים עדיין כרוכים בקשירת16,17,18, ואת רוב מכשירי הניסוי ניתן לתקן רק מה שמעכב את היישום של טכניקות אחרות כגון מוקסיבציה19. לכן, השגת שילוב של קיבוע ומוקסיבציה במכשיר הניסוי תוך הבטחת רווחת בעלי החיים ומפרטי הניסוי ויעילותם הפכה לאחד מתחומי המיקוד של החוקרים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
התוכנית עוקבת אחר הנחיות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית ואושרה על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית. מספר הסקירה הניסיונית של רווחת בעלי חיים ואתיקה הוא R-062021G098.
1. התקן פלטפורמה ניסיונית Moxibustion (איור 1)
הערה: תכננו ובנינו את מכשיר הפלטפורמה הניסיונית למוקסיבציה של חולדות בהתבסס על המרחק בין הגפיים האחוריות והקדמיות של חולדות והמאפיינים ההתנהגותיים והפיזיולוגיים שלהן.
- גודל מכשיר המוקסיבציה
- לייצר את המכשיר באמצעות חומר לוח נגד מוכה לוח לוח עץ; הגודל הכולל הוא 52 ס"מ אורך x 23.5 ס"מ רוחב x 64 ס"מ גובה, והשטח התחתון של המכשיר הוא 1222 ס"מ2.
הערה: פעולת המוקסיבציה מתבצעת על הרציף בגובה זה, וניתן לשמור על החולדות רגועות.
- לייצר את המכשיר באמצעות חומר לוח נגד מוכה לוח לוח עץ; הגודל הכולל הוא 52 ס"מ אורך x 23.5 ס"מ רוחב x 64 ס"מ גובה, והשטח התחתון של המכשיר הוא 1222 ס"מ2.
- המסגרת הראשית של מכשיר moxibustion
- הפוך את הבסיס של המכשיר כולו עם חומר לוח נגד מכות: צלחת הבסיס היא 52 ס"מ אורך x 23.5 ס"מ W עם משטח לבן. ודא שהחלק התחתון מהווה חלק גדול ממשקל המכשיר כדי לייצב את המכשיר כולו.
- הפוך את הפלטפורמה המוגבהת של המכשיר עם עץ מלא, 60 ס"מ גובה.
הערה: זוהי המסגרת הראשית של המכשיר כולו, אשר מייצבת את המכשיר כולו ותומכת במיקום החולדות במצב עמידה. - הניחו חמישה חריצי מיקום מעל הפלטפורמה המוגבהת, בגודל 10 ס"מ אורך x 6 ס"מ רוחב x גובה 10 ס"מ. השתמשו בלוחות מרווחים (אורך 10 ס"מ x רוחב 1.3 ס"מ x גובה 10 ס"מ) כדי להפריד בין חריצי המיקום, המתאימים למרחק בין הגפיים הקדמיות והאחוריות של החולדה במצב עמידה.
- מרכיבי מכשיר ה- moxibustion
- תקן שתי רצועות נירוסטה מעל חריצי המיקום. כל רצועה קבועה היא מוט פלדה בעל קצה ישר שווה 40 ס"מ אורך x 1.4 ס"מ רוחב (לשני הצדדים רוחב זהה), עם 15 חורים. שלושה חורים ברצועה הקבועה מתאימים לכל חריץ, המשמשים לקיבוע בורג ידית השזיף וצינור הנע. המרחק בין חורים סמוכים הוא 7 ס"מ.
- הניחו את בורג ידית פריחת השזיף המתכווננת בשני הקצוות של רשת בידוד החום העשויה נירוסטה 304 והתחברו לרשת בידוד החום הקבועה ולרצועה הקבועה.
- חבר את הקצה העליון של כל חריץ מיקום באמצעות רשת בידוד חום הניתנת להרמה המוקפת במסגרת צלחת מגולוונת. חברו מסגרת זו לבורג ידית פריחת השזיף בשני קצותיה. הניחו חומר רשת עגול מנירוסטה 304 במרכז רשת בידוד החום כדי למנוע מהאפר ליפול ולצרוב את החולדות וכדי לתקן את החולדות כדי להקל על ההדבקה.
- הדביקו את הקצה התחתון של הצינור הנייד מנירוסטה (באורך 34 ס"מ) עם רצועה קבועה מנירוסטה ואת הקצה העליון עם לוחית החיבור של מהדק הצינור.
הערה: הצינור הנייד נוח להתאמת מיקום מוט המוקסה במהלך פעולת ההשעיה. - השתמש במהדק הצינור העשוי מסגסוגת אלומיניום כדי לחבר את הצינור הנייד מנירוסטה ואת תפס המוקסה.
- חבר את תפס המוקסה מנירוסטה ללוחית החיבור של מהדק הצינור, וקבע 8-10 רצועות מוקסה בו זמנית למוקסיבציה.
הערה: ניתן להשתמש בצינור הנייד, בלוחית החיבור של מהדק הצינור ובתפס המוקסה לפעולת מוקסיבציה של תרחיף בחולדות.
2. להקים מודל חולדה של אי ספיקת כליות כרונית
- התאקלמו אצל 24 חולדות זכרים ללא פתוגן (SPF) SD (בגילאי 3-4 שבועות, במשקל 180-200 גרם) למשך שבוע אחד. שמור על טמפרטורת ההזנה ב 18-24 מעלות צלזיוס; לחות יחסית ב 40-70%; ומחזור אור של 12 שעות ומחזור חושך של 12 שעות. מאכלסים שישה בעלי חיים בכל כלוב ומספקים גישה חופשית למים ולמזון משותף.
- ביסוס מודל החולדות של CRF. על פי טבלת המספרים האקראיים ובהתאם לפרוטוקול זה, בחרו שש חולדות כקבוצת הביקורת ואת 18 הנותרות כקבוצת המודל. יש לטפל בקבוצת הביקורת (n = 6) במים מזוקקים (10 מ"ל∙kg-1∙day-1) ובהזנה רגילה ובקבוצת המודל (n = 18) עם תרחיף אדנין (150 מ"ג kg-1∙day-1) והזנה עשירה בחלבון למשך 21 יום.
- התבוננו ותיעדו את משקל הגוף, המצב הנפשי והתזונה מדי יום. לאחר תום 21 יום, ודא כי כל בעלי החיים הם בצום במשך 12 שעות לפני דגימת דם מסלולית.
- לאסוף את דגימות הדם מסלול.
- מרדימים את החולדות לזמן קצר עם איזופלורן. תפסו את גבה של החולדה ביד הלא דומיננטית, החזיקו את ראשה ופניה של החולדה באופן סימטרי בין האגודל לאצבע, חשפו באופן מלא צד אחד של הקנטוס של החולדה והחזיקו בתנוחה זו.
- בעזרת היד הדומיננטית, החזיקו נימי נקודת התכה באורך 3 ס"מ בין האגודל לאצבע וסובבו לאט את הנימים, נכנסים למקלעת הוורידית הפנימית של החולדה ב-45 מעלות עד שהדם זורם באיטיות מתוך הצינור.
- לאסוף 150-200 μL של דגימות דם ב 0.5 מ"ל דם איסוף צינורות נוגדי קרישה, בעדינות לשלוף את נימים, ולחץ על המסלול עם כותנה.
- נערו את צינור נוגדי הקרישה במהירות וביסודיות. מדדו קריאטינין בסרום פלזמה (Scr) וחנקן אוריאה בדם (BUN) באמצעות מנתח ביוכימי אוטומטי.
הערה: הגידול ב- Scr וב- BUN מצביע על הקמתו המוצלחת של מודל CRF. - חלקו את החולדות לארבע קבוצות: A: שש חולדות ביקורת, ללא טיפול; 18 חולדות מודל מחולקות לקבוצות B: (קבוצת מודל: ללא תרופות או מוקסיבציה), C: (קבוצת אשלגן לוסרטן: ניתנת 2.33 מ"ג∙kg-1∙day-1 על ידי מחט gavage 12 גרם), ו-D: (קבוצת צמחים-עוגה-מופרדת-מוקסיבציה: צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה מוחל על שנשו דו-צדדי [B23] ופישו דו-צדדי [B20]).
3. שלב הטיפול
הערה: קבוצות A ו - B אינן מקבלות כל טיפול, ואילו קבוצות C ו- D יטופלו פעם ביום במשך 24 ימים, עם יומיים חופש לאחר 12 ימי טיפול.
- הכנות לפני הטיפול
- הכינו 300 גרם של Radix astragali מיובש, 300 גרם של Radix Codonopsis מיובש, 200 גרם של Radix Rehmanniae Praeparata מיובש, 100 גרם של עשב אפימדיום קצר קרניים קלוי ו 100 גרם של Cornus officinalis. מערבבים את האבקות האלה.
- הכניסו 500 גרם של Artemisiae Argyi Folium למגרסה המסורתית של הרפואה הסינית (מהירות של 34,000 סיבובים לדקה) למשך 5 דקות, העבירו את האבקה הטחונה לצלחת, ולאחר מכן מסך עם מסננת 600 רשת. לאחר שני סבבי הקרנה, סלקו את המוקסה הגסה והעבירו את המוקסה העדינה לשקית לשימוש (איור 2).
- הכינו את חרוט המוקסה על ידי מילוי המוקסה הדקה לתוך התבנית ליצירת חרוט מוקסה קטן בקוטר 0.5 ס"מ וגובה 0.5 ס"מ. לחלופין, מלקסה את המוקסה בין האגודלים והאצבעות המורות של שתי הידיים כדי ליצור מדוכי מוקסה (איור 3A).
- הכינו את תבנית עוגת הצמחים על-ידי חיתוך מזרק בנפח 5 מ"ל לארבע טבעות פלסטיק עגולות בעובי 0.5 ס"מ והדבקת ארבע הטבעות על אותו מישור אופקי (בפינות מישור מרובע באורך צד של 26 מ"מ, איור 3D).
- הכינו עוגות תרופות על-ידי ערבוב האבקה והמים ביחס של 1:1 ומילוי התערובת בתבנית עוגת הצמחים (איור 3E). השאירו את עוגת התרופות בתבנית ואחסנו אותה במקום יבש.
- סימון נקודות הדיקור
- אתר את נקודות הדיקור באופן הבא: שנשו (B23), שני צידי החוליה המותנית השנייה, נקודת דיקור אחת בכל צד; פישו (B20), החוליה הבין-קוסטלית של בית החזה ה-11 משני הצדדים, נקודת דיקור אחת מכל צד (איור 4).
הערה: למיקום נקודות הדיקור, עיין במדריך לדיקור סיני לבעלי חיים ניסיוניים20. - לבשו כפפת גומי עבה על היד הלא דומיננטית כדי לכסות בעדינות את ראשה של החולדה, אתרו את נקודות הדיקור על גבה של החולדה ביד הדומיננטית, ולאחר מכן סמנו את נקודות הדיקור בטוש צבע.
- אתר את נקודות הדיקור באופן הבא: שנשו (B23), שני צידי החוליה המותנית השנייה, נקודת דיקור אחת בכל צד; פישו (B20), החוליה הבין-קוסטלית של בית החזה ה-11 משני הצדדים, נקודת דיקור אחת מכל צד (איור 4).
- הצבת החולדות
- יש ללבוש כפפות גומי עבות. השתמשו באגודל ובארבע האצבעות האחרות של היד הדומיננטית כדי לצבוט מעט את העור בגב ובצוואר של החולדה. השתמשו באגודל ובאצבע המורה של היד הלא דומיננטית כדי לצבוט את זנב החולדה בעדינות.
- הרימו את החולדה, יישרו את ראש החולדה לחריץ המיקום של פלטפורמת המוקסיבציה המיוחדת, והניעו את החולדה לאט קדימה. ודאו שהכף הקדמית של החולדה קרובה לקצה חריץ המיקום ושהחולדה מטפסת לתוך החריץ.
הערה: יש לחטא את כל פלטפורמת המוקסיבציה לפני שמתחילים. לפני שאתם תופסים את החולדה, געו בגבה של החולדה בעדינות או דברו איתה כדי להרגיע אותה. התאימו את גובה רשת הבידוד ממיקום נמוך (כאשר אינו בשימוש) לגבוה ביותר, אשר נוח לחולדות להיכנס.
- קיבוע חולדות
- הניחו את האגודל והאצבעות המורות של שתי הידיים על בורג פריחת השזיף בשני קצות רשת בידוד החום. פתחו את בורג פריחת השזיף כדי להוריד את רשת בידוד החום למיקום המתאים, קרוב לחלק האחורי של החולדה, אך לא לגרום לדחיסה, ולאחר מכן הדקו את הברגים.
- הנחת קונוס מוקסה ועוגה תרופתית.
- מניחים את התבנית המוכנה המכילה את עוגת התרופות על רשת בידוד החום המתאימה לנקודות הדיקור של פישו (B20) ושנשו (B23) על פי סימני הדיקור על החולדות. ישנן ארבע נקודות דיקור, שכל אחת מהן מתאימה לעוגת תרופות.
- מניחים את גביע המוקסה על העוגה הרפואית בצורה חלקה ויציבה.
- מוקסיבציה
- הדליקו את חרוט המוקסה עם מצית והתחילו במוקסיבציה עד שקונוס המוקסה נשרף והחום השיורי מתפזר באופן טבעי (העוגה הרטובה מתייבשת).
- החליפו את חרוט המוקסה השרוף בקונוס מוקסה חדש ובעוגה תרופתית על אותה נקודת דיקור והמשיכו במוקסיבציה עד שקונוס המוקסה נשרף והעוגה הרפואית מתייבשת. חזור על פעולה זו בסך הכל פי 5 בכל נקודת דיקור.
הערה: נקו וחיטאו את רשת בידוד החום הניתנת להרמה לפני החלפתה בקונוס מוקסה חדש ובעוגה תרופתית. - כבו את גביעי המוקסה ואת העוגות הרפואיות במיכל פסולת המכיל מים לאחר שריפת חמישה גביעי מוקסה בכל נקודת דיקור.
הערה: כל אקופוינט מקבל חמישה מדוכים של מוקסיבציה; ניתן להחליף כל חרוט מוקסה לאחר שריפה.
- החזרת החולדה לכלוב
- הניחו את כלוב הגידול הריק לפני החולדה, קרוב לקצה התחתון של חריץ המיקום של פלטפורמת המוקסיבציה, ושמרו על שקט. טפחו קלות על ישבנה של החולדה כדי שהחולדה תוכל לעבור מחריץ המיקום לכלוב ההאכלה. לאחר שהחולדה נכנסת, הניחו את הכלוב. השתמשו ביד הדומיננטית כדי לתפוס את הפרווה שעל גב החולדה, החזיקו את החולדה בחוזקה והניחו אותה על הקרקע לתצפית נוספת.
- שימו לב אם לחולדות יש קוצר נשימה, אם מצב הרוח יציב ואם פני העור צרובים. אם אין חריגה, להחזיר אותו לכלוב. אם הוא צרוב, מיד להחיל את משחה קשקשת על פני העור ומניחים אותו בכלוב אחד.
4. שלב הדגימה
- לאחר 24 ימי טיפול, הכינו את החולדות ל-12 שעות צום לפני הדגימה.
- יוצקים איזופלורן למכונת הרדמת הגז ומרדים את החולדות עם 2-3% איזופלורן. לאחר 2-3 דקות, יש לוודא שאין רפלקסים (לצבוט את הזנב בפינצטה כירורגית כדי לבדוק שאין להם רפלקס) והמשך קיום דופק ולעבור להרדמה תחזוקתית עם איזופלורן 1-1.5%.
- לאסוף 5 מ"ל של דם מן אבי העורקים הבטן על ידי החדרת המחט לתוך אבי העורקים מעין בטן. תן לדם לעמוד במשך 2 שעות, צנטריפוגה ב 2490 × גרם במשך 10 דקות ב 4 ° C, ולהעביר את supernatant בסרום לצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל לניתוח נוסף.
- מרדימים עמוקות את החולדות לתקופה ארוכה ולוקחים דם מאבי העורקים הבטני תחת הרדמה תחזוקתית. יתר על כן, להרדים את החולדות על ידי נקע צוואר הרחם.
- קצרו רקמות משתי הכליות על ידי הפשטת החיתולית הכלייתית הדו-צדדית והשומן עם מספריים כירורגיים ופינצטה ושטיפה במי מלח רגילים 0.9%. לשקול את הכליות השמאלית והימנית ולרשום את המשקל ואת המורפולוגיה.
- לשמר את רקמת הכליה על ידי חיתוך הכליה השמאלית לשישה חלקים והכנסתם לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל המכיל 4% פרפורמלדהיד להשריה, קיבוע ושימור. חותכים את הכליה הימנית לשישה חלקים באמצעות סכין בכיוון האורך ושני סכינים בכיוון הרוחבי. מניחים את החתיכות האלה לתוך שישה 2 מ"ל Cryotubes ומיד לשים אותם בחנקן נוזלי; העבירו אותם למקפיא בטמפרטורה של -80°C לאחסון.
5. שלב הזיהוי
- השתמש ברקמת הכליה הנכונה בגודל המתאים למיצוי חלבונים, אלקטרופורזה בג'ל, העברת ממברנה, חסימה, דגירה ראשונית של נוגדנים, נוגדן משני, כימילומינסנציה, פיתוח, קיבוע וסריקת פילם.
- השתמש במערכת ניתוח נתוני תמונה בג'ל (לדוגמה, Image-Pro Plus 6.0) כדי לנתח את הערך האפור של הרצועה ולחשב את תכולת כל חלבון.
- יש להכפיף את רקמות הכליה השמאלית להתייבשות, ניקוי, הטבעה בפרפין, חתך (עובי של 4 מיקרומטר), צביעה בהמטוקסילין-אאוסין וכתם טריכרום של מאסון, ולהתבונן בשינויים הפתולוגיים21 ברקמת הכליה תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה של פי 200.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
מורפולוגיה של הכליות
כפי שניתן לראות באיור 5, בהשוואה לקבוצות האחרות, הגודל, הצבע והמרקם של הכליות בקבוצה D (קבוצת צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה) היו קרובים יותר לאלה של הקבוצה הרגילה. מורפולוגיית הכליות של קבוצות האשלגן המודל ולוסרטן הראתה דרגות שונות של פיברוזיס לבן.
משקל כליות
איור 6 מראה שמשקל הכליה השמאלית של קבוצה A היה שונה באופן משמעותי מזה של קבוצה B, מה שמצביע על כך שמודל...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מבחינה קלינית, דיקור סיני וטיפול במוקסיבציה דורשים מהמטופלים להיות רגועים ונינוחים, להימנע מכעס ורעב מוגזמים ולהדגיש 'שלווה'. עם זאת, הפרקטיקה הנוכחית של ניסויי דיקור ומוקסיבציה עדיין מבוססת על הנחת היסוד של קשירת בעלי חיים, שאינה רק מנוגדת לכוונה המקורית של הניסוי אלא גם אינה תואמת את הפרקטיקה הקלינית. קשירת בעלי חיים, הפיכת בעלי חיים למפוחדים וכועסים, תגביר במהירות את האדרנלין והורמונים אחרים בחיות ניסוי, ותשפיע על תוצאות הניסוי22. במהלך הפעולה הניסיונית של דיקור סיני וחיות מוקסיבציה, יש לפתור ב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים. מספר הפטנט של מכשיר פלטפורמת הניסוי של עכברוש הוא ZL202320880924.X.
תודות
אנו מודים לפרופסור הואנג ולמיס קוי על הדרכתם הקפדנית ותמיכתם במאמר זה. המחקר נתמך על ידי: 1. הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC), 82160938, "חקר מחקר מנגנונים על פיברוזיס אינטרסטיציאלי כלייתי עם מוקסיבציה מופרדת עוגה מהאפקט האינטראקטיבי של מסלולי אותות ERK ו- Smad בתיווך TGF-β1"; 2. ועדת הבריאות של מחוז יונאן "2020 כישרונות עתודות TCM ברמה גבוהה"פרויקט הדגירה (Yunwei TCM Development [2021] No.1); 3. מחלקת המדע והטכנולוגיה המחוזית של יונאן - מחקר בסיסי יישומי קרנות מיוחדות משותפות לרפואה סינית (מס '2019FF002-022, מס '202101AZ70001-286, מס '202301AZ070001-030); 4. צוות החדשנות של מחוז יונאן: מניעה וטיפול בטקסיות באמצעות דיקור סיני וטווינה (2023).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.5 מ"ל הפרין ליתיום ביוכימי צינור | Shijiazhuang Kangweishi ציוד רפואי ושות', בע"מ | 220518 איסוף דם | |
| 0.9% מלח רגיל | קונמינג נאנג'יאנג פרמצבטיקה ושות', בע"מ | / | שטיפה |
| 1.5 מ"ל צינור אפנדורף | בייג'ינג Lanjieke ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | 12100024 | חבילת משנה |
| 2 מ"ל צינור שימור הקפאה | בארוק ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | 88-0151 | כליה ארוזה |
| 4 ° מקרר C Haier | Group Co. Ltd | BCD-236WDGL | חנות |
| 5 מ"ל מזרק | סצ'ואן המאה החדשה מוצרי פולימר רפואי ושות', בע"מ | 20211115 | Gavage |
| צינור צנטריפוגה 50 מ"ל | בייג'ינג Langeke ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | CT-002-50A | כליה ארוזה |
| 12 G מחט gavage | בייג'ינג Zhongke Hengtian טכנולוגיה ושות', בע"מ | 12#55 מ"מ | Gavage |
| צלחות 96 בארות | בייג'ינג Lanjieke ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | 11510 | קביעת ריכוז החלבון |
| -80 ° מקפיא C | Thermo Fisher Scientific | 991 | Store |
| Adenine | Beijing Boaotuo Technology Co., LTD | A0607 | דפוס תרופת |
| BCA מפתח | Biyuntian הנדסה ביולוגית ושות', בע" | P0010 | קביעת ריכוז החלבון |
| מגיב נוגדן חלבון BCL-2 | Abcam שנחאי מסחר ושות', בע"מ | ab196495 | חלבון כתם מערבי |
| Caspase-3 מגיב נוגדנים | Abcam שנחאי מסחר ושות', בע"מ | ab184787 | |
| מערכת הדמיה כימילומינסנציה | מערבי שנחאי Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD | 100240073 | הדמיית רצועות חלבון |
| אבקת רפואה סינית | בית החולים השני המסונף של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית | / | ריפוי |
| עומס ישיר צבע prestained marker | בייג'ינג Kangrunchengye ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ (GenStar) | M221 | כתם מערבי |
| מחט חד פעמית לאיסוף דם | Liuyang Sanli פיתוח מדע וטכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ | YZB / מדינה 0411-2010 | דגימת דם |
| מיכל איסוף דגימות דם ורידיות אנושיות חד פעמיות | Liuyang Sanli פיתוח מדע וטכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ | 20210901 | דגימת דם |
| DK-30 יצרנית קרח שלג אוטומטית | האחים הנאן ציוד מכשירים ושות', בע"מ | SHDX0023 | |
| ערכת מצע זוהר ECL | בייג'ינג Lanjieke ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | BL520B | המרת תמונות סמויות בסרט חשוף לתמונות |
| גלויות מאזניים אלקטרוניים | שנחאי רן האו אלקטרוניקה ושות', בע"מ | JCS-31002C | נמדדו |
| משקל הגוף ומשקל הכליות של חולדותהקפאת מיקרוטום | תרמו פישר מדעי | HM525 NX | Microtome |
| מנתח ביוכימי אוטומטי לחלוטין | טיאנג'ין מיקרו ננו ליבת טכנולוגיה ושות', בע"מ | PV2112001Z02410305 | בדיקת תפקודי כליות |
| מערכת הרדמת גז | Zhongshi Technology Co., Ltd | ZS-MV-1 | הרדמה |
| גליצין | בייג'ינג Soleibao טכנולוגיה ושות', בע"מ | Cat#G8200 | מאגר פועל, מאגר העברה מערבי |
| HE מגיב צביעה | בייג'ינג Soleibao Technology Co., Ltd. | G1120 | מכתים |
| הזנה גבוהה חלבון | ג'יאנגסו סינרגטיקה ביולוגית הנדסה ושות', בע"מ | XT19008 | האכלה |
| מעבדה אינטליגנטית מכונת מים טהורים במיוחד | צ'ונגצ'ינג huachuag הנדסת טיפול במים ושות', בע"מ | 15L | סינון |
| התייחסות פנימית & בטא;-אקטין | ג'יאנגסו צ'ינקה מחקר ביולוגי ושות', בע"מ | AF7018 | כתם מערבי |
| איזופלורן | ג'יאנגסו Zhongmu Beikang פרמצבטיקה ושות', בע"מ | 20220701 | הרדמה |
| חנקן נוזלי | קונמינג בוטאי קרח יבש מכירות ושות', בע"מ | / | הקפאת רקמות כליה |
| לוסרטן טבליות אשלגן | Merck Sharp & Dohme (סין) השקעות ושות', בע"מ | J20180054 | לרפא |
| מטחנת רקמות במהירות גבוהה בטמפרטורה נמוכה | ווהאן Servicebio טכנולוגיה ושות', בע"מ | SKZ3F20200191 | טחינת רקמות |
| Maason ערכת צביעה | בייג'ינג Soleibao טכנולוגיה ושות', בע"מ | G1340 | מכתים |
| מתנול | גואנגדונג גואנגהואה Sci-Tech ושות', בע"מ | 20220519 | מאגר העברה מערבי |
| Mini-PROTEAN Tetra | Bole Life Medical Products (שנחאי) ושות', בע"מ | 552BR 233193 | אלקטרופורזה |
| Moxa | בית החולים השני המסונף של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית | / | ריפוי |
| ספקטרופוטומטר ספקטרופוטומטר ספקטרום מולטיסקאן ספקטרום מיקרופלייט | TECAN | Spark | הספיגה והריכוז של חלבון הרקמה זוהו |
| מספריים הפעלה | Zhangjiagang העיר Jinfeng צבי סכין חיתוך מפעל 201118 | לחתוך את העור | |
| Paraformaldehyde | בייג'ינג Lanjieke ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | BL539A | רקמה קבועה |
| PERK חלבון נוגדן מגיב | שנחאי Pumai Biotechnology Co., LTD (CST China Agent) | 3192 | כתם מערבי |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי חיובי | Carl Zeiss Suzhou Co., Ltd. | 5446000456 | ללכוד |
| תמונה דבק טרומי | Derun Cheng (בייג'ינג) ביולוגי ושות', בע"מ (ACE China Agent) | B230418 | חלבון כתם מערבי |
| מצא עז אנטי-ארנב LgG (H + L), HRP מצומד | שנחאי Dinran אלקטרונית טכנולוגיה ושות', בע"מ (TRAN) | HS101 | מרסס כתם מערבי |
| Hefei Rongzhida מכשירי חשמל ביתיים קטנים ושות', בע"מ | RS-FS1401 | סינית כתושה תרופות | |
| PVDF ממברנה | MerckMillipore Corporation | IPVH00010 | כתם מערבי |
| צנטריפוגה מקוררת | Hettich דיוק טכנולוגיה (Zhuhai) ושות', בע"מ | MIKRO 220R | צנטריפוגה |
| RIPA ליזאט | בייג'ינג Solaibao טכנולוגיה ושות', בע"מ (Solarbio) | R0010 | דגימת רקמות ליטיות |
| נימי | ג'יאנגסו Kangjianhua ציוד רפואי ושות', בע" | 20160157 דם ממשחת קנתוס | |
| פנימית (משחת זיליאן) | בית החולים המחוזי יונאן לרפואה סינית מסורתית | / | משמש לטיפול בכוויות ממוקסה |
| אבקת חלב רזה | גואנגג'ואו Saiguo ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ (BIOFROXX) | 1172GR500 | מערבי חוסם |
| מאגר להב כירורגי | שנחאי ציוד רפואי ושות', בע"מ | JOBO10 | חתך רקמת כליה |
| סכין כירורגית ידית | שנחאי ציוד רפואי ושות', בע"מ | J11010 | להב הרכבה |
| TS-200 שייקר אורביטלי | Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd. | קיבוע ג'ל | TS-8S |
| Tween 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| פינצטה | שנחאי ציוד רפואי ושות', בע"מ | JD1050 | להרים את המוקסה |
| תרופות וטרינריות*דיסק בדיקת תפקודי כליות מיקרו ליבות | טיאנג'ין מיקרו ננו ליבת טכנולוגיה ושות', בע"מ | 47031-35.5-0145-0227-62-220750 | בדיקת תפקודי כליות |
מקורות
- Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
- Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
- Ren, H. W., Cai, D. J. Brief discuss on treating febrile diseases with moxibustion. China's Naturopathy. 29 (02), 1-2 (2021).
- Ouyang, X. L., et al. Moxibustion may delay the aging process of Wistar rats by regulating intestinal microbiota. Biomedicine & Pharmacotherapy = Biomedecine & Pharmacotherapie. 146, 112147(2022).
- Qi, Q., et al. Gut microbiome alterations in colitis rats after moxibustion at bilateral Tianshu acupoints. BMC Gastroenterology. 22 (1), 62(2022).
- Wang, G. Y., Meng, Z., Xu, Q. Y., Dou, L., Cui, X. F. Scar moxibustion Zusanli treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome 20 cases. Modern Chinese Medicine. 33 (03), 79-80 (2013).
- Xue, K. Y., Fu, J., Lan, L., Tang, J. X., Cui, J. Meta-analysis of the efficacy and safety of barrier moxibustion in the treatment of chronic fatigue syndrome. Journal of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine. 44 (03), 53-59 (2022).
- Liu, J. W., Tian, Y., Peng, Y. Y., Ye, Y. Y. Observation on moxibustion sensitivity and curative effect of thermal sensitive moxibustion and knee osteoarthritis. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 41 (10), 1063-1068 (2021).
- Liu, W. A., Chang, X. R., Liu, M., Zhang, G. S. Effects of herbal-cake-separated-moxibustion sized cones at different dosages on blood fat and hemorheology in patients with hyperlipemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (9), 1787-1790 (2013).
- Zuo, Z., Chen, X. M., Jiang, Y. W., Yang, Y. M., Wang, B. Y. Effect of medicinal cake partition moxibustion on serum TGF-β1 and renal function in chronic renal failure rabbits. Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 38 (04), 82-84 (2017).
- Huang, P. D., et al. Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on renal function and expression of renal connective tissue growth factor, integrin-linked kinase and bone morphogenetic protein-7 in chronic renal failure rabbits. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 44 (8), 577-582 (2019).
- Li, L. R., Huang, X. X., Wei, T. T., Zhang, P. Research progress of TCM external treatment for chronic renal failure. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 23 (04), 51-54 (2020).
- Zuo, Z., Jiang, Y. W., Guan, Z. X., Chen, X. M. Observations on the therapeutic effect of herbal cake moxibustion on chronic renal failure. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 34 (03), 218-220 (2015).
- Wang, H., Zhang, H. M., Xu, J. M., Fan, R. Y., Lu, J. Effect of moxibustion on renal hemodynamics in patients with chronic kidney disease. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 43 (11), 722-724 (2018).
- Zhang, X. Q., Zhang, X. Y. External treatment of chronic kidney failure. Clinical Journal of Chinese Medicine. 9 (26), 141-143 (2017).
- He, C., Zhang, C. X., Zhou, S. Q., Fan, Y. S. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Zhang, H. X., et al. Introduction of a new type of mouse forelimb fixator and two types of batch mice moxibustion device. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (7), 616-619 (2021).
- Chen, W., et al. A batch moxibustion device in the mouse abdominal waist. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 45 (04), 110-112 (2022).
- Gao, S. Y., Wu, R. N., Wang, M. M., Zhang, S. J. A device for animal experiment. Clinical Journal of Chinese Medicine. 10 (23), 139-140 (2018).
- Hu, Y. L. Manual of acupuncture for experimental animals (second edition). , China Agriculture Press. Beijing. (2014).
- Liang, Y. L., et al. Reflections on animal experiments with moxibustion. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 31 (11), 4379-4381 (2016).
- Madalina, V. N., Jinyang, Z. -B., Malgorzata, W., Liliana, S. Targeting renal fibrosis: Mechanisms and drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 129, 295-307 (2018).
- Wu, R. N., et al. Design of convenient animal experimental moxibustion therapy device. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 38 (02), 243-244 (2019).
- Yan, L. G., Zhou, T., Jia, Z. K., Li, J., Wang, C. X. Influence of Panax pseudo-ginseng-partition moxibustion on cartilage damage in rats with traumatic osteoarthritis by regulating AMPK/SIRT1/NF-?B signaling pathway. Hebei Medical Journal. 45 (10), 1450-1454 (2019).
- Xu, Q., et al. Effect of mild moxibustion of 45 °C at "Zusanli" (ST36) of different durations on the inflammatory factors in the abdominal aorta of hyperlipidemia rats. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 48 (9), 923-932 (2023).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
