מחקר זה מתאר שיטה מהירה ויעילה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים באמצעות המסת קרישי דם, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
גישה מקיפה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
פקקת מוחית, קריש דם בעורק מוחי או בווריד, הוא הסוג הנפוץ ביותר של אוטם מוחי. חקר מרכיבי התאים של קרישי דם מוחיים חשוב לאבחון, טיפול ופרוגנוזה. עם זאת, הגישות הנוכחיות לחקר מרכיבי התא של קרישי הדם מבוססות בעיקר על צביעה באתרה , שאינה מתאימה למחקר מקיף של מרכיבי התא מכיוון שהתאים עטופים היטב בקרישי הדם. מחקרים קודמים בודדו בהצלחה אנזים פיברינוליטי (sFE) מ-Sipunculus nudus, שיכול לפרק את הפיברין הצולב, באופן ישיר, ולשחרר את מרכיבי התא. מחקר זה ביסס שיטה מקיפה המבוססת על sFE לחקר מרכיבי התא של פקקת מוחית. פרוטוקול זה כולל המסת קרישי דם, שחרור תאים, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית. על פי שיטה זו, ניתן היה לחקור את מרכיבי התא באופן כמותי ואיכותי. התוצאות המייצגות של ניסויים בשיטה זו מוצגות.
מבוא
מחלת כלי דם במוח היא אחת משלוש מחלות עיקריות שיכולות לאיים על בריאות האדם, ביניהן מחלת כלי דם איסכמית במוח מהווה יותר מ -80%. פקקת מוחית ופקקת ורידים מוחיים הן מחלות כלי הדם האיסכמיות המודאגות ביותר כיום, הנגרמות בעיקר על ידי קרישי דם מוחיים 1,2. אם הטיפול לא נעשה כראוי, יהיו לו שיעורי נכות ותמותה גבוהים ושיעור הישנות גבוה לאחר השחרור3.
לאחרונה, מספר גדל והולך של מחקרים הראו כי מרכיבי התאים של קרישי דם מוחיים נמצאים בקורלציה הדוקה עם האבחון, הטיפול והפרוגנוזה של פקקת מוחית 4,5,6
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
המחקר בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות של ועדת האתיקה הרפואית של אוניברסיטת Huaqiao. קרישי הדם המוחיים הוסרו בניתוח ונאספו בבית החולים הראשון Quanzhou, המסונף לאוניברסיטה הרפואית פוג'יאן, בהסכמה מדעת של החולים.
1. טיפול מקדים לקריש דם
- מניחים את הקרישים על צלחת נקייה, מוסיפים 5 מ"ל מלח פיזיולוגי עם טוויטר, מנערים את התבשיל בעדינות ומסירים את המלח עם פיפטה.
הערה: יש לחזור על השטיפה שלוש פעמים. - חותכים את הקרישים לחתיכות קטנות יותר (קטנות מ 5 מ"מ x 5 מ"מ x 5 מ"מ) עם מספריים. מוסיפים 5 מ"ל מלח פיזיולוגי, מנערים את המנה בעדינות ומסירים את המלח עם פיפטה.
הערה: יש לחזור על השטיפה שלוש פעמים. יש לוודא שלא נפלטות....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בשלב הראשוני של תהליך ההשפלה, נמצא כי קרישי הדם היו בעלי מבנה קומפקטי אדום, ותמיסת העבודה הייתה חסרת צבע. לאחר הדגירה במשך 30 דקות, תמיסת העבודה הפכה לאדומה בהירה, מה שמצביע על כך שתאי הדם המוצלבים שוחררו לתמיסת העבודה. רוב הקרישים הומסו בעת הארכת זמן הדגירה ל-5 שעות, ותמיסת העבודה הפכה לאדומה בהירה. להיפך, לא היה שינוי משמעותי בקבוצת המלח הפיזיולוגית (NC) אפילו לאחר דגירה של 10 שעות (איור 1). תוצאות אלה הראו כי תאי הדם הסגורים בקרישי הדם שוחררו בהצלחה על ידי פרוטוקול זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
sFE הוא סוכן פיברינוליטי שיכול לפרק את הפיברין באופן ישיר ויעיל12,16. כאן, נעשה שימוש ב-sFE כדי לפרק את הפיברין הצולב-מקושר של קרישי הדם במוח, לשחרר את התאים הסגורים בתוך קרישי הדם, ולנתח את מרכיבי התאים של הקרישים באופן איכותי וכמותי. נתוני המיקרוסקופ ובדיקת הדם השגרתית הצביעו על כך שהתאים הסגורים שוחררו מקרישי הדם. יתר על כן, סוגי התאים והמבנים של התאים ששוחררו לא הושפעו באופן משמעותי לאחר טיפול sFE. כך נוצרה לראשונה שיטה ייחודית, פשוטה ויעילה לניתוח מרכיבי התא.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.
תודות
מחקר זה מומן על ידי לשכת המדע והטכנולוגיה של העיר שיאמן (3502Z20227197), ולשכת המדע והטכנולוגיה של מחוז פוג'יאן (מס '2019J01070, מס '2021Y0027).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| לוחית תגובת אגלוטינציה | ROTEST | RTB-4003 | |
| מנתח המטולוגיה אוטומטי | SYSMEX | XNB2 | |
| מעקר קיטור בלחץ אנכי אוטומטי | SANYO | MLS-3750 | |
| (1.5 מ"ל) | Biosharp | BS-15-M | |
| ספסל נקי | AIRTECH | BLB-1600 | |
| חממת טמפרטורה קבועה | JINGHONG | JHS-400 | |
| צלחת תרבות (100 מ"מ) | תנור | ||
| DHG | SENXIN | DGG-9140AD | |
| איזון אנליטי אלקטרוני | DENVER | TP-213 | |
| קרום מסנן (0.22 ומיקרו; m) | Millex GP | SLGP033NK | |
| צנטריפוגה מיקרו בקירור | Cence | H1650-W | |
| CITOGLAS | 01-30253-50 | ||
| Milli-Q התייחסות | Millipore | Z00QSV0CN | |
| תמיסת מלח רגילה | CISEN | H37022337 | |
| מיקרוסקופ אופטי | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| מלח חוצץ פוספט | Beyotime | C0221A | |
| (1 מ"ל | Axygene | T-1000XT-C | |
| קצה פיפטה (200 ומיקרו; L) | Axygene | T-200XT-C | |
| פיפטור (1 מ"ל) | Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| Pipettor (200 ומיקרו; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| אזמל | MARTOR | 23111 | |
| מתנד מערבולת בגודל קטן | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| פינצטה | היסטית | HKQS-180 | |
| תמיסת צביעת רייט | Beyotime | C0135-500 מ"ל |
מקורות
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
