להלן מפורטים שני פרוטוקולים להערכת מקורות מזון והעדפות אוביפוזיציה בזחלים ובנקבות של זבובים. אלה מורכבים מארבע אפשרויות עם שני גורמים המקיימים יחסי גומלין: סוג המצע וטמפרטורה. הבדיקות מאפשרות לקבוע את העדפת מקור המזון של הזחלים ואת העדפת אתר הביציות עבור הנקבות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
חקירת בחירות תולדות החיים: שימוש בטמפרטורה ובסוג המצע כגורמים מקיימים אינטראקציה עבור זחלי נשיפה והעדפות נשיות
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
זבובי נשיפה (Diptera: Calliphoridae) מציגים מגוון רחב של אורחות חיים של זחלים, המסווגים בדרך כלל כטפילות מחייבת, טפילות פקולטטיבית וספרו-נקרופגיה מוחלטת. כמה מינים טפיליים, הן מחייבים והן פקולטטיביים, נחשבים לבעלי חשיבות סניטרית וכלכלית, שכן הזחלים שלהם יכולים לגרום למיאזיס (התפשטות רימות ברקמה חיה). עם זאת, ראוי לציין כי הנקבה הבוגרת ממלאת תפקיד מכריע כשהיא בוחרת את אתר הביצית, ולכן קובעת במידה רבה את הרגלי האכילה ואת התנאים ההתפתחותיים של הזחלים. במחקר זה, מוצעים שני פרוטוקולים לבדיקת העדפת האכלת הזחלים והעדפת אתר הביציות הנקביות בהתחשב בשני גורמים המקיימים אינטראקציה: סוג מצע הבשר וטמפרטורה. ההגדרות המוצגות כאן אפשרו לבדוק זחלי לוסיליה קופרינה ונקבות גרבידיות במבחן של ארבע אפשרויות עם שתי טמפרטורות (33 ± 2 מעלות צלזיוס ו- 25 ± 2 מעלות צלזיוס) ושני סוגים של מצעי בשר (בשר טרי בתוספת דם ובשר רקוב בן 5 ימים). זחלים או נקבות גרבידיות יכולים לבחור להתחפר או להטיל את ביציהם, בהתאמה, באחד מהבאים: בשר רקוב ב -25 מעלות צלזיוס (המדמה מצב של מין נקרופג), בשר טרי בתוספת דם ב -33 מעלות צלזיוס (המדמה מצב של מין טפילי), ושתי בקרות, בשר רקוב ב -33 מעלות צלזיוס, או בשר טרי בתוספת דם ב -25 מעלות צלזיוס. ההעדפה נבחנת על ידי ספירת מספר הזחלים או הביצים המוטלים בכל אפשרות עבור כל משוכפל. השוואת התוצאות הנצפות להתפלגות אקראית אפשרה להעריך את המובהקות הסטטיסטית של ההעדפה. התוצאות הצביעו על כך שלזחלי L. cuprina יש העדפה חזקה למצע הרקוב ב 25 °C (75 °F). לעומת זאת, העדפת אתר האוביפוזיציה על ידי הנקבות הייתה מגוונת יותר לסוג הבשר. מתודולוגיה זו יכולה להיות מותאמת כדי לבדוק את ההעדפה של מיני חרקים אחרים בגודל דומה. שאלות אחרות ניתן לחקור גם באמצעות תנאים חלופיים.
מבוא
זבובים, במיוחד מוסקואידים קליפטרטיים (כולל זבובי מציצה, זבובי בית, זבובי בוט וזבובי בשר בין היתר), מפגינים מגוון רחב של אורחות חיים, הכוללים התנהגויות טפיליות ונקרו-ספרופגוס1. מינים טפיליים גורמים בדרך כלל למיאזיס (myiasis), התפשטות של רקמות חיות על ידי רימות (זחלים)2. במשפחת Calliphoridae, שני המינים הטפיליים המחייבים והפקולטטיביים הם מזיקים עיקריים לחיות משק האחראים להפסדים כלכליים ולרווחת בעלי חיים ירודה עקב נגיעות רימות 2,3,4,5,6,7.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
דגימות זבובים הושגו באמצעות מלכודות ולא על בעלי חיים שורצים. רישיון SISBIO (67867-1) הונפק לאיסוף והחזקת זבובים ממשפחת Calliphoridae בשבי בתנאי מעבדה. דגימות חרקים פטורות מהערכה אתית במחקר בברזיל. בשר בקר ודם הושגו באופן מסחרי, ולא נדרש אישור אתי.
1. העדפת האכלת זחלים
- הכנת צלחות פטרי המכילות 2% אגר
- הכינו ארבע מנות פטרי עם אגר 2%. כדי לעשות זאת, להוסיף 6 גרם של אגר בקטריולוגי 300 מ"ל של מים ולהמיס את התערובת במיקרוגל. לאחר מכן, מחלקים את הנפח באופן שווה לארבע צלחות פטרי זכוכית (150X20 מ"מ), תוך שימוש בכ-70 מ"ל בכל מנה.
הערה: הכינו צלחות פטרי השוות למספר העותקים הניסיוניים הרצויים. במחקר זה נעשה שימוש ב-36....
- הכינו ארבע מנות פטרי עם אגר 2%. כדי לעשות זאת, להוסיף 6 גרם של אגר בקטריולוגי 300 מ"ל של מים ולהמיס את התערובת במיקרוגל. לאחר מכן, מחלקים את הנפח באופן שווה לארבע צלחות פטרי זכוכית (150X20 מ"מ), תוך שימוש בכ-70 מ"ל בכל מנה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כדי להדגים את יעילותן של השיטות המוצגות, הניסויים נערכו באמצעות אוכלוסיית מעבדה של Lucilia cuprina (משפחה: Calliphoridae), זבוב טפילי פקולטטיבי2. את כל הנתונים הגולמיים שהתקבלו עבור מין זה ניתן למצוא בקובץ משלים S3 עם התוצאות עבור בדיקות העדפות הזחל והמצע הנקבי. כדי להעריך אם הזחלים והנקבות מראים העדפה למצע כלשהו, הנתונים שנצפו הושוו ל-1000 מערכי נתונים מדומים, שכל אחד מהם מייצג בחירה אקראית (ראה קוד בקובץ משלים S1). אחוז ההשוואות המובהקות סטטיסטית (p <.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הבנת האבולוציה של הרגלי האכלה, במיוחד בהקשר של טפילות אצל זבובים, מחייבת בחינה של העדפות המצע לאורך שלבי חיים שונים להאכלה או לביציות. לכן, במחקר זה הוצעו שיטות חזקות ופשוטות לחקירת העדפות המצע בזחלים ובנקבות של זבובים. שיטות אלה נבדקו בלוסיליה קופרנה (Lucilia cuprina), זבוב טפילי פקולטטיבי2. באופן מעניין, הניסויים חשפו נטייה ברורה לבשר רקוב בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס בקרב זחלי L. cuprina, התואמת את התנאים המשמשים בדרך כלל מינים נקרופגיים. זה היה שונה ממחקר של Fouche et al
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
איש מהם לא הצהיר.
תודות
אנו מודים לפטרישיה תיסן, גבריאלה ס. זאמפים ולוקאס דה אלמיידה קרבליו על שסיפקו את מושבת L. cuprina ועל עזרתם בהקמת הניסוי. ברצוננו להודות גם לרפאל בארוס דה אוליביירה על הצילום והעריכה של הסרטון. מחקר זה נתמך על ידי מענק מחקר של האומה המתפתחת מהאגודה להתנהגות בעלי חיים ל- V.A.S.C. ועל ידי מענק FAPESP Dimensions US-Biota-São Paulo ל- T.T.T. (20/05636-4). S.T. ו- D.L.F. נתמכו על ידי FAPESP (מענק פוסט-דוקטורט 19/07285-7 ומלגת דוקטורט 21/10022-8, בהתאמה). V.A.S.C. ו- A.V.R. נתמכו על ידי מלגות CNPq PhD (141391/2019-7, 140056/2019-0, בהתאמה). T.T.T. נתמכה על ידי CNPq (310906/2022-9).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אגר | סיגמא-אולדריץ' | 05038-500G | למיקרוביולוגיה |
| קרטונים שחורים | - | - | 70x50 ס"מ |
| דם בקר עם נוגדי קרישה | - | - | 50% דם בקר טהור עם נוגד קרישה (3.8% נתרן ציטראט) + 50% מים מסוננים |
| בשר טחון בקר | - | כ-7-8% שומן | |
| מברשת | עשוי מצינור חרוטי מפלסטיק | ||
| בז או גנרי | -50 מ"ל | ||
| מיכלי זכוכית בצורת צלב | בעבודת יד | NA | 48x48 ס"מ, גובה 8 ס"מ ורוחב |
| 8 ס"מErlenmeyer | Vidrolabor | NA | 500 מ"ל |
| 70% אתנול | סינת' | A1084.01.BL | 70% אתיל אתנול מוחלט + 30% מים מסוננים |
| צילינדר מדורג | Nalgon או Generic-500 | מ"ל ו-50 מ"ל כרית | |
| חימום | ס"מ מידות, 40 W, 127 V | ||
| מדחום אינפרא אדום | HeTaiDa | HTD8808 | מדחום גוף ללא מגע (קצב דגימה: 0.5 S, דיוק: ± 0.2 & deg; C, מדידה: 5-15 ס"מ) |
| צלחת פטרי (זכוכית) | דיוק | NA | 150x20 מ"מ מידות |
| (הערה: צלחות הפטרי יכולות להיות מפלסטיק אם משתמשים בהן פעם אחת בלבד) | |||
| צלחת פטרי PS | Cralplast | 18130 | מידות 60x15 מ"מ |
| פיפטה פסטר מפלסטיק | - | 3 מ"ל (נפח כולל) | |
| נתרן ציטראט | סינתזה | C11033.01.AG | 3.8% נתרן ציטראט (38 גרם מדולל ב -1 ליטר מים מסוננים) |
| כפיות | - | יש צורך ביותר מכף אחת. השתמש באחד לכל סוג של מצע בשר. רצוי נירוסטה. | |
| מרית נירוסטה | גנרי-שטוח | וקצה כפית | |
| סטריאומיקרוסקופ | Bioptika-WF10X | /22 עדשות | |
| פינצטה | - | מתכת עשויה ונקודה עדינה | |
| פסי אור לד לבנים | NA | NA | 4.8 W, 2x0.05 mm², 320 לומן, טמפרטורת צבע: 6500 K (לבן) |
מקורות
- Kutty, S. N., et al. Phylogenomic analysis of Calyptratae: Resolving the phylogenetic relationships within a major radiation of Diptera. Cladistics. 35 (6), 605-622 (2019).
- Zumpt, F. Myiasis in Man and ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
