הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי בתיווך כורכומינואיד על מודל מורין של קנדידאזיס פומי

1.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/65903

⸱

27 באוקטובר 2023

 ,  ,  ,  , 
1Department of Dental Materials and Prosthodontics, School of Dentistry, Araraquara, São Paulo State University (UNESP), 2Department of Social Dentistry, School of Dentistry, Araraquara, São Paulo State University (UNESP)

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר את היישום של טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) במודל מורין של קנדידה אוראלית. aPDT בוצע באמצעות תערובת מסיסה במים של כורכומינואידים ואור LED כחול.

תקציר

טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) נחקר בהרחבה במבחנה, ומודלים פרה-קליניים של זיהומים בבעלי חיים מתאימים להערכת טיפולים אלטרנטיביים לפני ניסויים קליניים. מחקר זה מתאר את היעילות של aPDT במודל מורין של קנדידה אוראלית. ארבעים עכברים עברו דיכוי חיסוני באמצעות זריקות תת-עוריות של פרדניזולון, ולשונם חוסנה באמצעות מטוש אוראלי שהושרה בעבר בתרחיף תאי C. albicans . טטרציקלין ניתן באמצעות מי שתייה במהלך הניסוי. חמישה ימים לאחר החיסון הפטרייתי, עכברים חולקו באופן אקראי לשמונה קבוצות; קבוצה תשיעית של עכברים לא נגועים שלא טופלו נכללה כקבוצת ביקורת שלילית (n = 5). שלושה ריכוזים (20 μM, 40 μM ו-80 μM) של תערובת כורכומינואידים נבדקו עם נורת LED כחולה (89.2 mW/cm2; ~455 nm) וללא אור (קבוצות C+L+ ו-C+L, בהתאמה). אור בלבד (C-L+), ללא טיפול (C-L-), ובעלי חיים ללא זיהום הוערכו כקבוצת ביקורת. הנתונים נותחו באמצעות מבחני ANOVA ו-Games-Howell של וולש (α = 0.05). קנדידה אוראלית הוקמה בכל בעלי החיים הנגועים ודמיינה באופן מקרוסקופי באמצעות נוכחות של כתמים לבנים אופייניים או pseudomembranes על גבי הלשונות. חלקים היסטופתולוגיים אישרו נוכחות גדולה של שמרים וחוטים המוגבלים לשכבה הקרטיניסטית של האפיתל בקבוצת C-L, ונוכחותם של תאים פטרייתיים הופחתה חזותית בתמונות שהתקבלו מעכברים שנחשפו ל- aPDT עם כורכומינואידים של 40 מיקרומטר או 80 מיקרומטר. aPDT בתיווך כורכומינואידים של 80 מיקרומטר קידם ירידה של 2.47 לוג10 בספירת מושבות בהשוואה לאלה בקבוצת C-L- (p = 0.008). כל הקבוצות האחרות לא הראו ירידה מובהקת סטטיסטית במספר המושבות, כולל קבוצות פוטונסיטייזר (C+L-) או אור בלבד (C-L+). aPDT בתיווך כורכומינואיד הפחית את העומס הפטרייתי מהלשונות של עכברים.

מבוא

קנדידה אוראלית (OC) היא הזיהום הפטרייתי העיקרי של חלל הפה; זה נגרם על ידי צמיחת יתר של קנדידה spp. גורמים מקדימים לOC כוללים תפקוד אנדוקריני, שימוש באנטיביוטיקה רחבת טווח, רדיותרפיה וכימותרפיה, חסרים תזונתיים, קסרוסטומיה (זרימת רוק נמוכה), שימוש בשיניים תותבות, היגיינה לקויה, ובמיוחד, דיכוי חיסוני1. מבין מיני הקנדידה , קנדידה אלביקנס היא הנפוצה והארסית ביותר; הוא נמצא כמין קומנסלי בגוף האדם וכפתוגן אופורטוניסטי. ל-C. albicans יש את היכולת לשנות את המורפולוגיה שלו משמרים קומנסליים (blastopores) לחוטים פתוגניים (hyphae ו-pseudohyphae)2. צורות נימה, במיוחד hyphae, יכול לפלוש אפיתל המארח על ידי אנדוציטוזה או חדירה פעילה, גרימת זיהום3. גורמי אלימות אחרים של C. albicans כוללים הידבקות, היווצרות ביופילם והפרשת אנזימים ורעלים ליפוליטיים והידרוליטיים, כגון ליפאזות, פוספוליפאזות, פרוטאינאזות וקנדידליזין4.

טיפולי OC כוללים שימוש בחומרים אנטי פטרייתיים, במיוחד פוליאנים ואזולים מקומיים (ניסטטין ומיקונזול)5. עם זאת, הם מראים יעילות רק לטווח קצר, והישנות היא תכופה. בנוסף, שימוש יתר של antifungals הוליד את הבעיה של התפתחות עמידות אנטי פטרייתית והתפשטות6. לכן, יש צורך בטיפולים אלטרנטיביים, כגון טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT), המשלב פוטו-נסיטייזר (PS) ואור באורך גל מתאים (זהה לזה של ספיגת PS) בנוכחות חמצן. PSS קשורים לתאים או נקלטים בהם, וכאשר הם מופעלים על ידי אור, הם מייצרים מיני חמצן תגובתי (ROS) שהם רעילים לתאים רגישים7.

ב-aPDT, אחד הפוטונסיטייזרים (PSs) שבהם נעשה שימוש הוא כורכומין (CUR), תרכובת טבעית המופקת מקני השורש של צמח הכורכום (Curcuma longa L.). יש לכורכומין תכונות טיפוליות רבות, כולל יכולות אנטי דלקתיות, נוגדות חמצון, אנטי-סרטניות ונוגדות חיידקים 8,9. מחקר קודם מצא כי aPDT באמצעות CUR הפחית ביעילות C. albicans במודל murine של קנדידה אוראלית מבלי לגרום נזק לרקמות המארח10. CUR הוא הכורכומינואיד העיקרי המופק מכורכום, אבל גם פוליפנולים אחרים, כמו דמתוקסיכורכומין וביס-דמתוקסיכורכומין, נמצאים בצמח זה. aPDT בתיווך כורכומינואיד הדגים פעילות אנטיבקטריאלית נגד ביופילמים של סטפילוקוקוס זהוב שגודלו בצנתרים11. עם זאת, למיטב ידיעתנו, פעילותו האנטי פטרייתית נגד C. albicans עדיין אינה ברורה. לכן, במחקר זה, הערכנו aPDT בתיווך מלח כורכומינואיד כנגד C. albicans במודל מורין של OC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

פרוטוקול המחקר לשימוש בעכברים אושר על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים (מספרי תיקים 05/2008 ו-09/2020) בבית הספר לרפואת שיניים, ארארקוארה, UNESP. C. albicans (ATCC 90028) שימש כזן הייחוס. נקבות עכברים שוויצריות בנות שישה שבועות (n = 45), עם טווח מסת גוף של 20-30 גרם, שימשו במחקר הנוכחי. בעלי החיים סופקו על ידי אוניברסיטת סאו פאולו, UNESP, Botucatu.

1. הכנת PS ובחירת מקור האור עבור aPDT

  1. הכינו את ה-PS בהתאם למפרט של החומר שייבדק.
    הערה: במחקר זה, תערובת מסיסה במים של כורכומינואידים (תערובת מלח מסיסה במים12 על בסיס CUR) שימשה כ-PS (ראו טבלת חומרים ואיור 1). דילולים ב-20 מיקרומטר, 40 מיקרומטר ו-80 מיקרומטר (15.6, 29.2 ו-58.4 מ"ג/ליטר, בהתאמה) הוכנו במים טהורים במיוחד מיד לפני השימוש ונשמרו בטמפרטורה של 5 מעלות צלזיוס.
  2. בחר ציוד קל בעל אורך גל מתאים (זהה לזה של בליעת PS) המסוגל להאיר את כל המטרה הפוטונסיטית באופן אחיד ובו זמנית מבלי לחמם את הרקמה.
    הערה: במחקר זה נעשה שימוש בפריט המכיל דיודה פולטת אור (LED, ראה טבלת חומרים), שתוכננה במכון פיסיקה דה סאו קרלוס (אוניברסיטת סאו פאולו, סאו קרלוס, SP, ברזיל). הספק היציאה שסיפק האור היה 89.2 mW/cm2 באורך גל כחול של כ-455 ננומטר.

2. הכנת חיסון C. albicans

  1. יש לשמור את זן הייחוס C. albicans (ATCC 90028) בשמרים-פפטון-גלוקוז (YEPD, ראו טבלת חומרים) עם 50% גליצרול בטמפרטורה של -80°C עד לשימוש.
  2. מפשירים את הזן הקפוא בטמפרטורת החדר, מורחים אליקוט של 100 מיקרוליטר על צלחת פטרי עם אגר דקסטרוז סאבורו (SDA) עם כלוראמפניקול (ראו טבלת חומרים), ודגרים בטמפרטורה של 37°C למשך 48 שעות.
  3. מעבירים חמש מושבות לתוך 10 מ"ל של ציר חנקן שמרים עם 2% גלוקוז (YNBg) בינוני וגדלים באופן אירובי ב 37 ° C במשך 16 שעות.
  4. לדלל את תרבית השמרים ב- YNBg טרי (1:10) ולדגור באופן אירובי ב 37 ° C עד שהצפיפות האופטית מגיעה לשלב אמצע לוג הגידול.
    הערה: תקנן את עקומת הצמיחה המיקרוביאלית עבור כל מעבדה בעבר. במחקר הנוכחי, תרביות הורשו לדגור במשך כ-8 שעות, עד שהגיעו לשלב אמצע היומן של הצמיחה כפי שמצוין על ידי הצפיפות האופטית ב-540 ננומטר (OD540), עם ערך ממוצע של 0.536 ±-0.062 יחידות שרירותיות (ממוצע ± סטיית תקן [SD]).
  5. צנטריפוגו את התרבית בטמפרטורה של 5,000 x גרם בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות, השליכו את הסופרנאטנט ושטפו את הגלולה פעמיים באותו נפח של מלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS; 0.136 M NaCl, 2 mM KCl, 1 mM KH2PO4, 10 mM Na2HPO4, pH 7.4).
  6. השתמש 100 μL aliquots לביצוע ארבעה דילולים טוריים פי 10 ב- PBS, פיזר דילולים על לוחות SDA, ודגר ב 37 ° C במשך 48 שעות לספירת מושבה. כסטנדרט, מתלים פטרייתיים משמשים בריכוזים של כ 4.5 × 107 יחידות יוצרות מושבה למיליליטר (CFU/mL)].

3. השראת OC בעכברים

הערה: המתודולוגיה הבאה תוארה בעבר על ידי Takakura et al.13 ושוחזרה על ידי הקבוצה שלנו10,14, עם כמה שינויים.

  1. פיזור אקראי של עכברים בתשע קבוצות (n = 5), בהתאם למספר זהה של טיפולים (קובץ משלים 1).
    הערה: חלל הפה של עכברים צריך להיות שלילי לצמיחת קנדידה . זה צריך להיבדק על ידי ספוג חלל הפה ציפוי הדגימה על SDA.
  2. שמור את בעלי החיים בקופסאות פרופילן10 (5 עכברים לכל היותר תיבה), עם שבבי עץ לחיפוי הרצפה, בויבריום מבוקר טמפרטורה ב 23 ± 2 ° C תחת מחזור אור / חושך 12/12 שעות. אין צורך לספק העשרה ספציפית.
  3. שמור על עכברים על דיאטת עכברים מושחלת ומים מסוננים ad libitum.
  4. הזרקה תת עורית של התרופה לדיכוי מערכת החיסון, פרדניזולון (100 מ"ג/ק"ג משקל גוף, ראה טבלת חומרים), לראשונה ביום הראשון לכל חברי הקבוצות C+L+ 20, C+L+ 40, C+L+ 80, C+L- 20 μM, C+L- 40, C+L- 80, C-L+ ו-C-L- (קובץ משלים 1).
    הערה: שמור עכברים מאותה קבוצה באותה קופסה ועקוב אחריהם מדי יום עבור כל סימן של מתח וירידה במשקל. פנה לייעוץ וטרינרי עבור משכך כאבים או מזון / מים שהשתנו אם מתח או ירידה במשקל הם ציינו.
  5. החל מהיום הראשון ועד סוף הניסוי, לספק טטרציקלין הידרוכלוריד במי שתייה ב 0.83 מ"ג / מ"ל13.
  6. חסן לשונות עכברים ביום השני, כולל קבוצות C+L+ 20, C+L+ 40, C+L+ 80, C+L- 20, C+L- 40, C+L- 80, C-L+ ו- C-L- (קובץ משלים 1), עם החיסון C. albicans . אין לחסן עכברים מקבוצת הביקורת השלילית (NCtrl).
    1. הרדמת בעלי חיים על ידי הזרקה תוך שרירית של 10 מ"ג / ק"ג כלורפרומזין כלוריד (ראה טבלת חומרים) על כל שריר הירך לפני ביצוע חיסון.
    2. בצע חיסון אינטרה-אוראלי של העכברים על ידי השריית ספוגית סטרילית (אחת לכל חיה) לתרחיף מתוקנן טרי (כלומר, מוכן מיד לפני החיסון) של C. albicans.
    3. הניחו עכברים מורדמים במצב שכיבה. מוציאים בעדינות את לשונם מפיהם באמצעות מלקחיים סטריליים. שפשפו את לשונו של כל עכבר במקלון ספוג במשך 30 שניות. עקוב אחר עכברים עד שהם מתאוששים מהרגעה.
  7. ביום החמישי, יש לתת זריקה תת עורית משלימה של פרדניזולון (100 מ"ג/ק"ג משקל גוף) כדי לשמור על הדיכוי החיסוני.
    הערה: פרוטוקול זה מספיק כדי לשמור על הזיהום במשך 7 ימים לאחר חיסון תוך אוראלי. ציר הזמן של הפרוטוקול מוצג באיור 2.

4. טיפול פוטודינמי אנטי מיקרוביאלי והחלמה של C. albicans מנגעים אוראליים

  1. ביום השביעי, לפני הטיפול, יש להרדים את בעלי החיים באמצעות הזרקה תוך-צפקית של קטמין הידרוכלוריד (100 מ"ג/ק"ג משקל גוף) בשילוב עם קסילזין (10 מ"ג/ק"ג משקל גוף) (ראו טבלת חומרים).
  2. הניחו כל בעל חיים במצב שכיבה על מכשיר כרית 14,15 המצויד בחוטי נירוסטה שניתן לכרוך בלולאה סביב החותכות כדי לשמור על הפה פתוח.
    הערה: רפידות איזותרמיות מומלצות לחימום העכברים בזמן טשטוש, מניעת היפותרמיה בטמפרטורת החדר ומניעת תמותה הקשורה להרדמה15. כל בעל חיים מורדם צריך להיות מנוטר על ידי היעדר רפלקס נסיגה כאשר בהונות הם צובטים כדי לאשר את עומק ההרדמה. ניתן לתת מנת תחזוקה אחת של קטמין ב-1/3 מהמינון המקורי (ללא קסילזין) במידת הצורך.
  3. כאשר הלסת התחתונה והלחיים נסוגות, מניחים בעדינות את הלשון מחוץ לפה.
  4. עבור עכברים מקבוצות C+L+, פיפטה 70 μL של PS על גבי הלשון (באחד הריכוזים שנבדקו). יש לשמור על העכברים בסביבה חשוכה למשך 20 דקות כתקופת טרום הקרנה. ודא כי במהלך זמן זה, הלשון של כל בעל חיים נשאר ממוקם בתוך חלל הפה כדי למנוע את photoensitizer (PS) מלהיות בליעה.
  5. לאחר תקופת הפוטוסנסיטיזציה, משוך את הלשון מהפה להארה. הניחו את התקן ה-LED על גבי הלשון והאירו ב-37.5 J/cm2 (7 דקות עם המכשיר הנוכחי) (איור 3).
  6. עבור בעלי חיים מקבוצות C+L, פיפטה 70 μL של PS באחד הריכוזים שנבדקו על גבי הלשון, ולשמור עכברים אלה בחושך במשך 27 דקות.
  7. עבור בעלי חיים מקבוצת C-L+ (מטופלים באור ללא פוטונסיטיזציה קודמת), פיפטה 70 μL של תמיסת מלח סטרילית על גבי הלשון. שמור את העכברים בחושך במשך 20 דקות ולאחר מכן להאיר את לשונם ב 37.5 J / cm2 (7 דקות עם המכשיר הנוכחי).
  8. עבור עכברים מקבוצת C-L- (לא מטופלים עם PS ולא עם אור), פיפטה 70 μL של תמיסת מלח סטרילית על גבי הלשון ולשמור אותם בחושך במשך 27 דקות.
  9. לשחזר C. albicans מן הלשון של כל העכברים מיד לאחר הטיפול. ספוג את החלק האחורי של הלשון במשך דקה אחת עם צמר גפן סטרילי.
  10. הניחו כל מטוש דגימה בצינור המכיל 1 מ"ל של מלח סטרילי ומערבולת למשך דקה אחת כדי להשעות מחדש את התאים המיקרוביאליים.
  11. מיד לבצע דילולים טוריים פי 10 ב PBS צלחת 25 μL aliquots מעל לוחות SDA כפול. לדגור את הצלחות באופן אירובי ב 37 ° C במשך 48 שעות.
  12. לאחר 48 שעות, השתמש במונה מושבות דיגיטלי (ראה טבלת חומרים) כדי לקבוע את ספירת מושבות השמרים. חשב עומס C. albicans (CFU/mL) עבור כל חיה.
  13. הפוך ערכי CFU/mL ליומן10 וננתח כראוי בהתאם לתכנון הניסוי והנחות הנתונים.
    הערה: בחקירה הנוכחית, נעשה שימוש במבחן ANOVA ו-Games-Howell החד-כיווני של וולש (α = 0.05)16 .

5. ניתוחים היסטופתולוגיים

  1. ביום השמיני, מרדימים עכברים עם קטמין במינון של 100 מ"ג/ק"ג בשילוב עם קסילזין במינון של 10 מ"ג/ק"ג באמצעות הזרקה תוך פריטוניאלית וממיתים אותם עם מנת יתר של קטמין (200 מ"ג/ק"ג הניתנת באמצעות אינטרפריוטוניאל). אשר את המוות על ידי בדיקת היעדר תנועה נשימתית (דום נשימה), והיעדר פעימות לב (אסיסטולה).
  2. בזהירות לצבוט את הלשון ולשלוף אותו מתוך הפה של החיה. באמצעות אזמל ידני, לבצע חתך לפני papillae circumvallate כדי להסיר בניתוח את כל הלשון מבלי לגרום לפציעות באזורים הקדמיים והמרכזיים.
  3. מקבעים את הלשון בפורמלין חוצץ 10% (pH 7.2-7.4) למשך 24 שעות ושוטפים אותה במים זורמים למשך שעתיים.
  4. המשך עם ההכללה בתהליך הפרפין: התייבשות, הבהרה והספגה10,14.
  5. חתכו מקטעים טוריים (בעובי 5 מיקרומטר) באמצעות מיקרוטום, ולאחר מכן הדביקו את המקטעים על שקופיות זכוכית. המשך להכתים חלקים אלה באמצעות חומצה תקופתית Schiff ו hematoxylin (PAS-H) לבדיקה היסטופתולוגית וזיהוי פטריות באמצעות תצפית תחת מיקרוסקופ אור.
  6. בקש מפתולוג, רצוי עיוור לקבוצות שנחקרו, לבחון את תגובת הרקמה עקב זיהום C. albicans .
  7. תאר את המאפיינים ההיסטולוגיים של הרקמה (אפיתל ורקמת חיבור), במיוחד תגובות דלקתיות מקומיות בעוצמות שונות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מודל מורין של OC הראה כתמים לבנים טיפוסיים ופסאודוממברנות על הלשון של כל העכברים הנגועים (איור 4A). C. albicans שנמצאו מבעלי חיים C-L אישרו התיישבות רקמות על ידי מיקרואורגניזם זה (הערכים נעו בין 1.62 x 104 ל 4.80 x 105 CFU/mL). כצפוי, חיות מקבוצת NCtr לא הראו שינויים כלשהם ברקמות או צמיחת מושבה לאחר הדגימה (איור 4B).

aPDT הפחית את הכדאיות של C. albicans כאשר כורכומינואידים שימשו ב-80 מיקרומטר לפ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

C. albicans נקשר לזיהומים בפה ובוושט אצל אנשים עם מצב של מדוכאי חיסון, סוכרת, שימוש ממושך באנטיביוטיקה והיגיינת פה לקויה 1,3. המחקר של מחלות זיהומיות בבני אדם דורש הן חקירות חוץ גופיות והן חקירות in vivo לפני שניתן יהיה לתכנן ניסויים קליניים בצורה בטוחה ומדויקת. המחקר הנוכחי מתאר שיטה להקמת מודל מורין של OC, אשר ניתן להשתמש בו כדי להעריך את הפתוגנזה של זיהומים אוראליים על ידי C. albicans ואת היעילות של גישות אנטי פטרייתיות 15,1...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תודות

המחברים מודים על התמיכה הכספית של FAPESP (קרן המחקר של סאו פאולו, מספר תהליך FAPESP #2013/07276-1 (CePID CePOF) ו- 2008/00601-6. אנו מודים גם לד"ר אנה פאולה סילבה על אספקת המידע על מלח מסיס במים המבוסס על CUR.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
C. albicansATCC (רוקוויל, מרילנד, ארה"ב)90028חיסון קנדידה
 אפנדורף  צנטריפוגה 5804/5804R, ב. בראון, מלסונגן, הסן, גרמניה022628146 (NA)משמש להכנת חיסון קנדידה
כלורפרומזין כלוריד 2 מ"ג/מ"ל בית מרקחת תרכובות, אררקוארה, SP, ברזיל -   משמש להרגעת בעלי חיים במהלך חיסון קנדידה
מלח מסיס במים על בסיס כורכומיןPDTPharma, Cravinhos, ברזיל - מורכב מ-53.4% כורכומין טבעי, ו-46.6% מכורכומינואידים אחרים (דמטוקסיכורכומין וביס-דמטוקסיכורכומין). מוכן במים ו-N-MethylD-Glucamine (משקל מולקולרי ממוצע סופי של 730.32 גרם.mol− 1)
דלפק מושבה דיגיטליCP 600 פלוס, Phoenix Ind Com Equipamentos Cientí ficos Ltda, Araraquara, SP, ברזיל - משמש לספירת מושבות על צלחות אגר
צ'או עכברים מוחצןBenelab מזון, תעשייה Qualy Animal Nutrition and Commerce Ltda., Lindó ia, Sã o מדינת פאולו, ברזיל. -משמש להאכלת העכברים
קטמין הידרוכלוריד 10%קטמינה, אגנר, יוני&אטילדה; o Quí נציץ Farmacê utica Nacional S/A, Embu-Guaç u, SP, ברזיל - משמש להרדמת בעלי חיים לפני טיפולים ולהמתת חסד
ידית דיודה פולטת אור (אב טיפוס)Instituto de Fí sica de Sã o קרלוס, אוניברסיטת Sã o פאולו, Sã o Carlos, SP, ברזיל - מיוצר עם LXHL-PR09, Luxeon III Emitter, Lumileds Lighting, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב
מתילפרדניזולון אצטט 40 מ"גDEPO-MEDROL, פייזר, ניו יורק - משמש כמדכא חיסון
מיקרוטוםלייקה  מיקרוסיסטמס, באנוקבורן, אילינוי, ארה"בSM2500משמש לחיתוך החלקים הסדרתיים של הלשונות
קופסאות פרופילן (בית כלובים) H13 x L20 x D30 ס"מציוד בונת'ר, Ribeirã o Preto, SP, ברזיל - שימש להחזקת בעלי החיים לאורך כל תקופת הניסוי
Sabouraud Dextrose Agar עם ChloramphenicolHiMedia, מומבאי, הודוMM1067-500Gמדיום תרבית לגידול שמרים (אגר)
ספקטרופוטומטרספקטרופוטומטר Kasvi K37-VIS , Sã o José dos Pinhais, PR, ברזילK37-VIS משמש לסטנדרטיזציה של ריכוז החיסון
טטרציקלין הידרוכלוריד בית מרקחת מורכב, Araraquara, SP, ברזיל - אנטיביוטיקה הניתנת כדי לגרום לדיסביוזה בפה
שבבי עץJ.R. שבבי עץ, Comerce of Sawdust Ltda., Conchal, Sã o מדינת פאולו, ברזיל -משמש לחיפוי רצפה בתוך קופסאות הדיור
Xylazine 2%Calmiun, Uniã o Quí נציץ Farmacê utica Nacional S/A, Embu-Guaç u, SP, ברזיל - משמש בשילוב עם קטמין להרדמה
מרק חנקן שמרים Difco, InterLab, דטרויט, מישיגן, ארה"בDF0919-07-3 מדיום תרבות לגידול שמרים (מרק)
מרק דקסטרוז פפטון שמריםNutriSelect Basic, Sigma AldrichY1375מדיום תרבית לשמירה על הזנים ב-80° C ולגדול
משמש להכנת צנטריפוגת :

מקורות

  1. Vila, T., Sultan, A. S., Montelongo-Jauregui, D., Jabra-Rizk, M. A. Oral candidiasis: a disease of opportunity. Journal of fungi (Basel, Switzerland). 6 (1), 15(2020).
  2. Sudbery, P. E. Growth of Candida albicans hyphae. Nature Reviews Microbiology. 9 (10), 737-748 (2011).
  3. Moyes, D. L., Richardson, J. P., Naglik, J. R. Candida albicans-epithelial interactions and pathogenicity mechanisms: scratching the surface. Virulence. 6 (4), 338-346 (2015).
  4. Lopes, J. P., Lionakis, M. S. Pathogenesis and virulence of Candida albicans. Virulence. 13 (1), 89-121 (2022).
  5. Quindós, G., et al. Therapeutic tools for oral candidiasis: Current and new antifungal drugs. Medicina oral, patologia oral y cirugia buccal. 24 (2), e172-e180 (2019).
  6. Nishimoto, A. T., Sharma, C., Rogers, P. D. Molecular and genetic basis of azole antifungal resistance in the opportunistic pathogenic fungus Candida albicans. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 75 (2), 257-270 (2020).
  7. Gholami, L., Shahabi, S., Jazaeri, M., Hadilou, M., Fekrazad, R. Clinical applications of antimicrobial photodynamic therapy in dentistry. Frontiers in Microbiology. 13, 1020995(2013).
  8. Trigo-Gutierrez, J. K., Vega-Chacón, Y., Soares, A. B., Mima, E. G. O. Antimicrobial activity of curcumin in nanoformulations: a comprehensive review. International Journal of Molecular Sciences. 22 (13), 7130(2021).
  9. Santezi, C., Reina, B. D., Dovigo, L. N. Curcumin-mediated Photodynamic Therapy for the treatment of oral infections-A review. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 21, 409-415 (2018).
  10. Dovigo, L. N., et al. Curcumin-mediated photodynamic inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidiasis. Medical Mycology. 51 (3), 243-251 (2013).
  11. Zangirolami, A. C., Carbinatto, F., Filho, J. D. V., Bagnato, V. S., Blanco, K. C. Impact of light-activated curcumin and curcuminoids films for catheters decontamination. Colloids and SurfacesB: Biointerfaces. 213, 112386(2022).
  12. Santezi, C., Tanomaru, J. M., Bagnato, V. S., Júnior, O. B., Dovigo, L. N. Potential of curcumin-mediated photodynamic inactivation to reduce oral colonization. Photodiagnosis Photodynamic Therapy. 15, 46-52 (2016).
  13. Takakura, N., et al. A novel murine model of oral candidiasis with local symptoms characteristic of oral thrush. Microbiology and immunology. 47 (5), 321-326 (2003).
  14. Mima, E. G., et al. Susceptibility of Candida albicans to photodynamic therapy in a murine model of oral candidosis. OralSurgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology and Endodontology. 109, 392-401 (2010).
  15. Solis, N. V., Filler, S. G. Mouse model of oropharyngeal candidiasis. Nature Protocol. 7 (4), 637-642 (2012).
  16. Marôco, J. Análise Estatística com o SPSS Statistics 25. , ReportNumber 7th ed, Lisboa, Portugal. (2018).
  17. Naglik, J. R., Fidel, P. L. Jr, Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS Microbiology Letters. 283 (2), 129-139 (2008).
  18. Samaranayake, Y. H., Samaranayake, L. P. Experimental oral candidiasis in animal models. Clinical Microbiology Reviews. 14, 398-429 (2001).
  19. Chamilos, G., Lionakis, M. S., Lewis, R. E., Kontoyiannis, D. P. Role of mini-host models in the study of medically important fungi. The Lancet Infectious Diseases. 7, 42-55 (2007).
  20. Carmello, J. C., et al. Treatment of oral candidiasis using Photodithazine- mediated photodynamic therapy in vivo. PLoS One. 11 (6), e0156947(2016).
  21. Sakima, V. T., et al. Antimicrobial photodynamic therapy mediated by curcumin-loaded polymeric nanoparticles in a murine model of oral candidiasis. Molecules. 23 (8), 2075(2018).
  22. Abe, S., et al. A glucocorticoid antagonist, mifepristone affects anti-Candida activity of murine neutrophils in the presence of prednisolone in vitro and experimental candidiasis of prednisolone-treated mice in vivo. FEMS Immunology and Medical Microbiology. 13 (4), 311-316 (1996).
  23. Jones, J. H., Russell, C., Young, C., Owen, D. Tetracycline and the colonization and infection of the mouths of germ-free and conventionalized rats with Candida albicans. Journal Antimicrobial Chemotherapy. 2 (3), 247-253 (1976).
  24. Russell, C., Jones, J. H. Effects of oral inoculation of Candida albicans in tetracycline-treated rats. Journal of Medical Microbiology. 6 (3), 275-279 (1973).
  25. Teichert, M. C., Jones, J. W., Usacheva, M. N., Biel, M. A. Treatment of oral candidiasis with methylene blue- mediated photodynamic therapy in an immunodeficient murine model. OralSurgery, Medicine, Pathology, Radiology and Endodontology. 93, 155-160 (2002).
  26. Totti, M. G. A., Santos, E. B., Almeida, O. P., Koga-Ito, C. Y., Jorge, A. O. C. Oral candidosis by Candida albicans in normal and xerostomic mice. Brazilian Oral Research. 18, 202-207 (2004).
  27. Hidalgo, K. J. R., et al. Antimicrobial photodynamic therapy in combination with nystatin in the treatment of experimental oral candidiasis induced by Candida albicans resistant to fluconazole. Pharmaceuticals (Basel). 12 (3), E140(2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Candida albicansLED
טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי בתיווך כורכומינואיד על מודל מורין של קנדידאזיס פומי
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.