פרוטוקול זה מספק מידע טכני לשחזור כלי דם באמצעות טכניקת השרוול בהשתלת כבד אורתוטופית בעכבר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שחזור כלי דם בטכניקת השרוול בהשתלת כבד אורתוטופית בעכבר
במאמר זה
סיכום
תקציר
השתלת כבד אורתוטופית בעכבר היא מתודולוגיה יעילה לחקר המנגנונים הבסיסיים של איסכמיה בכבד ופגיעה ברפרפוזיה. עם זאת, האתגרים הטכניים מציבים מחסום לשימוש במודל ניסיוני יקר ערך זה ולהעברת מיומנויות אלה לדור הבא. ההיבט המאתגר ביותר של הליך זה הוא שחזור כלי דם, כולל וריד הפורטל (PV), וריד נבוב נחות אינפרא-הפטי (IHIVC), ווריד נבוב נחות על-הכבד. השימוש באזיקים מפלסטיק, במקום בתפרים, מאפשר שחזור PV ו-IHIVC חלק יותר. כלי הדם משוחזרים על ידי הצמדת שרוול העשוי מצנתר תוך ורידי לקצה כלי ההשתלה והחדרת השרוול לכלי המקבל. שני ההיבטים המכריעים ביותר הם לדמיין כראוי את לומן הפנימי של הכלי והימנעות משימוש בכוח מוגזם. מטרתנו היא לספק סקירה טכנית של שחזורי כלי דם באמצעות טכניקת השרוול בניתוח מושתל. טיפים טכניים אלה לטכניקת השרוול צפויים לסייע למיקרוכירורגים להקל על שחזור כלי הדם ולקדם את מחקרם.
מבוא
השתלת כבד אורתוטופית בעכבר (MOLT) היא שיטה ניסיונית יעילה שדווחה לראשונה בשנת 19911. מודל ניסיוני זה, המשתמש בעכברים מהונדסים גנטית וריאגנטים מחקריים שונים, מילא תפקיד מרכזי בחקירת איסכמיה חמה וקרה ופציעות רפרפוזיה. עם זאת, המורכבות הטכנית הגבוהה של המודל עיכבה את פיתוח הרפואה הבסיסית להשתלת כבד2. MOLT כולל שלושה שלבים עיקריים: (1) שליפת הכבד מהעכבר התורם, (2) ניתוח שולחן אחורי, ו-(3) השתלת הכבד במקבל. מבין ההליכים המושתלים הללו, אנסטומוזה וסקולרית מהווה את האתגר הגדול ביותר. בעוד שהאנסטומוזה של הווריד הנבוב התחתון העל-כבד מסתיימת בדרך כלל על ידי תפירה ידנית2, ניתן לשחזר את הווריד הנבוב התחתון האי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקול הניסוי אושר על ידי הוועדה לניסויים בבעלי חיים באוניברסיטת קיוטו. במחקר נעשה שימוש בעכברי C57BL/6, בני יותר מ-10 שבועות ובמשקל שבין 25 גרם ל-30 גרם, שהתקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). כל בעלי החיים הורדמו עם 2.5% איזופלורן (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי מוסדות), נשמרו בתנאים ספציפיים נטולי פתוגנים, וכל הליכי הניסוי נערכו בהתאם לתקנות הניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת קיוטו. המכשירים המתאימים ששימשו למחקר מפורטים בטבלת החומרים ומתוארים באיור 1 ובאיור 2.
1. בחירת בעלי חיים
- השתמש עכברים עם משקל גוף של 25-30 גרם....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שחזור PV מוצלח כאשר, עם פתיחת הידוק הווריד הפורטלי, אין פיתול, והכבד מחורר באופן אחיד. זמן הכבד צריך להיות מתחת ל -20 דקות, מכיוון שזמני הכבד העולים על 25 דקות מגבירים את הסיכון לתמותת עכברים. שחזור IHIVC נחשב מוצלח אם אין פליטת דם מהשתל.
אחסון השתל בטמפרטורות קרות למשך שעה אחת באמצעות תמיסת שימור איברים מביא לרמת אלנין אמינוטרנספראז בסרום של כ-2,000 U/L לאחר 6 שעות לאחר הרפרפוזיה (איור 7A). שיעור ההישרדות הוא 100% לאחר 7 ימים לאחר ההשתלה (איו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
לימוד שחזור כלי דם הוא ההיבט המאתגר ביותר בהשגת MOLT מוצלח. איכות השרוול משפיעה באופן משמעותי על קושי השחזור, בהתחשב בגודל הקטן של עכברים5. מאמר זה מספק פרוטוקול מפורט להכנת השרוול, חיבורו ושחזורו.
אמנם אין הבדלים משמעותיים מדיווחים קודמים לגבי הכנת השרוול וחיבורו 2,5, אך יש לקחת בחשבון כמה נקודות קטנות. ראשית, יש להגביל את עובי ידית השרוול לכ-1/6 מההיקף הכולל. אם היא דקה מדי, הידית יכולה בקלות להתכופף ולהיות קש.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לאף מחבר אין ניגודי עניינים לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מחקר בסיסי JST 2022 (האגודה היפנית להשתלות).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 16 גרם קטטר תוך ורידי | TERUMO | SR-FF2032 | שרוול IHIVC |
| 20 גרם קטטר תוך ורידי | TERUMO | SR-FF1651 | שרוול PV |
| 8-0 משי צמה | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 משי |
| Belzer UW פתרון אחסון קר | נוזל שימור איברים | אסטלס | |
| מהדק בולדוג | B BRAUN | FB329R | מהדק בולדוג |
| C57BL/6 עכברים | איזופלורן של Oriental Bio Service | ||
| Viatris | Anesthesic | ||
| Micro Blunted Tips 0.1 מ"מ x 0.06 מ"מ | FST | 11253-20 | מיקרו-מלקחיים ישרים |
| מיקרו-סרפין מהדק מוליך עם מנעול | FST | 18056-14 | מוליך קליפ כלי |
| מיקרו Serrefines | F.S.T | 18055-4 | קליפ כלי |
| מס' 11 להבים רזרביים | סכין גילוח בטיחותי נוצה | 11 | להבים |
| מספריים עיניים, ידית עגולה | B BRAUN | FD103R | מיקרומספריים |
| מיכל פלסטיק בצורת מלבני | דייסו | באורך 10 ס"מ, רוחב 15 ס"מ וגובה 6 ס"מ | |
| קצות SuperGrip | FST | 00649-11 | מיקרו-מלקחיים מעוקלים |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | מיקרוסקופ |
| Vise | Niigataseiki | 00505351 | כלי מכני לאבטחת מלקחיים של אפונה על השולחן |
מקורות
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
