מאמר שיטה

יישום מחקרי של גל הלם הנגרם על ידי לייזר לחקר פציעת שבלול הנגרמת על ידי פיצוץ

DOI:

10.3791/66396

⸱

1 במרץ 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery, National Defense Medical College, 2Division of Bioinformation and Therapeutic Systems, National Defense Medical College, 3Department of Biochemistry, National Defense Medical College

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקולים ניסיוניים ליצירת מודל חייתי של פגיעת שבלול כתוצאה מפיצוץ באמצעות גל הלם המושרה בלייזר (LISW). חשיפה של העצם הטמפורלית ל- LISW מאפשרת רבייה של פתופיזיולוגיה שבלולית הנגרמת על ידי פיצוץ. מודל בעלי חיים זה יכול להיות פלטפורמה להבהרת פתולוגיה של השבלול ובחינת טיפולים אפשריים לפציעות פיצוץ.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

האוזן היא האיבר הרגיש ביותר ללחץ יתר של פיצוץ, ופציעות שבלול מתרחשות לעתים קרובות לאחר חשיפה לפיצוץ. חשיפה לפיצוץ עלולה להוביל לליקוי שמיעה תחושתי-עצבי (SNHL), שהוא ליקוי שמיעה בלתי הפיך המשפיע לרעה על איכות החיים. פתולוגיות שבלול מפורטות המושרות על ידי פיצוץ, כגון אובדן תאי שיער, נוירונים של גנגליון ספירלי, סינפסות שבלול ושיבוש של סטריאוציליה, תועדו בעבר. עם זאת, קביעת הידרדרות תחושתי-עצבית של השבלול לאחר פציעת פיצוץ היא מאתגרת מכיוון שבעלי חיים החשופים ללחץ יתר של הדף חווים בדרך כלל ניקוב קרום הטימפאני (TMP), הגורם לאובדן שמיעה הולכתי במקביל. כדי להעריך תפקוד לקוי של שבלול תחושתי-עצבי טהור, פיתחנו מודל ניסיוני בבעלי חיים של פגיעה בשבלול כתוצאה מפיצוץ באמצעות גל הלם המושרה על-ידי לייזר. שיטה זו מונעת TMP ופגיעות מערכתיות נלוות ומשחזרת את הירידה התפקודית ברכיב SNHL באופן תלוי אנרגיה לאחר חשיפה ל- LISW. מודל בעלי חיים זה יכול להיות פלטפורמה להבהרת המנגנונים הפתולוגיים ובחינת טיפולים אפשריים לתפקוד לקוי של השבלול כתוצאה מפיצוץ.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ליקוי שמיעה וטינטון הם בין הלקויות השכיחות ביותר, המדווחות אצל עד 62% מהחיילים המשוחררים1. מספר סיבוכים שמיעתיים הנגרמים כתוצאה מפיצוץ, כולל ליקוי שמיעה תחושתי-עצבי (SNHL) וניקוב קרום הטימפאני (TMP), דווחו בקרב אנשים שנחשפו ללחץ יתר של הדף2. יתר על כן, מחקרים על אנשים שנחשפו לפיצוצים מצביעים על כך שחשיפה לפיצוץ גורמת לעתים קרובות לפגמים ברזולוציה הרקתית השמיעתית, גם כאשר ספי השמיעה נמצאים בטווח התקין, מה שמכונה "ליקוי שמיעה נסתר (HHL)"3. זה מבוסס היטב כי יש אובדן משמעותי של סינפסות שבלול בין תאי שיער פנימיים (IHCs) ונוירונים שמיעתיים (ANs) בפתולוגיה של שבלול הקשור לפיצוץ4. ניוון סינפטי גורם לעיבוד שמיעתי לקוי והוא גורם תורם מרכזי בהתפתחות HHL5. לפיכך, איברי השמיעה הם רכיבים שבירים המכילים מבנים מורכבים ומאורגנים מאוד. עם זאת, המנגנון המדויק שבאמצעותו גלי הדף משפיעים על האוזן הפנימית ברמה התאית עדיין אינו ברור. הסיבה לכך היא האתגרים בשכפול המורכבויות הקליניות והמכאניות המדויקות של פציעות פיצוץ בסביבות מעבדה והמורכבות של פתולוגיות שבלול הנגרמות על ידי פיצוץ.

המרכיב העיקרי של פגיעת הדף הוא גל ההלם (SW), המאופיין בעלייה מהירה וגבוהה בלחץ שיא6. המורכבות של פציעות הדף נחקרה בהרחבה במחקרים רטרוספקטיביים רבים 7,8,9. ישנם מכשירים שונים ליצירת פיצוץ, כגון גז דחוס10, צינורות הלם11, וחומרי נפץ קטנים12, ברמות לחץ שונות. צורת גל הלחץ של SW שנוצרה על ידי מכשירים שפותחו לאחרונה דמתה מאוד לזו של פיצוץ אמיתי. רעיון חשוב בביסוס מודל חייתי של ליקוי שמיעה תחושתי-עצבי כתוצאה מפיצוץ הוא למזער פציעות נלוות, מלבד נזק שמיעתי, כדי להפחית את מותם של בעלי חיים. לפיכך, פותחו מחקרי פגיעות הדף בהם צינורות הלם מוזערו וניתן לשלוט במדויק בתפוקה כך שבעלי חיים חשופים כמעט ולא ימותו. עם זאת, למרות שמודלים אלה של בעלי חיים מפתחים בדרך כלל סיבוכים, כגון TMP, קשה להעריך את תפקוד השבלול בגלל ליקוי שמיעה הולכתי בו-זמני2. בעבר ביצענו מחקר בבעלי חיים מוגנים על אוזניים על פגיעות הדף באמצעות אטמי אוזניים ולא מצאנו שכיחות של TMP13. אטמי האוזניים יכולים להחליש חלקית נזק שבלול חמור, אך לא ניוון עצבי שמיעתי מרכזי או התפתחות טינטון. לכן, אטמי אוזניים להגן על השבלול, כמו גם את קרום הטימפאן. עם זאת, נדרש מודל של בעלי חיים של נזק שבלול טהור הנגרם על ידי פיצוץ ללא TMP כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של השבלול הנגרמת על-ידי פציעות פיצוץ.

בעבר פיתחנו מודל מקומי של פגיעת הדף של האוזן הפנימית בחולדות ובעכברים באמצעות גל הלם המושרה בלייזר (LISW)14,15. שיטה זו יכולה להתבצע בבטחה ובקלות ברמת מעבדה סטנדרטית ושימשה ליצירת מודלים של פגיעות ריאה והדף ראש16,17. ניתן לכוונן את האנרגיה של LISW על ידי שינוי סוג הלייזר והעוצמה, מה שמאפשר שליטה על מידת הנזק לשבלול. מודל פציעות השבלול המושרה על ידי LISW הוא בעל ערך לחקר המנגנונים של SNHL הנגרמים על ידי פציעות הדף וחקירת טיפולים פוטנציאליים. במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקולים ניסיוניים מפורטים ליצירת מודל עכברי של נזק שבלול הנגרם כתוצאה מפיצוץ באמצעות LISW ומדגימים ניוון שבלול, כולל אובדן תאי שיער (HCs), סינפסות שבלול ונוירוני גנגליון ספירליים (SGNs), באופן תלוי אנרגיה בעכברים לאחר חשיפה ל-LISW.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הליכי הניסוי אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המכללה הרפואית להגנה לאומית (אישור #18050) ובוצעו בהתאם להנחיות המכונים הלאומיים לבריאות ומשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה של יפן. נעשו כל המאמצים למזער את מספר בעלי החיים ואת סבלם.

1. בעלי חיים

  1. השתמש בעכברי CBA/J זכרים בני 8 שבועות כדי לעקוב אחר פרוטוקול זה. לפני הניסוי, העבירו את העכברים לבדיקת תפקוד שמיעה ותצפית אנדוסקופית על קרום הטימפאני כדי להבטיח תקינות.
  2. חלקו 27 עכברי CBA/J לשלוש קבוצות: (1) 2.0 J/cm2 קבוצה חשופה (n = 9 עכברים); (2) 2.25 J/cm2 קבוצה חשופה (n = 9 עכברים); ו-(3) 2.5 J/cm2 קבוצה חשופה (n = 9 עכברים). הסר את כל האוזניים להערכה חודש לאחר החשיפה ל- LISW.

2. הגדרות ניסיוניות של חשיפה ל- LISW

  1. מטרת הלייזר היא דיסק גומי שחור טבעי, בקוטר 10 מ"מ ובעובי 0.5 מ"מ. כדי להגביר את דחף LISW, השתמש בדבק ריתוך שרף אקרילי כדי לחבר יריעת פוליאתילן טרפתאלט (PET) בעובי 1.0 מ"מ לחלק העליון של אזור המטרה. הקרינו לייזר 532 ננומטר Q-switched Nd: YAG כדי ליצור את ה-LISW מאחורי המטרה (איור 1A).
  2. מקדו את פולס הלייזר עם עדשה פלאנו קמורה לנקודה בקוטר 3.0 מ"מ על מטרת הלייזר.
  3. השתמש בקרינת LISW כדי ליצור פלזמה במשטח המליטה של שני החומרים ולאדות את הגומי (אבלציה בתיווך פלזמה), תוך השארת גומי מאדה בחלל.
  4. השתמש בהידרופון כדי למדוד את גל הלחץ של LISW ב -1.0 מ"מ מתחת למים, לא ברקמה חיה. הניחו הידרופון סיב אופטי בקוטר 0.25 מ"מ מתחת לגומי השחור 1.0 מ"מ מתחת לפני המים כדי להקליט את צורות הגל של לחץ LISW ולמדוד אותן באמצעות אוסצילוסקופ דיגיטלי.
    הערה: צורות גלי הלחץ הראו מאפיינים יציבים עם לחץ מרבי ודחף דומים כפי שמוצג באיור 1B.
  5. בצע את כל ההליכים בבעלי חיים בהרדמה כללית באמצעות זריקות intraperitoneal של 1 מ"ג / ק"ג medetomidine hydrochloride ו 75 מ"ג / ק"ג קטמין. החל משחה אופתלמית על שתי העיניים של העכבר כדי למנוע התייבשות ולספק תמיכה בחום.
  6. יש לגלח בזהירות את האזורים הפוסטאוריקולריים כדי להימנע משמירה על האוויר הכלוא בפרווה. קבע את העכברים על צלחת ומקם את האזורים postauricular באזור המוקד של LISW בכיוון אנכי כלפי מעלה.
  7. חבר מטרת גומי שחורה באופן מלעורי לאזור האחורי של אוזן העכבר. כדי להבטיח התאמת עכבה אקוסטית, השתמש בג'ל מוליך אולטרסאונד בין מטרת הלייזר לבין פני העור.
  8. יש למרוח פולס LISW יחיד על השבלול דרך העצם הרקתית. הגדר את היציאות של פולסי הלייזר לשלוש צפיפויות אנרגיה: 2.0 J/cm2 , 2.25 J/cm2 ו-2.5 J/cm2.

3. בדיקת תפקוד שבלול

הערה: בדיקות תגובה שמיעתית בגזע המוח (ABR) בוצעו כפי שדווח בעבר14,15.

  1. בצע את מדידת ABR יום אחד לפני ויום אחד וחודש לאחר החשיפה ל- LISW.
  2. ABR הוא פוטנציאל שמיעתי מעורר בתגובה לגירויים שמיעתיים והוא משמש בדרך כלל להערכת ספי שמיעה בארבעה תדרים (12.0 קילוהרץ, 16.0 קילוהרץ, 20.0 קילוהרץ ו-24.0 קילוהרץ).
  3. הציגו את צליל הגירוי מעל אוזנייה קטנה ומדדו את רמת לחץ הקול ליד קרום הטימפאני של העכבר באמצעות מיקרופון קטן הממוקם ליד האוזנייה. פלט גירויי פרץ ממחולל קול במהירות של 37 מחזורים לשנייה והגבר את לחץ הקול מרמת לחץ קול של 20 dB (SPL) ל- 80 dB SPL בשלבי SPL של 5 dB.
  4. הכנס אלקטרודת מחט נירוסטה להקלטת אלקטרואנצפלוגרם מתחת לתעלת האוזן והאזור הקדמי של האוזן והכנס אלקטרודה קרקעית מתחת לאזור הקאודלי של הזנב.
  5. הערך את פונקציות השבלול על-ידי מדידת משרעת שיא ABR I (P1). נתח באופן אוטומטי את צורות הגל של ABR ביחס לספי השמיעה ולמשרעת ABR P1 באמצעות תוכנת ניתוח שיא ABR כפי שדווח קודם לכן18.
  6. חשב את שינויי הסף של ABR על ידי הפחתת הספים המתקבלים לפני החשיפה. השוו את שינויי הסף של ABR בשלוש הקבוצות החשופות לאלה של האוזניים הנגדיות הלא חשופות (ביקורת). מדוד אמפליטודות ABR באמצעות צורת גל ABR במהלך גירוי SPL של 80 dB.

4. הערכה היסטולוגית

הערה: הערכה היסטולוגית בוצעה כמתוארלעיל 14,15.

  1. HCs וסינפסה שבלול
    1. בצע את הבדיקה הפתולוגית של השבלול חודש לאחר החשיפה ל- LISW.
    2. יש לוודא את עומק ההרדמה באמצעות צביטת בוהן לפני הזילוח. לאחר hemoperfusion עם פתרון רינגר הנקה, לבצע זילוח transcardiac עם 1 מ"ל / גרם של 4% paraformaldehyde (PFA). לאחר עריפת הראש, יש להסיר את השבלול ולנקב ישירות עם 4% PFA, ולאחר מכן קיבוע ב-4°C למשך הלילה.
    3. לאחר הקיבוע, יש לרוקן את השבלול על ידי ניעור תמיסת חומצה אתילאנדיאמין טטראצטית (EDTA) 0.5mol/L למשך יומיים.
    4. חלקו את השבלול נטול המינרלים לארבעה חלקים. לאחר הקפאת כל פיסת שבלול על קרח יבש למשך 10 דקות, בצעו חסימה בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת בסרום סוס רגיל 5% פשוט מצומד עם 0.3% טריטון X לחדירה.
    5. יש להשתמש בנוגדנים אנטי-מיוזין 7a (Myo7A), חלבון קושר אנטי-C-terminal (CtBP2) ונוגדנים נגד נוירופילמנט (NF) כנוגדנים ראשוניים ומודגרים ב-37°C למשך הלילה. השתמשו בנוגדנים Myo7A, CtBP2 ו-NF כדי להעריך HCs, סרטים קדם-סינפטיים וסיבי עצב שבלול, בהתאמה.
    6. יש לשטוף את הנוגדן הראשוני הבלתי קשור במי מלח חוצצי פוספט (PBS) למשך 5X3 דקות. לדגור את הדגימות עם נוגדנים משניים המתאימים ב 37 ° C במשך 2 שעות. לאחר הצביעה, שטפו את הדגימות במשך 3 x 5 דקות עם PBS, ועטפו את הדגימות על זכוכית המגלשה עם מעטפת מסיסה במים באמצעות זכוכית כיסוי.
    7. לצורך הערכה, רכשו את התמונה המלאה של השבלול (מחולקת לארבעה חלקים) בהגדלה של פי 10, וחשבו את מפת תדרי השבלול באמצעות תוסף תוכנת ImageJ שאליו הפניה כדי למקם במדויק את אזורי השבלול הספציפיים בתדרים 12.0 kHz, 16.0 kHz, 20.0 kHz ו-24.0 kHz.
    8. חשב את שיעורי ההישרדות של HC ואת מספר הסינפסות בכל תדר.
      1. כדי לחשב את שיעורי ההישרדות של HC, ספרו את מספרי HCs ששרדו וחסרים לכל אורך של 200 מיקרומטר בכל תדר, וחשבו את שיעור ההישרדות של HCs באמצעות משוואה (1) המוצגת להלן:
        שיעור הישרדות HC (%) = (מספר HCs ששרדו / מספר HCs ששרדו ונעדרים) × 100 (1)
      2. כדי לחשב את מספר הסינפסות, קבל תמונות z-stack ברזולוציה גבוהה של אזור HC הפנימי באמצעות עדשת אובייקט טבילת שמן (63×) עם זום דיגיטלי 3.1x וגודל צעד של 0.25 מיקרומטר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי קונפוקלי. ייבאו את אוספי התמונות ל-ImageJ, וספרו אוטומטית את ה-CtBP2 puncta לכל IHC בטווח של 50 מיקרומטר בכל ערימת תמונות. חשב את שיעור ההישרדות של הסרטים הסינפטיים באמצעות משוואה (2):
        שיעור הישרדות סרטים סינפטיים (%) = (מספר הסרטים הסינפטיים באוזניים חשופות LISW / מספר הסרטים הסינפטיים באוזני ביקורת) × 100 (2)
    9. לסריקת מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM), הסירו את השבלול, כפי שתואר קודם לכן, ולאחר מכן תקנו עם 2% PFA ו-2.5% גלוטראלדהיד יחד בטמפרטורה של 4°C למשך הלילה. לאחר הסרת ההסתיידות של השבלול על ידי ניעור תמיסת EDTA של 0.5mol/L בטמפרטורה של 4°C למשך 7 ימים, חתכו את השבלול לארבע חתיכות להכנת הרכבה מלאה.
    10. תקן את הרקמות עם 1% אוסמיום טטרוקסיד ב 4 ° C במשך 30 דקות, לייבש אתנול 50% בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות, לחזור על הפעולה עם 70%, 80%, 95%, ולאחר מכן 100% אתנול, ציפוי sputter עם אוסמיום, ולבדוק תחת מיקרוסקופ אלקטרונים ב 5.0 kV, כפי שדווח קודם14.
    11. בצע ניתוח כמותי של הפרעות צרור סטריאוציליות בתאי שיער חיצוניים (OHC) על ידי חישוב היחס בין סטריאוסיליה משובשת (מספר סטריאוסיליה OHC משובשת / המספר הכולל של סטריאוסיליה OHC) בכל קבוצת אנרגיה באמצעות תמונות SEM14. ספור את מספר הסטריאוסיליה לכל 100 מיקרומטר במרכז אזורי 16.0 ו- 24.0 קילוהרץ. הגדר שורה אחת או יותר של צרורות OHC המכופפים כלפי הצד הצידי, סבוכים או חסרים את בסיסם כמשובשים.
  2. SGNs
    1. כדי להעריך כמותית את מספר ה- SGNs בחודש אחד לאחר החשיפה ל- LISW, בצע זילוח לבבי עם 4% PBS, ערוף ראש, הסר את השבלול ובצע קיבוע אחורי באותם תנאים שתוארו לעיל. בטל את החישוב של השבלול ב- 0.5 M EDTA למשך שבוע אחד.
    2. לאחר ההסתיידות, טובלים את השבלול ב-30% סוכרוז למשך הלילה, מטמיעים אותם בתרכובת ההקפאה, מקפיאים בחנקן נוזלי להכנת קטעים ליד תעלת רוזנטל בעובי של 15 מיקרומטר, מכתימים בהמטוקסילין ובאאוזין, וצופים בהם תחת מיקרוסקופ אור14.
    3. למדידת צפיפות SGN, ספרו את מספר ה-SGNs בסיבוב האמצעי של תעלת רוזנטל וחשבו את הישרדות SGN לכל בקרה.

5. ניתוח סטטיסטי

  1. בצע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות התוכנה הנבחרת.
  2. ניתוח הבדלים סטטיסטיים בהסטת סף ABR, HC, SGN וספירות סינפטיות באמצעות מדידות חוזרות דו-כיווניות ANOVA ["תדירות או חלקי שבלול (אפיקלי/אמצעי/בסיס)" ×"קבוצות בעלי חיים"], ניתוח דו-כיווני של שונות (ANOVA), ואחריו מבחן השוואה מרובה של Tukey לאחר הוק.
  3. הצג את כל הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן והגדר את רמת המובהקות הסטטיסטית על p < 0.05.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

צורת גל LISW
יכולת השחזור של צורת גל הלחץ LISW נמדדה פי 5 ב- 2.0 J/cm2 כדלקמן. צורות הגל היו בדרך כלל דומות ויציבות והראו עלייה חדה עם רוחב הזמן, לחץ שיא ודחף של 0.43±0.4 μs, 92.1 ± 6.8 MPa ו-14.1 ± 1.9 Pa∙s (חציון ± SD), אשר מתאים למאפייני SW (איור 1B). LISWs מאופיינים בזמן עלייה מהיר, לחץ שיא גבוה, משך זמן קצר ודומיננטיות לחץ חיובי. כאשר מוחלים על רקמה ביולוגית, המטרה ממוקמת ישירות על הרקמה החיה דרך הג'לי, וניתן לחשוב כי SW יש כמעט את אותם מאפיינים כמו SW נמדד מוחל על הרקמה. לאחר חשיפה ל- LISW, המופע של TMP הוערך באמצעות אנדוסקופ דיגיטלי קטן. אף אחד מהעכברים בקבוצת האנרגיה LISW לא הציג TMP לאחר חשיפה (איור 1C).

הערכה שמיעתית
בדיקת ABR בוצעה כדי לקבוע תפקוד שמיעתי. ABR הוא מדידה של הפוטנציאל המעורר קול במסלול השמיעתי, ו-ABR P1 מייצג פעילות עצבית מצטברת בעצב השבלול. יום לאחר החשיפה ל-LISW, האוזן החשופה הראתה הבדל משמעותי בשינוי סף ה-ABR בין קבוצות ה-LISW השונות (ANOVA דו-כיוונית, p < 0.0001; איור 2A). עלייה זו בשינוי סף ABR נמשכה עד חודש לאחר חשיפה ל- LISW בקבוצות 2.25 ו- 2.5 J/cm2 (ANOVA דו-כיוונית, 2.25 J/cm2, p < 0.0001; 2.5 J/cm2, p < 0.0001). בפרט, אזור התדירות הגבוהה הציג עלייה ניכרת בשינוי סף ABR. עם זאת, ספי ABR התאוששו לרמה שלא הייתה שונה באופן משמעותי מקדם-קרינה בקבוצת 2.0 J (ANOVA דו-כיוונית, 2.0 J/cm2, p = 0.76), מה שמצביע על כך שגובה הסף היה תלוי אנרגיה. לגבי אמפליטודות ABR P1, כל הקבוצות המוקרנות על ידי LISW הראו ירידה משמעותית באמפליטודות ABR P1 בכל התדרים יום אחד וחודש לאחר החשיפה ל- LISW (ANOVA דו-כיוונית, p < 0.0001; איור 2B). באוזן הלא חשופה (בקרה; אוזן שמאל) לא נמצאו שינויים ניכרים בסף השמיעה ABR בעקבות חשיפה ל- LISW (הנתונים אינם מוצגים).

הישרדות HCs ו- SGN
תצפית מיקרוסקופית על אוזניים שנחשפו ל-LISW לא גילתה נזק מכני לשבלול, כגון שבר ונקע של האוסיקלס, קרע בקרום החלון העגול או דימום תוך-שבלול, בעקבות חשיפה ל-LISW (הנתונים לא מוצגים), העולה בקנה אחד עם ממצאים קודמים 6,14.

כתמים חיסוניים פלואורסצנטיים של HCs עם Myo7A, סרטים סינפטיים עם CtBP2, ועצב השבלול עם NF מוצגים באיור 3A. לא נצפה נזק חמור לשבלול, כגון אובדן HCs או סיבי עצב, באף אחת מהקבוצות. עם זאת, ההערכה הכמותית של הישרדות OHCs חיוביים ל- Myo7A הייתה שונה באופן משמעותי בין הקבוצות (ANOVA דו-כיוונית, p = 0.002; איור 3B). קבוצת 2.5 J/cm2 הראתה שיעורי הישרדות נמוכים משמעותית של OHCs מאשר קבוצת הביקורת, במיוחד באזור התדר הגבוה (ANOVA דו-כיוונית, 2.5 J/cm2, p = 0.0002). עם זאת, שיעורי ההישרדות של IHCs היו דומים בין הקבוצות, מה שמצביע על כך ש- OHCs פגיעים ל- LISW באנרגיה גבוהה (ANOVA דו-כיווני, p = 0.76). הערכה כמותית של הישרדות הסרט הסינפטי מוצגת באיור 3C. סרטים סינפטיים הופחתו באופן משמעותי הן בקבוצות 2.25 J/cm2 בהשוואה לקבוצת הביקורת (ANOVA דו-כיוונית, 2.25 J/cm2, p < 0.0001; 2.5 J/cm2, p < 0.0001), והתדרים הגבוהים יותר הציגו נטייה חזקה יותר לרדת, בדומה לזו של שינוי סף ABR והישרדות OHC.

לאחר מכן, צפיפות SGN הוערכה, כפי שמוצג באיור 3D. היה הבדל משמעותי בצפיפות SGN בין הקבוצות (ANOVA דו-כיוונית, p = 0.76), וקבוצת 2.5 J/cm2 הראתה שיעורי הישרדות נמוכים משמעותית של SGN בהשוואה לקבוצות הביקורת (ANOVA דו-כיוונית, 2.5 J/cm2, p = 0.007). עם זאת, קבוצות 2.0 ו-2.25 J/cm2 הראו הישרדות SGN דומה בהשוואה לקבוצת הביקורת. תוצאה זו מצביעה על כך שחומרת ניוון השבלול ותפקוד לקוי של השמיעה תלויה בחשיפה לאנרגיית LISW, אשר עולה בקנה אחד עם תוצאות ההישרדות של ABR ו-HC.

צרור סטריאוסיליארי
ראינו עלייה ניכרת בסף ה-ABR, כ-30 dB, הן בקבוצות 2.25 והן ב-2.5 J/cm2 בתדרים מעל 20 kHz, שנמשכה עד חודש לאחר חשיפה ל-LISW (כפי שניתן לראות באיור 2A). אולם לא ניתן לייחס את שינוי הסף של 30-dB שראינו אך ורק לאובדן של OHCs, ניוון של סינפסות שבלול או מספר מופחת של SGCs (איור 3). מחקר קודם הצביע על כך ששינויי הסף של ABR היו מינימליים כאשר מספר הסרטים הסינפטיים ירד ב-50%19. לכן, ביצענו SEM כדי לחקור את הגורם לעליית סף ABR. בעקבות חשיפה ל-LISW בעוצמה של 2.5 J/cm2, נראה שחלק מהחבילות הסטריאוצילאריות של OHC הופרעו, במיוחד באזורים בעלי תדר גבוה (איור 4A), מה שעשוי להיות אחד הגורמים לסף ABR משופר בעקבות חשיפה ל-LISW. הערכה כמותית של הפרעה סטריאוצילית גילתה כי יחס השיבוש נטה להיות גבוה יותר באזור התדר הגבוה יותר באופן תלוי אנרגיה (איור 4B).

figure-results-1
איור 1: הגדרות ניסוי ופרופיל לחץ של LISW. (A) מערך ניסויי ליצירת LISW בבעלי חיים. (B) מאפיינים של צורות גל לחץ LISW שנקבעו על 2.0 J/cm2. (C) תמונות מייצגות של קרום הטימפאן. TMPs לא נצפו באף אחת מהאוזניים החשופות ל- LISW. כהפניה, TMP מייצג המושרה על ידי פיצוץ (ראשי חץ צהובים) מוצג באמצעות צינור פיצוץ. קיצורים: LISW = גל הלם המושרה בלייזר; PET = פוליאתילן טרפתלט; TMP = ניקוב קרום הטימפני; YAG = גארנט אלומיניום איטריום; SHG = דור הרמוני שני. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: תוצאות ABR לאחר חשיפה ל-LISW. (A) תזוזות סף ABR משמעותיות נצפו בכל הקבוצות יום אחד לאחר החשיפה ל-LISW. שינויי הסף של ABR בקבוצות 2.25 ו-2.5 J/cm2 נותרו גבוהים באופן משמעותי עד חודש לאחר החשיפה ל-LISW. (B) משרעת ABR P1 יום אחד וחודש לאחר החשיפה ל-LISW ירדה משמעותית בכל הקבוצות. כוכביות מצביעות על הבדלים משמעותיים בין הקבוצות בהשוואה לערכי טרום החשיפה (**p < 0.001, ****p < 0.0001). קווי שגיאה מציינים את השגיאה הסטנדרטית של הממוצע. קיצורים: ABR = תגובת גזע המוח השמיעתית; LISW = גל הלם המושרה בלייזר; P1 = שיא 1; SPL = רמת לחץ קול. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: פתולוגיה של שבלול האוזן לאחר חשיפה ל-LISW. (A) תמונות פלואורסצנטיות קונפוקליות של איבר קורטי באזור 20 קילוהרץ המוכתמות ב-Myo7A (כחול), CtBP2 (אדום) ו-NF (ירוק) בעקבות חשיפה ל-LISW. (B) האחוזים הממוצעים של HCs ששרדו מוצגים בציטוקוכליאוגרמות (cytocochleograms). הערכה כמותית הראתה אובדן משמעותי של OHCs ב 2.5 J/cm2, אם כי לא היה הבדל משמעותי בהישרדות IHC בין הקבוצות. (C) שיעור ההישרדות של סרטים קדם-סינפטיים בהשוואה לערכים שלפני החשיפה ירד משמעותית בקבוצות 2.25 ו-2.5 J/cm2 . (D) פוטומיקרוגרפים מייצגים של SGNs בכל הקבוצות חודש לאחר החשיפה ל-LISW. שיעור ההישרדות של SGN ירד משמעותית ועמד על 2.5 J/cm2. כוכביות מצביעות על הבדלים משמעותיים בהשוואה לערכים לפני החשיפה (**p < 0.001, ****p < 0.0001). קווי שגיאה מציינים את השגיאה הסטנדרטית של הממוצע. פסי קנה מידה = 5 מיקרומטר (A), 100 מיקרומטר (D). קיצורים: LISW = גל הלם המושרה בלייזר; IHC = תא שיער פנימי; NF = נוירופילמנט; OHC = תא שיער חיצוני; SGN = נוירון גנגליון ספירלי. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4: מבני פני השטח של OHCs. (A) תמונות מייצגות של מיקרוסקופ אלקטרונים סורק של סטריאוסיליה של OHC באזורים של 16 kHz ו-24 kHz של איבר Corti חודש לאחר החשיפה ל-LISW. הפרעה סטריאוצילית נראית בתמונות מוגדלות של האזור הארוז בקבוצה 2.5 J/cm2 (24 kHz area). סרגל קנה מידה -= 2 מיקרומטר. (B) שיעור השיבוש הסטריאוסיליארי היה גבוה יותר עם עלייה בלחץ היתר של LISW. קיצורים: LISW = גל הלם המושרה בלייזר; OHC = תאי שיער חיצוניים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נועד לאמת מודל עכברי של נזק שבלול הנגרם על ידי פיצוץ באמצעות LISW. הממצאים שלנו הראו כי לאחר יישום LISW דרך העצם הרקתית, אוזן העכברים החשופה הראתה ירידה פתולוגית ופיזיולוגית עקבית בשבלול, אשר לוותה בעלייה בלחץ היתר של LISW. תוצאות אלה מצביעות על כך שמודל עכבר זה מתאים לשכפול פתולוגיות שבלול שונות על ידי התאמת פלט LISW. באופן ספציפי, מודל זה של עכבר שבלול לקוי המושרה על-ידי LISW יכול לשמש כמודל טוב לפגיעה בשבלול בגלל אופיו המבוקר, הניתן לשחזור והניתן לכימות, כמו גם יכולתו לשחזר ירידה פתופיזיולוגית של השבלול בתנאים מבוקרים.

המחקר הקודם שלנו השתמש במודל של חולדות וצפה בניוון שבלול הנגרם על ידי LISW, כולל עלייה של ספי שמיעה, אובדן סרטים סינפטיים ושיבוש צרור סטריאוצילארי14. מחקר אחר בדק ניוון שבלול פתופיזיולוגי בעקבות פגיעת הדף בעכברים באמצעות שני סוגי פיצוצים בעלי מאפיינים שונים: דומיננטי בתדר נמוך באמצעות צינור הדף ודומיננטי בתדר גבוה באמצעות LISW15. הם קבעו כי התדירות הדומיננטית של ספקטרום עוצמת ההדף הייתה הגורם העיקרי בקביעת אזור הנזק לשבלול, כפי שדווח קודם לכן15. למיטב ידיעתנו, זהו המחקר הראשון שמדגים את המתודולוגיה המפורטת של חשיפה לשבלול LISW ואת ניוון השבלול המושרה על ידי LISW התלוי באנרגיה ובתדר.

השתמשנו בחשיפה ל-LISW כדי לפגוע בשבלול דרך העצם הרקתית הפוסט-אוריקולרית ולא דרך תעלת השמע החיצונית כדי ליצור מודל שכלל אך ורק נזק לשבלול ללא כל TMP או הפסקת שרשרת אוסיקולרית. הממצאים שלנו מרמזים כי לקות השמיעה שהודגמה במחקר זה נבעה מהידרדרות המרכיבים התחושתי-עצביים במסלול השמיעתי. מחקרים אחרונים הצביעו על כך שה-TMP יכול לשמש כחיץ מפני נזק לשבלול על ידי ספיגת אנרגיית SW 2,20,21. מודל LISW זה לא היה מסוגל לגרום ל-TMP, אפילו עם LISW בעוצמה גבוהה, מכיוון שה-SW הוקרן ישירות לתוך האוזן הפנימית ולא דרך קרום הטימפני. לכן, כדי לנתח ליקוי שמיעה מעורב עם TMP ו- SNHL, פיצוץ בעוצמה גבוהה שנוצר באמצעות פיצוץ אמיתי או צינור הלם הוא אידיאלי. הבחירה של סוג הפיצוץ תלויה בשימוש הספציפי או במטרה של המחקר. לכן, מודל זה המבוסס על LISW לפגיעה בבעלי חיים שימושי להבהרת פתופיזיולוגיה שבלול טהורה הנגרמת על ידי פיצוץ ללא TMP, וכתוצאה מכך ליקוי שמיעה הולכתי. מנקודת מבט אחרת, הקרנת LISW דרשה שעה אחת לחיה, כולל הגדרת הציוד ובדיקת קרום הטימפאני לאחר הקרנה. לכן, אם מספר בעלי חיים נחשפו ל- LISW ברציפות תוך יום אחד, קשה למדוד הקרנת LISW ו- ABR באותו יום עם מנת הרדמה אחת. בגלל הסיכון למוות של בעלי חיים בעת הגדלת מינון ההרדמה, במחקר זה החלטנו לבצע מדידות ABR למחרת, ולא מיד לאחר ההקרנה באותו יום.

בפציעת הפיצוץ, השלב הראשוני נגרם על ידי הכוחות הפיזיים של הפיצוץ ושידור SW מהיר עם שינויים משמעותיים בצפיפות הרקמות, כגון צמתי רקמות-אוויר22. לכן, רוב פציעות השבלול הנגרמות כתוצאה מפיצוץ נחשבות לנבועות מ-SW במהלך השלב הראשוני6, מה שמצביע על כך שמחקרים על פציעות שבלול שנחשפו ל-SW חיוניים להבנת המנגנונים של תפקוד לקוי של השבלול כתוצאה מפיצוץ. יצירת SW באמצעות פולס לייזר באנרגיה גבוהה על חומר מוצק ידועה בשם LISW. מחקרים קודמים השתמשו ב- LISW כדי לפתח מודלים של בעלי חיים של פגיעות מוח וריאות טראומטיות הנגרמות כתוצאה מפיצוץ16,17. היתרונות של שימוש ב- LISW למחקרים הקשורים לפיצוץ כוללים את מודל הנזק החוזר תלוי עוצמת הלייזר שלו ומיקוד ספציפי של האיבר הפגוע מכיוון ש- LISW אינו משפיע על אזורים מחוץ לאזור היעד.

במחקר זה גילינו ש-LISW מעורר שינויים פתולוגיים ב-HCs של השבלול, ב-SGNs, בסינפסות שלהם ובצרור הסטריאוצילירי, בדומה לנזק שנגרם על-ידי פגיעת הדף אמיתית12. ניתן לייחס את הנזק שנגרם על ידי צורות שונות של עלבונות שבלול, כגון אובדן שמיעה כתוצאה מרעש, לשני גורמים בסיסיים: לחץ מכני ישיר ושיבוש מטבולי משני. אנו מציעים כי שיבוש של צרור סטריאוצילארי הוא הפתולוגיה העיקרית הנובעת מלחץ מכני ישיר של LISW. הפרעות סטריאוציליות הן פתולוגיות נפוצות הקשורות לתפקוד שמיעה לקוי הקשור לגיל ולרעש23,24. המנגנון המדויק העומד בבסיס השיבוש הסטריאוסיליארי הזה טרם הובהר. מחקר קודם גילה כי הפרעה סטריאוצילית נצפתה שבוע לאחר החשיפה לפיצוץ12. סיבה אפשרית לשינוי מורפולוגי ייחודי זה עשויה להיות ניתוק של חוליות קצה וקישורים צדדיים בין סטריאוסיליה מופרעת בשורה החיצונית ביותר לבין סטריאוסיליה בשורה האמצעית14. יתר על כן, שורשים של השורה החיצונית ביותר של סטריאוסיליה, המורכבים מאקטין וחלבוני צרור, כגון TRIOBP, ניזוקו גם הם מכנית15.

עלבונות שבלול בדרך כלל מובילים לשיבוש נוסף של תהליכים מטבוליים שיכולים להימשך ימים או אפילו חודשים19. בפרט, הסינפסות בשבלול, האחראיות על עיבוד קול שמיעתי, פגיעות מאוד לחשיפה לפיצוץ25. המודלים שלנו בבעלי חיים הראו כי הניוון של תפקוד ANs, כפי שהודגם על ידי הירידה באמפליטודות ABR P1, נגרם על ידי נזק שבלול הנגרם על ידי LISW. מנגנון אפשרי אחד של סינפטופתיה שבלול המושרה על ידי LISW הוא שחרור גלוטמט מוגזם על ידי IHCs, כגון אוטוטוקסיות גלוטמט26. חשיפה ל- LISW גורמת לקרום הבזילרי לרטוט באלימות, מה שגורם לשחרור יתר של גלוטמט מה- IHC, מה שגורם לניוון AN. LISW יכול לשכפל את סוג רעילות הגלוטמט שמשפיעה על השבלול, מה שמוביל לסינפטופתיה של השבלול ולירידה במספר הסינפסות מבלי לפגוע בHCs. מנגנון אפשרי נוסף הוא שחשיפה ל-LISW עלולה לפגוע בתאים תומכים בשבלול, מה שתורם להישרדות של ANFs בהתאם לשחרור נוירוטרופינים27. בנוסף, LISW עלול להיות מועבר ישירות ANFs ולגרום נזק עצבי. כתוצאה מכך, המודלים שלנו לנזקי שבלול הנגרמים על-ידי LISW עשויים להיות בעלי ערך הן למחקר פיצוץ והן לבחינה של צורות מגוונות של ניוון שבלול המערבות סינפטופתיה של השבלול.

יש צורך דחוף בהתערבויות טיפוליות לטיפול באובדן שמיעה הנגרם כתוצאה מפיצוץ, תוך הדגשת המשמעות של אסטרטגיות טיפול המתמקדות בסינפטופתיה של השבלול או הפרעה בצרור סטריאוצילרי ב- OHC. גישות אלה יכולות להיות מיושמות גם על סוגים אחרים של הפרעות שמיעה עם מנגנונים פתולוגיים דומים. סינפטופתיה של שבלול נצפתה במודל תפקוד השבלול שלנו, מה שמרמז על כך שהיא עשויה להיות מטרה טיפולית מבטיחה. ניתן להשתמש ב-LISW ליצירת מודלים של עכברים שמשכפלים במדויק את הפתופיזיולוגיה של השבלול שנגרמת על-ידי פיצוצים, וניתן להשתמש במודלים אלה כדי לחקור סוגים שונים של הפרעות בתפקוד השבלול.

למחקר שלנו יש כמה מגבלות. ראשית, מדדנו את ספי ה-ABR ב-12-24 קילוהרץ. על פי מחקר קודם, נזק לשבלול הנגרם על ידי LISW גורם לאובדן שמיעה בתדרים גבוהים אצל בעלי חיים בגלל המאפיינים של SW והפגיעות של בסיס השבלול. מחקרי ABR נוספים נחוצים באזורי תדר רחבים יותר (>24 קילוהרץ). שנית, במחקר זה ערכנו רק הערכה היסטולוגית של השבלול ולא הערכנו את מסלול השמיעה המרכזי. ליקוי שמיעה בפציעת הדף אינו מוגבל רק לשבלול, אלא הוא ליקוי מורכב של גזע המוח ומערכת השמע המרכזית. בעתיד, רצוי להעריך את מרכז השמיעה במודלים של בעלי חיים שנחשפו ל- LISW.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי שני מענקים מ- JSPS KAKENHI (מספרי מענק 21K09573 (K.M.) ו- 23K15901 (T.K.)).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
532 ננומטר Q-switched Nd:YAG לייזר QuantelBrilliant b
ABR תוכנת ניתוח שיאMass Eye and EarN/AEPL חבילת בדיקת תפקוד שבלול
דבק ריתוך שרף אקרילי Acrysunday ושות', בע"מN/A
מיקרוסקופיה פלואורסצנטית קונפוקליתLeicaTCS SP8
תרכובת קריוסקציהSakuraTissue-Tek O.C.T
CtBP2 נוגדןBD Transduction#612044
מראות רב שכבתיות דיאלקטריותSIGMAKOKI CO., LTDTFMHP-50C08-532M1-M3
אוסצילוסקופדיגיטליאוזניות TektronixDPO4104B
CUICDMG15008-03A
הידרופוןRP אקוסטיקה e.K.
FOPH2000 Image J תוכנה תוסףNIHקו מדידהhttps://myfiles.meei.harvard.edu/xythoswfs/webui/_xy-e693768_1-t_wC4oKeBD
מיקרוסקופ אורKeyence CorporationBZ-X700
Myosin 7A נוגדןProteus Biosciences#25– 6790 
נוירופילמנט נוגדןסיגמא#AB5539
עדשה פלנו-קמורהSIGMAKOKI CO., LTDSLSQ-30-200PM
פריזמה תוכנהGraphPad N/ Aver.8.2.1
מיקרוסקופ אלקטרונים סורקJEOL בע"מJSM-6340F
אנדוסקופ דיגיטלי קטןAVS ושות' בע"מAE-C1
ג'לי קוליהיטאצ'י אלוקה רפואיN/A
מנחת משתנהShowa Optronics Co.יורשזמין של Currenly: KYOCERA SOC Corporation, מעטפת מסיסה במים RWH-532HP II
 Dako#S1964

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Arun, P., et al. Blast exposure causes long-term degeneration of neuronal cytoskeletal elements in the cochlear nucleus: A potential mechanism for chronic auditory dysfunctions. Front Neurol. 12, 652190(2021).
  2. Kurioka, T., Mizutari, K., Satoh, Y., Shiotani, A. Correlation of blast-induced tympanic membrane perforation with peripheral cochlear synaptopathy. J Neurotrauma. 39 (13-14), 999-1009 (2022).
  3. Liberman, M. C., Epstein, M. J., Cleveland, S. S., Wang, H., Maison, S. F. Toward a differential diagnosis of hidden hearing loss in humans. PLoS One. 11 (9), e0162726(2016).
  4. Koizumi, Y., et al. Y-27632, a rock inhibitor, improved laser-induced shock wave (lisw)-induced cochlear synaptopathy in mice. Mol Brain. 14 (1), 105(2021).
  5. Parthasarathy, A., Kujawa, S. G. Synaptopathy in the aging cochlea: Characterizing early-neural deficits in auditory temporal envelope processing. J Neurosci. 38 (32), 7108-7119 (2018).
  6. Kurioka, T., et al. Characteristics of laser-induced shock wave injury to the inner ear of rats. J Biomed Opt. 19 (12), 125001(2014).
  7. Paik, C. B., Pei, M., Oghalai, J. S. Review of blast noise and the auditory system. Hear Res. 425, 108459(2022).
  8. Bryden, D. W., Tilghman, J. I., Hinds, S. R. Blast-related traumatic brain injury: Current concepts and research considerations. J Exp Neurosci. 13, 1179069519872213(2019).
  9. Ma, X., Aravind, A., Pfister, B. J., Chandra, N., Haorah, J. Animal models of traumatic brain injury and assessment of injury severity. Mol Neurobiol. 56 (8), 5332-5345 (2019).
  10. Shao, N., et al. Central and peripheral auditory abnormalities in chinchilla animal model of blast-injury. Hear Res. 407, 108273(2021).
  11. Ou, Y., et al. Traumatic brain injury induced by exposure to blast overpressure via ear canal. Neural Regen Res. 17 (1), 115-121 (2022).
  12. Cho, S. I., et al. Mechanisms of hearing loss after blast injury to the ear. PLoS One. 8 (7), e67618(2013).
  13. Kurioka, T., Mizutari, K., Satoh, Y., Kobayashi, Y., Shiotani, A. Blast-induced central auditory neurodegeneration affects tinnitus development regardless of peripheral cochlear damage. J Neurotrauma. , (2023).
  14. Niwa, K., et al. Pathophysiology of the inner ear after blast injury caused by laser-induced shock wave. Sci Rep. 6, 31754(2016).
  15. Kimura, E., et al. Effect of shock wave power spectrum on the inner ear pathophysiology in blast-induced hearing loss. Sci Rep. 11 (1), 14704(2021).
  16. Satoh, Y., et al. Pulmonary blast injury in mice: A novel model for studying blast injury in the laboratory using laser-induced stress waves. Lasers Surg Med. 42 (4), 313-318 (2010).
  17. Kawauchi, S., et al. Effects of isolated and combined exposure of the brain and lungs to a laser-induced shock wave(s) on physiological and neurological responses in rats. J Neurotrauma. 39 (21-22), 1533-1546 (2022).
  18. Cassinotti, L. R., et al. Cochlear neurotrophin-3 overexpression at mid-life prevents age-related inner hair cell synaptopathy and slows age-related hearing loss. Aging Cell. 21 (10), e13708(2022).
  19. Kujawa, S. G., Liberman, M. C. Adding insult to injury: Cochlear nerve degeneration after "temporary" noise-induced hearing loss. J Neurosci. 29 (45), 14077-14085 (2009).
  20. Hickman, T. T., Smalt, C., Bobrow, J., Quatieri, T., Liberman, M. C. Blast-induced cochlear synaptopathy in chinchillas. Sci Rep. 8 (1), 10740(2018).
  21. Jiang, S., Sanders, S., Gan, R. Z. Hearing protection and damage mitigation in chinchillas exposed to repeated low-intensity blasts. Hear Res. 429, 108703(2023).
  22. Nakagawa, A., et al. Mechanisms of primary blast-induced traumatic brain injury: Insights from shock-wave research. J Neurotrauma. 28 (6), 1101-1119 (2011).
  23. Wu, P. Z., Liberman, M. C. Age-related stereocilia pathology in the human cochlea. Hear Res. 422, 108551(2022).
  24. Kurabi, A., Keithley, E. M., Housley, G. D., Ryan, A. F., Wong, A. C. Cellular mechanisms of noise-induced hearing loss. Hear Res. 349, 129-137 (2017).
  25. Kim, J., Xia, A., Grillet, N., Applegate, B. E., Oghalai, J. S. Osmotic stabilization prevents cochlear synaptopathy after blast trauma. Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (21), E4853-E4860 (2018).
  26. Hu, N., Rutherford, M. A., Green, S. H. Protection of cochlear synapses from noise-induced excitotoxic trauma by blockade of ca(2+)-permeable ampa receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (7), 3828-3838 (2020).
  27. Wan, G., Gomez-Casati, M. E., Gigliello, A. R., Liberman, M. C., Corfas, G. Neurotrophin-3 regulates ribbon synapse density in the cochlea and induces synapse regeneration after acoustic trauma. Elife. 3, e03564(2014).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים