מאמר שיטה

שיטה שונה לצנתור תוך-תאי בחולדות

DOI:

10.3791/66487

⸱

14 בפברואר 2025

 ,  ,  ,  , 
1Shanghai Key Laboratory of Anesthesiology and Brain Functional Modulation, Clinical Research Center for Anesthesiology and Perioperative Medicine, Translational Research Institute of Brain and Brain-Like Intelligence, Department of Anesthesiology and Perioperative Medicine, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 2Department of Anesthesiology, Women and Children's Hospital of Ningbo University, 3Department of Naval Diving Medicine, Naval Medical Center, Naval Medical University, 4Department of Diving and Hyperbaric Medicine, Naval Medical Center, Naval Medical University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים שיטה מותאמת לצנתור תוך-תאי בחולדות המייצגת גישה פשוטה, נוחה ואמינה למתן תרופות תוך-תקליות חוזרות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

צנתור תוך-תאי יושם באופן נרחב בניסויים בבעלי חיים, במיוחד אלה על כאב נוירופתי. עם זאת, לשיטות המסורתיות עדיין יש מספר מגבלות. למרות שכמה חוקרים ניסו לשפר את השיטות המסורתיות, עדיין יש לשנות את השיטות הזמינות. כאן אנו מציגים שיטה שונה לצנתור תוך-תאי בחולדות.

שיטה זו משתמשת בחוט נירוסטה באורך 20 ס"מ (קוטר 0.2 מ"מ), צינור PE10 מפלסטיק באורך 15 ס"מ, מכסה איטום מתוצרת עצמית ופס אנטי-אלרגי 0.3 ס"מ × 0.5 ס"מ. לשיטה המותאמת שלנו לצנתור תוך-תאי יש מספר יתרונות. ראשית, החדרת חוט נירוסטה לצינור PE10 מגבירה את גמישות הצינור, משפרת את אחוזי ההצלחה של צנתור תוך-תאי, מפחיתה את כמות השטח הנדרשת לניתוח וממזערת את הנזק לרקמות סביב עמוד השדרה המותני. שנית, אורך צינור PE10 נקבע לפני הניתוח, וזמן השהייה של הצנתר יכול להיות ארוך יותר משבוע. שלישית, צינור PE10 מקובע על ידי תפר הספרה 8, 4 פעמים, אשר מונע תנועת צינור ונסיגה כאשר החיה זזה. רביעית, כובע איטום מתוצרת עצמית משמש לאיטום צינור PE10, אשר לא רק מונע דליפת נוזל מוחי שדרתי, אלא גם מפחית את הצורך בחיתוך חוזר של צינור PE10. לבסוף, הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 קשור ברצועה, המונעת נסיגת צינור כאשר החיה זזה.

שיטה זו יכולה להגדיל את שיעור הצלחת הצנתור בחולדות, שכן כ-80% מצינורות PE10 נשארו במקומם גם 28 ימים לאחר הניתוח. לפיכך, שיטה שונה זו עשויה לייצג גישה פשוטה, נוחה ואמינה למתן תרופות אינטרתיקליות חוזרות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

צנתור תוך-תאי (ידוע גם בשם צנתור תת-עכבישי) בחולדות היא שיטה הכוללת החדרת קטטר לחלל התת עכבישי דרך החלל הבין חולייתי1. תרופות מוזרקות ישירות לחלל התת עכבישי דרך הצנתר, מה שעוזר לחוקרים לחקור את ההשפעות של תרופות על חוט השדרה מבלי לקחת בחשבון את ההשפעות של תרופות החודרות את מחסום הדם-מוח 2,3. יתר על כן, נוזל מוחי שדרתי יכול להיאסף לאחר צנתור intrathecal כדי לחקור את microenvironment של מערכת העצבים המרכזית 4,5. השיטה הנהוגה כיום לצנתור תוך-תאי הוקמה לראשונה על ידי יקש ורודי6 בשנת 1976, ומאז היא מיושמת באופן נרחב בניסויים בבעלי חיים בתחומי מדעי המוח, הרדמה ושיכוך כאבים, ויסות לב וכלי דם בתיווך חוט השדרה, ובמיוחד כאב נוירופתי 2,7. עם זאת, לשיטה זו עדיין יש מספר מגבלות, כגון שכיחות גבוהה של נזק לחוט השדרה, דימום תת-עכבישי, תפקוד תחושתי ומוטורי לאחר הניתוח, תמותה גבוהה לאחר הניתוח וסיכון גבוה לפגיעה נוירולוגית 4,5,8,9,10 . בניסיון להתגבר על מגבלות אלה, הוצע צנתור של החלל התת עכבישי דרך מרווחים מותניים על ידי Størkson et al. בשנת 199611, ודווח על שיעור הצלחה גבוה יותר לאחר הניתוח. יש לציין כי קיבוע של צנתר פנימי הוא עדיין אתגר בשיטה זו, ונסיגת צנתר נפוצה עקב תנועת בעלי חיים, מה שהופך את מתן התרופות התוך-תאיות ללא נוח.

בשל המגבלות הנ"ל, חלק מהחוקרים 12,13,14,15 ניסו לשפר את כלי הניקוב, את שיטות הצנתור ואת שיטות קיבוע הצנתר, אך עדיין יש לשנות את השיטות הקיימות בשל הקושי לכמת את קוטר החרוזים בהם נעשה שימוש, הצורך בנקבים חוזרים ואורכו הקצר של הצנתר, וכו'.11

על פי הגישה המותנית לצנתור תוך-תאי1 ושיטת סלדינגר לצנתור ורידים מרכזי,16 פיתחנו שיטה לצנתור תוך-תאי בחולדות המשתמשת בחוט נירוסטה, כובע איטום מתוצרת עצמית ורצועה אנטי-אלרגית כדי לפשט את השיטה הקיימת. באמצעות שיטה זו, ניתן להחדיר את הצנתר בקלות לחלל התת עכבישי ולקבע אותו ביציבות על גב החולדה, ולהימנע מהצורך בנקבים חוזרים למתן תרופות תוך תאיות חוזרות.

בזאת, אנו מציגים שיטה שונה שעשויה לשפר את שיעור ההצלחה של צנתור תוך-תאי בחולדות ומייצגת גישה פשוטה, נוחה ואמינה למתן תוך-תאי חוזר של תרופות.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הצנתור התוך-תאי בוצע בהתאם קפדנית להמלצות בהנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המכונים הלאומיים לבריאות, והפרוטוקול אושר על ידי ועדת האתיקה של חיות ניסוי, סין (No. TJBH15523201). בניסוי נעשה שימוש בחולדות ספראג-דולי (SD) זכרים. ננקטה זהירות כדי למזער את הכאב ואי הנוחות של בעלי החיים.

1. הכנת חומרים ומכשירים

הערה: הכנת חומרים ומכשירים חשובה מאוד לצנתור תוך-תאי מוצלח.

  1. הכינו צינור PE10 באורך 15 ס"מ (האורך נקבע בהתאם למרחק בין ראש החולדה לקצה הזנב), הכניסו חוט נירוסטה באורך 20 ס"מ (קוטר 0.2 מ"מ) עם שני קצוות מלוטשים לצינור PE10 כתמיכה, וסמנו את הצינור 2 ס"מ מקצה אחד כדי לציין את עומק ההחדרה (כפי שמסומן בצלבים שחורים באיור 1A, ב).
  2. חתכו את הקצה החד של מחט 22G ואטמו את הקצה הדיסטלי (איור 1C).
  3. חותכים צנתר אפידורלי (בקוטר חיצוני של 1.0 מ"מ) למקטעים של 1 ס"מ. לאחר מכן, הכניסו שבר למחט 22G ללא קצה חד (איור 1D), ואטמו את הקצה הדיסטלי של השבר בעזרת זוג מלקחיים ישרים מחוממים. המכשיר הזה נקרא מכסה איטום צינור (איור 1E).
  4. הכינו רצועה אנטי-אלרגית בגודל 0.3 ס"מ × 0.5 ס"מ על-ידי חיתוך סרט משי (1.25 ס"מ × 9.1 מ') עם זוג מספריים (איור 1F).

2. הכנה לניתוח

  1. הכינו את המכשירים לצנתור תוך תאי על ידי עיקורם לפני הניתוח. המכשירים המשמשים לניתוח הם מלקחיים שיניים, מספריים, מכשיר gavage, ידית אזמל #10 להבים. (איור 2).
  2. יש לטבול את צינור PE10 וחוט ההנחיה באתנול 75% לצורך עיקור למשך כשעתיים.

3. ניתוח

  1. מרדימים את החולדה עם איזופלורן 3% בקצב זרימה של 3 ליטר/דקה.
  2. הניחו את החולדה על שולחן הניתוחים והתבוננו ברפלקס הנסיגה בעת צביטת הכף האחורית במלקחיים. היעדר תנועת כפות אחוריות בתגובה לגירוי אישר הרדמה מוצלחת. מתן שיכוך כאבים הולם על ידי הזרקה תוך שרירית של 1 מ"ג / ק"ג meloxicam לפני צנתור intrathecal.
  3. הסר שיער מאזור עמוד השדרה המותני של הגב והאזור שבין שתי אוזניים באמצעות מכונת גילוח.
  4. הניחו צינור צנטריפוגה (בקוטר 3 ס"מ) מתחת לבטנה של החולדה בצומת המותניים-ירך כדי להגביר את הכיפוף בעמוד השדרה המותני, ולתת יותר מקום למחט ולצנתר לעבור דרכו.
  5. לעקר את אתרי הניתוח (האזור מעל אזור עמוד השדרה המותני והאזור בין שתי אוזניים) עם תמיסת פובידון-יוד ולאחר מכן עם תמיסת אתנול שלוש פעמים. מכסים את החולדה בחבישה אספטית, וחושפים את אתרי הניתוח. לאחר מכן שטפו את צינור PE10 ואת חוט ההנחיה במי מלח רגילים לפני הניתוח.
    הערה: הזנב לא היה מכוסה כך שניתן היה להבחין בתנועת הזנב במהלך צנתור תוך-תיקלי.
  6. קבע את מיקום החלל הבין חולייתי בין L5 ו- L6 על ידי איתור התהליך הספינוסי של L6 בנקודת האמצע בין הפסגות האיליאק הדו-צדדיות השמאלית והימנית. תקן את העור עם האגודל השמאלי והאצבע השמאלית המורה של המפעיל, ולאחר מכן בצע חתך קו אמצע באורך 3-4 ס"מ ממש מעל התהליך הספינוסי בין L4 ו- S1.
  7. להפריד בבוטות את הרקמות התת עוריות עם זוג מספריים. יש לאתר שוב את החלל הבין חולייתי שבין L5 ל-L6 ולבצע חתך קטן (0.3-0.5 ס"מ) משני צידי התהליכים הגביים L5 ו-L6.
  8. הדקו והרימו את התהליך הגבי L5 בעזרת זוג מלקחיים בעלי שיניים כדי להרחיב את החלל הבין חולייתי. לאחר מכן, הפרידו בבוטות את השרירים סביב גוף החוליה בעזרת זוג מספריים עד שהחלק העליון של התהליך הגבי L6 נחשף לחלוטין.
    הערה: יש להימנע מהסרה של כל חלק בגוף החוליה ובשרירים, במטרה למזער את הנזק לרקמות הסובבות.
  9. כאשר מרימים את התהליך הגבי L5 בעזרת זוג מלקחיים בעלי שיניים ומרחיבים את החלל הבין חולייתי עם זוג נוסף של מלקחיים, מנקים את החלל הבין חולייתי L5-6 בעזרת כדור צמר גפן עד שאזור ה-V ההפוך נחשף לחלוטין.
  10. נקבו את עמוד השדרה עם מחט 23 G באזור "V" ההפוך ממש מתחת לחלק העליון של התהליך הגבי L6.
    הערה: נצפתה תנועת זנב, ו / או נוזל שקוף חסר צבע זורם החוצה מהחלל התת עכבישי, המציין נקב מוצלח לתוך החלל התת עכבישי.
  11. הכנס בזהירות את צינור PE10 המכיל חוט נירוסטה לתעלת עמוד השדרה באתר הניקוב, כשהוא מוטה 30° לכיוון הזנב. כוונן את זווית ההחדרה עד שניתן יהיה להחדיר בהצלחה את צינור PE10 ללא התנגדות (במהלך תהליך זה נצפתה תנועת זנב).
  12. כאשר האזור המסומן של צינור PE10 מגיע לשריר האחורי, הצנתור מופסק.
  13. הסר באיטיות את חוט הנירוסטה מצינור PE10. ניתן להבחין בתנועת זנב.
    הערה: ניתן להבחין בתנועת זנב, ולאחר הסרת החוט, נוזל שקוף (או נוזל אדום בהיר) עשוי לזרום מתוך הצינור.
  14. לאחר מכן, חבר את צינור PE10 למזרק 1 מ"ל, שדרכו מוזרק 20 μL של מלח רגיל. לאחר הסרת המזרק, מי מלח יזרום ברציפות מתוך צינור PE10, מה שמעיד על כך שהוא הוכנס בהצלחה לחלל התת עכבישי.
  15. ברגע שצינור PE10 מאושר כבלתי חסום, תפרו את השרירים בצד אחד של גוף החוליה בתפר 4-0 ובצעו קשר. לאחר מכן, קשרו את התפר סביב צינור PE10 וצרו קשר נוסף. אין לחתוך את התפר; לתפור את השרירים בצד השני; קשרו שוב את התפר לצינור PE10, בצעו קשר שלישי וחתכו את התפר.
    הערה: תהליך זה מתקן צינור PE10 עם תפר איור 8 כדי להפחית את האפשרות של תזוזה ונסיגה של הצינור.
  16. בצע חתך באורך 0.5 ס"מ 1 ס"מ מתחת לנקודת האמצע בין האוזניים. מפרידים בבוטות את הרקמות התת עוריות בעזרת מספריים, ומחדירים צינור מתכת לכיוון הזנב עד שהקצה נראה בחתך המותני.
  17. הכנס את הקצה הדיסטלי של צינור PE10 לתוך צינור ה-gavage עד שצינור PE10 יוצא מהקצה השני של צינור ה-gavage; ואז למשוך בעדינות את gavage.
  18. כאשר צינור PE10 מאושר שוב כבלתי חסום, תפרו את השרירים הנותרים סביב החתך המותני בתפר 4-0, קשרו את התפר סביב צינור PE10 ובצעו קשר נוסף כדי לתקן שוב את צינור PE10.
  19. תפרו את העור, תוך הימנעות מנזק לצינור PE10. לאחר מכן, תפרו את עור הצוואר בתפר 4-0, קשרו את התפר סביב צינור PE10 ובצעו קשר כדי לתקן את צינור PE10.
  20. כאשר צינור PE10 מאושר שוב כבלתי חסום, אטם את הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 עם מכסה איטום.
  21. יבש את צינור PE10 עם חתיכת רקמה ולאחר מכן קשר את הרצועה האנטי-אלרגית סביב צינור PE10 מספר פעמים כדי למנוע נסיגה של צינור PE10 במהלך תנועת חולדות.

4. ניסוי אימות לידוקאין

  1. לאחר הניתוח, יש להחזיר את החולדה לכלוב שלה (אחד בכל כלוב) ולהשגיח עליה מקרוב במהלך ההתאוששות מההרדמה עד שהחולדה מגיעה להכרה.
  2. לאחר שהחולדה ערה לחלוטין, הסירו את מכסה האיטום והזריקו 20 מיקרוליטר של 2% לידוקאין לצינורית PE10 בקצב של 0.02 מ"ל/שנייה באמצעות מזרק המילטון, ולאחר מכן הזרקה של 10 מיקרוליטר של מי מלח רגילים.
  3. אטמו את צינור PE10 עם מכסה האיטום.
  4. הניחו את החולדה על שולחן והתבוננו היטב. נוכחות של שיתוק בגפיים האחוריות לאחר הזרקה תוך-תאית של לידוקאין (מצינור PE10) מעידה על צנתור מוצלח (איור 3). שיתוק גפיים אחוריות נמשך בדרך כלל כ -30 דקות10.
    הערה: אפשרו לחולדה להתאושש במשך 5-7 ימים לפני הניסויים הבאים.
  5. עקוב מקרוב אחר החולדה במהלך תקופת ההחלמה עד להחלמה מלאה של תפקוד הגפיים.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לצורך הזרקה תוך-תאית, הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 נחתך, וצינור PE10 נאטם באמצעות מכסה איטום בין שתי זריקות סמים. במחקר הפיילוט שלנו, שיעור ההצלחה של צנתור תוך-תאי היה כ-95% (19 מתוך 20 חולדות); ההצלחה התבטאה בתנועת זנב ו/או שחרור נוזל שקוף חסר צבע במהלך ההליך. כ-85% מהצינורות נותרו במקומם 7 ימים לאחר הניתוח, וכ-80% נותרו במקומם 28 ימים לאחר הניתוח. החולדות התאוששו זמן קצר לאחר הניתוח, ולא נצפו סיבוכים בתוך 7 ימים לאחר הניתוח. התנועה היומית הייתה תקינה, ולא נצפתה חריגה התנהגותית. תוצאות אלה מצביעות על כך שהשיטה שלנו עדיפה על אלה שדווחו בעבר מבחינת שיעור ההצלחה ושיעור המגורים הארוכים.

שיתוק מלא של הגפיים התחתונות עם הזרקת לידוקאין באמצעות צנתרים מעיד על צנתור תוך-תאי מוצלח15. שיעור ההצלחה של צנתור תוך-תאי מחושב על ידי חלוקת מספר החולדות הכולל במספר החולדות עם צנתור מוצלח. בשיטה המתוקנת שלנו, שיעור ההצלחה היה 95%, שהיה גדול יותר מהשיעור שהושג בשיטה שדווחה על ידי Hou et al. (88%)15. זה מוצג באיור 4.

הצינור התוך-תאי נוטר ב-2, 5 ו-7 ימים לאחר הצנתור התוך-תאי ושיעור הצנתרים המוצלחים חושב כמספר החולדות עם צנתר מגורים מוצלח / מספר כולל של חולדות × 100%. לאחר 2, 5 ו-7 ימים לאחר הצנתור התוך-תקלי, שיעור הצנתרים המוצלחים היה 94%, 81% ו-65%, בהתאמה, במחקר של StØrkson et al.11. שיעור הצנתרים המוצלחים לאחר 2, 5 ו-7 ימים לאחר הצנתור התוך-תאי היה 95%, 90% ו-85%, בהתאמה, בטכניקה שלנו (איור 5).

figure-results-1
איור 1. חומרים ומכשירים המשמשים לצנתור תוך-תאי. (A) הוכן צינור PE10 באורך 15 ס"מ, והצינור סומן 2 ס"מ מקצה אחד כדי לציין את עומק ההחדרה. (B) חוט נירוסטה באורך 20 ס"מ עם שני קצוות מלוטשים הוכנס לצינור PE10 כתמיכה. (C) הקצה החד של מחט 22G נחתך בזוג מספריים, והקצה הדיסטלי נחתם בזוג מלקחיים. (D) צנתר אפידורלי (בקוטר חיצוני של 1.0 מ"מ) נחתך למקטעים בקוטר 1 ס"מ, שהוחדרו לאחר מכן למחט 22G ללא קצה חד. (ה) הקצה הדיסטלי של הצנתר האפידורלי נאטם בזוג מלקחיים ישרים מחוממים; מכשיר זה נקרא מכסה איטום הצינור. (F) רצועה אנטי-אלרגית בקוטר 0.3 ס"מ ×-0.5 ס"מ (סרט משי, 1.25 ס"מ ×-9.1 מ') הוכנה עם זוג מספריים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2. הכנת מכשירים לצנתור תוך-תקלי. מכשירים (כגון מלקחיים שיניים, מספריים, מכשיר gavage, ידית אזמל, #10 להבים) עוקרו עם אתנול במשך כ 2 שעות ולאחר מכן שטף עם מלוחים רגילים כ 30 דקות לפני הניתוח. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3. תוצאות ניסוי תיקוף הלידוקאין לאחר צנתור תוך-תקלי. לאחר הזרקה תוך-תאית של 20 μL של 2% לידוקאין ואחריה הזרקה של 10 μL של מי מלח רגילים, החולדה הייתה משותקת זמנית: שיתוק הגפיים התחתונות התרחש תוך 30 שניות ונעלם כעבור 30 דקות, מה שמעיד על צנתור תוך-תאי מוצלח. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4. השוואת שיעור הצנתור המוצלח בין השיטה המותאמת שלנו לשיטה שדווחה בעבר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-5
איור 5. השוואה של שיעור הצנתרים הארוכים בין השיטה המותאמת שלנו לבין שיטה שדווחה בעבר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

　שיטה ששונתהשיטה קודמתהיתרונות של שיטה שונהחסרונות השיטה הקודמת
שיטה מנחה להחדרהחוט נירוסטהמדריך-קנולה (20 גרם 0.9× 38 מ"מ)מגביר את גמישות הצינור,קשה להרגיש את ההתנגדות, מה שמגדיל את הקושי בפעולה
משפר את אחוזי ההצלחה של צנתור תוך-תאינזק לרקמות עקב ניקוב חוזר
מפחית את הדרישה למרחב אופרטיביקצה אחד של הצינור נמתח עד פי 1.5 מהאורך המקורי, מה שהופך את הקוטר של שני הקצוות לשונה
ממזער את הנזק לרקמות סביב עמוד השדרה המותנירגישות לדליפת נוזל מוחי שדרתי מכיוון שהקוטר של קנולה מדריך 20G הוא פי 2 או יותר מזה של צינור PE10 מתוח
אורך צינור PE1015 ס"מ14 או 28 ס"מקל לקבוע את אורך צינור PE10 ללא קשר למשך השהייה של הצנתרמשך השהייה בצנתר קצר יותר עבור צינור PE10 קצר יותר; רגישות לנפילה מהגוף עבור צינור PE10 ארוך
שיטת קיבועתפר "8" ו 4 פעמים1 או 2 חרוזיםמונע את תנועת הצינור ונסיגה במהלך פעילות בעלי החייםהבדל בקוטר הצינור בשני קצותיו, ורגישות לתזוזה של צינור PE10 במהלך ייצור החרוזים
שיטה לאיטום צינורכובע בייצור עצמילאמונע דליפה של נוזל מוחי שדרתי דרישה לחיתוך חוזר של צינור PE10
מונע חיתוך חוזר ונשנה של צינור PE10
שיטה למניעת פסילהלהקה אנטי אלרגית1 או 2 חרוזיםמונע מהצינור לסגת במהלך פעילות בעלי החיים רגישות לפסילה

טבלה 1. יתרונות וחסרונות של השיטה ששונתה ושיטה שדווחה בעבר.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ישנם מספר טיפים קריטיים עבור שיטה זו שונה כדי למקסם את שיעור ההצלחה של צנתור intrathecal. ראשית, יש להכין חוט נירוסטה באורך 20 ס"מ עם שני קצוות מלוטשים ולהחדיר אותו לצינור PE10 כתמיכה. שנית, על המפעיל לחשוף לחלוטין את אזור ה-V ההפוך לאחר ניקוי החלל הבין-חולייתי L5-6 באמצעות כדור צמר גפן, ולהרחיב את החלל הבין-חולייתי באמצעות מלקחיים נוספים תוך הרמת התהליך הגבי L5 באמצעות מלקחיים בעלי שיניים. שלישית, צינור PE10 צריך להיות קבוע עם תפר איור 8 ארבע פעמים. לבסוף, יש לקשור את הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 ברצועה ולאטום אותו במכסה מתוצרת עצמית.

אחוזי ההצלחה של הצנתור התוך-תאי והפגיעה ברקמות סביב גופי החוליות עשויים להשפיע באופן משמעותי על אמינות תוצאות הניסוי15. לפיכך, שיפור אחוזי ההצלחה ככל האפשר והפחתת הנזק לרקמות הסובבות אותם חיוניים לביסוס מודלים של בעלי חיים וניסויים רלוונטיים1. בשיטה שונה זו, חוט נירוסטה מוכנס לתוך צינור PE10 לצורך הדרכה, אשר מגביר את גמישות הצינור ומשפר את שיעור ההצלחה של צנתור intrathecal. יתר על כן, כמות השטח הדרוש לפעולה מצטמצמת בשיטה שונה זו, והנזק לרקמות סביב עמוד השדרה המותני ממוזער מכיוון שהרקמות הסובבות מופרדות בצורה בוטה, אך לא נחתכות. לשם השוואה, בשיטה11 שדווחה בעבר, משתמשים בצינורית מדריך 20 G כדי להפחית את ההתנגדות במהלך הניקוב, ולעתים קרובות יש צורך בניקור חוזר, שעלול לפגוע ברקמות. בנוסף, בשיטה שדווחה בעבר, כדי להקטין את הקוטר של צינור PE10, הוא שקוע במים חמים (60 ° C) ולאחר מכן נמתח בקצה אחד לכ -150% מהאורך המקורי, מה שעשוי שלא להבטיח את עקביות קוטר הצינור ולכן עלול לגרום לדליפה של נוזל מוחי שדרתי מכיוון שהקוטר של צינורית מדריך 20G גדול בערך פי שניים או שווה לזה של צינור PE10 המתוח. יתר על כן, בשיטה שלנו, תפקוד מותני נשמר במידה הרבה ביותר, אשר מונע את ההשפעה של הניתוח על התוצאות של ניסויים הבאים. תוצאות אלה עולות בקנה אחד עם אלה שדווחו על ידי Xu et al2.

בשיטה11 שדווחה בעבר, אורך צינור PE10 הוא כ-14 ס"מ אם הצינור מקובע באתר סביב אתר הניקוב, אך זמן השהייה של הצנתר הוא לעתים קרובות קצר יותר מ-7 ימים בתנאים אלה (או שהצינור מוסר מהגוף על ידי החולדה). אורך צינור PE10 הוא כ-28 ס"מ אם הצינור קבוע בחלק האחורי של הצוואר, שהוא ארוך משמעותית מצינור PE10 המשמש בשיטה שלנו (15 ס"מ). למרות שחרוזים נוצרו בעקבות הפרוטוקול שדווח על ידי Størkson et al.11, כמה צינורות הוסרו מהגוף, ורק כ -65% מהצינורות עדיין היו קבועים במקומם 7 ימים לאחר הניתוח, מה שהשפיע באופן משמעותי על תוצאות הניסויים הבאים. בשיטה שלנו, צינור PE10 מקובע בתפר הספרה 8 4 פעמים, והקצה החוץ-גופי של צינור PE10 קשור ברצועה כדי להפחית את האפשרות לתזוזה ונסיגה. בהתאם לשיטתנו, כ-85% מהצינורות נשארו במקומם לאחר 7 ימים לאחר הניתוח, וכ-80% מהצינורות נשארו במקומם 28 ימים לאחר הניתוח.

בשיטה11 שדווחה בעבר, יש לחתוך את הקצה החוץ-גופי של הצנתר התוך-תאי עבור כל מתן תרופה. עם זאת, מתן intrathecal חוזר ונשנה של תרופות עשוי לקצר את זמן השהייה קטטר, מה שהופך את הממשל intrathecal של תרופות לא נוח. לכן, בשיטה שלנו, כובע מתוצרת עצמית משמש לאיטום צינור PE10, אשר מעוקר עם אתנול פעם ביום. זה לא רק מונע דליפה של נוזל השדרה, אלא גם מפחית את הצורך חיתוך חוזר ונשנה של צינור PE10 לניהול intrathecal של תרופות, הבטחת משלוח יעיל של התרופות.

היתרונות והחסרונות של השיטה ששונתה והשיטה שדווחה בעבר מסוכמים בטבלה 1. ראשית, עבור השיטה המתוקנת, השימוש בחוט נירוסטה בצינור PE10 מגביר את גמישות הצינור ומשפר את שיעור ההצלחה של צנתור intrathecal, כמות השטח הדרוש לניתוח מצטמצם, ואת הנזק לרקמות סביב עמוד השדרה המותני ממוזער. בשיטה שדווחה בעבר, צינורית מדריך 20G מוחדרת עד שמרגישים התנגדות, ולעתים קרובות יש צורך בניקוב חוזר, מה שעלול לגרום נזק לרקמות. בנוסף, צינור PE10 בקצה אחד נמתח עד שאורכו מגיע לכ-150% מהאורך המקורי, מה שעלול לגרום לדליפת נוזל מוחי שדרתי מכיוון שקוטר צינורית מדריך 20G גדול פי 2 או שווה לזה של צינור PE10 מתוח. שנית, בשיטה המתוקנת, אורך צינור PE10 נקבע לפני הניתוח, וזמן השהייה של הצנתר יכול להיות ארוך יותר משבוע. בשיטה שדווחה בעבר, אורך צינור PE10 הוא כ -14 ס"מ אם הוא קבוע באתר הניקוב, אך זמן השהייה של הצנתר הוא לעתים קרובות קצר יותר מ -7 ימים מכיוון שהצינור רגיש לשליפה מהגוף על ידי החולדה; אורך צינור PE10 הוא כ-28 ס"מ אם הוא קבוע בחלק האחורי של הצוואר, שהוא ארוך משמעותית מאורך הצינור המשמש בשיטה שלנו. שלישית, בשיטה המתוקנת, צינור PE10 קבוע עם תפר איור 8 4 פעמים כדי למנוע תזוזה ונסיגה של הצינור; פקק מתוצרת עצמית משמש לאיטום צינור PE10, אשר לא רק מונע דליפה של נוזל מוחי שדרתי אלא גם מונע את הצורך בחיתוך חוזר של צינור PE10. בשיטה שדווחה בעבר, קשה להשיג חרוזים בקוטר עקבי, תזוזה של צינור PE10 נפוצה כאשר חרוזים נוצרים, וחיתוך חוזר ונשנה של צינור PE10 נדרש לעתים קרובות. לבסוף, בשיטה שהשתנתה, הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 קשור ברצועה, המונעת מהצינור לסגת במהלך התנועה. עם זאת, בשיטה הקודמת, החרוזים אינם יכולים למנוע באופן אמין נסיגת צינור PE10 מכיוון שקשה להשיג חרוזים בקוטר עקבי.

בסך הכל, לשיטה מותאמת זו לצנתור תוך-תאי יש את היתרונות הבאים. ראשית, השימוש בחוט נירוסטה בצינור PE10 מגביר את גמישות הצינור ומשפר את אחוזי ההצלחה של הצנתור התוך-תאי, מצטמצם השטח הדרוש לניתוח וממזער את הנזק לרקמות סביב עמוד השדרה המותני, מה שמשמר את תפקוד המותני ככל האפשר ומונע את השפעת הניתוח על תוצאות הניסויים הבאים. שנית, צינור PE10 מקובע בתפר הספרה 8 4 פעמים, המונע תנועת צינור ונסיגה במהלך התנועה. שלישית, מכסה איטום מתוצרת עצמית משמש לאיטום צינור PE10, אשר לא רק מונע דליפת נוזל מוחי שדרתי, אלא גם מונע את הצורך בחיתוך חוזר ונשנה של צינור PE10. חיתוך חוזר ונשנה של הצנתר עלול לקצר את הצנתר, מה שהופך את אספקת התרופות ללא נוחה. לבסוף, הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 קשור ברצועה אנטי-אלרגית, המונעת מהצינור לסגת במהלך התנועה.

עם זאת, ישנן מספר מגבלות בטכניקת צנתור תוך-תאי שונה זו. ראשית, לאחר הניתוח, יש לשכן את החולדות בנפרד (אחת בכל כלוב) כדי למנוע נזק לקצה החוץ-גופי של צינור PE10. שנית, התאוששות במשך 5-7 ימים לאחר הזרקה intrathecal של לידוקאין נדרש לפני הניסויים הבאים.

לסיכום, שיטה מותאמת זו לצנתור תוך-תאי עשויה לשמש כלי שימושי למתן תוך-תאי חוזר ונשנה של תרופות ולהוות דרך פשוטה, נוחה ואמינה לקיצור משך הניסויים.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחברי כתב היד מצהירים כי אין ניגודי עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע (מס '81971042) ופרויקטי מומחי התמיכה המרכזיים של ועדת הבריאות המחוזית של שנחאי הונגקו (מס '. HKZK2020A06).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1 סמ"קJiangxi Hongda ציוד רפואי ושות', בע"מ1 סמ"ק
22 מד וזמנים; 1 "מחטיםJiangxi Hongda ציוד רפואי ושות', בע"מ22G
23 מד וזמנים; 1 "מחטיםJiangxi Hongda ציוד רפואי ושות', בע"מ23G
25 μ L המילטון מזרקיםשנחאי Bolige ושות', בע"מ0.31 מ"מ 25 μ L 
4-O MERSILK לא נספג תפרETHICONSA83G
50 מ"ל צינורות צנטריפוגה קורנינג קוטר 3 ס"מ430820CORNING
קטטר אפידורלי ומחברHenan Tuoren Medical Device Co., Ltdסוג רגיל
Gavage מכשירשנחאי Bolige ושות', בע"מ8 #
PE-10 Mirco צינורות רפואייםBB31695-PE / 1סחורות מדעיות, ידית אזמל בע"מ
ולהביםג'יאנגסו Songxin ציוד רפואי ושות', בע"ממספריים 125 מ"מ
ג'יאנגסו Songxin ציוד רפואי ושות', בע"מ100 מ"מ
ושות', בע"מ0.2 מ"מ  וזמנים;   1 מ
'מלקחייםג'יאנגסו סונגשין ציוד רפואי ושות', בע"מ18 ס"מ
סרטURGO URGO1.25 ס"מ וזמנים; 9.1 מ'
מזרק #10 Sprague-Dawley (SD) חולדות שנחאי BK/KY ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ חוט נירוסטה זכר 0.2 מ"מ קוטר דונגגוואן Jiazhi מוצרי מתכת טכנולוגיה עם שיניים משי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kong, G., Huang, Z., Zhu, Q., Wan, Y. Comparison of two modified methods of intrathecal catheterization in rats. Exp Anim. 69 (2), 219-223 (2020).
  2. Xu, C. S., Sun, P., Lin, C. a new design puncture needle and a device of microcatheter protection for lumbar intrathecal catheterization in rats. Zhongguo Ying Yong Sheng Li Xue Za Zhi. 36 (3), 283-288 (2020).
  3. Yamamoto, G., et al. Neurosteroid dehydroepiandrosterone sulphate enhances pain transmission in rat spinal cord dorsal horn. Br J Anaesth. 123 (2), e215-e225 (2019).
  4. Mattioli, T. A., Sutak, M., Milne, B., Jhamandas, K., Cahill, C. M. Intrathecal catheterization influences tolerance to chronic morphine in rats. Anesth Analg. 114 (3), 690-693 (2012).
  5. Wang, B. C., Hillman, D. E., Li, D., Turndorf, H. Lumbar subarachnoid catheterization in rats. Pharmacol Biochem Behav. 38 (3), 685-688 (1991).
  6. Yaksh, T. L., Rudy, T. A. Chronic catheterization of the spinal subarachnoid space. Physiol Behav. 17 (6), 1031-1036 (1976).
  7. Martin, H., Kocher, L., Chery-Croze, S. Chronic lumbar intrathecal catheterization in the rat with reduced-length spinal compression. Physiol Behav. 33 (1), 159-161 (1984).
  8. Mazur, C., et al. Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat. J Neurosci Methods. 280, 36-46 (2017).
  9. Zhang, S. X., Huang, F., Gates, M., White, J., Holmberg, E. G. Extensive scarring induced by chronic intrathecal tubing augmented cord tissue damage and worsened functional recovery after rat spinal cord injury. J Neurosci Methods. 191 (2), 201-207 (2010).
  10. Ohara, P. T. Long-term intrathecal catheterization in the rat. J Neurosci Methods. 110 (1-2), 81-89 (2001).
  11. StØrkson, R. V., KjØrsvik, A., TjØlsen, A., Hole, K. Lumbar catheterization of the spinal subarachnoid space in the rat. J Neurosci Methods. 65 (2), 167-172 (1996).
  12. Poon, Y. Y., Chang, A. Y., Ko, S. F., Chan, S. H. An improved procedure for catheterization of the thoracic spinal subarachnoid space in the rat. Anesth Analg. 101 (1), table of contents 155-160 (2005).
  13. Xu, F., Li, T., Zhang, B. An improved method for protecting and fixing the lumbar catheters placed in the spinal subarachnoid space of rats. J Neurosci Methods. 183 (2), 114-118 (2009).
  14. Igawa, Y., Andersson, K. E., Post, C., Uvelius, B., Mattiasson, A. A rat model for investigation of spinal mechanisms in detrusor instability associated with infravesical outflow obstruction. Urol Res. 21 (4), 239-244 (1993).
  15. Hou, Y., et al. A modified procedure for lumbar intrathecal catheterization in rats. Neurol Res. 38 (8), 725-732 (2016).
  16. Farhadi, E., et al. Comparison of open and ultrasound-guided placement of central venous catheter in children weighing less than five kilograms; a randomized clinical trial. Acad Radiol. 30 (7), 1419-1425 (2023).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Modified Catheterization MethodRat NeurosurgeryNeuropathic Pain ModelPE10 TubeStainless Steel WireIntrathecal Drug DeliveryCatheter IndwellingFigure 8 SutureSpinal Canal Access

מאמרים קשורים