הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

חשיפת הזדמנויות טיפוליות עם מודלים אורגנואידים שמקורם בחולה מלנומה

2.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66509

⸱

6 בספטמבר 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת אורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה על ידי תרבית תרחיפים של תאים מנותקים מרקמות מלנומה טרייה. אורגנואידים אלה משחזרים בנאמנות גידולים ספציפיים למטופל במבחנה, ומציעים גישה חדשנית לחקר מנגנוני דיכוי החיסון של הגידול, בדיקות סקר לתרופות, מנגנוני עמידות לתרופות וגישות מעקב אחר סרטן.

תקציר

עם התפתחות האימונותרפיה, יש צורך מתמשך לפתח מודלים שיכולים לשחזר את המיקרו-סביבה של הגידול של גידולים מקומיים. בעוד מודלים מסורתיים דו-ממדיים ותלת ממדיים יכולים להציע תובנות לגבי התפתחות סרטן והתקדמותו, אלה חסרים היבטים מכריעים המעכבים חיקוי נאמן של גידולים מקומיים. מודל חלופי שזכה לתשומת לב רבה הוא אורגנואיד הנגזר מהמטופל. התפתחותם של אורגנואידים אלה משחזרת את התקשורת הבין-תאית המורכבת, המיקרו-סביבה של הגידול וההיסטוארכיטקטורה של גידולים. מאמר זה מתאר את הפרוטוקול להקמת מודלים אורגנואידים הנגזרים מחולה מלנומה (MPDO). כדי לאמת את המודלים האלה, הערכנו את הרכב תאי החיסון, כולל רמות הביטוי של סמני הפעלת תאי T, כדי לאשר את ההטרוגניות התאית של האורגנואידים. בנוסף, כדי לתאר את התועלת הפוטנציאלית של MPDOs בטיפולים תאיים, הערכנו את היכולות ציטוטוקסיות של טיפול באורגנואידים עם תאי T γδ. לסיכום, מודלי MPDO מציעים דרכים מבטיחות להבנת מורכבות הגידול, אימות אסטרטגיות טיפוליות וקידום טיפול מותאם אישית.

מבוא

מודלים קונבנציונליים של תרביות תאים דו-ממדיות הם כלים חיוניים בחקר הסרטן לחקר התקדמות הסרטן והטיפולבו 1. מודלים אלה לא רק מאפשרים תנאי ניסוי מבוקרים כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים והתאיים העומדים בבסיס התפתחות והתקדמות סרטן, אלא גם מספקים תוצאות ניסוי חסכוניות ומהירות יחסית. השימוש בהם, עם זאת, מוגבל בשל המגוון התאי המוגבל במיקרו-סביבה של הגידול (TME), אשר לא ניתן לשחזר בטבע קופלנרי של מודלים מונו-תרבותיים2. בנוסף, מודלים של תרביות תאים מציעים סביבה פשטנית מדי בהשוואה לגוף האדם3. לכן, כדי להבין טוב יותר את התקדמות הסרטן ולפתח טיפולים יעילים, חוקרים פנו למודלים חדשניים שמטרתם לשחזר את TME בטבע מקרוב. כתוצאה מכך, שמירה על נאמנות לגידולים מקומיים היא בעלת חשיבות עליונה במודלים אלה. בהתחשב באופי המורכב של הסרטן, כל סטייה משמעותית מהגידול המקורי עלולה להציג משתנים בלתי צפויים שעשויים לבלבל מסקנות משמעותיות לגבי התנהגות הגידול.

בעוד xenografts שמקורם בחולה (PDX) התפתחו כמערכת מודל המאפשרת מעקב אחר התקדמות הגידול in vivo, כמה מגבלות תוהות עד כמה הגידול המפותח משחזר את הביולוגיה האנושית של סרטן4. לדוגמה, מלנומה TME מכילה תאי חיסון חודרי גידול ותאי סטרומה. כאשר עוברים כקסנוגרפט, התאים הלא סרטניים מהחולה יאבדו בהדרגה, מה שיכול לבחור התאמות שונות מאלה שבגידולי החולה. בעוד שניתן למתן מגבלות אלה על ידי ביצוע מעברים מוגבלים של PDX in vivo, ההבדלים בין המינים עדיין יכולים להוות סיכון לשינויים גנטיים ב- PDX החורגים מזה של הגידול המקומי5. יתר על כן, מודלים PDX נקבעים בדרך כלל בעכברים מדוכאי חיסון כדי למנוע דחייה של רקמות אנושיות. זה מגביל את היכולת לחקור את תפקידה של מערכת החיסון המארחת בסרטן, במיוחד במחקרים אימונותרפיים6. אנו ואחרים השתלנו PDX בעכברים "אנושיים" 7,8. עם זאת, הקמת מודלים PDX בעכברים אנושיים היא גוזלת זמן ויקרה. זה יכול לקחת כמה חודשים עד שנים לפתח מודל PDX יחיד מדגימת הגידול של המטופל, ובכך להגביל את המהירות ואת קנה המידה של המחקר. למרות מגבלות אלה, מודלים של PDX הוכחו כמייצגים במדויק את הביולוגיה של TME, ולכן נעשה בהם שימוש נרחב לפיתוח טיפולים לסרטן, רפואה מותאמת אישית ואימונותרפיה, בין היתר9.

טכניקת תרבית תלת-ממדית חלופית שהתפתחה היא אורגנואיד הנגזר מהמטופל (PDO), שבו גידול של חולה שזה עתה נותח מתורבת כדי ליצור מודלים השומרים על הטרוגניות פנוטיפית, היסטוארכיטקטורה ותקשורת בין-תאית10. יכולתו להידמות מאוד לגידולים מקומיים הודגמה בעבר, כאשר אורגנואידים בתרבית מסרטן לא פולשני שרירי (NMIBC) וסרטן שלפוחית השתן פולשני שרירים (MIBC) הצליחו לשחזר היבטים מרכזיים של גידולי ההורים11. בשל הפוטנציאל והיתרונות שלהם על פני מודלים אחרים, PDOs מציעים מגוון רחב של יישומים מותאמים אישית שחסרים למודלים אחרים, כולל אך לא מוגבל למחקר ופיתוח של מעכבי בקרה חיסונית יחד עם טיפולים תאיים וממוקדים. לדוגמה, בעבר השתמשנו באורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה (MPDOs) כדי לחקור את יכולתם של לימפוציטים חודרי גידול (TILs) להתרחב באמצעות נוגדנים IL-2 ונוגדנים נגד PD1 (αPD-1). התוצאות הראו כי ה-TILs שהורחבו על ידי IL-2 ו-αPD-1 לא רק היו בעלי מספר גבוה יותר, אלא גם יכלו לחדור בהצלחה ל-MPDO ולהרוג תאי מלנומה ביעילות גבוהה יותר מאשר TILs שהורחבו בשיטות אחרות12. קבוצות אחרות הראו תוצאות דומות כאשר השימוש באנטי-PD-1 ו/או אנטי-PD-L1 מוביל לכך ש-TILs נשארים פונקציונליים ב-PDOs, מה שמוביל לאחר מכן להרג הגידול13. בנוסף, הקבוצה שלנו השתמשה גם ב-MPDO כדי להעריך את יכולת החדירה וההרג של תאי T γδ14. היישום של PDOs משתרע על פני מגוון רחב של תחומים, כולל הרחבת TIL, מחקרי ציטוטוקסיות וסינון מולקולות קטנות. כל היישומים הללו מדגישים את הפוטנציאל והשימושיות שמודל זה מעניק. ככזה, אנו מתארים את הפרוטוקול המפורט עבור התרבות של MPDOs.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

רקמות מלנומה אנושית התקבלו מחולים שקיבלו טיפול באוניברסיטת פנסילבניה באמצעות פרוטוקול איסוף רקמות (UPCC08607) שאושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של אוניברסיטת פנסילבניה. כל המטופלים חתמו על הסכמה מדעת. לאחר כריתה של רקמות המלנומה האנושית, רקמת הגידול ממוקמת בתווך הנשר השונה של דולבקו (DMEM) ונשמרת בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לעיבוד (תוך 6 שעות). אורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה (MPDOs) נגזרו מגידול טרי כפי שמודגם באיור 1.

1. בידוד תאים מרקמת המלנומה האנושית

  1. הכנות לפני תחילת ההליך
    הערה: ניתן להשתמש בשתי שיטות תרבית (מטריג'ל וג'ל קולגן) לתרבית רקמת מלנומה מנותקת:
    1. לשיטת מטריגל: הכינו תמיסת ציפוי של מטריצת קרום מרתף מופחתת גורם גדילה (GFR) על ידי דילול מטריצת קרום מרתף GFR עם מדיום תרבית אורגנואיד (ראה טבלה 1) ביחס של 1:2. הוסף כ 115 μL של תמיסה מופשרת לכל אחת מכמה בארות של צלחת 48 בארות ולהשאיר אותו להתמצק במשך 30 דקות ב 37 ° C באינקובטור לח.
    2. לשיטת ג'ל הקולגן: יש להוסיף 1 מ"ל של ג'ל קולגן (ראו טבלה 1) לתוספת קרום פנימי בקוטר 30 מ"מ. הניחו לג'ל להתמצק למשך 30 דקות בטמפרטורה של 37°C באינקובטור לח.
  2. הכינו את המדיום המותנה L-WRN15. התווך המותנה L-WRN מופק מקו תאים L-WRN שהונדס להפריש Wnt3a, R-spondin 3 ונוגין למדיום מותנה יחיד הנמצא בשימוש נרחב לתרבית תאים.
    1. הפשיר cryotube של תאי L-WRN באמבט מים 37 ° C. הוסף 5 מ"ל של תווך תא L (ראה טבלה 1) ואת תרחיף התא L-WRN לצינור חרוטי של 15 מ"ל, וצנטריפוגה ב 120 × גרם למשך 5 דקות ב- 4 ° C. שאפו את הסופרנטנט, וודאו ש~500 μL נשאר בתחתית כדי להשעות מחדש את גלולת התאים.
    2. מעבירים את גלולת התא בסופרנאטנט ל-30 מ"ל של תווך תא L על קרח ומוסיפים 150 מיקרוליטר של היגרומיצין (500 מיקרוגרם/מ"ל) ו-300 מיקרוליטר של G418 (500 מיקרוגרם/מ"ל). זרעו את התאים בצפיפות של 3 × 106 על בקבוק T-150 ודגרו ב 37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח עם 5% CO2 עד ~ 90% מפגש.
    3. ברגע שהתאים הם ~90% נפגשים, לפצל תאים לחמש צלוחיות T-150 על ידי שטיפה עם 20 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS), שאיפה ועיכול עם 3 מ"ל של תחליף טריפסין. לאחר 5 דקות, לנטרל עם 9 מ"ל של תווך תא L ואחריו צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 120 × גרם ב 4 ° C . כאשר ~100% נפגשים, פצלו את חמש צלוחיות T-150 ל-10 צלוחיות T-175 תלת-שכבתיות.
    4. לאחר המפגש, יש לשטוף תאים עם 2 x 50 מ"ל של PBS ולאחר מכן עם 25 מ"ל של מדיום כביסה (ראה טבלה 1).
    5. הוסף 75 מ"ל של מדיום תרבית ראשוני לכל בקבוק T-175 תלת שכבתי ודגור במשך 3 ימים ב 37 ° C באינקובטור לח עם 5% CO2 (ראה טבלה 1).
    6. לאחר 3 ימים, קצרו את התווך המותנה לחרוט של 50 מ"ל וסחררו ב 1,100 × גרם במשך 5 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. לאסוף את supernatant (מדיום מותנה), להבטיח כי 5 מ"ל נשאר מאחור.
    7. הוסף 75 מ"ל טרי של מדיום תרבית תאים ראשונית לכל בקבוק T-175 תלת שכבתי ודגר במשך 3 ימים נוספים כדי לאסוף תווך מותנה נוסף.
    8. למדיום המותנה שנאסף, הוסף נפח שווה של מדיום תרבית תאים ראשוני (50% נפח) וסנן ואקום את התוכן באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר. לאחסן aliquots לתוך צינורות 50 מ"ל ולאחסן ב -20 ° C לשימוש לטווח ארוך או 4 ° C עד 2-3 שבועות. השתמש במדיום זה כדי להשלים את אמצעי התרבית האורגנואידים (ראה טבלה 1).
      הערה: יש להפשיר את aliquots ב 4 °C בלילה לפני השימוש.
  3. קצירת תערובת התאים מרקמת מלנומה טרייה
    1. לשטוף את רקמת המלנומה שזה עתה נכרתה בצלחת פטרי 10 מ"ל המכילה אמצעי כביסה. לאחר השטיפה הראשונה, השתמשו בפינצטה סטרילית כדי להעביר את הגידול לצלחת פטרי שנייה לשטיפה נוספת וחזרו על תהליך זה 3x על קרח כדי לשמור על שלמות הגידול ועל יכולת הקיום שלו. במהלך מחזורי השטיפה הללו, השתמשו במספריים סטריליים ובלהב כדי להסיר עודפי רקמת חיבור, שומן ושאריות דם. לאחר שלוש השטיפות, הניחו את הגידול בצלחת פטרי ריקה והשתמשו בלהבים סטריליים כדי לטחון אותו דק.
      הערה: לאחר הטחינה, הגידול צריך להציג עקביות דמוית ג'ל. ככל שהטחינה של הגידול עדינה יותר, כך תפוקת התא תהיה גבוהה יותר. הסיבה לכך היא כי גושים גדולים יותר של הגידול יהיה מאתגר יותר לעיכול ולא יכול לעבור דרך מסננת תאי ניילון 70 מיקרומטר בשלב הבא.
    2. לאחר שרקמת הגידול נשטפה היטב וטחונה, העבירו אותה לצינור חרוטי של 50 מ"ל המכיל 10 מ"ל של מדיום העיכול המוכן (ראה טבלה 1). מניחים את החרוט באמבט מים ב 37 ° C, להבטיח את התוכן הם מערבולות כל 5 דקות.
    3. לאחר 25 דקות, הוסף 30 מ"ל של מדיום ADMEM/F12 המכיל 10% FBS כדי לעצור את העיכול.
      הערה: כמויות אלה שצוינו מיועדות לגידולים במשקל שאינו עולה על 0.2 גרם.
    4. סנן את תרחיף התאים המעוכל דרך מסננת תאי ניילון בגודל 70 מיקרומטר, ולאחר מכן שטוף את המסננת עם ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1) המכיל 10% FBS. לאחר שלב הכביסה, השתמשו בפיפטה כדי לאחזר את כל המדיה שנותרה בתחתית המסנן כדי להבטיח אחזור של מספר התאים הגבוה ביותר האפשרי. לאחר מכן, צנטריפוגה ב 300 × גרם במשך 7 דקות ב 4 °C (75 °F). השליכו את הסופרנאטנט והשעו מחדש את הגלולה בתווך תרבית אורגנואידים (ראו טבלה 1).
    5. תרבית את תרחיף המלנומה החד-תאי במערכות תרבית מטריג'ל או קולגן:
      1. מטריג'ל: ספרו את התרחיף החד-תאי כדי להבטיח שכ-2 × 105 תאים נזרעים בבארות מצופות מטריג'ל שחוממו מראש בתוספת 200 מיקרוליטר של מדיום תרבית אורגנואידים.
        הערה: אורגנואידים מבוססי מטריג'ל משמשים לחקר פתופיזיולוגיה, בדיקת יעילות תרופות ובדיקת רעילות לתרופות16.
      2. ג'ל קולגן: יש לספור את התרחיף החד-תאי כדי להבטיח ערבוב של כ-106 תאים עם 1 מ"ל של ג'ל קולגן. הוסיפו את התערובת לתוספות קרום ג'ל הקולגן שהתמצקו מראש והניחו אותן בצלחת של 6 בארות. הוסיפו מספיק מדיום לתרבית אורגנואידים כדי לטבול את התוספות המכילות את התאים וג'ל הקולגן.
        הערה: אורגנואידים מג'ל קולגן משמשים למדידת נדידת תאי T ולחקר התפתחות רקמות16.
    6. תנו לאורגנואידים לגדול תוך הקפדה על הוספת מדיום טרי כל 3 ימים.
    7. יש להעביר את האורגנואידים ברגע שהם מגיעים לגודל של 150-200 מיקרומטר או לשמר אותם בהקפאה עד לשימוש נוסף.
      1. למעבר אורגנואידים, מעבירים את האורגנואידים לחרוט 15 מ"ל ושוטפים עם DPSB 1x. צנטריפוגה את התערובת ב 300 × גרם במשך 7 דקות ב 4 ° C. הסר את supernatant ולהוסיף תחליף טריפסין (50-100 μL לכל organoid) במשך 10 דקות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, להבטיח כי התוכן מעורבל כל 3 דקות.
      2. יש להפסיק את העיכול באמצעות מדיום ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1) המכיל 10% FBS. צנטריפוגות את התערובת ב 300 × גרם במשך 7 דקות ומשהה מחדש בתווך תרבית אורגנואידים.
      3. זרעו את התרחיף החד-תאי לתוך באר חדשה מצופה מטריג'ל/קולגן באותה צפיפות זריעה ראשונית (2 × 10,5 תאים ב-200 מיקרוליטר של תרבית אורגנואידים עבור בארות מצופות מטריג'ל בצלחת 48 בארות או 106 תאים ב-1 מ"ל של תרבית אורגנואידים עבור החדרת קרום פנימי מצופה קולגן בקוטר 30 מ"מ).
      4. לשימור בהקפאה, יש לעכל MPDOs באמצעות תחליף טריפסין לתרחיפים חד-תאיים ולאחר מכן להשעיה של 106 תאים לתוך 1 מ"ל של תווך הקפאה (ראה טבלה 1).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הצורה והגודל של MPDOs נוטרו לאורך זמן כדי ללמוד את דינמיקת הצמיחה שלהם. כפי שניתן לראות באיור 2, במהלך תקופת הגידול הראשונית, גודל האורגנואיד גדל באופן משמעותי במהלך 7 הימים המתוארים. בעקבות התצפית על דינמיקת הגדילה של MPDO, תשומת הלב הופנתה להערכת הרכב תאי החיסון כדי לאמת את השחזור הנאמן של אורגנואידים לגידולים המקוריים. הערכה זו, שהתמקדה בעיקר בשפע תאי αβ T, סיפקה תובנות לגבי הדמיון בין האורגנואידים לבין הגידול ההורי. כפי שניתן לראות, איור 3 ממחיש שלא הייתה הב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הופעתם של PDOs התייחסה למגבלות מרובות שמציבות שיטות מחקר סרטן אחרות שהוקמו בעבר, תוך הצגת יישומים פוטנציאליים טרנספורמטיביים בתחום. טכנולוגיית אורגנואידים זו הוצעה לראשונה בשנת 2009 על ידי הנס קלברס ועמיתיו, שהצליחו לבסס בהצלחה מערכת תרבית אורגנואידים במעיים על ידי גידול תאי גזע Lgr5+ שמקורם במעי עכברים בג'ל מטריצה תלת-ממדי המכיל R-ספונסין, EGF וגורמי נוגין20. כמה שנים לאחר מכן, בשנת 2020, הצוות של קולר דיווח על מודל תרבית אורגנואידים שאיפשר לראשונה יצי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

תודות

מחקר זה מומן בחלקו על ידי מענקים מהחברות R01(CA258113), SPORE (CA261608) ו-P01 (CA114046). איור 1 הוכן בשנת BioRender.com.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2 מ"ל כובע אדום הברגה פנימית פוליפרופילן קריוגניבקבוקון קורנינג431420
50 מ"ל פוליפרופילן צינור חרוטיקורנינג352070
100 מ"מ טיפול TC תרבית צלחתקורנינג353003
105 מ"מ מלקחיים פוליסטירןכפקקים סטריליים ירוק עד 222-1121-B1I
150 ס"מ2 בקבוק תרבית תאיםCLS430825
A83-01Tocris2939
Advanced DMEM/F12 (1x) סרום מופחת בינוני (1:1)Gibco12634-010
תוסף B-27 (50x)Gibco17504-044
Brilliant Violet 510 נוגדןפרפורין אנטי אנושיBioLegend308120
סגול מבריק 605 אנטי אנושי Ki-67 נוגדןBioLegend350522
סגול מבריק 650 אנטי אנושי CD366 (Tim-3) נוגדןBioLegend345028
סגול מבריק 711 אנטי אנושי CD45 נוגדןBioLegend304050
מוסיף תרבית תאים 0.4 ומיקרו; m, 30 מ"מ קוטרMillipore SigmaPIHP03050
מאגר צביעת תאיםBioLegend420201
מסננת תאים 40 ומיקרו; מ ניילוןקורנינג 352340
מסננת תאים 70 ומיקרו; מ ניילוןקורנינג 352350
קולגנאז, סוג IV, אבקהGibco17104019
Cultrex Rat Collagen ITrevigen3440-100-01
צלחת תרבית, PS, 48 בארות, TC מטופל במכסה, סטריליMax Scientific 07-6048
דימתיל סולפוקסיד (DMSO) Hybri-MaxSigma-AldrichD2650
DMEM - גלוקוז גבוה 4.5 מ"ג/מ"לקורנינגMT10-0130CV
Dnase I - דרגה IIMillipore Sigma10104159001
DPBS, 1% קורנינג21-031-CV
סרום בקר עוברי, FBSקורנינגMT35-010-CV
FITC Annexin V ערכת זיהוי אפופטוזיס IBD Biosciences 
ForskolinTocris1099
אנטיביוטיקה סלקטיבית גנטית (G418 סולפט) (50 מ"ג/מ"ל)ThermoFisher10131035
תוסף GlutaMAXThermoFisher35050061
Ham's F12 תערובת חומרים מזיניםThermoFisher11765054
HEPES (1 מ')Gibco15630-080
Hygromycin B (50 מ"ג/מ"ל)ThermoFisher10687010
L-גלוטמין 200 מ"מ (100x)Gibco25030-081
תא L-WRNATCCCRL-3276
מטריג'ל ללא פנול & עובדת צמיחה. Corning356231
Millex PVDF מופחת, 0.22 μ MMillipore SigmaSLGVR33RB
N-AcetylcysteineSigma-AldrichA9165-5G
ניקוטינאמידSigma-AldrichN0636-100G
Nunc Tripleבקבוק תרבית תאים מטופל בקבוקThermoFisher132867
PE/Cyanine5 אנטי אנושי CD8a נוגדןBioLegend301010
PE-Cy 7 עכבר אנטי אנושי CD279 (PD-1)BD Biosciences 
PenStrep Gibco15140-122
רקומביננטי אנושי EGFPeprotechAF-100-15-1MG
אנושית רקומביננטית FGF חומצית100-17A
(NaHCO3) (7.5%)איכות ביולוגית 118-085-721
להבים כירורגיים מנירוסטה מס' 22אינטגרה4-322
TrypLE Express ג'יבקו12604-021
556547 מסנן מזרק 561272 תמיסת נתרן ביקרבונט

מקורות

  1. Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research. Cancers (Basel). 11 (8), 1098(2019).
  2. Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques. Proteomics. 21 (9), e2000103(2021).
  3. Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. Three-dimensional in vitro culture models in oncology research. Cell Biosci. 12, 155(2022).
  4. Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research. Cancers (Basel). 15 (17), 4352(2023).
  5. Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot). Cancer Res. 81 (17), 4399(2021).
  6. Choi, Y., et al. Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice. Exp Mol Med. 50 (8), 99(2018).
  7. Woo, X. Y., et al. Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts. Nat Genet. 53 (1), 86(2021).
  8. Somasundaram, R. Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy. Nat Commun. 12 (1), 346(2021).
  9. Abdolahi, S. Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research. J Transl Med. 20 (1), 206(2022).
  10. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. Med Comm. 4 (3), e274(2023).
  11. Minoli, M. Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response. Nat Commun. 14, 2214(2023).
  12. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. eBioMedicine. 92, 104614(2023).
  13. Grönholm, M., et al. Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy. Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).
  14. Ou, L., et al. Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells. Clin Transl Med. 12 (6), e814(2022).
  15. Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center. , Available from: https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf (2024).
  16. Jee, J. H., et al. Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture. Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712(2019).
  17. Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. The transcriptional control of the perforin locus. Immunol Rev. 235 (1), 55(2010).
  18. Li, X., et al. Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression. Exp Cell Res. 386 (1), 111719(2020).
  19. Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review). Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).
  20. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  21. Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. Skin organoid research progress and potential applications. International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).
  22. Sun, L., et al. A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options. Sci Adv. 9 (43), eadg6686 (2023).
  23. Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
  24. Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).
  25. Vilgelm, A. E., et al. Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids. iScience. 23 (8), 101408(2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

מודלים של אורגנואידים של מלנומהאורגנואידים המופקים מחולהמיקרו-סביבה גידוליתתרבית אורגנואידיםהרכב תאי חיסוןהפעלת תאי Tסריקת תרופותטיפול מותאם אישית בסרטןשיטת ג'ל קולגןציפוי Matrigel
חשיפת הזדמנויות טיפוליות עם מודלים אורגנואידים שמקורם בחולה מלנומה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.