פרוטוקול השתלת כבד עזר הטרוטופי של חולדות המתואר כאן מציע כלי מחקר מעשי לחקר מנגנונים של דחיית השתלת כבד. מודל זה מסייע להקל על המכשולים הכירורגיים והלחץ של בעלי חיים של השתלת כבד אורתוטופית בחולדות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל השתלת חולדה בכבד שלם עזר הטרוטופי תוך שימוש בכבד כבד למחקרי דחיית אלוגרפט
במאמר זה
סיכום
תקציר
מודלים להשתלת בעלי חיים קטנים הם הכרחיים למחקרי סבילות לאיברים הבוחנים התערבויות טיפוליות אפשריות במחקרים פרה-קליניים. פרוטוקולים של השתלת כבד חולדה (LTx) משתמשים בדרך כלל במודל אורתוטופי שבו הכבד המקורי של המושתלים מוסר ומוחלף בכבד תורם. הליך כירורגי תובעני מבחינה טכנית זה דורש מיומנויות מיקרו-כירורגיות מתקדמות ומסובך עוד יותר על ידי זמני איסכמיה ממושכים של אנהפט ופלג גוף תחתון. זה הוביל לפיתוח שיטה הטרוטופית פחות מסובכת שניתן לבצע מהר יותר ללא זמן אנהפטי או איסכמיה בפלג גוף תחתון, מה שמפחית את הלחץ לאחר הניתוח עבור בעל החיים המקבל.
פרוטוקול LTx הטרוטופי זה כולל שני שלבים עיקריים: כריתת הכבד מהחולדה התורמת והשתלת הכבד כולו בחולדה המקבלת. במהלך כריתת הכבד התורם, המנתח קושר את הווריד הנבוב העל-כבדי (SHVC) ואת עורק הכבד (HA). בצד המקבל, המנתח מסיר את הכליה השמאלית וממקם את הכבד התורם עם וריד הפורטל (PV), הווריד הנבוב האינפרא-כבדי (IHVC) וצינור המרה הפונים לכלי הכליה. יתר על כן, המנתח מבצע אנסטומוזה של וריד הכליה של המקבל מקצה לקצה עם ה-IHVC של הכבד ועורק את ה-PV עם עורק הכליה באמצעות סטנט. הפטיקורטרוסטומיה משמשת לניקוז המרה על ידי אנסטומוזה של צינור המרה לשופכן של המקבל, מה שמאפשר הזרמת מרה דרך שלפוחית השתן.
משך ההשתלה הממוצע היה 130 דקות, משך איסכמיה קרה היה בסביבות 35 דקות ומשך איסכמיה חמה היה פחות מ-25 דקות. היסטולוגיה של המטוקסילין ואאוזין של כבד העזר מהשתלות סינגניות הראתה מבנה הפטוציטים תקין ללא שינויים פרנכימליים משמעותיים 30 יום לאחר ההשתלה. לעומת זאת, דגימות שתל אלוגניות של 8 ימים לאחר ההשתלה הדגימו חדירה לימפוציטית נרחבת עם ציון מדד פעילות דחיית סכימת Banff של 9. לכן, שיטת LTx זו מאפשרת חלופה למודל דחיית תחלואה נמוכה ל-LTx אורתוטופי.
מבוא
LTx של בעלי חיים קטנים הוא מודל שלא יסולא בפז לחקירת מנגנונים של דחיית כבד. השתלת כבד עזר הטרוטופית עם עורקי ורידים פורטליים (HALT-PVA) בחולדות הוצגה בשנת 1968 על ידי לי ואדג'ינגטון1כאשר הם דיווחו על שימוש בווריד הכליה ובעורק של המושתל כדי לחדש את כלי הדם של כבד עזר מושתל. לאחר מכן, Hess et al.2 שיפרו את הפרוטוקול עם הפחתת התחרות התפקודית בין הכבד הטבעי לכבד העזר על ידי הקטנת גודל הכבד הטבעי והתורם יחד עם שחזור החיבור של צינור המרה של התורם, וכתוצאה מכך הישרדות השתל לטווח ארוך. שיפורים נוספים נעשו עם הכנסת אנסטומוזה של השרוול 3,4....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
בעלי חיים גודלו ושוכנו בתנאים ספציפיים ללא פתוגנים במתקני הטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת ויסקונסין (UW) - מכון מדיסון למחקר רפואי בהתאם להנחיות המוסדיות. פרוטוקול המחקר (מס' M006022) אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים בבית הספר לרפואה ובריאות הציבור של אוניברסיטת וושינגטון, וכל בעלי החיים טופלו באופן אתי.
1. בעלי חיים
- השתמש בחולדות נקבות לואיס בוגרות במשקל 205-235 גרם ובזכרי לואיס במשקל 250-280 גרם כחולדות תורמות. השתמש בחולדות לואיס ובראון נורווגיה זכרים בוגרים במשקל 365-420 גרם כנמענים.
- בצע השתלות סינגניות על ידי השתלת תורמי לואיס למושתלי לואיס, בעוד ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
נכון לעכשיו, נעשה שימוש ב-29 זוגות חולדות כדי לבסס את פרוטוקול HALT-PVA, 17 השתלות סינגניות ו-12 השתלות אלוגניות. הכבדים המושתלים הסינגניים שרדו עד לנקודת הסיום של 8 או 30 יום עם שיעור הצלחה של 70%, בעוד שהכבדים המושתלים האלוגניים שרדו עד לנקודת הקצה המיועדת שלהם ל-3 או 8 ימים עם שיעור הצלחה של 50%. כישלונות כוללים חולדות שמתו עקב סיבוכים כירורגיים וכבדי עזר שנכשלו גם כאשר המושתל שרד.
משך הניתוח הממוצע היה 130 דקות, עם זמן איסכמיה קרה של כ-35 דקות, וזמן איסכמיה חמה של פחות מ-25 דקות. בתנאי שלא.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
השתלת כבד היא אפשרות הטיפול היחידה לחולים עם מחלת כבד סופנית, עם כמעט 9,000 LTxs המבוצעים מדי שנה בארה"ב13. למרבה הצער, דחייה חיסונית נראית אצל עד 25% ממקבלי LTx, ודחייה זו מזיקה לאיבר המושתל ולמטופל14,15. כדי לשפר את התוצאות לאחר LTx, יש צורך בפיתוח מודלים חדשניים לחקר דחיית איברים ויישום אסטרטגיות להפחתת הדחייה.
בהשוואה להשתלת כבד אורתוטופית של חולדות, המודל ההטרוטופי הנוכחי ק.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי המכון הלאומי לבריאות (NIH) K08AI155816, שהוענק ל-DA.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 3-0 תפר משי | אתיקון | C013D | |
| 5-0 עניבות משי | כלים מדעיים עדינים | 18020-50 | |
| 6-0 עניבות משי | כלים מדעיים עדינים | 18020-60 | |
| 7-0 עניבות משי | טלפלקס | 103 שניות | |
| 9-0 תפר פוליאמיד | AROSurgical | T05A09N10-13 | שחור |
| קוטריה דו קוטבית | קודמן & שורטלף בע"מ | פ"ה 234 | |
| בופרנורפין הידרוכלוריד | הוספירה | 409201232 | |
| מלקחיים, אדסון-בראון | כלים מדעיים עדינים | 11627-12 | 12.5 ס"מ |
| מלקחיים, דומונט זוויתי | כלים מדעיים עדינים | 11253-25 | רפואי #5/45 11 ס"מ |
| מלקחיים, קשירת תפרים | כלים מדעיים עדינים | 18025-10 | 10 ס"מ |
| הזרקת נתרן הפרין, USB | פרסניוס קאבי | 504015 | 10,000 יחידות USP ל-10 מ"ל |
| צינורית הידרודיסקציה | אמבלר כירורגי | 1021E | 27 גרם |
| איזופלורן | מוצרי Dechra Vet. | 17033-091-25 | |
| קטטר IV | קנדל | ברקוד 2619פור | 26 גרם x 3/4 אינץ' |
| מערכת נסיגה מגנטית | כלים מדעיים עדינים | 18200-50 | |
| מיקרו מהדקים | כלים מדעיים עדינים | 18055-05 | 6 מ"מ |
| מיקרו מהדקים | כלים מדעיים עדינים | 18055-06 | 4 מ"מ |
| מוליך מיקרו מהדק | כלים מדעיים עדינים | 18057-14 | 14 ס"מ |
| מחזיק מחט מיקרו | S& T | ג-14 | 14 ס"מ |
| מיקרוסקופ | צייס | אוניברסלי S3 | ראש כפול |
| משחה עיניים | Puralube | 14590500 | |
| צינורות פולימידי | קול פארמר | 95820-04 | OD "0.0215, מזהה "0.0195, קיר "0.0010" |
| מלוחים | בקסטר | 281324 | 0.9% נתרן כלורי |
| מספריים קפיצים כירורגיים | S& T | SDC-15 | קהה 14 ס"מ |
| מספריים קפיצים כירורגיים | כלים מדעיים עדינים | 15021-15 | ואנאס 14 ס"מ |
מקורות
- Lee, S., Edgington, T. S. Heterotopic liver transplantation utilizing inbred rat strains. Am J Pathol. 52 (3), 649-669 (1968).
- Hess, F., Jerusalem, C., Van der Heyde, M. N. Advantages of auxiliary liver homotransplantation in rats. Arch Surg. 104, 76-80 (1972).
- M....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
