כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול שלב אחר שלב לחקירת ההשפעות הטיפוליות ומעכבות כלי הדם של נוסחת Sanleng Jiashen על עכברי BALB/c-nu עם קרצינומה הפטו-תאית אורתוטופית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול שלב אחר שלב לחקירת ההשפעות הטיפוליות ומעכבות כלי הדם של נוסחת Sanleng Jiashen על עכברי BALB/c-nu עם קרצינומה הפטו-תאית אורתוטופית.
הקטלניות של סרטן הכבד והעמידות לתרופות כימיות אילצו את החיפוש אחר מרשמים יעילים של צמחי מרפא מסורתיים לסרטן הכבד. מודלים של בעלי חיים הניתנים לחזרה, קלים למניפולציה ומחקים מאוד את התהליכים הפתופיזיולוגיים של סרטן הכבד הם תנאי מוקדם לסינון מוצלח של מועמדים יעילים לתרופות. בינתיים, אינדיקטורים ואמצעים אמינים להערכת יעילות תרופות הם גם הערובה למחקר ופיתוח תרופות נגד סרטן הכבד.
נוסחת Sanleng Jiashen, מרשם מייצג של רפואה סינית מסורתית המכילה Sparganium stoloni erum, Buch. -שינקן. (Sanleng), Panax ginseng C. A. Mey. (ג'ינסנג), Rheum officinale Baill. (ריבס), ו-Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong), נקבעים כדי להזין את הכבד ולנקות חום, להסיר רעלים ולקדם את זרימת הדם לטיפול בסרטן הכבד. פרוטוקול ניסיוני זה מתאר את הכנת פורמולת Sanleng Jiashen שעברה ליופיליזציה ואת תהליך ההקמה של סרטן כבד במקום בעכברי BALB/c-nu. צביעה היסטופתולוגית, זיהוי אימונוהיסטוכימי של סמני סרטן, הדמיה in vivo של עכברים ובדיקת ממברנה כוריואלנטואית של עובר אפרוח שימשו כדי לחקור את ההשפעה העיכובית והאנטי-אנגיוגנזה של פורמולת Sanleng Jiashen על התפשטות ממאירה של רקמת סרטן הכבד. הנתונים מראים כי נוסחת Sanleng Jiashen יכולה להתנגד ביעילות להתפשטות הממאירה של רקמת סרטן הכבד, המתבטאת בהפחתת נפח מסת הגידול, שיפור הנזק הפתולוגי ורמות נמוכות יותר של סמן הסרטן ki67.
העיכוב המעולה של אנגיוגנזה מצביע גם על כך שלנוסחת Sanleng Jiashen עשוי להיות פוטנציאל לטפל ולמנוע התקדמות והידרדרות של סרטן הכבד. כל תוכנית הניסוי מציגה תהליך מקיף של מרכיבי הרפואה הסינית המסורתית בטיפול בסרטן הכבד של עכברים, המספק התייחסות להקמה ואופטימיזציה של מודל סרטן הכבד, כמו גם מחקר ופיתוח של תרופות למניעה וטיפול בסרטן הכבד.
סרטן הכבד הוא סרטן קטלני שמקורו בכבד והוא הגורם השני בשכיחותו למוות הקשור לסרטן ברחבי העולם1. שיעורי מחלות הכבד בארצות הברית ובכמה מדינות מתפתחות מראים רמות גבוהות, ויכולים להיות יותר ממיליון מקרי סרטן כבד ברחבי העולם עד 20302. בשל הרגלי חיים לא בריאים כמו עישון, השמנת יתר ושתייה, והנזקים של הפטיטיס B, הפטיטיס C ווירוסים אחרים, השכיחות והתמותה של סרטן הכבד עלו משמעותית משנה לשנההשלישית. כגידול ממאיר הטרוגני עם מאפיינים היסטולוגיים שונים ופרוגנוזה גרועה, לסרטן הכבד יש מגוון רחב מאוד של שכיחות, כולל קרצינומה של הכבד, כולנגיוקרצינומה תוך כבדית וסרטן כבד פיברולמלרי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
עכברים עירומים זכרים BALB/c-nu שהיו נטולי פתוגנים ספציפיים, בני 5 שבועות ובמשקל 18-22 גרם הוזנו במרכז הניסויים לבעלי חיים של המכללה הרפואית לטרנספורמציה של אוניברסיטת ג'ילין; תנאי ההזנה היו 22-24 מעלות צלזיוס עם 40%-60% לחות יחסית. מספר הרישיון של חיית הניסוי הוא SYXK(Ji) 2018-0006, ותהליך הניסוי תואם את הכללים והתקנות של ועדת האתיקה של אוניברסיטת ג'ילין, ומספר אישור האתיקה של בעלי חיים הוא 20221228-01.
1. הכנת פורמולת Sanleng Jiashen מיובשת בהקפאה15
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כפי שמוצג באיור 2A, ביססנו מודל סרטן כבד ממוקד של עכברי BALB/c-nu והערכנו את ההשפעה האנטי-גידולית של נוסחת Sanleng Jiashen. איור 2B מציג כי נוסחת Sanleng Jiashen יכולה לדכא באופן משמעותי את הצמיחה של גידולי כבד. התוצאות הפתולוגיות הצביעו על כך שבהשוואה לקבוצת הביקורת, למוקדי הגידול בקבוצת המודל היו גבולות ברורים עם הרקמה הסובבת, מוקדי גידול גדולים יותר, התרחבות קשרית וצמיחת דחיסה. בינתיים, סידור תאי הגידול ברקמת הגידול אינו מסודר ללא מבנה אונות כבד. בהת.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כמות גדולה של ראיות אישרה כי לסנלנג, ג'ינסנג, ריבס וצ'ואן-שיונג בנוסחת סנלנג ג'יאשן יש השפעות פרמקולוגיות על הטיפול בסרטן הכבד. מחקרים הראו כי Sanleng יכול לעכב באופן משמעותי את התפשטותם וצמיחתם של תאי גידול כדי למנוע פלישת תאי גידול וגרורות, לגרום לאפופטוזיס של תאים ולווסת את מחזור התא ואת המיקרו-סביבה של הגידול20. הוכח כי קמפפרול, החומר הפעיל בסנלנג, יכול לעכב את התרחשות והתפתחות סרטן הקיבה21, סרטן הערמונית22 וסרטן.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן לפילוסופיה ומדעי החברה של סין (20VYJ070), הפרויקט של מחלקת החינוך המחוזית של ג'ילין (JJKH20230963KJ), והקבוצה השנייה של פרויקט ההנדסה של חוקרי שינגלין באוניברסיטת צ'אנגצ'ון לרפואה סינית (QNKXJ2-2021+ZR25).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.25% תמיסת טריפסין | HyClone, אמריקה | SH30042.01B | |
| 1 מ"ל מזרק חד פעמי | Mingankang ציוד רפואי ושות', בע"מ, סין | RWSB | |
| 1% פניצילין ותמיסת סטרפטומיצין | Hyclone, America | SV30010 | |
| 1.5 מ"ל צינור צנטריפוגה | קורנינג, אמריקה | MCT-150-C-S | |
| 12 ס"מ מלקחיים | מחטהסדיק, סין | HKQS-211 | |
| 6-0 תפרים כירורגיים | שנחאי Jinhuan ציוד רפואי ושות', בע"מ, שנחאי, סין | CR631 | |
| 75% אלכוהול | סצ'ואן Youbang Enterprise Co., Ltd., סצ'ואן, סין | 1.00009E+11 | |
| צלחות 96 בארות | NEST, סין | 701001 | |
| אצטון | טיאנג'ין דינגפו מפעל כללי כימי, טיאנג'ין, סין | GB686-89 | |
| BALB / c-nu עכברים עירומים זכרים | בייג'ינג Weitonglihua ניסיוני בעלי חיים טכנולוגיה ושות', בע"מ, בייג'ינג, סין | SYXK (Ji) 2018-0006 | |
| מכונת אפיית רקמות ביולוגית | Leica, גרמניה | Leica HI1220 | |
| צלחת תרבית תאים | NEST, סין | NEST.706001 | |
| תמיסת חומצת לימון | Wuhan Canos Technology Co., Ltd., ווהאן, סין | sj1074 | |
| D-luciferin | Gold Biotechnology®, Inc., סין | LUCK-100 | |
| DMEM | Hyclone, אמריקה | SH30243.01 | |
| מאיר ביצה | שאנדונג Weizhen ציוד דגירה חברה, שאנדונג, סין | WZSDT | |
| Eosin פתרון צביעה | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, סין | 110703061 | |
| משחת עיניים Erythromycin | Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., שנחאי, סין | H37022025 | |
| סרום בקר עוברי | קלארק, אמריקה | FB25015 | |
| חממת אפרוח אינטליגנטית אוטומטית לחלוטין | שאנדונג Weizhen ציוד דגירה חברה, שאנדונג, סין | 29538 | |
| GFP lentivirus פתרון Suzhou | GenePharma Co., Ltd., Suzhou, סין | F22AZ | |
| סרום עז | Shenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Shengyang, סין | WLA067 | |
| מקדחת גולגולת עכבר כף יד | STRONGWT, סין | 190 | |
| קו תאים HCCLM3 | WheLab, שנחאי, סין | C1010 | |
| כרית חימום | Zhongke Life Technology Co., Ltd., האנגג'ואו, סין | GEJRD-10W | |
| Hematoxylin | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, סין | B-YH250-1 | |
| סיר מרתח אינטליגנטי | Hangzhou Jiuyang living Appliance Co., Ltd., האנגג'ואו, סין | 3003BQ | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך | אולימפוס, יפן | IX73 | |
| ki67 נוגדן ראשוני | ווהאן Servicebio Technology Co., Ltd., ווהאן, סין | GB121141-100 | |
| Lodophor חיטוי | Cofoe Medical Technology Co., Ltd., Hunan, סין | 202110073 | |
| Luciferase | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, סין | E26JZ | |
| דבק | מטריקסקורנינג, אמריקה | 356234 | |
| גזה רפואית | Yunnan Chenye ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, יונאן, סין | 71712049971 | |
| מתנול | גואנגדונג גואנגהואה מדע-טק ושות', בע"מ, גואנגדונג, סין | 1.17001.023 | |
| מספריים עיניים | Hesdick, סין | HKQS-209 | |
| פינצטה עיניים | Hesdick, סין | HKCL-20 | |
| מכונת הטמעת פרפין | Leica, גרמניה | ||
| מכונת חיתוך פרפין | Leica, גרמניה | Leica CM1950 | |
| Paraformaldehyde | Biosharp, סין | BL539A | |
| PBS מאגר | ווהאן Servicebio Technology Co., Ltd., ווהאן, סין | G2156-1L | |
| Puromycin | בייג'ינג Solarbio Science & טכנולוגיה ושות', בע"מ, בייג'ינג, סין | P8230 | |
| מקרר | תרמו מדעי, אמריקה | TDE40086FV-ULTS | |
| אזמל | הסדיק, סין | HKCL-93 | |
| נוגדן משני | ווהאן Servicebio Technology Co., Ltd., ווהאן, סין | GB23301 | |
| מערכת הדמיה חיה של בעלי חיים קטנים | קליפר מדעי החיים, אמריקה | IVIS Lumina XR | |
| Sorafenib | שנחאי אלאדין ביוכימיה טכנולוגיה ושות', בע"מ, שנחאי, סין | 284461-73-0 | |
| חבישה שקופה | 3M, אמריקה | 9534HP | |
| Triton X-100 | בייג'ינג Solarbio מדע & טכנולוגיה ושות', בע"מ, בייג'ינג, סין | T8200 | |
| מייבש הקפאת ואקום | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd., Ningbo, סין | sz-10N | |
| ביצי עוף נוצה לבנה | שאנדונג Haotai גידול בעלי חיים ניסיוני ושות', בע"מ, שאנדונג, סין | SCXK(Lu) 20180004 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich, , אמריקה | 534056 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה פורסם
הסרטון יגיע בקרוב