כאן, אנו מתארים בפירוט את נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך מוקסיבציה מחולקת עשבי תיבול על הטבור בטיפול בדיסמנוריאה ראשונית בחולדות עם קרישה קרה וקיפאון דם, אשר יכול לשפר באופן משמעותי את התגובה המתפתלת של חולדות dysmenorrhea ולהקל על הכאב.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מתארים בפירוט את נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך מוקסיבציה מחולקת עשבי תיבול על הטבור בטיפול בדיסמנוריאה ראשונית בחולדות עם קרישה קרה וקיפאון דם, אשר יכול לשפר באופן משמעותי את התגובה המתפתלת של חולדות dysmenorrhea ולהקל על הכאב.
דיסמנוריאה ראשונית (PDM) מתייחסת להתרחשות של כאבי בטן עוויתיים בבטן התחתונה ללא כל פתולוגיה ברורה של האגן, המלווה לעיתים קרובות בתסמינים מערכתיים אחרים, מה שמקטין באופן משמעותי את איכות החיים של נשים עם PDM, 45%-95% מהנשים הווסת מושפעות ממנו. למרות השכיחות הגבוהה של PDM, לעתים קרובות הוא אינו מטופל היטב והחוקרים הרלוונטיים והנשים עצמן מתעלמים ממנו. מוקסיבציה מחולקת צמחי מרפא (HPM) היא טיפול חיצוני אופייני ברפואה הסינית המסורתית (TCM), הנמצא בשימוש נרחב לטיפול במחלות בסין; הוא מטפל במחלות על ידי מריחת פורמולה צמחית סינית על נקודות הדיקור של המטופל ולאחר מכן הצתת מקלות מוקסה על פורמולת הצמחים לטיפול במוקסיבציה. היעילות העיקרית של צמחי המרפא ששימשו במחקר זה היא הפעלת מרידיאנים וחום, אשר מעודדים את זרימת הצ'י כדי להקל על כאב. גירוי החום של מוקסיבציה יכול לזרז את עירוי עשבי התיבול לגוף האדם. כתוצאה מכך, HPM, המשלב גירויי אקופוינט, צמחי מרפא וחום, מתאים לטיפול בהפרעות גינקולוגיות, במיוחד מחלות תפקודיות כגון PDM. מאמר זה מספק תיאור מפורט של הנהלים ואמצעי הזהירות עבור HPM בנקודת הדיקור Shenque (CV8) בחולדות ניסוי נקבות, אשר 0מספק בסיס ניסיוני לקידום טוב יותר של היישום והפיתוח של HPM על הטבור ב- PDM.
דיסמנוריאה ראשונית (PDM), המכונה גם דיסמנוריאה תפקודית, היא אחת המחלות הגינקולוגיות הנפוצות ביותר המשפיעות על נערות מתבגרות ונשים צעירות בווסת1. הוא מאופיין בתופעות לוואי כגון ייסורים ודחיסות הרחם (עוויתות), יחד עם בעיות דלקתיות בבטן לפני ואחרי הווסת ללא כל עדות לפתולוגיה של האגן2. התכווצויות בטן תחתונה המתחילות 8-72 שעות לאחר תחילת הווסת, מגיעות לשיאן בימים הראשונים של זרימת וסת מוגברת 3,4, ולעיתים מתפשטות לגב ולירכיים הן הסימפטומים האופייניים ל- PDM פוליציסטי . בשל הגדרות שונות של המצב והיעדר דרכים סטנדרטיות להעריך את עוצמת כאבי הווסת, השכיחות המשוערת של דיסמנוריאה אצל נשים נעה בין 45%-95% 3,4,5. כ-10%-25% מהנשים בגיל הפריון סובלות ככל הנראה מ-PDM6 חמור מאוד. שכיחות PDM היא הגבוהה ביותר בקבוצת הגיל 20 עד 24 ויורדת בהדרגה לאחר מכן2. PDM מאופיין בכאבי בטן תחתונה תקופתיים, אשר לעיתים קרובות מלווים בתסמינים סיסטמיים אחרים כגון כאבי גב תחתון, בחילות, הקאות, כאבי ראש, אנורקסיה, שלשולים7, ואפילו תסמינים נפשיים כמו דיכאון וחרדה 8,9. במהלך הווסת, נשים עם דיסמנוריאה חוות ירידה באיכות החיים הכללית 4,8,10.
יתר על כן, מחקרים מצאו כי כאבי מחזור חוזרים ונשנים עשויים להשפיע על תפקוד מערכת העצבים המרכזית, מה שמוביל לשינוי תפיסת הכאב הן בשלב הכואב והן בשלב ללא כאב11. בשל האטיולוגיה של PDM המבוססת על פרוסטגלנדינים (PGs), הטיפול התרופתי הנפוץ ביותר עבור PDM הוא תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs)12,13, ואחריו גלולות למניעת הריון14. בנוסף לתופעות הלוואי של תרופות, 10%-20% מהאנשים אינם מגיבים לנוגדי דלקת שאינם סטרואידים ואמצעי מניעה3. רוב המחקר הנוכחי עוסק בהשפעות של דיסמנוריאה על האנטומיה והפיזיולוגיה של המוח, עם תשומת לב מועטה לגישות טיפוליות. כתוצאה מכך, יש צורך דחוף למצוא אסטרטגיית טיפול שניתן ליישם באופן נרחב בפרקטיקה הקלינית, עם יעילות מבוססת, ולקבל בקלות על ידי המטופלים.
מוקסיבציה מחולקת צמחי מרפא (HPM) היא טיפול חיצוני אופייני ברפואה הסינית המסורתית (TCM), הנמצא בשימוש נרחב לטיפול במחלות בסין. היתרונות שלה כוללים עלות מינימלית, ללא תופעות לוואי, השפעות טובות לטווח ארוך, ניתוח קל, קבלה קלה על ידי המטופלים. נמצא כי ההשפעה של HPM על הטבור על PDM היא משמעותית15, אשר עשויה להיות קשורה קשר הדוק לוויסות הקור והחום חסר עודף של הרחם, כמו גם תאי פיטום וקולטנים קשורים16. צוות המחקר הוכיח כי HPM יכול להקל באופן מיידי על כאבי מחזור17.
ג'אנג ג'ונג-ג'ינג רשם בתחילה את הרעיון של דיסמנוריאה במחלות שונות של נשים וטיפול בחדר הזהב, וכתב כי זרימת הווסת היא שלילית מתחת לחגורה, והבטן מלאה בכאב18. על פי הסימפטומים העיקריים שלה, dysmenorrhea ניתן לייחס לקטגוריה של כאבי מחזור וכאבי בטן הווסת ברפואה הסינית המסורתית. ניתן לחלק את תסמונות הדיסמנוריאה לחמישה: צ'י וחוסר דם; קרישה קרה וקיפאון דם; הצטברות חום לח; קיפאון צ'י וקיפאון דם; וחוסר כבד וכליות16. על פי מחקרים רלוונטיים, תסמונת קרישת הקור וקיפאון הדם היא התסמונת הנפוצה ביותר של PDM19,20. TCM גורסת כי PDM ופתוגנים קרים קשורים קשר הדוק21. במהלך או סביב הווסת, יש זרימה מוגזמת של דם בשואי, מה שמוביל לדלדול מהיר של דם צ'י בשל אופיו האנרגטי. כתוצאה מכך, נשים פגיעות לגורמים הגורמים למחלות בשל מחסור באנרגיה בריאה מספקת והתנודות המהירות של צ'י ודם ברחם ובמרידיאנים צ'ונג ורן22. נשים בעלות מבנה גוף מפותח צריכות לנקוט אמצעי זהירות כדי להימנע מצריכת מזון גולמי או קר ולמנוע הצטננות במהלך הווסת. כישלון לעשות זאת עלול לגרום לחדירה של פתוגנים קרים לתוך הרחם, המוביל לקרישה וקיפאון של הדם ברחם ואת המרידיאנים צ'ונג ורן. כתוצאה מכך, אנשים חווים כאב כתוצאה מקיפאון בזרימת הדם. הן חדירה של פתוגנים קרים מבחוץ ואת נוכחותו של יין קר בתוך הגוף יכול לגרום חסימה וקרישה של המרידיאנים.
המיקום של דיסמנוריאה הוא במרידיאנים צ'ונג ורן, וההתחלה קשורה לשינויים בצ'י ובדם. בתורת הרפואה הסינית המסורתית, מוקסיבציה פועלת על ידי גירוי יאנג צ'י, חימום המרידיאנים, פיזור קור והגברת זרימת הדם כדי להקל על כאב. לדברי ג'ינפו מלינגשו23, אם הדופק וקריש הדם נמצאים באמצע, ויש דם דחוס ודם קר, אז זה מתאים למוקסיבציה; זהו טיפול חיצוני טיפוסי dysmenorrhea. בעבודה שפורסמה בעבר24 עלי ארטמיסיה ארגי מתוארים כמרים וחריף, המסוגלים לשחזר את היאנג המקורי הכמעט מותש, לחבר את שנים עשר המרידיאנים, לעבור דרך שלושת מרידיאנים יין, לווסת צ 'י ודם, להפיג קור ולחות, ולחמם את הרחם, moxibustion, בעזרת acupoints המתאימים, יכול לגרש גורמים פתוגניים חיצונית, לווסת את הצ'י והדם באופן פנימי, ובכך למלא תפקיד בוויסות המרידיאנים, הפעלת זרימת הדם ועצירת הכאב. הטבור, הידוע גם בשם שנק (CV8), שייך למרידיאן רן, המחבר בין המרידיאנים דו, צ'ונג ודאי. על פי תיאוריית TCM, שאנקה נחשב קשור לחמשת הזאנג והשישה פו25. הוא נחשב כבסיס מולד וכציר של מאזן יין-יאנג. אנטומי, PDM נמצא בסמיכות לאגן והוא קשור קשר הדוק לרחם. מחלת PDM משפיעה באופן ספציפי על הרחם, והפתוגנזה שלה כרוכה בחוסר איזון של צ'י ודם, כמו גם חוסר איזון של הקרביים. על ידי גירוי נקודת השנק, ניתן להשפיע ישירות על מצב הצ'י והדם של הרחם ולטפל ביעילות בכאבי מחזור. בהתבסס על התיאוריה הנ"ל, בחרנו את הגירוי של אקופוינט שנק הממוקם באזור הבטן לטיפול HPM, במטרה להקל על תסמיני דיסמנוריאה ולהקל על הכאב.
כדי לחקות את ההתערבות של TCM ב-PDM קרוב ככל האפשר לקרישת קור וקיפאון דם, שכפלנו את טכניקת HPM על הטבור בחולדות נקבות. התגלה כי HPM על הטבור יש אפקט משכך כאבים ברור והוא יכול להפחית את התגובה המתפתלת של חולדות dysmenorrhea. על מנת לחקור את המנגנון של HPM על הטבור לשיפור PDM ולקידומו, בחנו טכניקה של קיבוע חולדות וביצוע HPM בנקודת הדיקור של שנק בבטן.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול ניסויי זה אושר על ידי הוועדה לניהול ניסויים בבעלי חיים ואתיקה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג לרפואה סינית מסורתית. כל פעולות הניסוי בבעלי חיים עומדות בכללי האתיקה של רווחת בעלי חיים ניסיוניים ובתקנות בטיחות הניסויים בבעלי חיים. במחקר נעשה שימוש בנקבות של חולדות וויסטאר בוגרות בגילאי 8-10 שבועות ממרכז חיות המעבדה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג לרפואה סינית. לפני הניסוי, חולדות קיבלו תזונה אדפטיבית במשך שבוע בסביבה מבוקרת (טמפרטורה: 23-25 מעלות צלזיוס, לחות: 40%-60%). החולדות הוחזקו במחזור אור-חושך של 12 שעות, עם אורות שהודלקו בין השעות 8:00 ל-20:00, והייתה להן גישה בלתי מוגבלת למזון ומים. הפרוטוקול הבא מתאר את PDM עם קרישה קרה והקמת מודל קיפאון דם ו- HPM על הליך הטיפול בטבור. ייצוג של ההליך מוצג באיור 1.
1. הקמת PDM עם קרישה קרה וקיפאון דם
2. טיפול בטבור HPM בחולדות מודל PDM עם קרישה קרה וקיפאון דם
הערה: הכן את ארבעת החומרים החשובים ביותר לטיפול בטבור HPM (ראה טבלת חומרים).
3. ביצוע הבדיקה ההתנהגותית
4. לקיחת הדגימה לאחר המבחן ההתנהגותי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
במחקר זה, אסטרדיול בנזואט בשילוב עם אוקסיטוצין שימש כדי לגרום למודל PDM של קרישה קרה וסוג קיפאון דם כדי לבחון את ההשפעה של טיפול בטבור HPM. ראשית, על-ידי התבוננות בהתנהגות המתפתלת של החולדה, קבעו אם חולדת PDM עם קרישה קרה וקיפאון דם מודלה בהצלחה, והעריכו את התנהגות הכאב, המידול והטיפול של החולדה ברחם באמצעות WS, WLs ואינדקס הרחם. מהיוםה-6 עד היוםה-10 של הדוגמנות, טיפול HPM בוצע ב-CV8 (שנק) פעם ביום, במשך 30 דקות בכל פעם. ביום ה- 11 של הדוגמנות, החולדות הומתו תחת הרדמה, והרחם הוסר ושימש לצ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כיום, ישנן שיטות דוגמנות שונות עבור PDM עם קרישה קרה סוג קיפאון הדם, אבל השיטה העיקרית היא אסטרדיול בנזואט בשילוב עם אוקסיטוצין עבור מודלים dysmenorrhea, אשר יהיה שונה על בסיס זה. במחקר זה, שיטת הקפאת כל הגוף בשילוב עם אסטרדיול בנזואט ואוקסיטוצין שימשה למידול. הטמפרטורה של כל שיטת הקפאת הגוף הייתה -20 מעלות צלזיוס. בניסוי המקדים הקודם, נמצא כי כאשר הטמפרטורה הייתה -25 מעלות צלזיוס, החולדות יסבלו מכוויות קור חמורות או אפילו קטיעת זנב, ולכן הטמפרטורה הותאמה ל -20 מעלות צלזיוס, מה שיכול לה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן למדעי הטבע של מחוז ג'ג'יאנג, תוכנית חקר Q (LQ20H270012), תוכנית הטכנולוגיה של הרפואה הסינית המסורתית של ג'ג'יאנג (NO.2020ZB124), פרויקט המחקר של האוניברסיטה הרפואית הסינית של ג'ג'יאנג (NO.2021JKZKTS056B), והפרויקט ברמת בית החולים של בית החולים המסונף השלישי של האוניברסיטה הרפואית הסינית של ג'ג'יאנג (NO. ZS22ZA01). אנו אסירי תודה למרכז בעלי החיים הניסיוני של האוניברסיטה הרפואית הסינית של ג'ג'יאנג ולמעבדת המפתח לדיקור ונוירולוגיה של מחוז ג'ג'יאנג על שסיפקו לנו את תנאי הניסוי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.9% מי מלח פיזיולוגיים | האנגג'ואו Gaosheng ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | SLYSZ1A | להזרקת קבוצת הביקורת |
| מזרק סטרילי חד פעמי 1 מ"ל | Changzhou Yuekang ציוד רפואי ושות', בע"מ | 3000-0515-14 | להזרקת סמים |
| 3 מ"ל (מורחב) פיפטה פסטר | בייג'ינג Lanjieke טכנולוגיה ושות', בע"מ | YCKJ-HC-007245 | להרכבת |
| 75% אלכוהול חיטוי | Hangzhou OUTOP Biotechnology Co., Ltd. | N/A | לעיקור אתר הטיפול |
| מגלשת זכוכית מצופה דבק | Zhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | 188105W | עבור חממה ביוכימית מכתים HE |
| שנחאי Boxun Industrial Co., Ltd מפעל ציוד רפואי | N/A | להסרת שעווה רקמות בחומר בד מכתים HE | |
| הכנה פנימית | נרתיק להחזקת | ||
| חולדה מנהל דיגיטלי מערכת סריקת פרוסות | Hamamatsu | C13210-01 | לסריקת פרוסות HE |
| כפפות | לטקס חד פעמיותגואנגג'ואו ליגה טכנולוגיה ושות', בע"מ | LG10-102-1I | לשימוש במהלך הפעולה |
| אסטרדיול בנזואט | Hefei Xinkexin Animal Pharmaceutical Co., Ltd. | N/A | להקמת מודל דיסמנוריאה |
| Excelsior AS מייבש אוטומטי לחלוטין | Thermo Scientific | Excelsior AS | להכתמת התייבשות רקמות |
| נקבות Wistar | מרכז חיות מעבדה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג לרפואה סינית | N/A | 220– 250 גרם |
| קמח | הכנה ביתית | N/A | לטיפול במוקסה מחולקת עשבי תיבול |
| מלקחיים | Zhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | lsnz | לאיסוף דגימות |
| פורמלדהיד | שנחאי Lingfeng מגיב כימי ושות', בע"מ | 441244-1KG | לקיבוע רקמות |
| ג'מיני AS מכתים שקופיות | תרמו סיינטיפיק | ג'מיני AS | מכונת מכתים |
| Hemostat | Zhejiang Tuzhi פרמצבטיקה טכנולוגיה ושות', בע"מ | lsnz | לאיסוף דגימות |
| HistoCore | Leica (ארקדיה H) | 14039357258 | להטמעת רקמות מכתים HE |
| כדור כותנה רפואי סטרילי | בית החולים המסונף השלישי של האוניברסיטה הסינית לרפואה בג'ג'יאנג | N/A | לעיקור אתר הטרמנט |
| תמיסת צביעה כחולה מתילן (0.1%) | בייג'ינג הונגהו יונייטד מוצרים כימיים ושות', בע"מ | G1300 | להקרנת מחזור אסטרוס |
| מזמרה מיקרודיסקציה | Hangzhou Gaosheng ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | XWJ12A | לאיסוף דגימות |
| זכוכית כיסוי מיקרוסקופ (24 מ"מ x 50 מ"מ) | האנגג'ואו Zhengbo ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | 10212450C | עבור מכתים HE |
| Microtome | Leica Microsystems | RM2255 | לחיתוך רקמות |
| מקפיא Midea מקרר | Hefei Midea Co., Ltd. | N/A | להקמת מודל דיסמנוריאה עם קרישה קרה וקיפאון דם |
| מלקחיים טוחנים | Hangzhou Zhengbo Biotechnology Co., Ltd. | YGJD-11 | לאיסוף דגימות |
| הרכבה בינונית | האנגג'ואו Gaosheng ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | CS9603-100 מ"ל | להרכבת רקמות |
| מקל מוקסה | בית החולים המסונף השלישי של האוניברסיטה הסינית לרפואה בג'ה-ג'יאנג | N/A | לטיפול במוקסה מחולקת עשבי תיבול |
| נתרן פנטוברביטל | האנגג'ואו דוואן ביולוגי ושות', בע"מ | N / A | לאיסוף דגימות |
| פוספט חוצץ מלח (PBS) | Hangzhou Gaosheng Biotechnology Co., Ltd. | P1010-2L | לאיסוף דגימות |
| מספריים | ג'ה-ג'יאנג טוז'י פרמצבטיקה טכנולוגיה ושות', בע"מ | lsnz | לאיסוף דגימות |
| להב חיתוך | שנחאי Saihan טכנולוגיה ושות', בע"מ | LEICA-819-box | להכנת חתך פרפין מכתים HE |
| מכונת גילוח | שנזן קורדס מכשירי חשמל ושות', בע"מ | N/A | לגילוח שיער של חולדה |
| נתרן כלוריד | מגיב כימי ושות 'בע"מ | A501218-0001 | לאיסוף דגימות |
| סוכרוז | ג'ה-ג'יאנג טוז'י טכנולוגיה פרמצבטית ושות', בע"מ | S11055-500g | להתייבשות שיפוע |
| מיכל בידוד תרמי | Zhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | lsbwx8l | להסרת שעווה של קטע פרפין |
| קלטות הטמעת רקמות, בצורת מלבניות, עם מכסה שביר. | ג'ה-ג'יאנג טוז'י פרמצבטיקה טכנולוגיה ושות', בע"מ | 31050102W | להטמעת רקמות מכתים HE |
| סרט דבק רחב | Zhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | לא ישים | לייצוב חולדה במהלך הליך הטיפול |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.