כאן, אנו מציגים פרוטוקול המשלב אלקטרופורציה in vivo וניתוק עצבים של שריר levator auris longus (LAL). הליך זה מאפשר לחקור את התפקיד הפוטנציאלי של חלבונים שמקורם בשריר בהתחדשות הסינפסה העצבית-שרירית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
משולב באלקטרופורציה של Vivo ועצבוב מחדש לטווח קצר של שריר השלד של שריר השלד Auris longus
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
הצומת העצבית-שרירית (NMJ) היא הסינפסה ההיקפית השולטת על התכווצות סיבי שרירי השלד כדי לאפשר תנועה מתואמת של אורגניזמים רבים. ב- NMJ, מסוף אקסון מוטורי קדם-סינפטי בא במגע עם תחום פוסט-סינפטי שרירי ומכוסה על ידי תאי Schwann טרמינליים. שלמותו ותפקודו של NMJ נפגעים במספר תנאים, כולל הזדקנות, מחלות נוירומוסקולריות ופציעות טראומטיות. כדי לנתח את התרומה הפוטנציאלית של חלבונים שמקורם בשריר לתחזוקה והתחדשות של NMJ, שולבה אסטרטגיית העברת גנים in vivo עם ניתוק עצבים של שריר הגולגולת levator auris longus (LAL) לאחר פגיעה עצבית מכנית. ממצאים קודמים הראו כי הביטוי הכפוי של חלבונים פלואורסצנטיים נשלטים אינו משנה את ארגון NMJ או את ההולכה העצבית. הליך זה נועד לתאר שיטה מפורטת של אלקטרופורציה in vivo של שריר LAL ואחריה טרנסקציה או ריסוק של הענף הספציפי של עצב הפנים המעצבב את שרירי הגולגולת, מה שמוביל לניתוק עצבים NMJ ועצבוב מחדש, בהתאמה. השילוב של אסטרטגיות ניסיוניות אלה בשריר LAL הנוח מהווה שיטה יעילה לחקור את התרומה הפוטנציאלית של ביטוי יתר או השתקה של חלבון שריר בהקשר של עצבוב NMJ לטווח קצר.
מבוא
הצומת העצבית-שרירית (NMJ) היא הסינפסה ההיקפית השולטת בהתכווצות שרירים, ובעקיפין, בתנועה המתואמת של אורגניזמים1. הוא נוצר על ידי מסוף אקסון מוטורי קדם-סינפטי, תחום פוסט-סינפטי שרירי המועשר בקולטני אצטילכולין (AChRs), ותאי שוואן טרמינליים לא מיאליניים המכסים את מסוף האקסון 2,3,4. עם ניתוק עצבים NMJ עקב פגיעה עצבית היקפית טראומטית, מחלה או התערבות פרמקולוגית, פעילות השרירים המתכווצים אובדת 5,6. מכיוון שמיקרו-סביבות מתירניות מסוימות מאפשרות התאוששות תפקודית מהירה ויעילה, החיפוש אחר חלבונים שיכולים לסייע לתהליך ההתחדשות הוא הכרח קבוע. כאן, שני הליכים שולבו כדי להעריך באופן ספציפי את התפקיד הפוטנציאלי של מניפולציה ביטוי חלבון שריר בהתחדשות לטווח קצר של NMJ לאחר פגיעה עצבית.
שריר ה-levator auris longus (LAL), הממוקם על פני השטח הגביים של הגולגולת, הוא שריר דק ושטוח השולט על תנועת הפינה. שריר LAL מורכב מרצועות רוסטרליות וקאודליות, שכל אחת מהן מכילה שתיים או שלוש שכבות של סיבי שריר 7,8. הענף האוריקולרי האחורי של עצב הפנים מעצבב את שריר ה-LAN, ויוצר דפוס עצבוב מתואר היטב המורכב מחמישה אזורי עצבוב רוסטרליים (R1-R5) ושני אזורי עצבוב קאודליים (C1-C2) 8,9,10. ה- LAL הוא שריר חשוף באופן שטחי ונגיש בקלות, ולכן השימוש בו דורש הליכים זעיר פולשניים. זה מאפשר הדמיה של NMJ באמצעות מיקרוסקופיה בזמן אמת, אספקת תרופות, כמו גם התערבות של ההכנות שרירים מלאים הן in vivo ו ex vivo11,12. בסך הכל, תכונות אלה הופכות את שריר LAL למודל מצוין לחקר התנהגות NMJ ותפקוד10,13.
אלקטרופורציה In vivo היא טכניקת העברת גנים המאפשרת שילוב של DNA אקסוגני ברקמה באמצעות חדירות חולפת של קרום התא וניידות של DNA בתוך התאים, שניהם נוצרים לאחר גרימת שדה חשמלי14,15. הליך זה הוא מקומי וניתן לבצעו בכל שלב בהתפתחות החיה. בהתחשב בתכונות הייחודיות של שריר RAL, אלקטרופורציה in vivo שלו מייצגת הליך זעיר פולשני, יעיל ביותר ומהיר16, המאפשר לצפות בביטוי חלבון חזק יומיים או שלושה לאחר אלקטרופורציה.
הליך ריסוק עצב הפנים נמצא בשימוש נרחב במחקר מכיוון שהוא מציע מספר יתרונות 5,17,18. פרוטוקול זה שונה בעבר כדי להתמקד באופן ספציפי בענף האוריקולרי האחורי של עצב הפנים המעצבב את שרירי הגולגולת, כולל שריר ה- RAL, כדי למנוע שיתוק פנים; כתוצאה מכך, עכברים אינם זקוקים לטיפול מיוחד לאחר ניתוח (למשל, משחת עיניים סיכה לאובדן רפלקס מצמוץ). מכיוון שעצבוב NMJ בשריר LAL מתחיל בין 7-9 ימים לאחר פציעה6, זהו מודל טוב לעצבוב ריינרבציה לטווח קצר בהשוואה למודל הנפוץ של פציעת ריסוק עצבים של העצב הסיאטי לעצבוב שרירי הגפיים האחוריות, שם עצבוב העצבוב מתרחש כשלושה שבועות לאחר פגיעה עצבית18.
השילוב של אלקטרופורציה in vivo ופגיעה בעצב הפנים בשריר LAL יאפשר לחוקרים להעריך את ההתנהגות של רכיבים סינפטיים כנגד אפנון חלבון שמקורו בשריר בזמנים שונים של התחדשות NMJ, כולל השפעות מורפולוגיות קצרות טווח וארוכות טווח 6,16, באמצעות מגוון רחב של טכניקות כולל בדיקות אימונוהיסטוכימיות, היסטולוגיות ותפקודיות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הליכי הניסוי מאושרים על ידי ועדת הביואתיקה באוניברסיטה האוסטרלית של צ'ילה, צ'ילה (פרוטוקול מס' 503/2023), ועוקבים אחר הנורמות שהוטלו על ידי ועדת הביואתיקה של הסוכנות הלאומית למחקר ופיתוח, צ'ילה (ANID), כמו גם הנחיות דירקטיבת המועצה האירופית לטיפול בחיות מעבדה. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בעכברי CF-1 בוגרים (בני 3-6 חודשים) משני המינים (30-45 גרם). המתת חסד הושגה על ידי מנת יתר של חומר נדיף, הרדמה, ואחריה exsanguination. הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר מפורטים בטבלת החומרים.
1. אלקטרופורציה של שרירי LAL in vivo
- הכנה
- הרגיעו בעדינות את העכבר בתא השראה אקרילי תחת שאיפה של 2.5% איזופלואור עם 0.8 ליטר/דקה חמצן (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי מוסדות). לאחר מכן, שמרו על הרגעת עכברים באמצעות מסכת צינור אף המחוברת למכונת הרדמה באינהלציה תחת סטריאומיקרוסקופ מנתח.
הערה: ודא שהעכבר נמצא במצב שינה לפני תחילת ההליך; בדוק את רפלקס המגע של העכבר על ידי לחיצה עדינה על רגל אחת עם מלקחיים (בצע שלב זה בכל פעם לאחר גרימת הרדמה). - לחטא את אזור צוואר הרחם ברמה של תפר הקשת של הגולגולת עם chlorhexidine gluconate חיטוי 2% ולהזריק תת עורית 20 μL של 2 מ"ג / מ"ל hyaluronidase ב PBS באמצעות מזרק המילטון כדי להקל על גישת פלסמיד DNA למשטח השריר.
- כבה את זרימת האיזופלואור ואפשר לעכבר לנשום חמצן טהור למשך דקה אחת.
- שקול את העכבר כדי לחשב את מינון Meloxicam המתאים (ראה שלב 1.3.2).
- הניחו את בעל החיים בכלוב ריק (ללא מצעים) כדי להתאושש מההרדמה.
- להחזיר את החיה לדיור רגיל למשך 30 דקות16.
- הרגיעו בעדינות את העכבר בתא השראה אקרילי תחת שאיפה של 2.5% איזופלואור עם 0.8 ליטר/דקה חמצן (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי מוסדות). לאחר מכן, שמרו על הרגעת עכברים באמצעות מסכת צינור אף המחוברת למכונת הרדמה באינהלציה תחת סטריאומיקרוסקופ מנתח.
- הליך הניתוח
- יש להרדים מחדש את העכבר על ידי שאיפה של 2.5% איזופלואור עם תערובת חמצן של 0.8 ליטר/דקה (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו במוסדות) ולשמור אותו מורדם לאורך כל ההליך הכירורגי באמצעות מכשיר הרדמה באינהלציה, תחת סטריאומיקרוסקופ מנתח.
- יש לגלח את אזור צוואר הרחם באמצעות סכין גילוח פיפיות ולחטא עם כלורהקסידין ואתנול 70% 3 פעמים.
- בצע חתך של 8 מ"מ מעל תפר הגולגולת וחשף את שריר LAL על ידי הסרה עדינה של השומן ורקמת החיבור הממוקמת ממש מתחת לעור באמצעות מספריים/מלקחיים.
הערה: שריר LAL הוא השריר השטחי ביותר באזור הגולגולת לאחר חתך בעור. ניתן לזהות אותו בקלות על ידי כיוון סיבי השריר הפועלים באלכסון מהגולגולת האמצעית לכיוון כל פינה 8,16. - באמצעות מזרק המילטון, מזריקים 10 μL של DNA המתקבל מסחרית (0.8-1 מיקרוגרם / μL) ב- PBS לתוך הפאשיה המופצת בכל השריר, ויוצרת בועה.
- הניחו שתי אלקטרודות מחט זהב במרחק של 5 מ"מ זו מזו, מקבילות ומעל סיבי שריר, ותופסות את כל אורכו של שריר ה-LAL (איור 1A).
- באמצעות אלקטרופורטור, ליצור חמישה פולסים של 100 V / cm של 20 ms משך כל אחד, בתדר 1 הרץ.
- חזור על ההליך בשריר LAL הנגדי (חזרה על שלבים 1.2.4-1.2.6).
- תפירה והחלמה
- תפר (גודל זן 5/0, מחט HR15) את העור עם חוט חומצה פוליגליקולית נספג.
- הזריקו תת עורית את Meloxicam משכך כאבים במינונים של 1-2 מ"ג / ק"ג משקל כדי להפחית את הכאב לאחר הניתוח.
- כבה את זרימת האיזופלואור ואפשר לעכבר לנשום חמצן טהור למשך דקה אחת.
- הניחו את בעל החיים בכלוב ריק (ללא מצעים) כדי להתאושש מההרדמה.
- להחזיר את החיה לדיור הרגיל שלה לפקח על זה במשך 2 ימים לאחר הניתוח או עד ההתאוששות שלה. עקוב אחר סימני כאב או לחץ, תוך הקצאת ציונים לכל אחד מהפרמטרים השונים בהתחשב בקריטריונים ההומניים שתוארו קודם לכן19.
הערה: מקם את העכבר בפד מחומם המכוסה בכרית כירורגית כדי למנוע מטמפרטורת גופו לרדת במהלך הניתוח. נסו לא לקחת יותר מ -30 דקות להליך הכירורגי, ובכך למנוע מהעכבר למות עקב הרדמה עודפת. אם החלבון המובע מניב רמות פלואורסצנטיות נמוכות, מומלץ לבצע אלקטרופורציה משותפת עם נותב (למשל, tdTomato או GFP) ביחס של 1:5 (נותב: DNA של עניין).
2. ניתוק עצבים כתוצאה מפגיעה עצבית
הערה: פרוטוקול זה הוא שינוי של פרוטוקול17 שתואר קודם לכן. בצע הליך זה עם הבדל של לפחות 3 ימים מן electroporation. בהתאם לשאלות המחקר, הליך זה יכול להתבצע לפני או אחרי אלקטרופורציה.
- הרדמה ומיקום בעלי חיים
- יש לבצע הרגעה של בעלי חיים בתא השראה אקרילי תחת שאיפה של 2.5% איזופלואור עם 0.8 ליטר/דקה חמצן (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי מוסדות).
- משקל העכבר כדי לחשב את מינון Meloxicam (ראה שלב 2.3.2).
- שמור על הרגעת עכברים באמצעות מסכת צינורות אף המחוברת למכונת הרדמה אינהלציה תחת סטריאומיקרוסקופ מנתח.
- מקם את העכבר על צדו השמאלי (כדי לעצבן את שריר LAL הימני). הדביקו את אוזן ימין לכיוון האף כדי לחשוף את האזור האחורי של הפינה.
- הליך הניתוח
- יש לגלח את האזור האחורי של הפינה באמצעות סכין גילוח פיפיות ולחטא עם כלורהקסידין ואתנול 70% 3 פעמים.
- יש לאתר את הווריד האאוריקולרי האחורי ולבצע חתך בעור, במרחק של כ-2 מ"מ ממנו, של כ-5 מ"מ עם מספריים קפיציים. הימנעו מחיתוך כלי דם ו/או רקמת שריר.
- חותכים את השומן ואת רקמות החיבור עם מלקחיים ומספריים. מצא את עצב אביזר עמוד השדרה; המשיכו עד למציאת הבטן של שריר הקיבה ותעלת השמע הסחוסית (רקמה לבנה שקופה למחצה) (איור 2A).
- אתר את תחילת הסתעפות עצב הפנים ממש מתחת לשריר הקיבה.
- עקוב אחר הענף האאוריקולרי האחורי (הענף הגבי ביותר של עצב הפנים), והסר בעדינות את רקמת החיבור המקיפה אותו, תוך הימנעות ממניפולציה עצבית ישירה.
- למחוץ את הענף האוריקולרי האחורי של עצב הפנים במשך 30 שניות, הפעלת לחץ מתמיד על העצב עם מלקחיים עם קצה זוויתי 45 מעלות.
- תפירה והחלמה
- תפר (גודל זן 5/0, מחט HR15) את העור עם חוט חומצה פוליגליקולית נספג.
- הזריקו תת עורית את Meloxicam משכך כאבים במינונים של 1-2 מ"ג / ק"ג משקל כדי להפחית את הכאב לאחר הניתוח.
- הסר את הקלטת מהאוזן, כבה את זרימת האיזופלואורן ואפשר לעכבר לנשום חמצן טהור למשך דקה אחת.
- הניחו את בעל החיים בכלוב ריק (ללא מצעים) כדי להתאושש מההרדמה.
- להחזיר את העכבר לדיור הרגיל שלה לפקח על זה במשך 2 ימים לאחר הניתוח או עד ההתאוששות שלה.
- לאחר ההתאוששות, בדוק את העכבר עבור כשלים בתנועה של האוזן הפגועה כסימן של ניתוק עצבים יעיל.
הערה: בבעלי חיים להדברת בושה יש לבצע חתך בעור, לחשוף את עצב הפנים מבלי לגעת בו ישירות, ולאחר מכן לתפור.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התפוקה הקוונטית הפלואורסצנטית הגבוהה של חלבון tdTomato20 הופכת אותו לעוקב מתאים ליעילות אלקטרופורציה. לכן, הביטוי של חלבון tdTomato בשרירי LAL על-ידי אלקטרופורציה in vivo הוערך (איור 1). שרירי LAL נותחו 21 יום לאחר ההתחשמלות. תכשירים שלמים מראים את הרצועה הקאודלית הדקה (cLAL, מצולע ציאן) של שריר LAL עם שני אזורי העצבוב שלו, ואת הרצועה הרוסטרלית העבה (rLAL, מצולע צהוב) עם חמשת אזורי העצבוב שלה 8,10 (
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
השילוב של אלקטרופורציה של שרירי in vivo וניתוק עצבים הוא גישה ניסיונית רבת ערך לחקר נישה רגנרטיבית ב- NMJ4. מכיוון ששריר LAL חשוף באופן שטחי, ניתן להשלים בקלות הליכים משולבים אלה עם מתן בדיקות או תרופות שעלולות להשפיע על ביטוי או פעילות החלבונים12. בנוסף, אלקטרופורציה של גנים מדווחים לתוך שריר LAL יכולה לספק כלי רב ערך לעקוב אחר הפעלה או עיכוב של מסלולי איתות בהקשר של נזק עצבי ו / או התחדשות NMJ.
שני הה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לסביבה השיתופית והמגרה מאוד של חברי מעבדת NeSt על דיון מועיל והערות על עבודה זו. העבודה במעבדת NeSt ממומנת כיום על ידי FONDECYT 1221213. התוכנית באיור 1A נוצרה עם BioRender.com.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| #5/45 מלקחיים דומונט | כלים מדעיים | 11251-35 | עיקור לפני השימוש |
| אנטי 2H3 | DSHB | לדלל 1: 300 | |
| אנטי S100 מוכן לשימוש | Dako | IR504 | לדלל 1: 5 |
| אנטי SV2 | DSHB | לדלל 1: 50 | |
| כלורהקסידין גלוקונאט 2% | DifenPharma | ||
| אור קר מנתח סטריאומיקרוסקופ | מוטי | דגם SMZ-171 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | לדלל 1 : 100 |
| דומונט #5SF מלקחיים | כלים מדעיים עדינים | 11252-00 | לעקר לפני השימוש |
| Dumont Mini Ocps – סגנון 5 | כלי מדע עדין | 11200-14 | עיקור לפני השימוש |
| ECM 830 אלקטרופורטור | BTX מכשיר | ||
| אלקטרודות מסוג מחט זהב | Genetrodes, BTX | 45-0114 | המילטון 10 מ"מ ישר |
| nbsp; | המילטון | 80400 | |
| Hyaluronidase | Sigma-Aldrich | H3884 | |
| מכונת הרדמה אינהלציה | SciVerma Scientific | M3000 שולחן עליון | |
| Isoflurane | Baxter | 218-082 | |
| עכברים | Instituto de Salud Publica - צ'ילה | עכברים בוגרים (בני 3-6 חודשים) CF-1, משני המינים (30-45 גרם) | |
| סכיני גילוח | Schick | ||
| Suture Glicosorb 5/0 | TAGUM | GS0812. J | חוט חומצה פוליגליקולית נספגת |
| tdTomato פלסמיד | Addgene | 54642 | tdפלסמיד עגבניות בשליטת מקדם ה-CMV |
| טרמדול הידרוכלוריד 5% (טריאמקול) | גרור פארמה | ||
| ואנאס מספריים אביב | כלים מדעיים משובחים | 91500-09 | עיקור לפני השימוש |
| WGA Alexa Fluor 488 | Invitrogen | W7024 | דילול |
| &אלפא;-BTX Alexa Fluor 488 | Invitrogen | B13422 | מדלל 1 : 500 |
מקורות
- Slater, C. R. The functional organization of motor nerve terminals. Prog Neurobiol. 134, 55-103 (2015).
- Sanes, J. R., Lichtman, J. W. Development of the vertebrate neuromuscular junction. Annu Rev Neurosci. 22, 389-442 (1999).
- Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. Neuromuscular synaptogenesis: Coordinating partners with multiple functions. Nat Rev Neurosci. 15 (11), 703-718 (2014).
- Zelada, D., Bermedo-Garcia, F., Collao, N., Henriquez, J. P. Motor function recovery: Deciphering a regenerative niche at the neuromuscular synapse. Biol Rev Camb Philos Soc. 96 (2), 752-766 (2021).
- Kobayashi, J., et al. The effect of duration of muscle denervation on functional recovery in the rat model. Muscle Nerve. 20 (7), 858-866 (1997).
- Bermedo-Garcia, F., Zelada, D., Martinez, E., Tabares, L., Henriquez, J. P. Functional regeneration of the murine neuromuscular synapse relies on long-lasting morphological adaptations. BMC Biol. 20 (1), 158(2022).
- Erzen, I., Cvetko, E., Obreza, S., Angaut-Petit, D. Fiber types in the mouse levator auris longus muscle: A convenient preparation to study muscle and nerve plasticity. J Neurosci Res. 59 (5), 692-697 (2000).
- Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo. Neuromuscul Disord. 20 (11), 740-743 (2010).
- Murray, L. M., Talbot, K., Gillingwater, T. H. Review: Neuromuscular synaptic vulnerability in motor neurone disease: Amyotrophic lateral sclerosis and spinal muscular atrophy. Neuropathol Appl Neurobiol. 36 (2), 133-156 (2010).
- Murray, L. M., et al. Selective vulnerability of motor neurons and dissociation of pre-and postsynaptic pathology at the neuromuscular junction in mouse models of spinal muscular atrophy. Hum Mol Genet. 17 (7), 949-962 (2008).
- Wright, M., Kim, A., Son, Y. J. Subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice. J Vis Exp. (55), e3124(2011).
- Zelada, D., Barrantes, F. J., Henríquez, J. P. Lithium causes differential effects on postsynaptic stability in normal and denervated neuromuscular synapses. Sci Rep. 11 (1), 17285(2021).
- Klooster, R., et al. Muscle-specific kinase myasthenia gravis IgG4 autoantibodies cause severe neuromuscular junction dysfunction in mice. Brain. 135, Pt 4 1081-1101 (2012).
- Mcmahon, J. M., Signori, E., Wells, K. E., Fazio, V. M., Wells, D. J. Optimisation of electrotransfer of plasmid into skeletal muscle by pretreatment with hyaluronidase: Increased expression with reduced muscle damage. Gene Ther. 8 (16), 1264-1270 (2001).
- Difranco, M., Quinonez, M., Capote, J., Vergara, J. DNA transfection of mammalian skeletal muscles using in vivo electroporation. J Vis Exp. (32), e1520(2009).
- Ojeda, J., et al. The mouse levator auris longus muscle: An amenable model system to study the role of postsynaptic proteins to the maintenance and regeneration of the neuromuscular synapse. Front Cell Neurosci. 14, 225(2020).
- Olmstead, D. N., et al. Facial nerve axotomy in mice: A model to study motoneuron response to injury. J Vis Exp. (96), e52382(2015).
- Magill, C. K., et al. Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: A confocal microscopic study in transgenic mice. Exp Neurol. 207 (1), 64-74 (2007).
- Lloyd, M., Wolfensohn, S. Practical use of distress scoring systems in the application of humane endpoints. Humane Endpoints in Animal Experiments for Biomedical Research. , 48-53 (1999).
- Shaner, N. C., et al. Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. Red fluorescent protein. Nat Biotechnol. 22 (12), 1567-1572 (2004).
- Perez, V., et al. The p75(ntr) neurotrophin receptor is required to organize the mature neuromuscular synapse by regulating synaptic vesicle availability. Acta Neuropathol Commun. 7 (1), 147(2019).
- Boehm, I., et al. Comparative anatomy of the mammalian neuromuscular junction. J Anat. 237 (5), 827-836 (2020).
- Jones, R. A., et al. Cellular and molecular anatomy of the human neuromuscular junction. Cell Rep. 21 (9), 2348-2356 (2017).
- Jones, R. A., et al. NMJ-morph reveals principal components of synaptic morphology influencing structure-function relationships at the neuromuscular junction. Open Biol. 6 (12), 160240(2016).
- Ma, C. H., et al. Accelerating axonal growth promotes motor recovery after peripheral nerve injury in mice. J Clin Invest. 121 (11), 4332-4347 (2011).
- Sakuma, M., et al. Lack of motor recovery after prolonged denervation of the neuromuscular junction is not due to regenerative failure. Eur J Neurosci. 43 (3), 451-462 (2016).
- Mir, L. M., et al. High-efficiency gene transfer into skeletal muscle mediated by electric pulses. Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (8), 4262-4267 (1999).
- Kleeman, B., et al. A guide to choosing fluorescent protein combinations for flow cytometric analysis based on spectral overlap. Cytometry A. 93 (5), 556-562 (2018).
- Morris, L. M., Klanke, C. A., Lang, S. A., Lim, F. Y., Crombleholme, T. M. Tdtomato and EGFP identification in histological sections: Insight and alternatives. Biotech Histochem. 85 (6), 379-387 (2010).
- Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. The levator auris longus muscle of the mouse: A convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins. Neurosci Lett. 82 (1), 83-88 (1987).
- Sokołowska, E., Błachnio-Zabielska, A. U. A critical review of electroporation as a plasmid delivery system in mouse skeletal muscle. Int J Mol Sci. 20 (11), 2776(2019).
- Pérez-García, M. J., Burden, S. J. Increasing musk activity delays denervation and improves motor function in ALS mice. Cell Rep. 2 (3), 497-502 (2012).
- Valdez, G., et al. Attenuation of age-related changes in mouse neuromuscular synapses by caloric restriction and exercise. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14863-14868 (2010).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
