מאמר שיטה

הדמיה וכימות של כלי הדם בכבד של עכברים באמצעות אולטרסאונד דופלר מהיר במיוחד

DOI:

10.3791/66789

⸱

19 ביולי 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine - Nephrology, Leiden University Medical Center, 2Einthoven Laboratory of Vascular and Regenerative Medicine, Leiden University Medical Center, 3Institute Physics for Medicine Paris, Inserm, ESPCI-Paris-PSL, 4Department of Surgery - Vascular surgery, Leiden University Medical Center, 5Department of Surgery, Brigham & Women's Hospital, Harvard Medical School, 6The Novo Nordisk Foundation Center for Stem Cell Medicine (reNEW), Leiden University Medical Center

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אולטרסאונד דופלר מהיר במיוחד (UFUS) עם רזולוציה מרחבית גבוהה (100 מיקרומטר) ורגישות מייצג שיטת הדמיה לא פולשנית מתאימה להשגת סקירה איכותית מקיפה של כלי הדם בכבד. UFUS גם מקל על מדידות כמותיות של המיקרו-כלי דם, במטרה לשפר את ההבנה שלנו לגבי מנגנוני מחלות כלי דם.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הדמיה לא פולשנית in vivo של כלי הדם היא כלי רב עוצמה לחקר מנגנוני מחלה במכרסמים. כדי להשיג הדמיה ברגישות גבוהה של המיקרו-כלי דם באמצעות שיטות אולטרסאונד דופלר, עדיפות שיטות הדמיה המשתמשות ברעיון של הדמיה מהירה במיוחד. על ידי הגדלת קצב הפריימים של סורק האולטרסאונד לאלפי פריימים לשנייה, ניתן לשפר את רגישות זרימת הדם עד ל-2 מ"מ לשנייה ולקבל מידע פונקציונלי על המיקרו-סירקולציה בהשוואה לרגישות של כ-1 ס"מ לשנייה במצבי דופלר קונבנציונליים. בעוד שהדמיית אולטרסאונד דופלר מהירה במיוחד (UFUS) אומצה במדעי המוח, שם היא יכולה ללכוד את פעילות המוח באמצעות צימוד נוירו-וסקולרי, היא מציבה אתגרים גדולים יותר בעת הדמיית כלי הדם של איברי הבטן עקב תנועות גדולות יותר הקשורות לנשימה. הכבד, הממוקם אנטומית מתחת לסרעפת, רגיש במיוחד לתנועה מחוץ למישור ולתנועת נשימה מתנודדת. ממצאים אלה לא רק משפיעים לרעה על הדמיית דופלר אלא גם מסבכים את הניתוח האנטומי של מבני כלי הדם וחישוב פרמטרים של כלי הדם. כאן, אנו מציגים ניתוח הדמיה איכותי וכמותי של כלי הדם בכבד בעכברים על ידי UFUS. אנו מזהים מבני כלי דם אנטומיים עיקריים ומספקים איורים גרפיים של האנטומיה המקרוסקופית של הכבד, ומשווים אותה להערכה אנטומית מעמיקה של כלי הדם בכבד על סמך קריאות דופלר. בנוסף, פיתחנו פרוטוקול כימות למדידות חזקות של נפח הדם בכבד של המיקרו-כלי דם לאורך זמן. כדי לשקול מחקר נוסף, ניתוח כלי דם איכותני מספק סקירה מקיפה ומציע טרמינולוגיה סטנדרטית לחוקרים העובדים עם מודלים עכבריים של מחלות כבד. יתר על כן, הוא מציע את ההזדמנות ליישם אולטרסאונד כשיטה משלימה לא פולשנית לבדיקת פגמים בכלי הדם בכבד in vivo ולמדידת שינויים מיקרו-וסקולריים תפקודיים עמוק בתוך האיבר לפני חשיפת חריגות כלי דם ברמות בקנה מידה מיקרוני באמצעות צביעה ex vivo על קטעי רקמה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודלים פרה-קליניים של עכברים נמצאים בשימוש נרחב לחקר ההופעה וההתקדמות של מחלת כלי דם בכבד 1,2. מעקב אורכי הוא יתרון, מכיוון ששינויים בנימי הדם מתרחשים בשלב מוקדם של המחלה לפני הופעת דלקת ופיברוזיס, מה שעלול לגרום לשחמת לאורך זמן1. כדי לחקור את התקדמות המחלה, כלי הדמיה רבי עוצמה חיוניים להדמיה ומדידה של תפקוד כלי הדם in vivo. אולטרסאונד דופלר מהיר במיוחד (UFUS) מייצג שיטה מתאימה בשל עלותו הנמוכה, הניידות, הפשטות והיכולת בזמן אמת, אך גם מכיוון שמדובר בהליך לא פולשני וחוסך זמן3. בהשוואה לאולטרסאונד דופלר קונבנציונלי, שעשוי להגיע לרזולוציה מרחבית דומה אך מוגבל לזרימת דם גדולה, UFUS מאפשר זיהוי של זרימת דם איטית עד 2 מ"מ לשנייה מ-1 ס"מ לשנייה, מה שמאפשר לחקור את תרומתם של כלי דם קטנים בהרבה4. UFUS משפר את הרגישות, המושגת באמצעות שידורי גל מישור עם שדה ראייה גדול באינסוניפיקציה בודדת כדי להגדיל את קצב הפריימים ובכך את מספר תמונות האולטרסאונד הזמינות5. המספר הגבוה של דגימות זמניות משפר את ביטול האות המגיע מהרקמה ומשפר את זיהוי ההדים המוחזרים ממפזרי הדם, ומגביר את הרגישות ללא צורך בחומרי ניגוד6. על ידי הערכת האנרגיה של הדי מפזר הדם באמצעות הערכת דופלר העוצמה, מתקבלת כמות פרופורציונלית לנפח הדם בכל פיקסל גם אם כלי הדם קטנים מכדי לפענח אותם בתמונה7.

UFUS מציע שילוב חיובי של רזולוציה מרחבית וזמנית, מה שהופך אותו לכלי מתאים להערכה איכותית של ארכיטקטורת כלי הדם בכבד. בעוד שהפעלת סורק אולטרסאונד היא פשוטה יחסית, נדרשת הבנה מקיפה של אנטומיית הכבד כדי לנווט דרך כלי הדם בכבד של אונות הכבד השונות בעכברים. מחקרים אחרונים התמקדו בתיאור אנטומיה של כבד עכברים ועץ כלי הדם בכבד באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת תלת מימדית (μ-CT)8,9. למרות שחלק מההבדלים המורפולוגיים בין כבד אנושי לעכבר מתועדים היטב10, מחקר המבוצע במכרסמים מאמץ לעתים קרובות טרמינולוגיות אנטומיות הרלוונטיות לבני אדם, מה שמוביל לבלבול מסוים בהקשר של בעלי חיים בעלי ארבע רגליים. אפילו מינוח סטנדרטי מוכר, כגון Nomina Anatomica Veterinaria (NVA), חסר מידע מספיק על טרמינולוגיות עקביות למבני כלי דם בכבד מכרסמים11. מעבר לאתגר של מבנים אנטומיים מתועדים בצורה גרועה במכרסמים, מתעוררים קשיים גדולים עוד יותר בפירוש קריאות אולטרסאונד, במיוחד כאשר צפויה גישה הניתנת לשחזור.

השגת מידע תפקודי לא פולשני על איברים חיים בקני מידה מרחביים שונים מציבה אתגרים להדמיה in vivo 3. שיטות הדמיית כבד מתקדמות כגון CT, הדמיית תהודה מגנטית ואנגיוגרפיה (MRI/MRA), או הדמיית דופלר קונבנציונלית באמצעות גלים ממוקדים חיוניות להערכת התקדמות המחלה, אך הן נכשלות בלכידת רוב הדינמיקה של זרימת הדם למעט הדמיה פוטואקוסטית 12,13,14. ל-UFUS רגישות גבוהה והוא יכול לזהות זרימת דם איטית בכלי דם קטנים, שאינם מוגבלים לזרימה גדולה מסנטימטר לשנייה 4,15. לאחרונה פיתחנו שיטת הדמיה מותאמת אישית המבוססת על שיקולים אנטומיים באמצעות UFUS, המאפשרת מדידה אמינה של נפח הדם בכבד במודל עכבר עם הרחבת כלי דם16.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים את ההליך להדמיית UFUS לא פולשנית של הכבד באמצעות פלטפורמת אולטרסאונד זמינה מסחרית שפותחה במקור להדמיית מוח תפקודית. כדי לייעל את התהליך ולשפר את אחזור המידע, אנו מציעים המחשה מקיפה של כבד העכבר עם מינוח אנטומי ושיטת ניתוח מלאה. בנוסף, אנו מספקים ייצוג מפורט של קריאות ההדמיה שנרכשו כהתייחסות, המציין מבנים אנטומיים נפוצים וציוני דרך כדי לסייע בבחירת מישור תלוי מפעיל. יתר על כן, אנו כוללים המחשה רלוונטית של ניתוחים איכותיים וכמותיים של כלי הדם בכבד.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו על פי החקיקה האירופית (Directive 2010/63/EU) והנחיות ממשלת הולנד ואושרו על ידי הוועדה האתית לבעלי חיים של המרכז הרפואי של אוניברסיטת ליידן.

1. הכנת עכבר להדמיית UFUS (תזמון ~ 10 דקות)

  1. הכנת מערך הדמיה
    1. ג'ל העברת אולטרסאונד צנטריפוגה בצינורות של 50 מ"ל ב-100 x גרם למשך 3-5 דקות למניעת היווצרות בועות אוויר.
    2. הפעל את כרית החימום וחמם עד 35 מעלות צלזיוס. מלאו את מיכל המים המודפס בתלת מימד במים נטולי יונים.
      הערה: בועות מים או חלקיקים קטנים הנמצאים במים עלולים להפריע למדידת הדופלר.
  2. הרדמה של בעל החיים
    1. שקלו את החיה. נעשה שימוש בבני זוג זכרים ונקבות בני 8-16 שבועות עם משקל גוף של 19-32 גרם. הכן תערובת הרדמה של קטמין במינון מתן של 100 מ"ג/ק"ג וקסילזין 10 מ"ג/ק"ג ב-0.9% NaCl. הכינו את התערובת סטרילית וטרייה כל יום מכיוון שהתערובת אינה יציבה ועלולה לאבד מעוצמתה.
      הערה: משקל גוף החיה המועדף הוא בין 23-30 גרם.
    2. יש לחטא את מקום ההזרקה, כלומר את הרבע הימני או השמאלי התחתון של הבטן, באמצעות גזה ואתנול 70%. הזריק 10 מיקרוליטר/גרם משקל גוף תוך-צפקי (ip) עם מחט 27G ומזרק חד פעמי של 1 מ"ל או מזרק אינסולין 30G.
    3. החזירו את החיה לכלוב על כרית חימום מבלי לסגור את מכסה הכלוב. טיימר התחלה.
      הערה: הרדמה עמוקה אמורה להימשך כ-40 דקות. אם יש צורך בפגישת הדמיה ארוכה יותר, שקול להשתמש בהרדמה הפיכה, כגון תערובות של קטמין 60 מ"ג/ק"ג ומדטומידין 0.4 מ"ג/ק"ג ב-0.9% NaCl ואחריו היפוך עם הזרקה תת עורית של אטיפמזול 1 מ"ג/ק"ג. הרדמה בהזרקה עדיפה על פני הרדמה באינהלציה בגלל מערך ההדמיה.
    4. בדוק את יעילות ההרדמה. ודא אם ההרדמה פועלת על ידי צביטה עדינה של הכפות האחוריות לאחר כ-5 דקות. אם בעל החיים עדיין מגיב, המתן עוד 2-3 דקות כדי להשיג הרדמה מלאה.
    5. מרחו משחה עיניים למניעת ייבוש הקרנית וטראומה בעיניים כאשר בעל החיים ישן עמוק. בדוק שוב את הרפלקסים והתחל את ההליך רק כאשר החיה אינה מראה תגובה לצביטה.
  3. הכנת אזור ההדמיה (איור 1)
    1. חתוך את בטן החיה בעדינות בעזרת גוזם וטרינר בזמן שהוא מונח על כרית חימום. בצע את הקיצוץ בעדינות רבה מבלי להפעיל דחיסה על החזה או הבטן.
    2. מרחו קרם אפילציה לא יותר משתי דקות.
      זהירות: אין להאריך את זמן הדגירה של קרם האפילציה, מכיוון שהוא עלול לגרום לדלקת בעור. זה לא רק משפיע על איכות ההדמיה אלא גם עלול לגרום לאי נוחות לבעל החיים.
    3. הסר את קרם האפילציה עם כמה טישו נייר ונקה בעדינות במים חמים.
  4. מקם את החיה ואת מערך ההדמיה למדידות דופלר (איור 2A).
    1. מקם את החיה בגב על כרית חימום ואבטח בעדינות את הכפות באמצעות סרט. יש להרטיב את העור בכמות קטנה של מים חמים.
    2. מרחו את ג'ל העברת האולטרסאונד הצנטריפוגה ישירות על העור המגולח באמצעות מזרק של 20 מ"ל.
      הערה: בועות אוויר עלולות להשפיע על הדמיית דופלר ולגרום לחפצים.
    3. הנח את מיכל המים המודפס בתלת מימד מלא במים מעל החיה. ודא שגובה מיכל המים מתאים לבעל החיים, כ-1 מ"מ מעליו, ואינו סוחט את החיה.
    4. בדוק אם יש אוויר בין ג'ל העברת האולטרסאונד לתרמופלסטי הפולימתילפנטן (PMP) של מיכל המים.

2. פעולת בדיקה ובחירת מישור (תזמון ~ 10 דקות)

  1. הפעל את התוכנה וצור הפעלה ניסיונית במערכת. הפעל את תוכנת הסריקה.
    הערה: תוכנת סריקה משולבת במערכת.
  2. מרכז את המנועים על ידי לחיצה על כן בחלון המוקפץ. מערכת ממונעת משמשת לשליטה מרחוק על הגשושית על ידי תוכנת סריקה. על ידי ריכוז המנועים, הגשושית תנוע אוטומטית לשלושה כיוונים, כלומר אנכית, לרוחב ומסתובבת. ודא שאף חפץ לא מפריע למסלול הגשושית כדי למנוע נזק לציוד.
    הערה: חיוני למרכז את המנועים; כישלון לעשות זאת עלול להוביל לתפקוד לקוי של התוכנה.
  3. צור הפעלה ניסיונית חדשה על-ידי בחירה באפשרות הפעלה מהתפריט. מלא את המידע הנדרש בלוח ההפעלה, כולל פרויקט, נושא, הפעלה, שם משתמש, הערה ותגית. לחץ על אימות.
    הערה: יש ליצור את ההפעלה לפני רכישה או שמירה של נתוני הדמיה. ניתן לשנות את פרטי ההפעלה במהלך הניסוי, אך זכור שהוא ישנה גם את היעד לשמירת נתונים.
  4. מקם את הגשושית. הגשושית האולטראסונית הליניארית של 15 מגה-הרץ עם 128 אלמנטים מחוברת למערכת באמצעות מערכת ממונעת המורכבת ממודול מנוע בעל ארבעה צירים, כלומר שלושה כיווני תנועה תרגומיים וסיבובית אחת.
    1. עבור לתפריט Move probe והשתמש במערכת המיקום הנשלטת על ידי המחשב כדי להעביר את הגשושית למים במיכל המים המודפס בתלת מימד. השתמש בלחצני הבקרה המצוינים במיקום הבדיקה כדי להזיז את המנועים, והגדר את השלבים במ"מ לתנועה תרגומית (X, Y ו-Z) או ב-° לתנועה סיבובית (R). כדי למנוע תאונות בכיוון Z, הגדר את מגבלת Z בבטיחות.
      הערה: חיוני שאלמנטים של הגשושית יהיו במגע עם המים. עם זאת, הימנע מהזזת הגשושית לחלוטין למים, מכיוון שהדבר עלול לפגוע בציוד. אם המנועים אינם יכולים להגיע למיקום, מוצגת אזהרה מחוץ לסביבת העבודה.
    2. שמור את הקואורדינטות כמיקום ייחוס על ידי לחיצה על הגדר בית. אל תשנה תרגומים וסיבובים במקביל מכיוון ש-R הוא יחסי ל-X, Y ו-Z. לחץ תמיד על הגדר בית לפני שינוי R.
    3. הגדר פרמטרים של הדמיה והדמיה. עבור אל Live view תפריט ולחץ על Play כדי לבחור את מישור העניין.
      זהירות: הפעל רק תצוגה חיה או רכישה כאשר האלמנטים של בדיקת האולטרסאונד מוקפים בתווך התואם את העכבה האקוסטית כדי להבטיח את תוחלת החיים של הציוד ולמנוע התחממות יתר.
  5. בחר פרמטרי הדמיה ב-Preset.
    1. טען רצף אולטרה-רגיש דופלר של 10 אלפיות השנייה עם כפתור רצף העומס , לדוגמה, 11 גלי מישור מורכבים (זוויות מ-10° עד 10°) עם מתח הדמיה של 25 V וקצב פריימים דופלר של 10 ms.
      הערה: אין צורך להשתמש ברצף דופלר מהיר (למשל, 10 אלפיות השנייה) על מנת לדמות ולסנן את תנועות הנשימה של האיבר במהלך הניתוח.
    2. הגדר עומק הדמיה בין 1 מ"מ ל-50 מ"מ, עם עומק מרבי להדפסה של 50 מ"מ. הגדרת ברירת המחדל היא עומק של 9 מ"מ מ-1 מ"מ עד 10 מ"מ, כאשר העומק המומלץ הוא בין 2 מ"מ ל-12 מ"מ.
      הערה: בהתאם לגודל החיה ומיכל המים, ניתן להתאים את עומק ההדמיה לצרכים ספציפיים.
  6. בחר פרמטרים חזותיים.
    1. בחרו Doppler כדי לדמות את כלי הדם.
      הערה: עוצמת הפיקסלים ב-A.U. מייצגת את נפח הדם ויש להשוות אותה רק בעת שימוש באותו בדיקה ורצף.
    2. בחר Averaging להחלת חישוב ממוצע זמני כדי למטב את יחס האות לרעש.
      הערה: חישוב ממוצע זמני של התמונות משפר את איכות התמונה אך מפחית את קצב הפריימים. בהתאם למטרה, יש לבצע פשרה מתאימה.
    3. בחר דחיסת תמונה: לוגריתמי (גבוה), שורש ריבועי (בינוני) או ליניארי (נמוך). לחלופין, התאם את טווח הניגודיות באופן אוטומטי או ידני באמצעות מחוונים לאפשרויות ניגודיות גבוהה ונמוכה.
      הערה: הנתונים אינם מושפעים מבחירת דחיסת התמונה; זה משפיע רק על תצוגת ההדמיה בזמן אמת.
    4. בחר את קנה המידה של מפת הצבעים משחור ללבן על ידי סימון האפשרות אפור או מאדמדם-שחור לצהוב על ידי סימון חם.
  7. בחירת מישור (איור 2B)
    1. בחר את מישור ההדמיה בציוני דרך אנטומיים. עבור בין הדמיה של דופלר למצב B כדי להכיר את האנטומיה של אונות הכבד וכלי הדם.
    2. עצור את התצוגה החיה על ידי לחיצה על סמל עצור .
    3. עבור אל הזז בדיקה תפריט כדי לנווט בגשושית ובחר מישור על ידי לחיצה על הגדר בית כדי לשמור את הקואורדינטות כמיקום התייחסות. ודא שעץ כלי הדם מוגדר היטב ונראה עם כמה שפחות אות מחוץ למישור.
    4. חזור לתפריט Live View ולחץ על סמל העצירה .

3. רכישת סריקת דופלר (תזמון ~ 20 דקות)

  1. הפעל רכישת דופלר עם קצב פריימים של 10 אלפיות השנייה.
    1. עבור לתפריט fUS 2D כדי להמחיש וריאציות המודינמיות לאורך זמן במיקום ספציפי (איור 3). כדי להגביר את הניגודיות, יש לתת בולוס של 50 מיקרוליטר תוך ורידי (iv) מיקרו-בועות מוזרקות בריכוז של 2 x 108 מיקרו-בועות למ"ל לווריד הזנב.
    2. בברז קבוע מראש, הגדר את משך ההקלטה הכולל בשניות (30 שניות). בחר מצב רציף ללא הפסקה בין התמונות על ידי הגדרת זמן בין תמונות ל-0 שניות.
    3. לחץ על כפתור ההקלטה כדי להתחיל את הרכישה הדו-ממדית. ניתן לבטל את ההקלטה על ידי לחיצה על כפתור עצור . נתונים עלולים ללכת לאיבוד כאשר הרכישה נקטעת לפני השלמתה.
  2. דמיין והתאם את ההקלטה שנרכשה.
    1. שנה את הניגודיות ואת מפת הצבעים אם תרצה בהקש על תצוגה חזותית. הפעל מחדש את ההקלטה במידת הצורך על ידי גלילה בין המסגרות עם המחוון, הכלול בפונקציה זמן.
  3. שמור את הנתונים.
    1. ספק שם עבור ההקלטה שנרכשה כדי לשמור את הקובץ בתבנית .scan בתיקיית ההפעלה. חלון מוקפץ לשמירת הנתונים מוצע אוטומטית בסוף כל הקלטה. הנתונים נשמרים אוטומטית.
  4. הפעל רכישה נוספת על ידי לחיצה על הכרטיסייה קבועה מראש וחזור משלב 3.1.1 ואילך.
  5. הסר את מערך ההדמיה וטפל בבעל החיים.
    1. עבור אל הזז בדיקה תפריט כדי להזיז אנכית את הגשושית למעלה מחוץ למיכל המים המודפס בתלת מימד. הסר את ההתקנה והג'ל האולטראסוני ושחרר את החיה.
    2. המתת חסד של החיה כאשר תכנון הניסוי מגיע לנקודת הסיום; אחרת, המשך בשלבים הבאים.
    3. מרחו מעט קרם לחות על אזור העור המגולח של החיה אם מכוונים למדידות אורכיות.
    4. החזירו את החיה לכלוב ותנו לה להתעורר מההרדמה מתחת למנורת חום כדי למנוע היפותרמיה. עקוב אחר החיה בזמן ההתאוששות.
    5. החזר את החיה למתלה הכלוב המאוורר בנפרד כשהיא הולכת שוב כרגיל. סיים את הניסויים בחיות מעבדה לפני ניתוח מערך הנתונים.

4. ניתוח כמותי (תזמון ~ 1 שעות)

  1. פתח את קובץ ה- Script של הניתוח gui_analysis.m הזמין בקובץ משלים 1.
  2. בחר את הסריקה והגדר את הפרמטרים הכמותיים בהגדרות: 10 אזורי עניין (ROI) עם גודל ווקסל של 2 x 2. בחר 40 אלפיות השנייה עבור כל מסגרת כדי לבצע את שילוב דופלר.
  3. צייר את היקף כלי הדם של האיבר; 10 החזר ה-ROI ממוקמים אוטומטית בין עורקים הנראים בבירור וניתנים לכוונון ידני במידת הצורך (איור 4A). סגור את תיבת הדו-שיח הצפה כאשר אתה מרוצה מהמיקום. להבטיח רכישה יציבה (איור 4B) עבור חישוב נפח דם חזק, הימנעות מרכישות המושפעות מחפצי תנועה חזקים (איור 4C).
  4. כימות נפח הדם הממוצע בכבד ב-A.U. מתוך סך 10 החזר ה-ROI על ידי הערכה אוטומטית של הממוצע וסטיית התקן של ערכי המסגרת השקטה ברישום של 30 שניות (איור 4D).
    הערה: ניתן להעתיק/להדביק את טבלת הנתונים של עוצמות ההחזר על ההשקעה ישירות לקובץ גיליון אלקטרוני.
  5. חזור על הניתוח עבור לפחות שני מישורים נוספים, -0.3 מ"מ ו-0.6 מ"מ, בכיוון זנב. כמת את כל נתוני הרכישה לפני ביצוע הניתוח הסטטיסטי.
  6. בדוק את סטיית התקן של העוצמות על התמונה כולה וקבע חתך כממוצע הכולל (μ) עם 2 סטיות תקן (2σ) כדי לא לכלול באופן אובייקטיבי מדידות רגישות לחפצי תנועה (איור 4E).
    הערה: הממוצע וסטיית התקן של ערכי המסגרת השקטה המוערכים על פני התמונה כולה מופיעים בשורה הראשונה של טבלת הנתונים.
    זהירות: חפצי תנועה מונעים כימות חזק ויש לזהותם באופן אובייקטיבי על סמך ניתוח התמונה הזמנית כולה.
  7. קחו את הממוצע של כל נפח הדם הממוצע בכבד שכומת על פני 3 מישורים שונים ב-30 החזר ROI לכל חיה בשלב 4.3 (איור 4F). יש ליישם את מבחן ה-ROUT ב-1% בתוכנת ניתוח סטטיסטי כדי לזהות החזר ROI חריג לפני ממוצע של 30 החזר ROI לבעל חיים. כדי לשפר את הערכת נפח הדם, רשום מטוסים נוספים לכל בעל חיים.
  8. כדי לנהל טיפול ברכב, יש לחטא את מקום ההזרקה, כלומר את הרבע הימני או השמאלי התחתון של הבטן, באמצעות גזה ואתנול 70%. הזריק 20 מיקרוליטר של מי מלח או DMSO ip עם מחט 27G ומזרק חד פעמי של 1 מ"ל או מזרק אינסולין 30G או מתן 100 מיקרוליטר של (הידרוקסיפרופיל) מתיל צלולוז על ידי שימוש במחט הזנה רב פעמית 30G עם קצה עגול. שרטוט נתונים של 3 קבוצות שקיבלו מי מלח או DMSO על ידי ip או מתן דרך הפה (po) של תאית (איור 4G). בצע אנליזה בצורה עיוורת מבלי לחשוף את המצב ו/או הטיפול שקיבל.
    הערה: לניהול הרכב אין השפעה על מדידות נפח הדם.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעקבות הפרוטוקול, הדמיה של כלי הדם בכבד מתאפשרת על סמך סטנדרטיזציה של מבנים אנטומיים וטרמינולוגיה מתאימה (איור 1). כדי להציע מינוח סטנדרטי לחוקרים המשתמשים במודלים פרה-קליניים של כבד, הצגנו באופן סכמטי את מיקום הכבד הנפוץ בחלל הבטן של עכברים (איור 1A), סיפקנו את הסידור המבני של אונות הכבד השונות (איור 1B), וציינו את רשת כלי הדם העורקיים (איור 1C). מצויד במומחיות אנטומית, הדמיית UFUS in vivo בוצעה על ידי שימוש במיכל מים מודפס בתלת מימד כדי להפחית חפצי תנועה (איור 2A). העכבה האקוסטית תוקנה על ידי החדרת הגשושית למים ומריחת ג'ל העברת אולטרסאונד ישירות על העור המגולח של החיה. על ידי אימוץ מערך זה, הנשימה וחפצי תנועה אחרים מצטמצמים מכיוון שהגשושית אינה במגע ישיר עם החזה והבטן הנעים של החיה. בדרך זו, דמיינו את מבנה כלי הדם של האונה הימנית והשמאלית, שנגישים בקלות על ידי UFUS בשל מיקומם השטחי (איור 2B). אונות כבד אחרות, כגון האונה הזנבית והאונה המרובעת, ממוקמות עמוק יותר בגוף, מה שמקשה על זיהוי אנטומי של כלי הדם בכבד כראוי על ידי UFUS.

לאחר שהדגמנו את החשיבות של אינדיקציות ופרשנויות אנטומיות סטנדרטיות ומקובלות של מבני כלי דם, ביצענו סריקות דופלר מרובות במישורים שונים כדי לספק סקירה מקיפה של כלי הדם בכבד שצולמו על ידי UFUS משופר ניגודיות בעכברים (איור 3). תיארנו את רשת עורקי הכבד של אונות הכבד הבודדות, כלומר, אונות שמאל לרוחב (LL), שמאל מדיאלי (LM), ימין לרוחב (RL) וימין מדיאלי (RM). יתר על כן, עורקים עיקריים מסומנים, כגון אבי העורקים הבטני (AA), עורק הכבד (HA), עורק הכבד הצדדי השמאלי (LLHA) ועורק הכבד המדיאלי הימני (RMHA). חשוב לציין כי ניתן למקם את אונות הכבד בצורה מעט שונה בהתאם למיקום ולתנועה הפריסטלטית של המעי הדק (SM), כמו גם למצב מילוי הקיבה (S). סקירה משופרת זו של כל כלי הדם בכבד העכבר מספקת אטלס כלי דם מקיף להדמיית כבד in vivo על ידי UFUS.

בחירה מדויקת של מישורים אנטומיים היא חיונית להשגת קריאה כמותית הנגזרת מאונה אחת של כבד. ניתן להשיג מדידות נפח דם חזקות על ידי בחירה ידנית של 10 אזורי עניין (ROI) לכל מישור (איור 4A). לכימות אמין של נפח הדם של המיקרו-סירקולציה, יש צורך ברכישה יציבה עם שונות נמוכה בעוצמות התמונה הממוצעות. זה נקבע על סמך ערך התמונה הממוצע (MIV) של התמונה כולה לאורך זמן (איור 4B), בניגוד להקלטה הרגישה לחפצי תנועה משמעותיים (איור 4C). כדי לטפל בחפצי תנועה, הבחירה האוטומטית של MIV נמוך שימשה לכימות אמין של מדידות נפח הדם בכבד (איור 4D) על ידי התוויית סטיית התקן של כל ה-MIV הנמוך בזמן של תמונה שלמה (איור 4E). סריקות דופלר של מישורים מרובים לכל חיה מראות שונות פנימית והדדית מקובלת בתוך ובין עכברים מ-3 קבוצות שונות לאחר טיפול חריג ב-30 החזר ROI לכל חיה עם מבחן ROUT 1% (איור 4F). כדי לשפר את אומדן נפח הדם לכל בעל חיים, מומלץ להקליט מטוסים נוספים או להגדיל את מספר ההחזר על ההשקעה שנבחר לכל מטוס. בנוסף, ניתן להשתמש בקריאות נפח הדם כדי לפקח על טיפול תרופתי, המכוון במיוחד למיקרו-כלי דם. על ידי ניהול הרכב בשני מסלולי מתן הוכחנו שאין השפעה על מדידות נפח הדם בכבד (איור 4G). תוצאות אלו מצביעות על כך שמחיקת גנים או מתן טיפול אינם מושפעים ממתן הרכב, מה שמבטיח תכנון ניסיוני חזק. בסך הכל, פרוטוקול כמותי אובייקטיבי וניתן לשחזור מסופק למחקר עתידי לחקר פגמים בכלי הדם בכבד במודלים שונים של עכברים.

דיאגרמות אנטומיה של כבד מכרסמים; כולל אונות, עורקים, ורידים מסומנים.
איור 1: אנטומיה של כבד העכבר. (A) סקירה סכמטית של מיקום הכבד בחלל הבטן מתחת לסרעפת של העכבר. (B) תיאור סכמטי של כבד העכבר עם ארבע אונות כבד, כלומר אונה שמאלית, מרובעת, זנבית וימנית, ושלישיית הפורטל שמורכבת מווריד הפורטל, עורק הכבד וצינור המרה. (C) איור סכמטי של רשת העורקים של כלי הדם ההפטיים. זיהוי עורקי הכבד (HA) וענפים (ראמוס) עם מינוח לטיני מסופק. קיצור: HA = עורק הכבד. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

הגדרת הדמיית אולטרסאונד עם עכבר, המציגה תרשים אונות כיס המרה והכבד ותוצאות סריקת UFUS.
איור 2: הדמיית אולטרסאונד דופלר מהירה במיוחד (UFUS) של כלי הדם בכבד בעכברים. (A) סקירה סכמטית של מערך ניסוי להדמיה לא פולשנית in vivo . (B) איורים סכמטיים של כיוון ההדמיה והנציגים הקשורים של האונה המדיאלית הימנית והשמאלית, כמו גם האונה הצדדית השמאלית, שצולמו על ידי UFUS. קיצור: AA = אבי העורקים הבטן, LLL = האונה הצדדית השמאלית, אוהב את חיי = האונה האמצעית השמאלית, RML = האונה האמצעית הימנית. סרגל קנה מידה = 1 מ"מ. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

טומוגרפיה אופטית; תרשים אנטומי; מקטעי כבד, פרספקטיבה גולגולתית לזנב; ניתוח תמונה.
איור 3: אולטרסאונד דופלר אולטרה-מהיר (UFUS) מייצג משופר ניגודיות של כלי הדם בכבד העכבר. סקירה כללית של כל כלי הדם בכבד של עכבר בוגר המצולם ב-3 מצבים, כלומר, ימין לרוחב, מדיאלי ושמאל לרוחב, ב-4 מישורים מהגולגולת לכיוון הזנב. הייחוס ממוקם ישירות מתחת לסרעפת המצולמת במדיאלי ו-1 ס"מ לרוחב מימין ומשמאל, עם אותם מישורים בכיוון זנב. קיצור: AA = אבי העורקים הבטני, HA = עורק הכבד, LLL = האונה הצידית השמאלית, LLHA = עורק הכבד הצדדי השמאלי, אוהב את חיי = האונה המדיאלית השמאלית, RLL = האונה הצידית הימנית, RMHA = עורק הכבד המדיאלי הימני, RML = האונה המדיאלית הימנית, SI = המעי הדק, S = קיבה. סרגל קנה מידה 1 מ"מ. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

תמונות מיקרוסקופיה, תרשימי נתונים; ניתוח נוירו-וסקולרי, השוואת עומק מישורית, גרפים סטטיסטיים.
איור 4: אולטרסאונד דופלר אולטרה-מהיר (UFUS) מדידה כמותית של נפח הדם בכבד. (A) נציגי האונה המדיאלית (ML) של עכברי בקרה בוגרים מסוג C57BL/6 Wildtype במישור 1 שנבחרו מתחת לסרעפת, המתאים ל-0 מ"מ, מישור 2 ב-0.3 מ"מ ומישור 3 ב-0.6 מ"מ עם מבחר של 10 אזורי עניין (ROI). סרגל קנה מידה 1 מ"מ. איור של Power Doppler של שנות ה-30 עם (B) רכישה יציבה (אפור) ו-(C) תנועת רקמות (אדום) בהתבסס על ערכי תמונה ממוצעים ביחידות שרירותיות (A.U.) של התמונה כולה להערכה כמותית. (ד) זיהוי אוטומטי של עוצמות נמוכות (A.U.) למדידה כמותית של נפח דם לאורך זמן. (E) סטיית תקן (St. Deviation) של עוצמות נמוכות שנועדה לזהות רכישות לא יציבות (אדום) הנגרמות על ידי חפצי תנועה המסומנים על ידי ניתוק של הממוצע הכולל (μ) ממספר (N) של בעלי חיים מ-3 קבוצות עם הערכה של 2 SD (2σ) של סטיית תקן (SD) של עוצמות נמוכות (A.U.) במצב פיזיולוגי (אפור) בעכברי ביקורת בוגרים מסוג C57BL/6. (F) כימות של שינויים בנפח הדם שנמדדו in vivo לאורך זמן בממוצע על פני 3 מישורים, כלומר 30 החזר ROI בסך הכל לכל חיה, מיוצגים כעוצמת פיקסלים (A.U). זיהוי חריג על ידי מבחן ROUT 1%. (ז) אין הבדל בין סוג רכב המסירה לבין דרך הניהול. קבוצה 1 (n=6) קיבלה זריקה תוך-צפקית (ip) של מי מלח, קבוצה 2 (n=3) הזרקת ip של DMSO וקבוצה 3 (n=6) מתן דרך הפה (po) של תאית. ANOVA חד כיווני עם מבחן ההשוואות המרובות של דנט, ns P > 0.05. קיצור: A.U. = יחידות שרירותיות, DMSO = דימתיל סולפוקסיד, ip = תוך-צפק, po = מתן דרך הפה, ROI = אזור עניין, St. סטייה = סטיית תקן, UFUS = אולטרסאונד דופלר מהיר במיוחד. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

קובץ משלים 1: תסריט כמותי של אולטרסאונד דופלר מהיר במיוחד (UFUS) של מדידות נפח דם בכבד. Script gui_analysis.m מספק ממשק גרפי למיקום אוטומטי של אזור העניין (ROI) למדידות נפח דם. אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בפרוטוקול זה, אנו מדגימים כיצד לבצע הדמיית UFUS לא פולשנית של כלי הדם בכבד העכבר. אנו מציגים תיאור מפורט של הליך ההדמיה, הכולל טיפול בבעלי חיים, הפעלת סורק האולטרסאונד וניתוח נתונים לחישוב שינויים בנפח הדם in vivo. כדי להקל על פירוש נתוני אולטרסאונד, אנו מספקים סקירה מקיפה של המבנים האנטומיים שניתן לדמיין בבירור על ידי UFUS. יתר על כן, אנו מתארים הליך כימות סטנדרטי למדידות חזקות של פרמטרים של כלי הדם. השגת רזולוציה מתאימה אפשרית ללא שימוש בחומר ניגוד, המאפשר הערכה כמותית בטוחה ופשוטה של נפח הדם בכבד של המיקרו-סירקולציה. אנו מדגישים את השימוש במינוח אנטומי סטנדרטי כדי למנוע בלבול ופרשנות שגויה, במיוחד בעת הערכת מדידות כמותיות של מיקרו-כלי דם.

בעבר דווח על הדמיית UFUS של כלי דם של עכברים, בעיקר בתחום מדעי המוח7. הדמיית המוח אינה מושפעת לרעה מחפצי תנועה בניגוד לכבד, הרגיש מאוד לתנועת נשימה. בשל מיקומו האנטומי מתחת לסרעפת, יש לבצע הסרת שיער באזור הבטן בעדינות רבה כדי למנוע הכנסת נשימה לא סדירה על ידי מזעור כוחות פיזיים על אזור החזה והבטן. יתרה מכך, השגת דרגת הרדמה נכונה חיונית כדי להבטיח נשימה מתנדנדת סדירה, גורם שניתן לתקן בקלות יחסית בשלבים שלאחר העיבוד. הרגישות של UFUS שופרה כאן על ידי החלת מסנן פירוק ערך יחיד (SVD) להסרת חפצי תנועה6 ועל ידי צנזורה נוספת של פריימים בתנועה גבוהה. סרטי ה-Power Doppler בקצב הפריימים הגבוה נרכשים כאן ב-10 אלפיות השנייה כדי לאפשר לנו לדמיין ולמדוד עוד יותר את ההשפעה של תנועת הנשימה על פריימים שיצרו שיאים בעלי ערך גבוה עקב חפצי תנועה. לאחר מכן ניתן היה לזהות את קצב הנשימה מהשיא בהתמרת פורייה המהירה של אות התמונה הממוצע, וניתן להשליך את מסגרות השיא המתאימות לתנועה הגבוהה של האיבר.

הדמיית אולטרסאונד דופלר הניתנת לשחזור בתוך בעל חיים בודד לאורך זמן, כמו גם בין בעלי חיים במשקלי גוף שונים, עדיין יכולה להתמודד עם מספר מגבלות. ראשית, מיקום הכבד יכול להיות מושפע מגורמים כמו בטן מלאה מאוד ותנועה פריסטלטית של המעי. השפעה זו בולטת במיוחד כאשר בוחרים את אונת הכבד הצדדית השמאלית כהתייחסות. לכן, אנו ממליצים לבחור באונה הצדדית השמאלית רק בבעלי חיים גדולים יותר ומעדיפים את האונה האמצעית הימנית או השמאלית בבעלי חיים קטנים יותר. שנית, תנועות נשימה כבדות שאינן מתנודדות יכולות להתרחש אצל בעלי חיים במצוקה, וכתוצאה מכך חפצי תנועה שמאתגרים לתקן וכתוצאה מכך לא ניתן להשתמש בהם לחישוב נפח הדם. לפיכך, בחירה נכונה של הרדמה, יחד עם מינון המותאם למשקל הגוף, היא קריטית. לבסוף, מגבלת הרזולוציה מגבילה את ההדמיה של המיקרו-כלי דם בכבד, כלומר, ניתן לדמיין כלי דם בקוטר של עד 100 מ"מ3.

השימוש בחומרי ניגוד הוצע לאחרונה כדי לרכוש תמונה מפורטת של כלי הדם של העכבר על ידי מעקב אחר מיקרו-בועות. גישה כזו יכולה להשיג רזולוציה מרחבית גבוהה ולספק מדידות מהירות דם כמותיות17. עם זאת, מעקב אחר מיקרו-בועות נותר מאתגר מאוד עבור איברים פנימיים נעים, במיוחד כאשר הם נרכשים בדו-ממד.

כאן, הראינו כי מדידות נפח דם יציבות בכבד המתקבלות על ידי דופלר מהיר במיוחד יכולות להיות נרכשות בעכברי ביקורת משלוש קבוצות המקבלות כלי רכב שונים הניתנים על ידי זריקות ip או גבאז' דרך הפה. לאחרונה, מדידות נפח דם כאלה שימשו בהצלחה בעכבר מחלת כבדמודל 16. להרחבה, התרחבות כלי הדם זוהתה ברמה מיקרוסקופית אלקטרונית ואושרה על ידי מדידות כמותיות באמצעות UFUS. מחקר זה הדגיש את הרגישות של הערכה in vivo לחקירת פגמים בכלי הדם ברמה תפקודית וכמותית, אפילו עם אנגיו-ארכיטקטורת כבד שמורה, המבטיחה לאבחון וניטור קליניים.

לסיכום, פרוטוקול זה משמש כמדריך למחקרים איכותיים וכמותיים לא פולשניים של כלי הדם בכבד בעכברים. ניתן להשתמש בו גם למעקב אורכי בשל ההליך הלא פולשני והפשוט שלו. בנוסף, יש לו פוטנציאל לספק הערכות תפקודיות של כלי הדם.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

M. Tanter ו-T. Deffieux הם מייסדים שותפים ובעלי מניות של Iconeus. לכל המחברים האחרים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים ל-M.S. Zuurmond (המרכז הרפואי של אוניברסיטת ליידן) על הכנת האיורים הגרפיים. פרוטוקול זה נגזר והותאם מעבודתנו המקורית שפורסמה בעבר de Haan et al. 202216. פרויקט זה קיבל מימון מתוכנית המחקר והחדשנות Horizon 2020 של האיחוד האירופי במסגרת הסכם מענק מארי סקלודובסקה-קירי מס' 813839; הארגון ההולנדי למחקר ופיתוח בריאות (ZonMw) PTO 446002501 בשיתוף עם CVON-PHAEDRA Impact; בריאות הולנד (שיחת PPS-Match LUMC Top sector LSH 2020), פרויקט NV-STAB; המרכז לרפואת תאי גזע של קרן נובו נורדיסק הנתמך על ידי מענק של קרן נובו נורדיסק (NNF21CC0073729); על ידי פרויקט תוכנית EIC Pathfinder של מועצת החדשנות האירופית MICROVASC מס' 101070917; סוכנות המחקר הלאומית הצרפתית ANR-17-T171105J-RHUS-0009 פרויקט RHU Quid-Nash; סוכנות המחקר הלאומית הצרפתית ANR-22-CE19-0034-03, פרויקט Peri-fUS; ו-INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) מאיץ למחקר טכנולוגי באולטרסאונד ביו-רפואי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
(הידרוקסיפרופיל) מתיל צלולוז HPMCסיגמא-אולדריץ' H75090.5%
HPMC צנטריפוגה ZentriMix 380 RHettich3200
צינורות צנטריפוגה 50 מ"ל חרוטי פוליפרופילןסטרילי צינורות CELLSTAR227 261
קצות כותנהMeditip CleanG80215
מים נטולי יוניםבבית
קרם אפילציהבקרבת בית מרקחת
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)SigmaD2650-5X5MLסטרילי
אתנול מוחלטFRESENIUS KABI010-0622-1
מחט האכלה, לשימוש חוזרFST Fine Science Tools18064-20
מלקחיים עם קצה דק Dumont #5 מלקחייםFST Fine Science Tools11252-00
רפידות גזה 5 x 5 ס"מKlinipress175 004
GraphPad PrismGraphPad Software, Incגרסה 9
סקריפט ניתוח GUIInsermgui_analysis.mזקוק לסריקת דופלר של 10 אלפיות השנייה
כרית חימום 17 x 17 ס"מ, 6 WThermoLux Acculux461265
מזרק אינסולין 30G 0.30 x 8 מ"מ, 0.3 מ"ל ו- 0.5 מ"לBD Microfine + Demi25636
קטמין אנסקטיןDechraREG NL 111764100 מ"ג/מ"ל
Kimwipes מגב מוך נמוךKIMTECH ULINES-8115
סרט מעבדה 19 מ"מ x 50 מ' x 0.125 מ"מסטוקביסM451
תוכנת MATLABMathWorksגרסה R2022b
קרם לחותבקרבת בית מרקחת
מחט צהוב 30 גרם 0.3 x 13 מ"מBD Microlance304000
משחת עיניים Oculentum Simplexהוסיף Pharma220201
רקמות ניירבבית
סמן מעבדה קבועVWR52877-310
תמיסת מלח פיזיולוגית (NaCl 0.9%)FRESENIUS KABIB102986סטרילי
Sharps מיכל חד פעמי רפואי Dispo 2.5 ליטרAPmedicalUN3291
מנעול בטוח סטרילי 1.5 מ"ל צינורותEppendorf0030 120.086
מזרק 1 מ"לBD מזרק 303172
20 מ"ל Luer-LokBD Plastipak300629
טיימרWest Bend40053
גוזםExacta AesculapGT416
מהיר במיוחד פלטפורמת אולטרסאונדIconeus &   INSERM 'אולטרסאונד ביו-רפואי' ARTIconeus אב טיפוס אחדברצף 10ms
Aquasonic 100Parker Laboratories INC.BT-025-0037N
מיכל מים מודפס בתלת מימד 10 x 10 x 1.5 ס"מ פולימתילפנטן (PMP) 0.125 מ"מGoodFellow Cambridge limitedME311100/2קובץ CAD על פי בקשה
Xylazine SedamunDechraREG NL 1008420 מ"ג/מ"ל
פלסטיפק עם ג'ל שידור אולטרסאונד

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Poisson, J., et al. Liver sinusoidal endothelial cells: Physiology and role in liver diseases. J Hepatol. 66 (1), 212-227 (2017).
  2. Gracia-Sancho, J., Caparrós, E., Fernández-Iglesias, A., Francés, R. Role of liver sinusoidal endothelial cells in liver diseases. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 18 (6), 411-431 (2021).
  3. Deffieux, T., Demene, C., Pernot, M., Tanter, M. Functional ultrasound neuroimaging: a review of the preclinical and clinical state of the art. Curr Opin Neurobiol. 50, 128-135 (2018).
  4. Macé, E., et al. Functional ultrasound imaging of the brain: Theory and basic principles. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 60 (3), 492-506 (2013).
  5. Tanter, M., Fink, M. Ultrafast imaging in biomedical ultrasound. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 61 (1), 102-119 (2014).
  6. Demené, C., et al. Spatiotemporal clutter filtering of ultrafast ultrasound data highly increases Doppler and fUltrasound sensitivity. IEEE Trans Med Imaging. 34 (11), 2271-2285 (2015).
  7. Deffieux, T., Demené, C., Tanter, M. Functional ultrasound imaging: A new imaging modality for neuroscience. Neuroscience. 474, 110-121 (2021).
  8. Fiebig, T., et al. Three-dimensional in vivo imaging of the murine liver: A micro-computed tomography-based anatomical study. PLoS One. 7 (2), e31179(2012).
  9. Sänger, C., et al. Intrahepatic vascular anatomy in rats and mice - Variations and surgical implications. PLoS One. 10 (11), e0141798(2015).
  10. Higashiyama, H., et al. Anatomy of the murine hepatobiliary system: A whole-organ-level analysis using a transparency method. Anat Rec. 299 (2), 161-172 (2016).
  11. World Association of Veterinary Anatomists. , Available from: http://www.wava-amav.org/ (2023).
  12. Szklaruk, J., Bhosale, P., Luersen, G. State-of-the-art cross-sectional liver imaging: beyond lesion detection and characterization. J Hepatocell Carcinoma. 2, 101-117 (2015).
  13. Lv, J., Xu, Y., Xu, L., Nie, L. Quantitative functional evaluation of liver fibrosis in mice with dynamic contrast-enhanced photoacoustic imaging. Radiology. 300 (1), 89-97 (2021).
  14. Sun, T., et al. In vivo liver function reserve assessments in alcoholic liver disease by scalable photoacoustic imaging. Photoacoustics. 34, 100569(2023).
  15. Macé, E., et al. Functional ultrasound imaging of the brain. Nat Methods. 8 (8), 662-664 (2011).
  16. de Haan, W., et al. Endothelial Zeb2 preserves the hepatic angioarchitecture and protects against liver fibrosis. Cardiovasc Res. 118 (5), 1262-1275 (2022).
  17. Couture, O., Hingot, V., Heiles, B., Muleki-Seya, P., Tanter, M. Ultrasound localization microscopy and super-resolution: A state of the art. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 65 (8), 1304-1320 (2018).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Micro CT

מאמרים קשורים