מאמר שיטה

טיפול סיסטמי בעכברות לאחר לידה, נוער ועכברים בוגרים על ידי הזרקת סינוס רטרובולברית

4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66809

⸱

17 במאי 2024

 , 
1Metabolic Medicine Branch, National Human Genome Institute, National Institutes of Health

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מספק פרוטוקול וסרטון נלווה להזרקת סינוס רטרובולברי של עד נפח כולל של 150 μL עבור עכברים בוגרים לאחר לידה, צעירים ובוגרים. הליך זה מתאים במיוחד להזרקת עכברים קטנים (15 גרם) כאשר הזרקת וריד הזנב אינה אפשרית.

תקציר

בעוד שהזרקות ורידי זנב משמשות לעתים קרובות כנתיב מסירה מערכתי בעכברים בוגרים, זריקות רטרובולבר הן שיטה חלופית למסירה מערכתית עם פחות מגבלות. ראשית, הזרקות ורידי זנב (TVIs) מוגבלות לעכברים בוגרים שבהם גודל וריד הזנב מתאים לגישה. להיות מוגבל לטיפול בעכברים בוגרים יכול להיות בעייתי כאשר מתמודדים עם מודלים עכברים שאינם שורדים לבגרות. שנית, TVI אינם ישימים עבור מודלים של עכברים עם פנוטיפים של פיגור גדילה שבהם העכברים לעולם אינם מגיעים לגודל של עכברי בר בוגרים. לכן, זריקות retrobulbar ניתן להשתמש בהצלחה לטיפול בעכברים צעירים ובוגרים כאחד. לבסוף, זריקות רטרובולבר מבוצעות תחת הרדמה, וזה פחות מלחיץ על העכברים מאשר TVI המבוצעות בדרך כלל ללא הרדמה. מאמר זה מציג פרוטוקול והוראות מפורטות להזרקות רטרובולבר שניתן להשתמש בהן להעברה מערכתית לעכברים קטנים וצעירים.

מבוא

מודלים מורינים של מחלות גנטיות משמשים בדרך כלל כדי להדגים את היעילות של מולקולות קטנות, גנטיקה, טיפולים תאיים1. בעכברים, השיטה הנפוצה ביותר לשכפול העברה מערכתית לבני אדם היא הזרקת וריד הזנב (TVI), המבוצעת בדרך כלל בעכברים בוגרים בסביבות גיל 6-8 שבועות כדי להבטיח שהוריד גדול מספיק כדי לגשת אליו. TVI שימש בהצלחה במספר רב של מחקרים פרה-קליניים הוכחת עקרונות של מחלות גנטיות, כגון המופיליה, אשר תמכו בניסויים קליניים בבני אדם עבור ריפוי גנטי2. אולם למודלים רבים של מחלות גנטיות יש פנוטיפים של גדילה ו/או קטלניות מוקדמת, אשר מונעים מהם להגיע לגיל או לגודל של עכבר בוגר (איור 1). טיפול בעכברים כאלה באמצעות TVI יכול להיות קשה מאוד, אם לא בלתי אפשרי, תלוי בגיל הקטלניות ו / או בגודל המרבי שבעלי החיים יכולים להשיג.

לעומת זאת, הזרקה סיסטמית של חומר טיפולי על ידי הזרקת סינוס רטרובולבר (המכונה לעתים קרובות ובטעות רטרו-אורביטל) יכולה להיעשות די בקלות בעכברים ללא קשר לגיל או לגודל3. זריקות רטרובולבר של וירוס הקשור לאדנו (AAV) שימשו בהצלחה במודלים מורינים צעירים עם עיכוב גדילה של מחלות גנטיות, כגון חומצה מתילמלונית (MMA) ומחלת נימן-פיק מסוג C 4,5,6,7,8. (הליך זה יכול לשמש גם להזרקת יילודים 3,4,9,10; עם זאת, טכניקה זו אינה מפורטת בפרוטוקול זה או בסרטון הנלווה.) אפילו חומרים רעילים מאוד כמו דוקסורוביצין יכולים להיות מועברים בבטחה על ידי הזרקת רטרובולבר 11,12. בניגוד ל-TVI, עכברים מורדמים במהלך הזרקות סינוס רטרובולברי, מה שהופך את ההליך לפחות מלחיץ על העכבר ומקל על המפעיל שאינו צריך לרסן פיזית את העכבר13,14. חשש נוסף הוא ש-TVI משתמש לעתים קרובות במנורת חום כדי להרחיב את וריד הזנב, מה שעלול לגרום להתייבשות בעכברים צעירים ועלול להיות בעייתי במודלים של מחלות גנטיות החשודות יותר ללחץ הקשור לחום. בעיה נוספת שיכולה להתעורר בעת שימוש ב- TVI היא שווריד הזנב יכול להיות מאתגר במיוחד לדמיין על עכברים בעלי פיגמנטציה גבוהה. עם זאת, בדומה ל-TVI, זריקות רטרובולבר לסינוסים מביאות לפיזור ביולוגי מערכתי רחב15,16.

פרוטוקול

פרוטוקול זה והסרטון הנלווה אליו מיועדים למרחב הזרקת רטרובולבר של עכברים בוגרים לאחר לידה, נעורים ובוגרים בהזרקת סינוס רטרובולברי; הפרוטוקול אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (ACUC) של המכון הלאומי לחקר הגנום האנושי תחת פרוטוקול מספר G-03-4. למוסדות אחרים עשויות להיות דרישות והגבלות שונות, וייתכן שיהיה צורך לשנות פרוטוקול זה לאישור במכון שלך. קבל אישור מיחידת ACUC של המוסד שלך לפני ביצוע הליך זה או כל הליך אחר בבעלי חיים.

1. הכנה לפני הזרקה

  1. יש לדלל את ה-AAV לנפח ולריכוז הרצויים בהזרקה עם מלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS) בצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי של 1.5 מ"ל לכל הזרקה. הוסף נפח נוסף של 50% לכל הזרקה כדי לאפשר מילוי מדויק של המזרק הסטרילי החד פעמי.
    הערה: כאן אנו מדללים כתב AAV8-CAG-eGFP כדי לספק מנה של 1 × 1013גנומים נגיפיים לכל ק"ג של מסת גוף (vg / kg) בנפח של 50 μL. כמות AAV ב 50 μL להיות מוזרק מחושב באמצעות המשקל של החיה בזמן ההזרקה. בסרטון זה, AAV מוזרק דרך מסלול retrobulbar כדי לשכפל העברה מערכתית בבני אדם. וקטורים אחרים של ריפוי גנטי (כלומר, לנטיוירוס, אדנווירוס), טיפולי RNA ומולקולות קטנות יכולים להיות מועברים באופן מערכתי באמצעות הליך זה.
  2. ודא שמערכת ההרדמה של בעלי חיים במעבדה (LAAS) מוגדרת ומתפקדת כראוי בהתאם להוראות היצרן.
    הערה: אם נעשה שימוש בשיטת הרדמה חלופית, ודא כי ההרדמה מוכנה לפני תחילת הזרקות. הליך הזרקת רטרובולבר צריך להיות תואם לרוב חומרי ההרדמה (למשל, ריסון כימי בהזרקה כמו קטמין וקסילזין).
  3. לפני מילוי המזרק הסטרילי החד-פעמי (כאן, מזרק אינסולין, 31 גרם, אורך 8 מ"מ, קיבולת 3/10 מ"ל), הזיזו את הבוכנה למעלה ולמטה מספר פעמים כדי להבטיח שניתן יהיה לדכא את הבוכנה בצורה חלקה. לאחר מכן, מלא את המזרק לנפח הרצוי, וודא שאין בועות אוויר.
    הערה: ניתן להזריק נפחים של עד 150 μL; המעבדה שלנו מזריקה בדרך כלל נפח של 50 μL.

2. הרגעה עכברית באמצעות מתן גז איזופלורן עם מערכת הרדמה של חיות מעבדה (LAAS)

  1. ודא שהגז זורם רק לתא האינדוקציה. סגור את הסטופקוק הדו-כיווני למעגל ללא נשימה מחדש (NRB).
  2. הפעל את ידית זרימת החמצן הירוקה בחזית מד הזרימה כך שיהיה קצב זרימה של 1 ליטר לדקה.
  3. סובבו את האיזופלורן ל-≤4% על ידי לחיצה על הידית בחלק העליון של הוופורייזר וסיבוב החוגה לריכוז הרצוי.
  4. מקם את העכבר בתא ההשראה השקוף. שימו לב היטב לנשימה ולתנועה של החיה. ברגע שהחיה שכובה, סובבו את ידית הוופורייזר ל-2-2.5% איזופלורן.
  5. פתח את הסטופק הדו-כיווני למעגל NRB המחובר למסיכת הפנים וסגור את זרימת הגז לתיבת האינדוקציה.
  6. הסר את בעל החיים והכנס אותו למסכת הפנים של מעגל NRB.
  7. הפחיתו את הגדרת ריכוז האיזופלורן ל-1.5%-1.75%, כפי שנקבע על ידי תגובה לגירויים (למשל, צביטת בוהן או לחיצת כפות).
  8. עקוב תמיד ברציפות אחר נשימת העכבר וצבע הקרום הרירי (במידת האפשר). אם נשימתו של בעל החיים נעשית מאומצת או שצבע הקרום הרירי אינו ורוד, הפחיתו את ריכוז חומר ההרדמה.
  9. שמור על חום בעל החיים לאורך כל ההליך. השתמש במחמם ידיים עטוף במגבת נייר המונחת מתחת לכרית התחתונה וממוקמת ישירות מתחת לעכבר.
  10. כבה את החמצן ואת הוופורייזר לאחר השלמת ההליך.

3. הזרקת החיה

  1. אם אתה ימני, הזריק את עינו הימנית של העכבר ומקם את העכבר על צדו השמאלי כשהחוטם מצביע לכיוון יד ימין. אם אתה שמאלי, הזריק את עינו השמאלית של העכבר ומקם את העכבר על צדו הימני כשהחוטם מצביע לכיוון יד שמאל.
  2. החל טיפה אחת או שתיים של הרדמה אופתלמית על גלגל העין, אשר יש להזריק. לאחר מכן, הסר כל תמיסת הרדמה אופתלמית עודפת באמצעות פד גזה סופג סטרילי. הפעילו לחץ עדין עם קצות האצבעות על העור, הגב והגחון לעין כדי להבליט חלקית את גלגל העין של העכבר מהשקע (איור 2A,B).
    הערה: היזהר לא להפעיל לחץ מוגזם על כלי צוואר הרחם שמסביב בעת הבלטת העין מכיוון שהדבר יעכב את זרימת הדם וההזרקה. בנוסף, הפעלת לחץ על קנה הנשימה עלולה למנוע מהעכבר לנשום. ודא שהעכבר יכול לנשום לאורך כל ההליך.
  3. השאירו את המחט במצב משופע בזווית של כ-30° והניחו אותה בתוך הקנטוס המדיאלי (איור 2C).
    הערה: עומק מיקום המחט כדי להגיע לסינוס retrobulbar ישתנה בהתאם לגודל החיה. הימצאות המחט במצב משופע במהלך ההזרקה מפחיתה את הסיכון לנזק עיני. היזהרו לא למקם את המחט עמוק מדי ולנקב את ארובת העין. הזריקה אמורה להימשך פחות מדקה.
  4. לאט ובצורה חלקה להפעיל לחץ על הבוכנה מזרק כדי לספק את ההזרקה. זה יקטין את הסיכוי של אקסטרווסציה.
  5. הסר את המחט לאט ובצורה חלקה.
  6. הסר את מסכת הפנים מהעכבר כדי לאפשר התאוששות מהרדמה.

4. לאחר הזרקה

  1. כבה את החמצן ואת הוופורייזר לאחר השלמת ההליך.
  2. השתמש גזה סטרילית כדי להסיר דם אם דימום שיורי מתרחשת.
  3. ודא שהעכבר נמצא באזור חם (כ -37 מעלות צלזיוס), אך לא חם מדי, כדי למנוע היפותרמיה במהלך ההתאוששות מהרדמה.
  4. התבוננו בעכבר בבידוד עד להחלמה מוחלטת לפני החזרת העכבר לכלוב ולמתלה.
    הערה: בידוד העכבר במהלך ההתאוששות מונע מחבריו לכלוב לפצוע את העכבר המורדם במהלך ההתאוששות.

תוצאות

הזרקת סינוס רטרובולבר שימשה בהצלחה להעברה מערכתית של מולקולות קטנות, נוגדנים ונגיף הקשור לאדנו (AAV)4,5,9,15,16. באיור 3, הכבד של עכבר שטופל ב-PBS (רכב) וכבד עכבר שטופל ב-AAV8 מוצגים כדוגמה להזרקה וביטוי של AAV לאחר הזרקת רטרובולבר. AAV8, כמו וקטורי AAV טבעיים רבים, הוא גביעוני כבד. לכן, צפויה התמרה משמעותית של הכבד בעכבר שקיבל מינון מערכתי של 5 × 1012ק"ג/ק"ג17. המספר הגדול של הפטוציטים המבטאים RNA של מתיל-מלוניל-CoA מוטאז (MMUT) שנראה באיור 3, אשר מבוטא על-ידי טרנסגן AAV, מצביע על הזרקה רטרואורביטלית מוצלחת.

השוואה בין חומצה פרופיונית לעומת עכברים מסוג בר, הפרש משקל, 4 שבועות, תוצאת מחקר.
איור 1: עכבר עם פיגור גדילה עם חומצה פרופיונית. זוהי דוגמה לפיגור גדילה קיצוני שיכול להתרחש במודלים מורינים של מחלות גנטיות. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

תהליך הזרקת עין עכבר; תרשים ממחיש את מערך הזרקת העיניים בניסוי מעבדה.
איור 2: תמונות ותרשים של הזרקת סינוס רטרובולברי. (A) תמונה של מיקום האצבע על פרווה כדי לבלוט את גלגל העין (מסומן בחץ לבן). (B) תמונה של בליטת גלגל העין (מסומנת בחץ לבן) לאחר הפעלת לחץ כלפי מטה על הפרווה לפני מיקום המחט והזרקתה. (C) דיאגרמה של כיוון שיקוע המחט (שיפוע כלפי מטה ביחס לגלגל העין), זווית המחט (30°) ומיקום מחט סינוס רטרובולברי. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

תמונת מיקרוסקופ, ניתוח מבנה תאי; אימונוהיסטוכימיה; זיהוי ביטוי חלבון.
איור 3: הכלאה באתרו של RNA לאחר הזרקת סינוס רטרובולברי עם AAV8. תמונות של (A) 10x כבד שטופל ברכב, (B) 10x כבד שטופל ב-AAV8, (C) 20x כבד שטופל ברכב, ו-(D) 20x כבד שטופל ב-AAV8 מוכתם עבור MMUT RNA. עכברים עם חומצה מתילמלונית טופלו במינון של 5 × 1012 vg / kg של AAV8-LPS-MMUT או בקרת רכב (PBS) בגיל חודש. רקמת הכבד נאספה חודש לאחר הטיפול. ממ"ט RNA מוכתם חום (חצים שחורים מציינים אזורים של צביעה חיובית). כבד מוכתם בהמטוקסילין. פסי קנה מידה = 100 מיקרומטר 10x לתמונות, 50 מיקרומטר לתמונות 20x (B). קיצורים: AAV = וירוס הקשור לאדנו; LPS = מקדם ספציפי לכבד; MMUT = methylmalonyl-CoA mutase. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

בעוד הזרקת רטרובולבר היא שיטה אמינה להעברת מולקולות קטנות, חלבונים וטיפולים גנומיים, תרגול הטכניקה עם צבע הוא הכרחי כדי להבטיח כי אספקה מערכתית אמינה וניתנת לשכפול מושגת. השימוש בצבע מומלץ מאוד לתרגול הזרקות רטרובולבר בעכברים לפני השימוש במסלול העברה זה בניסויים. ניתן לבדוק את הצבעים באופן חזותי ברקמות העכבר כדי להבטיח אספקה מערכתית עקבית.

בהדגמה שלנו של טכניקת הזרקת retrobulbar, גז isoflurane שימש להרדים את העכברים לפני ההליך. ניתן להשתמש בצורות אחרות של הרדמה לפני ההליך, אך חשוב לוודא שהעכבר אינו מתאושש מהטשטוש לפני השלמת ההזרקה. למרבה המזל, ההזרקה בפועל אורכת בדרך כלל פחות מדקה והזמן שבו העכבר צריך להיות מורדם לחלוטין הוא קצר. העכבר צריך להיות מורדם לחלוטין במהלך ההזרקה, ואת ההרדמה יש לקרוא אם העכבר הופך להכרה לפני ההזרקה. מכיוון שישנם סיכונים הקשורים לשימוש בהרדמה, יש למזער את משך הזמן שהעכבר מורדם. לא היו לנו בעיות בשימוש באיזופלורן כדי להרדים עכברים חולים קטנים עם חומצה מתילמלונית ופרופיונית. עם זאת, דגמים מסוימים של עכברים עשויים להיות רגישים יותר לטשטוש ולהרדמה מסוימת. יש לשקול בעיה פוטנציאלית זו לפני ניסיון להשתמש בסדציה במחקר. לבסוף, השימוש בטשטוש בשילוב עם הזרקת רטרובולבר מפחית מאוד את המצוקה לכאורה שהעכבר מפגין בתהליך ההזרקה בהשוואה ל- TVI שם לא נעשה שימוש נפוץ בטשטוש.

לא ראינו בעיות הקשורות לאחר הזרקה, אם כי זיהום הוא סיכון פוטנציאלי עם כל זריקה. כדי להפחית את הסיכוי להדבקה, מזרק חד פעמי סטרילי ו- PBS סטרילי כדי לדלל את AAV מטוהר משמשים. כל העכברים במתקן בעלי החיים שלנו נבדקים מדי יום לאיתור סימנים לבעיות בריאותיות פוטנציאליות ומקבלים טיפול וטרינרי כדי לטפל בכל בעיה בריאותית בעת הצורך.

החלופה להזרקת סינוס רטרובולבר והשיטה הנפוצה יותר להעברה מערכתית לעכברים צעירים ובוגרים היא TVI. הזרקת TVI ורטרובולבר לסינוסים גורמת להתפלגות ביולוגית דומה במקרה של מולקולות קטנות ונוגדנים, ועל ידי אקסטרפולציה, אותו הדבר צפוי עבור וקטורים נגיפיים15,16. עם זאת, לא ניתן למצוא דוגמאות להשוואה בין העברה מערכתית של וקטורים של ריפוי גנטי על ידי TVI לבין הזרקת סינוס רטרובולברי בספרות. לדעתנו, זריקות סינוס רטרובולבריות קלות יותר לביצוע בעכברים עם פנוטיפ גדילה מופחת ו/או קטלניות מוקדמת.

TVI נחשב לעתים קרובות כמקביל יותר להעברה מערכתית בבני אדם, למרות שלבני אדם יש סינוס רטרובולברי אך אין לו זנב. בהיבט אחד, הזרקת סינוס רטרובולברי דומה להזרקה מערכתית אנושית בכך שהמזרק נכנס למערכת הוורידית העליונה בדומה להזרקה שהועברה לאדם על ידי צנתר מרכזי מוחדר היקפית (PICC Line) או צנתר תוך ורידי שהוכנס לזרוע. לעומת זאת, המזרק נכנס למערכת הוורידית התחתונה של עכבר לאחר הזרקת ורידים בזנב. למרבה הצער, אף אחת מהשיטות הללו אינה משכפלת במדויק את השיטות(ות) המשמשות להעברה מערכתית בבני אדם, אך שתיהן שיטות יעילות להעברה מערכתית בעכברים.

גילויים

למחברים אין שום דבר רלוונטי לפרסום הזה לחשוף.

תודות

אנו מעריכים את הסיוע של צוות מתקן העכבר NHGRI, המעבדה לפתולוגיה מולקולרית של NCI, ובמיוחד אנדרו וורנר. R.J.C. נתמך על ידי תוכנית המחקר Intramural של NHGRI באמצעות 1ZIAHG200318-16 ועבודה זו מומנה חלקית על ידי המרכז הלאומי לקידום מדעי התרגום (NCATS). איור 2C נוצר באמצעות BioRender.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
AAV8-CAG-eGFPUniv. Penn. Vector Coreמיוחדתמקורות חלופיים של מדווחי AAV ומדווחי AAV אלטרנטיביים זמינים
טיפים למחסום (מסנן), 20 μ AM12645ThermoFisherלדילול AAV כדי להפחית את נפח הזרקה וריכוז
טיפים למחסום (מסנן), 100 μ גודל L (סטרילי)ThermoFisherAM12648לדילול AAV כדי להפחית את נפח וריכוז ההזרקה
מעגל ייצור כפול ניתן להשתמש בשיטת הרדמה חלופיתVetEquip921400
Gilsen PIPETTEMAN Classic P20 GilsonF123600לדילול AAV כדי להפחית את נפח וריכוז ההזרקה
Gilsen PIPETTEMAN Classic  P100 פיפטהגילסוןF123615לדילול AAV כדי להפחית את נפח וריכוז ההזרקה
מחממי ידיים (HOTHANDS)ULINES-1497Bלשמירה על חום העכבר בזמן הרדמת
מזרקי אינסולין, 31 גרם,   אורך 8 מ"מ, קיבולת 3/10 מ"ל328438 בקטון דיקסוןבשימוש בווידאו; מזרק אחד לכל הזרקה
איזופלורן (פלוריסו)VETONE502017ניתן להשתמש בהרדמה אלטרנטיבית
Medline Protection Plus רפידות תחתונות חד פעמיותThermoFisher23-666-062כדי להניח עכבר על הזרקה מתמשכת
מיכל Oak Ridge Phlebotomy Sharps עם מכסה שקוףThermoFisher22-730-434לסילוק מחטים
פוספט מלוח PBS, pH 7.4Gibco10010023לדילול AAV לריכוז ולנפח הרצויים
Snap Cap צינורות מיקרוצנטריפוגה עם שמירה נמוכה (סטריליים)ThermoFisher3451לדילול AAV כדי להפחית את נפח ההזרקה והקונטרציה
ספוג גזה סטרילי 4"x"4Covidien3033
Trecaine Hydrochloride Ophthalmic (0.5%)Ocenanside PharmaceuticalsAK102D5DSמקומי  הרדמה
27.0 גרם (או קטן יותר)כללאחלופה למזרק אינסולין המשמש בסרטון
VetEquip' s מדריך למשתמש ומדריך הפעלה למערכת הרדמה של חיות מעבדה שולחניות וניידות. VetEquipchrome-extension://efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj/https://www.vetequip.com/pdfs/LAAS%20Manual.pdfקישור למדריך למשתמש ומדריך
הזמנה בגודל L מזרק טוברקולין עם

מקורות

  1. Perlman, R. L. Mouse models of human disease: An evolutionary perspective. Evol Med Public Health. 2016 (1), 170-176 (2016).
  2. Samelson-Jones, B. J., George, L. A. Adeno-associated virus gene therapy for hemophilia. Annu Rev Med. 74, 231-247 (2023).
  3. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retrobulbar injections in mice. Lab Anim (NY). 40 (5), 155-160 (2011).
  4. Chandler, R. J., et al. Systemic gene therapy for methylmalonic acidemia using the novel adeno-associated viral vector 44.9. Mol Ther Methods Clin Dev. 27, 61-72 (2022).
  5. Chandler, R. J., et al. Systemic aav9 gene therapy improves the lifespan of mice with niemann-pick disease, type c1. Hum Mol Genet. 26 (1), 52-64 (2017).
  6. Venturoni, L. E., et al. Growth advantage of corrected hepatocytes in a juvenile model of methylmalonic acidemia following liver directed adeno-associated viral mediated nuclease-free genome editing. Mol Genet Metab. 137 (1-2), 1-8 (2022).
  7. Ilyinskii, P. O., et al. Immtor nanoparticles enhance aav transgene expression after initial and repeat dosing in a mouse model of methylmalonic acidemia. Mol Ther Methods Clin Dev. 22, 279-292 (2021).
  8. Davidson, C. D., et al. Improved systemic aav gene therapy with a neurotrophic capsid in niemann-pick disease type c1 mice. Life Sci Alliance. 4 (10), e202101040(2021).
  9. Chandler, R. J., et al. Systemic gene therapy using an aav44.9 vector rescues a neonatal lethal mouse model of propionic acidemia. Mol Ther Methods Clin Dev. 30, 181-190 (2023).
  10. Rocha-Ferreira, E., et al. A neonatal rodent model of retroorbital vein injection. J Vis Exp. (204), e65386(2024).
  11. Bohnert, B. N., Artunc, F. Induction of nephrotic syndrome in mice by retrobulbar injection of doxorubicin and prevention of volume retention by sustained release aprotinin. J Vis Exp. (135), e57642(2018).
  12. Bohnert, B. N., et al. Retrobulbar sinus injection of doxorubicin is more efficient than lateral tail vein injection at inducing experimental nephrotic syndrome in mice: A pilot study. Lab Anim. 53 (6), 564-576 (2019).
  13. Meijer, M. K., Spruijt, B. M., Van Zutphen, L. F., Baumans, V. Effect of restraint and injection methods on heart rate and body temperature in mice. Lab Anim. 40 (4), 382-391 (2006).
  14. Nohara, M., Tohei, A., Sato, T., Amao, H. Evaluation of response to restraint stress by salivary corticosterone levels in adult male mice. J Vet Med Sci. 78 (5), 775-780 (2016).
  15. Schoch, A., Thorey, I. S., Engert, J., Winter, G., Emrich, T. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus routes of antibody administration in pharmacokinetic studies. Lab Anim (NY). 43 (3), 95-99 (2014).
  16. Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Anim (NY). 37 (1), 26-32 (2008).
  17. Zincarelli, C., Soltys, S., Rengo, G., Rabinowitz, J. E. Analysis of aav serotypes 1-9 mediated gene expression and tropism in mice after systemic injection. Mol Ther. 16 (6), 1073-1080 (2008).

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

הזרקה רטרובולבריתהולכה סיסטמיתתרפיה גנומיתמודלים של עכבריםהזרקה לוריד הזנבאסידמיה אורגניתעכברים עם עיכוב בצמיחהעכברים מורדמיםהזרקת AAVאלחוש עיני
טיפול סיסטמי בעכברות לאחר לידה, נוער ועכברים בוגרים על ידי הזרקת סינוס רטרובולברית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.