הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

תובנות מכניסטיות לגבי ההגנה המיטוכונדריאלית של Salidroside באמצעות מסלול AMPK/Sirt1/HIF-1α בתאי HT22 היפוקסיים

1.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66923

⸱

25 באפריל 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy/School of Modern Chinese Medicine Industry, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Research Service Office, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan

במאמר זה

סיכום

המחקר הנוכחי זיהה מנגנון ייחודי שבאמצעותו סלידרוסיד מפעיל השפעות הגנה מיטוכונדריאליות על תאי HT22 היפוקסיים, בין השאר באמצעות מסלול AMPK/Sirt1/HIF-1α.

תקציר

נמצא כי להלידרוזיד (Sal), מרכיב פעיל של Rhodiola crenulata (Hook. f. et Thoms.) נמצא כי H. Ohba מפעיל השפעות מגנות על המיטוכונדריה על-ידי שיפור חילוף החומרים ושיפור אספקת האנרגיה של תאי המוח בתנאים היפוקסיים. עם זאת, מנגנון הפעולה שלו לא הובהר במלואו. במחקר הנוכחי, נעשה שימוש לראשונה בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים כדי לנתח את ההשפעות של Sal על רמות הנוקלאוטידים (ATP, ADP ו-AMP). בדיקת ההסטה התרמית התאית (CETSA), שיטת אינטראקציה מולקולרית בשימוש נרחב לאימות וכימות מעורבות מטרת תרופות בתאים ורקמות על פני מינים שונים, נבחרה לאחר מכן כדי לאשר את הזיקה של Sal לחלבונים הקשורים למסלול AMPK/Sirt1/HIF-1α. התוצאות חשפו כי Sal העלה את רמות ה-ATP וה-ADP בתאי HT22 היפוקסיים תוך הפחתת רמות ה-AMP. יתר על כן, Sal הפגין קשירה יציבה לחלבוני AMPKα, p-AMPKα, Sirt1 ו-HIF-1α. לסיכום, סאל עשוי להפעיל השפעות הגנה מיטוכונדריאליות על ידי אפנון מסלול AMPK/Sirt1/HIF-1α כדי לווסת את תכולת הנוקלאוטידים. מחקר זה מספק התייחסות מתודולוגית לניתוח תכולת נוקלאוטידים בדגימות תאים ותורם לזיהוי וגילוי מטרות לתרכובות שמקורן ברפואה הסינית המסורתית.

מבוא

המוח רגיש מאוד לחמצן בשל הדרישות המטבוליות הגבוהות שלו, היכולת הגליקוליטית המוגבלת והתלות בזרחון חמצוני. כתוצאה מכך, חשיפה לסביבה דלת חמצן בגבהים גבוהים עלולה להוביל בקלות לפגיעה מוחית היפוברית (HHBI)1,2. מחקרים אפידמיולוגיים מצביעים על כך שכאשר אנשים שאינם מתאקלמים בגבהים גבוהים עולים במהירות לאזורים גבוהים, שכיחות מחלת הרים חריפה יכולה להגיע עד 75%, עם שיעור תמותה של כ-1% במקרים קשים. יתר על כן, בהיעדר טיפול רפואי, שיעורי התמותה מבצקת מוחית או ריאתית בגובה רב יכולים להגיע עד 40%3,4.

HHBI מציג קשת רחבה של תסמינים קליניים. מקרים קלים עד בינוניים עשויים לכלול כאבי ראש, סחרחורת ואובדן זיכרון5, בעוד שמקרים חמורים עלולים לגרום לפגיעה קוגניטיבית, שינוי בהכרה ותוצאות שעלולות להיות קטלניות5. מניעה וטיפול ב-HHBI באזורים בגובה רב הפכו למוקד מרכזי של המחקר הרפואי. אסטרטגיות מניעה כוללות בעיקר אימונים אדפטיביים בסביבות גבוהות, כולל מנוחה מספקת, תזונה מאוזנת, תזונה נכונה ופעילות גופנית מתאימה 6,7. בנוסף, התערבויות פרמקולוגיות שמטרתן להגן על תאי המוח ולהקל על היפוקסיה מוחית נותרו מרכזיות במחקר הנוכחי של HHBI.

המיטוכונדריה משמשים כמרכזי ייצור האנרגיה העיקריים בתוך התאים, ומסנתזים אדנוזין טריפוספט (ATP) כדי לעמוד בדרישות האנרגיה התאית. בתנאים היפוקסיים, ייצור האנרגיה המיטוכונדריאלית יורד, מה שמוביל לירידה ברמות ה-ATP ולפגיעה בתפקוד התאים8. הפגיעה ההיפוקסית משבשת גם את הוויסות המיטוכונדריאלי של הומאוסטזיס Ca2+ ו-pH, ומעוררת אפופטוזיס ונמק 9,10. קיים קשר מחזק הדדי בין תפקוד לקוי של המיטוכונדריה לבין פגיעה מוחית היפוקסית. מצד אחד, פגיעה במיטוכונדריה הנגרמת על ידי היפוקסיה מחמירה את המחסור בחמצן על ידי הפחתה נוספת של חילוף החומרים באנרגיה תאית, ויוצרת מעגל קסמים. מצד שני, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה מעלה את רמות ה-Ca2+ התוך-תאי, מפעיל מפלים אפופטוטיים ומוביל למוות תאי11. למרות שהמנגנונים העומדים בבסיס פגיעה מוחית היפוקסית נותרו מורכבים ולא מובנים במלואם, מחקרים רבים זיהו פגיעה בחילוף החומרים של אנרגיה מיטוכונדריאלית עצבית כגורם קריטי בפתוגנזה שלה12,13. לכן, חקירה נוספת של תפקוד המיטוכונדריה עשויה לספק תובנות חשובות לגבי מטרות טיפוליות פוטנציאליות לפגיעה מוחית היפוקסית.

סלידרוזיד (Sal) הוא מרכיב פעיל המופק מצמח המישור Rhodiola crenulata (Hook. f. et Thoms.) H. Ohba ונמצא בשימוש נרחב במוצרי בריאות מזון ותרופות14. הנוסחה המולקולרית של Sal היא C14H20O7, והיא ידועה גם בשם 2-(4-hydroxyphenyl)-ethyl β-D-glucopyranoside. יש לו תכונות פרמקולוגיות מגוונות, כולל אנטי היפוקסיה, נוגד חמצון, אנטי עייפות, אנטי גידולים, אימונומודולטוריים, אנטי דלקתיים והשפעות הגנה קרדיווסקולריותוכלי דם מוחיים 15,16,17. בין אלה, השפעתו נגד היפוקסיה היא אחת המתועדות ביותר. מחקרים אחרונים הדגישו יותר ויותר את ההשפעות המגנות המיטוכונדריאליות המשמעותיות של Sal כמנגנון פוטנציאלי להשפעות המניעה והטיפוליות שלו על פגיעה מוחית הנגרמת על ידי מישור בעכברים14,18. עם זאת, המנגנונים המולקולריים המדויקים שבאמצעותם Sal משפיע על רמות ATP, ADP ו-AMP נותרו לא מובנים היטב.

חלבון קינאז המופעל על ידי AMP (AMPK) פועל כחיישן אנרגיה מרכזי המסייע בשמירה על הומאוסטזיס של אנרגיה תאית. הפעלת AMPK מגרה את Sirtuin 1 (Sirt1), מה שמוביל לעלייה ברמות NAD+ תוך-תאיות19. מחקרים הראו כי Sirt1 יכול לווסת את גורם 1-אלפא המעורר היפוקסיה (HIF-1α) כדי לתאם את התגובה התאית להיפוקסיה20. מחקרים קודמים הראו כי Sal מעכב את פתיחת נקבוביות המעבר של חדירות המיטוכונדריה העצבית, מווסת תהליכי אנרגיה מיטוכונדריאלית בתיווך HIF-1α, מחליש אפופטוזיס עצבי ושומר על שלמות מחסום הדם-מוח, ובכך מגן על חולדות מפני פגיעה מוחית הנגרמת על ידי מישור14,21. עם זאת, ההשפעה של Sal על ATP והמטבוליטים שלו, ADP ו-AMP, נותרה לא ודאית.

כדי לחקור זאת, נעשה שימוש לראשונה בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) כדי לכמת את הרמות של שלושת הנוקלאוטידים הללו. בנוסף, נעשה שימוש בבדיקת השינוי התרמי התאי (CETSA), טכניקה ביופיזיקלית בשימוש נרחב שהוצגה בשנת 2013 כדי לחקור אינטראקציות ליגנד-חלבון בתאים שלמים22. שיטה זו מיושמת בדרך כלל כדי לאמת ולכמת את מעורבות מטרת התרופה בתאים וברקמות על פני מינים שונים. באופן ספציפי, לאחר דגירה משותפת של תאי מטרה עם התרופה בטמפרטורות משתנות למשך זמן מוגדר, החלבון הקשור לתרופה מפגין יציבות תרמית מוגברת, מה שהופך אותו פחות נוטה לדנטורציה ומשקעים. החלבונים הלא קשורים המשקעים מוסרים לאחר מכן באמצעות צנטריפוגה, ואינטראקציות בין תרופות למטרה מזוהות לאחר מכן באמצעות ניתוח כתמים מערביים של הסופרנטנט22. כדי לזהות מטרות מולקולריות פוטנציאליות של Sal, CETSA נבחרה כדי להעריך את זיקת הקישור שלה לחלבונים הקשורים למסלול AMPK/Sirt1/HIF-1α.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרטים המסחריים של הריאגנטים והציוד המשמש במחקר זה מסופקים בטבלת החומרים.

1. הכנת פתרון

  1. הכינו את מדיום הנשר המותאם (DMEM) של Dulbecco על ידי הוספת 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין.
  2. הכן תמיסת Sal של 20 מ"מ על ידי המסת 3 מ"ג של Sal ב-500 מיקרוליטר של מי מלח עם חוצץ פוספט (PBS)21.
  3. סנן 500 מ"ל של אצטוניטריל טהור כרומטוגרפית (שלב נייד A) באמצעות ממברנה אורגנית של 0.45 מיקרומטר.
  4. הכן 1000 מ"ל של שלב B נייד על ידי הוספת 3.5 מ"ל של מגיב I ל-1 ליטר מים נטולי יונים. התאם את ה-pH ל-6.15 עם מגיב II, בהתאם להוראות ערכת בדיקת תוכן הנוקלאוטיד (ATP, ADP ו-AMP) (ראה טבלת חומרים).
    הערה: מגיב I ומגיב II כלולים בערכת בדיקת תוכן הנוקלאוטידים (ATP, ADP ו-AMP).
  5. סנן שלב נייד B באמצעות ממברנה מימית של 0.22 מיקרומטר.
    הערה: יש להשתמש בשלב B נייד מיד לאחר ההכנה. יש לבצע סוניקציה של שלבים ניידים A ו-B למשך 30 דקות לפני השימוש כדי להסיר בועות אוויר.
  6. יש לדלל תמיסת מלאי סטנדרטית של 1 μM ATP, ADP ו-AMP עם מים דה-יונים כדי להשיג פתרונות סטנדרטיים של סדרות ATP, ADP ו-AMP של 0.5 μM, 0.1 μM, 0.05 μM, 0.01 μM ו-0.005 μM.
  7. סנן את סדרת התמיסות הסטנדרטיות באמצעות ממברנת מסנן מיקרו-נקבובית מסוג מחט של 0.22 מיקרומטר.
    הערה: יש להשתמש בבקבוקי הזרקה חומים לאחסון הפתרונות הסטנדרטיים הסדרתיים. יש להשתמש בסדרת הפתרונות הסטנדרטיים המוכנה בהקדם האפשרי.

2. תרבית תאים

הערה: תרבית תאים HT22 ומודל ההיפוקסיה המגורה CoCl2 הוקמו על פי דוח קודם21.

  1. תרבית תאי HT22 ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 עד שמגיעים למפגש של 80% בצלחת הפטרי. עכל את התאים עם 0.25% טריפסין למשך דקה.
  2. זרע 2 × 105 תאים משלב 2.1 לצלחות של 6 בארות עם DMEM מלא (קבוצת ביקורת ללא טיפול תרופתי) או DMEM מלא המכיל את התרופה (250 מיקרומטר CoCl2, 250 מיקרומטר CoCl2 + 10 מיקרומטר דור, 250 מיקרומטר CoCl2 + 20 מיקרומטר סאל, ו -250 מיקרומטר CoCl2 + 10 מיקרומטר דור + 20 מיקרומטר סאל). דגירה למשך 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2.
    הערה: שלוש דגימות מקבילות הוקמו בכל קבוצה.

3. בדיקת תוכן נוקלאוטידים (ATP, ADP ו-AMP)

  1. הוסף 1 מ"ל של מגיב מיצוי I לכל באר בצלחות 6 הבארות משלב 2.2.
    הערה: מגיב מיצוי I כלול בערכת בדיקת תוכן הנוקלאוטידים (ATP, ADP ו-AMP) (ראה טבלת חומרים).
  2. ליזה את התאים על ידי סוניקציה על אמבט קרח באמצעות מנגנון שיבוש תאים קולי (הספק: 300 וואט, גלים קוליים למשך 3 שניות, מרווח של 7 שניות, זמן כולל: 3 דקות).
  3. צנטריפוגה של התאים הליזים ב-10,304 × גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס באמצעות צנטריפוגה מקוררת במהירות גבוהה.
  4. העבירו 0.75 מ"ל של סופרנטנט משלב 3.3 לצינור של 2.0 מ"ל. מוסיפים 0.75 מ"ל של מגיב מיצוי II, מנערים ומערבבים בעזרת מערבל מערבולת, וצנטריפוגה שוב ב-10,304 × גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס.
    הערה: מגיב מיצוי II כלול בערכת בדיקת תוכן הנוקלאוטידים (ATP, ADP ו-AMP).
  5. פיפט את הסופרנטנט משלב 3.4 וסנן אותו באמצעות קרום מסנן מיקרופורי מסוג מחט של 0.22 מיקרומטר לתוך בקבוקון חום.
    הערה: ATP, ADP ו-AMP בדגימה שחולצה אינם יציבים. יש לבצע את כל ההליכים הניסיוניים בטמפרטורות נמוכות או על קרח. יש לעבד ולבדוק דגימות בהקדם האפשרי.
  6. פתח את תוכנת הכרומטוגרפיה והגדר את הפרמטרים הבאים: נפח הזרקה: 10 מיקרוליטר; טמפרטורת עמודה: 27 מעלות צלזיוס; קצב זרימה: 0.8 מ"ל לדקה; אורך גל זיהוי: 254 ננומטר; משך הזיהוי: 70 דקות. הגדר את הליך שיפוע השיפוע לפי טבלה 1.
  7. לחץ על כפתור הביצוע כדי להזריק אוטומטית את הדגימה ולזהות את התוכן של ATP, ADP ו-AMP בפתרונות סטנדרטיים טוריים (שלב 1.7) ופתרונות לדוגמה (שלב 3.5) בהתאם לתוכנית שהוגדרה בשלב 3.6.
    הערה: בסוף הניסוי יש לשטוף את העמודה הכרומטוגרפית עם 98% שלב B נייד כדי למנוע סתימה.
  8. שרטטו את העקומות הסטנדרטיות של ATP, ADP ו-AMP באמצעות תוכנות גרפים וניתוח סטטיסטי, עם ריכוזים סטנדרטיים סדרתיים על ציר ה-x ואזורי שיא על ציר ה-y.
  9. חשב את תוכן ה-ATP, ADP ו-AMP בדגימות באמצעות משוואת העקומה הסטנדרטית משלב 3.8.

4. בדיקת הסטה תרמית סלולרית (CETSA)

  1. תאי HT22 רגילים במשך 20 דקות בצלחת פטרי באמצעות ליזאט המכיל מעכב פרוטאז (ליזאט: מעכב פרוטאז = 100:1) על ידי פיפטינג חוזר ונשנה של התאים.
    הערה: בצע שלב זה על אמבט קרח כדי למנוע פירוק חלבון.
  2. אסוף את הליזאט של התא משלב 4.1 וסוניקט על אמבט קרח באמצעות מנגנון שיבוש תאים קולי (הספק: 300 וואט, גלים קוליים למשך 3 שניות, מרווח של 7 שניות, זמן כולל: 3 דקות). צנטריפוגה בטמפרטורה של 10,304 × גרם, 4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות ואוספים את הסופרנטנט.
    הערה: חלקו את הסופרנטנט ל-14 מנות: 7 קבוצות לדגירת מטבעות עם סאל ו-7 קבוצות לדגירת מטבעות עם PBS כבקרה. עבור הקבוצה שטופלה בסאל, הוסף 100 מיקרוליטר של סופרנטנט ו-0.1 מיקרוליטר של 20 מיקרומטר סאל לדגימה. עבור קבוצת הביקורת, הוסף 100 מיקרוליטר של סופרנטנט ו-0.1 מיקרוליטר של PBS לכל דגימה.
  3. דגרו כל דגימה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות, ולאחר מכן דגרו עוד ב-37 מעלות צלזיוס, 42 מעלות צלזיוס, 47 מעלות צלזיוס, 52 מעלות צלזיוס, 57 מעלות צלזיוס, 62 מעלות צלזיוס ו-67 מעלות צלזיוס למשך 3 דקות באמצעות מכשיר בקרת טמפרטורת חימום מתכת.
  4. צנטריפוגה את הדגימות משלב 4.3 ב-10,304 × גרם למשך 20 דקות ב-4 מעלות צלזיוס ואוספים את הסופרנטנט באמצעות פיפטה.
  5. מדדו את ריכוז החלבון הכולל של הסופרנטנט משלב 4.4 באמצעות ערכת בדיקת ריכוז חלבון BCA, בהתאם להוראות היצרן (ראו טבלת חומרים).
  6. הכינו ג'ל הפרדה של 10% באמצעות ערכת הכנה מהירה של ג'ל PAGE, בהתאם להוראות היצרן (ראו טבלת חומרים).
  7. טען 3 מיקרוליטר של סמן חלבון צבעוני מוכתם מראש ו-14 מיקרוליטר דגימות לבארות של ג'ל ההפרדה (כמות חלבון סופית לבאר: 20 מיקרוגרם).
  8. הפעל את הג'ל באמצעות מאגר אלקטרופורזה למשך שעה אחת ב-80-100 mV כדי להשיג חלבונים מופרדים.
  9. העבירו את החלבונים משלב 4.8 לקרום PVDF באמצעות תמיסת העברת ממברנה מהירה ומבנה סנדוויץ' (נייר פילטר כותנה-PVDF ממברנה-חלבון ג'ל-פילטר נייר-כותנה) ב-400 mA למשך 30 דקות.
  10. חסום את ממברנות ה-PVDF משלב 4.9 עם תמיסת אלבומין בסרום בקר (BSA) של 5% למשך 1-2 שעות בטמפרטורת החדר.
    הערה: הכן תמיסת BSA של 5% על ידי המסת 5 מ"ג אבקת BSA ב-100 מ"ל של תמיסת TBST המכילה 100 מ"ל של מאגר TBS ו-0.05% Tween 20.
  11. דגרו את ממברנות ה-PVDF משלב 4.10 עם נוגדן ראשוני מדולל של 5 מ"ל ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
    הערה: יש לדלל את הנוגדן העיקרי בתמיסת BSA (יחס של 1:1000).
  12. שטפו את ממברנות ה-PVDF שלוש פעמים עם TBST למשך 5 דקות כל אחת כדי להסיר נוגדנים ראשוניים לא קשורים.
  13. דגרו את הממברנות משלב 4.12 עם נוגדן משני מדולל מצמד חזרת פרוקסידאז (HRP) למשך שעתיים בטמפרטורת החדר על שייקר להסרת צבע.
    הערה: יש לדלל את הנוגדן המשני המחובר ל-HRP בתמיסת BSA (יחס של 1:10,000).
  14. שטפו את הממברנות שלוש פעמים עם TBST למשך 5 דקות כל אחת כדי להסיר שאריות נוגדנים משניים.
  15. כסו את הממברנות משלב 4.14 עם מפתח כימילומינסנציה ECL, ולאחר מכן דמו את אות חלבון המטרה באמצעות מערכת הדמיה.
    הערה: בצע שלב זה בחושך כדי למנוע כיבוי פלואורסצנטי.
  16. לנתח ולכמת את הערך האפור של חלבוני מטרה באמצעות תוכנת ImageJ (ראה T able של חומרים).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

העקומות הסטנדרטיות עבור ATP, ADP ו-AMP שזוהו על ידי HPLC היו Y = 7006.5X - 222.99, Y = 5217.3X - 17.796 ו-Y = 9280.1X + 22.749, בהתאמה (איור 1A-C). תכולת הנוקלאוטידים שנמדדה בכל קבוצה על ידי HPLC חושבה באמצעות העקומות הסטנדרטיות (איור 1D-I). נמצא כי CoCl2 הפחית משמעותית את רמות ה-ATP וה-ADP בתאי HT22 בהשוואה לקבוצת הביקורת (P < 0.01, איור 1J,K...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מיטוכונדריה הם אברוני מפתח המעורבים במניעה טיפולית של HHBI 23,24,25. מחקרים קודמים של הקבוצה אישרו כי Sal מווסת את ביטוי החלבונים AMPK, Sirt1 ו-HIF-1α, משפר את תפקוד המיטוכונדריה העצבי ומגן מפני HHBI21,24. עם זאת, ההשפעה הישירה של Sal על נוקלאוטידים בתאים היפוקסיים דורשת חקירה נוספת. בנוסף, הערכת פוטנציאל הקישור של תרכובות וחלבונים בתנאי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82274207 ו-82474185), מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2024NSFSC1845), קרן המדע לנוער של מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2023NSFSC1776), תוכנית המחקר והפיתוח המרכזית של נינגשיה (2023BEG02012), פרויקט התמיכה בכישרונות נוער של האגודה הסינית לרפואה סינית לשנים 2024-2026 (2024-QNRC2-B07) ומחקר שינגלין פרויקט קידום של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (XKTD2022013 ו-QJJJ2024027).

תרומת המחבר:
שיאובו וואנג, יאטינג ג'אנג, יה הו, רוי לי ושיאנלי מנג הגו את הפרויקט הזה. יטינג ג'אנג, יה הו וטינגטינג קואנג ביצעו את הניסויים וניתחו את הנתונים. יאטינג ג'אנג והונג ג'יאנג כתבו את כתב היד. שיאובו וואנג ושיאנלי מנג תיקנו את כתב היד. כל המחברים קראו ואישרו את כתב היד הסופי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אצטוניטרילאלאדיןA104440
0.22 ומיקרו; m קרום מימיJintengJTMF0445
0.22 ומיקרו; m קרום מסנן מיקרופורי מסוג מחטJintengJTSFM013001
0.45 ומיקרו; m ממברנה אורגניתJintengJTMF0448
תוכנת Agilent OpenLab   Agilentגרסה 2.X
נוגדן-AMPKαטכנולוגיית איתות תאים#2532
נוגדן-HIF-1 ואלפא;טכנולוגיית איתות תאים#41560
נוגדן-p-AMPK ואלפא;טכנולוגיית איתות תאים#50081
איתות תאיםנוגדן-Sirt12028
איתות תאיםנוגדנים-ובטא;-אקטין#4970
ערכת בדיקת ריכוז חלבוןBCA Boster Biological Technology17E17B46
אלבומין סרום בקרCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW127-02
מעכב פוספטאז רחב ספקטרום (100 פעמים;)Boster Biological TechnologyAR1183
עמודה כרומטוגרפיתAgilentSB-C18
CoCl2Sigma15862
שייקר דה-קולוריזציהKylin-BellTS-2
DorsomorphinMedChemExpress (MCE)HY-13418A
הנשר השונה של דולבקו בינוניGibco8121587
מאגר אלקטרופורזהNCM Biotech20230801
סרום בקר עובריGibco2166090RP
עז נגד ארנב IgG H& L (TRITC)ZenBioScience Co., Ltd.
511202 תוכנת GraphPad Prismתוכנת GraphPad, LLCגרסה 9.0.0
כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהיםAgilent1260 Infinity II Prime 
צנטריפוגה מקוררת במהירות גבוההתרמו פישר אגדה מדעיתמיקרו 17R
HRP מצומד affinipure עז אנטי-ארנב IgG (H + L)Boster ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מBA1054
HT22 תאיםגואנגג'ואו ג'ניו ביוטק ושות', בע"מJNO-02001
ערכת כימילומינסנציה ECL רגישה במיוחדNCM BiotechP10300
Image J תוכנההמכונים הלאומיים לבריאותv1.8.0
מכשיר בקרת טמפרטורת חימום מתכתBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
מתנולאלאדיןM116118
נוקלאוטיד (ATP, ADP ו-AMP)בייג'ינג Solarbio Science & טכנולוגיה ושות', בע"מBC5114
PAGE ערכת הכנה מהירה לג'לBiosharpPL566B-5
פניצילין-סטרפטומיציןNCM BiotechC125C5
פוספט חוצץ מלח (1&)Gibco8120485
סמן חלבון צבעוני מוכתם מראש (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
מאגר טעינת חלבון (5x)Boster Biological TechnologyAR1112
PVDF (0.45 μ מ)Cywin Innovation (בייג'ינג) ביוטכנולוגיה ושות', בע"מSW120-01
פתרון העברת ממברנה מהירהCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
RIPA ליזאטבוסטר טכנולוגיה ביולוגית ושות', בע"מAR0105
Salidrosideצ'נגדו Herbpurify ושות', בע"ממאגר RFS-H0400191102
TBSNCM Biotech23HA0102
מאגר טרנסממברניNCM Biotech23CA2000
טריפסין (0.25%, 1&)HyCloneJ210045
Tween 20שנחאי Canspec מכשירים מדעיים ושות', בע"מ
מכשיר שיבוש תאים אולטרסאונדNingbo Xinyi ציוד קולי ושות', בע"מJY92-IIDN
מערכת הדמיה VisionworksAnalytik JenaUVP ChemStudio
מערבל מערבולתKylin-BellXW-80A
טכנולוגיית #טכנולוגיית ערכת בדיקת תוכן PM12012

מקורות

  1. Marutani, E., Ichinose, F. Sulfide catabolism ameliorates hypoxic brain injury. Nat Commun. 12 (1), 3108(2021).
  2. Chen, X., Ma, W., Li, Y. Current situation of Chinese and Western medicine research on hypoxic brain injury at high altitude. Jilin Medical J. 43 (11), 3099-3101 (2022).
  3. Huo, Y., Zhao, A., Li, X., Li, J., Wang, R. Animal models of acute plateau disease. Chinese Pharmacol Bull. 37 (01), 26-30 (2021).
  4. Netzer, N., Strohl, K., Faulhaber, M., Gatterer, H., Burtscher, M. Hypoxia-related altitude illnesses. J Travel Med. 20 (4), 247-255 (2013).
  5. Lefferts, W. K., et al. Effect of hypoxia on cerebrovascular and cognitive function during moderate intensity exercise. Physiol Behav. 165, 108-118 (2016).
  6. Burtscher, J., Mallet, R. T., Burtscher, M., Millet, G. P. Conditioning the brain: From exercise to hypoxia. Exerc Sport Sci Rev. 49 (4), 291-292 (2021).
  7. Koester-Hegmann, C., et al. High-altitude cognitive impairment is prevented by enriched environment including exercise via VEGF signaling. Front Cell Neurosci. 12, 532(2019).
  8. Coimbra-Costa, D., Alva, N., Duran, M., Carbonell, T., Rama, R. Oxidative stress and apoptosis after acute respiratory hypoxia and reoxygenation in rat brain. Redox Biol. 12, 216-225 (2017).
  9. Nair, S., et al. Neuroprotection offered by mesenchymal stem cells in perinatal brain injury: Role of mitochondria, inflammation, and reactive oxygen species. J Neurochem. 158 (1), 59-73 (2021).
  10. Rodríguez, M., Valez, V., Cimarra, C., Blasina, F., Radi, R. Hypoxic-Ischemic encephalopathy and mitochondrial dysfunction: facts, unknowns, and challenges. Antioxid Redox Sign. 33 (4), 247-262 (2020).
  11. Li, T., et al. Overexpression of apoptosis inducing factor aggravates hypoxic-ischemic brain injury in neonatal mice. Cell Death Dis. 11 (1), 77(2020).
  12. March-Diaz, R., et al. Hypoxia compromises the mitochondrial metabolism of Alzheimer's disease microglia via HIF1. Nature Aging. 1 (4), 385-399 (2021).
  13. Aabdien, A., Mallard, C., Hagberg, H. Mitochondrial dynamics, mitophagy and biogenesis in neonatal hypoxic-ischaemic brain injury. FEBS Lett. 592 (5), 812-830 (2018).
  14. Bai, X. L., Deng, X. L., Wu, G. J., Li, W. J., Jin, S. Rhodiola and salidroside in the treatment of metabolic disorders. Mini-Rev Med Chem. 19 (19), 1611-1626 (2019).
  15. Ji, R., et al. Salidroside alleviates oxidative stress and apoptosis via AMPK/Nrf2 pathway in DHT-induced human granulosa cell line KGN. Arch Biochem Biophys. 715, 109094(2022).
  16. You, L., Zhang, D., Geng, H., Sun, F., Lei, M. Salidroside protects endothelial cells against LPS-induced inflammatory injury by inhibiting NLRP3 and enhancing autophagy. BMC Complement Med. 21 (1), 146(2021).
  17. Yang, S. X., et al. Salidroside alleviates cognitive impairment by inhibiting ferroptosis via activation of the Nrf2/GPX4 axis in SAMP8 mice. Phytomedicine. 114, 154762(2023).
  18. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).
  19. Yang, H., et al. Black soybean peptide mediates the AMPK/SIRT1/NF-κB signaling pathway to alleviate Alzheimer's-related neuroinflammation in lead-exposed HT22 cells. Int J Biol Macromol. 286, 138404(2025).
  20. Yoon, H., Shin, S. H., Shin, D. H., Chun, Y. S., Park, J. W. Differential roles of Sirt1 in HIF-1α and HIF-2α mediated hypoxic responses. Biochem Bioph Res Co. 444 (1), 36-43 (2014).
  21. Hou, Y., et al. Rhodiola crenulata alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury by maintaining BBB integrity and balancing energy metabolism dysfunction. Phytomedicine. 128, 155529(2024).
  22. Jafari, R., et al. The cellular thermal shift assay for evaluating drug target interactions in cells. Nat Protoc. 9 (9), 2100-2122 (2014).
  23. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. Eur J Pharmacol. 912, 174617(2021).
  24. Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. J Ethnopharmacol. 293, 115278(2022).
  25. Kristián, T. Metabolic stages, mitochondria and calcium in hypoxic/ischemic brain damage. Cell Calcium. 36 (3-4), 221-233 (2004).
  26. Carling, D. AMPK signalling in health and disease. Curr Opin Cell Biol. 45, 31-37 (2017).
  27. Steinberg, G. R., Hardie, D. G. New insights into activation and function of the AMPK. Nat Rev. Mol Cell Bio. 24 (4), 255-272 (2023).
  28. Zhang, N., et al. Restoration of energy homeostasis under oxidative stress: Duo synergistic AMPK pathways regulating arginine kinases. PLoS Genet. 19 (8), e1010843(2023).
  29. Wang, Y., et al. Irisin ameliorates neuroinflammation and neuronal apoptosis through integrin αVβ5/AMPK signaling pathway after intracerebral hemorrhage in mice. J Neuroinflamm. 19 (1), 82(2022).
  30. Liu, H., Li, Y., Xiong, J. The role of hypoxia-inducible factor-1 alpha in renal disease. Molecules. 27 (21), 7318(2022).
  31. Wu, H., et al. Mitochondrial dysfunction promotes the transition of precursor to terminally exhausted T cells through HIF-1α-mediated glycolytic reprogramming. Nat Commun. 14 (1), 6858(2023).
  32. Joo, H. Y., et al. NADH elevation during chronic hypoxia leads to VHL-mediated HIF-1α degradation via SIRT1 inhibition. Cell Biosci. 13 (1), 182(2023).
  33. Ham, P. B., Raju, R. Mitochondrial function in hypoxic ischemic injury and influence of aging. Prog Neurobiol. 157, 92-116 (2017).
  34. Dal Cortivo, G., Barracchia, C. G., Marino, V., D'Onofrio, M., Dell'Orco, D. Alterations in calmodulin-cardiac ryanodine receptor molecular recognition in congenital arrhythmias. Cell Mol Life Sci. 79 (2), 127(2022).
  35. Wang, Z. Q., et al. Cyclovirobuxine D inhibits triple-negative breast cancer via YAP/TAZ suppression and activation of the FOXO3a/PINK1-Parkin pathway-induced mitophagy. Phytomedicine. 136, 156287(2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

הגנה מיטוכונדריאלית על ידי סלידרוסידנתיב AMPKנתיב Sirt1HIF-1 Alphaתכולת נוקלאוטידיםרמות ATPתזוזה תרמית תאיתכרומטוגרפיה נוזלית בעתכת ביצועיםרפואה סינית מסורתית

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.