פרוטוקול זה מתאר את היישום של הטכניקה הכירורגית המשמשת להעברת עוברי חזירים משובטים באמצעות laparotomy בזהבים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
פרוטוקול זה מתאר את היישום של הטכניקה הכירורגית המשמשת להעברת עוברי חזירים משובטים באמצעות laparotomy בזהבים.
פרוטוקול זה נועד להדגים את הטכניקה הכירורגית להעברת עוברי חזירים משובטים לאובידוקט, שיטה הנמצאת בשימוש נרחב בייצור חזירים מהונדסים גנטית למחקר ביו-רפואי. תשעה זהובים עברו סנכרון הורמונלי ולפרוטומיה להחזרת עוברים משובטים המיוצרים על ידי העברה גרעינית של תאים סומטיים (SCNT) בשלבים של עד 4 תאים ביום השני לאובידוקט. אבחון ההריון בוצע באמצעות בדיקת אולטרסאונד 30 יום לאחר ניתוח ההעברה. שישה מתוך תשעת הזימים שנותחו הראו סימני הריון בבדיקת אולטרסאונד. עם זאת, מכיוון שלא הייתה התקדמות בהתפתחות העובר כפי שהוערכה על ידי האכוגרפיה, הזימים עברו נקרופסיה בגיל 60 יום לאיסוף החומר הביולוגי והערכת מערכת הרבייה. הידבקויות נצפו בקרני הרחם, בשחלות ובביציות. מלומן הרחם של שניים מהזהובים המורדמים, התקבלו מבנה עוברי אחד וארבעה עם גילאי הריון הנעים בין 12 ל -20 יום. למרות היעדרם של חזירונים חיים, המיוחס ככל הנראה ליעילות נמוכה של החזרת עוברי חזירים משובטים, המושפעת מגורמים שונים, כולל מספר ואיכות העוברים המוחזרים, הטכניקה הכירורגית שהוצגה הוכחה כמהירה ובטוחה.
חזירים הם מודל ניסיוני מצוין למחקר ביו-רפואי בשל הדמיון האנטומי, הפיזיולוגי והגנטי שלהם לבני אדם1. בעלי חיים אלה שימשו לעתים קרובות במחקר הקשור להשתלת קסנו, מתוך כוונה לייצר איברים, תאים או רקמות המקדמים סיכון נמוך לדחייה כאשר הם מושתלים בבני אדם. מחקר ההשתלות נועד להגדיל את אספקת האיברים להשתלה אנושית, ובכך לצמצם את רשימת ההמתנה של חולים2.
ייצור חזירים להשתלת קסנו כרוך במספר שלבים, כולל ייצור שיבוטים מתאי חזירים ערוכים גנטית. לאחר ייצור במבחנה של עוברים משובטים מהונדסים גנטית, העוברים מועברים למערכת הרבייה של זרע עם מחזור ייחום מסונכרן כדי להכין את הפיזיולוגיה של הרחם לקבלה ולהריון של המושג החדש3.
החזרת עוברים בחזירים יכולה להתבצע בשיטות לא פולשניות או פולשניות4. בין השיטות הלא פולשניות היא העברה transcervical , אשר אינו דורש כל התערבות כירורגית. עם זאת, שיטה זו מוגבלת להחזרת עוברים בשלבי התפתחות מאוחרים יותר (כלומר שלבי מורולה או בלסטוציסט) ואינה מאפשרת קביעה מדויקת של מקום החדרת הצנתר או שיקוע העובר5. לפרוסקופיה ולפרוטומיה נחשבות לשיטות פולשניות להחזרת עוברים. לפרוסקופיה היא פחות פולשנית אך דורשת ציוד ספציפי ויקר, ויעילותה משתנה במידה ניכרת (מפחות מ-20% ליותר מ-80%) בשל גורמים שונים כגון קושי במניפולציה של מבני הרבייה וסוג הצנתר בו נעשה שימוש 4,6. לכן, העברה באמצעות לפרוסקופיה עדיין פחות יעילה בהשוואה לשיטות העברה כירורגיות באמצעות לפרוסקופיה4.
ניתוח החזרת עוברים בזרע באמצעות לפרוטומיה הוא הליך פשוט ומהיר יחסית, הנמשך בדרך כלל כ -30 דקות. עם זאת, זה צריך להתבצע במרכז כירורגי מצויד מנגנון הרדמה שאיפה צוות מיוחד. עבור זני חזירים מסחריים (כגון Landrace, Large White, או הכלאות שלהם), ציוד מיוחד כמו מנופים להרמת זהבים ושולחן ניתוחים רחב ויציב נחוצים בשל משקלם הרב של בעלי החיים (סביב 130-150 ק"ג).
כדי שהניתוח יצליח, יש להעריך את שלב התפתחותם של העוברים לפני כן. מומלץ להעביר עוברים של עד 4 תאים לצינור הרחם. עוברים בשלבים שמעבר ל-4 תאים, כגון מורולות ובלסטוציסטים, צריכים להיות מועברים לקרן הרחם 7,8.
למרות שקבוצות מחקר ברחבי העולם מבצעות ייצור והעברה כירורגית של עוברי חזירים משובטים מהונדסים גנטית, עדיין אין פרוטוקולים מוגדרים היטב המדגימים הליך זה באמצעות סרטונים. גישה זו חיונית להצלחת ההיריון, שכן הטכניקה דורשת תצהיר מדויק של עוברים במיקום המדויק של האובידוקט, הכולל לוקליזציה של אוסטיום הצינורית והכנסת פיפטה המכילה את העוברים. טכניקה זו יכולה להיות מובנת טוב יותר באמצעות סרטוני הסבר של ההליך כולו. לכן, מאמר זה נועד להדגים את ניתוח הלפרטומיה להעברת עוברים משובטים לאובידוקט של זהבים, תנאי מוקדם חיוני לייצור עתידי של חזירים מהונדסים גנטית שישמשו להשתלת קסנו או למטרות קשורות אחרות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים במחקר של המכללה לרפואה וטרינרית ומדעי בעלי חיים של אוניברסיטת סאו פאולו, פרוטוקול מספר 6088030523. תשעה זהובים בני שבעה חודשים מגרעין החזירים Água Branca, הממוקם בעיר איטו, מדינת סאו פאולו, ברזיל, שימשו מיד לאחר גילוי הייחום השני9. פרטי הריאגנטים והציוד ששימש במחקר מפורטים בטבלת החומרים.
1. הכנת בעלי חיים
2. הליך כירורגי
3. טיפול לאחר הניתוח
4. אבחון הריון אולטרה-סונוגרפי של הריון
5. המתת חסד של בעלי החיים
הערה: יש להרדים את הזהובים שלא הציגו עוברים בגודל ובמראה המתאימים לגיל ההריון בבדיקה האולטרה-סונוגרפית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה נועד להדגים את ניתוח הלפרטומיה להחזרת עוברים משובטים לאובידוקט של זהבים. כל בעלי החיים נשארו במישור הרדמה מתאים, ללא אירועים תוך ניתוחיים או סיבוכים במהלך ההתאוששות מההרדמה. לזהובים נדרשו, בממוצע, 2-3 שעות לעמוד לאחר סיום הניתוח.
כל ההליכים הכירורגיים נמשכו, בממוצע, 44 דקות. תשעה זהובים נותחו, כאשר בממוצע 185 עוברים משובטים הוחזרו לכל זהב, ובסך הכל 1,664 עוברים הוחזרו באופן דו-צדדי (טבלה 1). לוקליזציה של השחלות, יציאתן, והכנסת קטטר Tomcat המכיל את העוברים לתוך האוסטיום...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
השיטה הכירורגית המתוארת בוצעה בעבר על ידי קבוצות מחקר אחרות העובדות עם ייצור חזירים משובטים או חזירים משובטים מהונדסים גנטית, עם דיווחים על לידות לאחר יישום טכניקה זו 15,16,17,18,19,20. שיעורי ההריון והלידה של עוברי SCNT המיוצרים מקווי תאים שונים נעים סביב 20%-30% (מתוך 264 החזרות מאז 2017), ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
אף אחד מהכותבים לא חושף ניגוד עניינים כלשהו
ברצוננו להודות לבית החולים הווטרינרי לסוסים ולבית החולים הווטרינרי מעלי גירה של המכללה לרפואה וטרינרית, אוניברסיטת סאו פאולו (FMVZ / USP), סאו פאולו, ברזיל, FAPESP (מענק 2022/11459-3, קרן המחקר של סאו פאולו), EMS Pharma, CNPq (מענק 405254/2022-9), וחקלאות חזירים Água Branca, איטו, סאו פאולו, ברזיל.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.25 מ"ל קש | חומר | ||
| 1 מ"ל מזרק | Descarpack | 341001 | חומר כירורגי |
| 10 מ"ל מזרק | Descarpack | 324601 | חומר כירורגי |
| 20 מ"ל מזרק | Descarpack | 324801 | חומר כירורגי |
| 3 מ"ל מזרק | Descarpack | 324201 | חומר |
| מזרק 5 מ"ל | Descarpack | 324401 | חומר כירורגי |
| 60 מ"ל מזרק | Descarpack | 323201 | חומר כירורגי |
| צינור אנדוטרכיאלי 9 מ"מ | Rusch | 112482-000090 | חומר כירורגי |
| אליס מלקחיים | כירורגי | ||
| גנרי Amox LA | JA Saú de Animal | MAPA: 8.781/2004 | תרופה פרמצבטית |
| מלקחיים Bakhaus | מכשיר גנרי-כירורגי | ||
| צנתר 20G | Descarpack | 362401 | קטטר לגישה תוך ורידית |
| Cetamin | Agener Uniã o | רישום MAPA: SP-000292-5.000011 | הרדמה |
| ג'ל קליני מוליך | רישום RMC | ANVISA: 80122200013 | חומר כירורגי |
| Dipyrone D-500 | Zoetis | רישום MAPA: SP0000728-46 | תרופה פרמצבטית |
| אזמל חד פעמי n. 22 | Wiltex | ANVISA רישום: 10150470565 | מכשיר כירורגי |
| מברשת ספוג סטרילית חד פעמית | Rioquimica | 7.89778E+12 | אספסיס כירורגי |
| סריקה קלה: Go | IMV | ESCG01 | אולטרסאונד |
| אנדוזים AW פלוס | Ruhof | 34514 | חומר ניקוי למכשירים כירורגיים |
| פנטניל (פנטנסט) | Cristá | lia ANVISA רישום: 1029800810159 | |
| מפסק גוסט | הרדמה מכשיר גנרי-כירורגי | ||
| הלסטד-יתוש מלקחיים המוסטטיים | גנרי-כירורגי מכשיר | ||
| ריפוי - Unguento Pearson | Pearson SA | רישום MAPA: SP0000094-16 | תרופה פרמצבטית |
| Rioquimica | רישום ANVISA: 218690015 | חומר כירורגי | |
| איזופלואורן | ביוכימיקו | רישום ANVISA: 100630222 | |
| סט טפטוף IV הרדמה מאריך | גנרי-נוזלי | טיפול | |
| IV סט טפטוף מאקרו | Descarpack | 410301 | טיפול בנוזלים |
| לקטופור (ceftiofur) | Ourofino SA | רישום MAPA: SP0000051-50 | תרופה פרמצבטית |
| לרינגוסקופ | - | מכשיר כירורגי | |
| Maxicam 2% | Ourofino SA | רישום MAPA: SP0000051-69 | תרופה פרמצבטית |
| דבק Micropore 5 ס"מ x 10 ס"מ | חומר כירורגי | גנרי 1530 | |
| Midazolam | Hipolabor | רישום ANVISA: 1134301430035 | |
| סט עירוי IV רב כיווני | Descarpack | 413201 | טיפול בנוזלים |
| 40 מ"מ x 1.2 מ"מ | Descarpack | 353601 | מחט סטרילית למריחת תרופות וחומרי הרדמה. |
| מחט 40 מ"מ x 1.6 מ"מ | Wiltex | ANVISA: 10150470664 | מחט סטרילית למריחת תרופות וחומרי הרדמה. |
| מחזיק מחט | גנרי-מכשיר כירורגי | ||
| ניילון 2 תפר trhead | שאלון רפואי | N502CTI40 | חומר כירורגי |
| עט רגיל | גנרי-רגיל | לרישום הערות | |
| תמיסה פיזיולוגית 0.9% 500 מ"ל שקית | JP Farma | MS:1.0491.0070 | טיפול בנוזלים |
| חומצה פוליגליקולית 2 חוט תפר | Atramat | G4099-75H | חומר כירורגי |
| אשלגן כלורי | Samtec | ANVISA רישום: 1559200010139 | תרופות פרנטרלי |
| Descarpack | 122401 | ציוד מגן אישי (PPE) | |
| פרופופול (Provive) | Uniã o Quí נציץ | ANVISA רישום: 1049714490057 | |
| תמיסת הרדמה רינגר לקטט 500 מ"ל שקית | JP Farma | MS:1.0491.0061 | טיפול בנוזלים |
| Riohex 0.5% תמיסת אלכוהול קלורקסדין | Rioquimica | 218690356 | אספסיס כירורגי |
| Riohex 2% תמיסת קלורקסדין עם חומר פעילי שטח | Rioquimica | 218690356 | אספסיס כירורגי |
| קרקפת 21 גרם | Descarpack | 421201 | חומר כירורגי |
| כיסויי נעליים | אישי גנרי | (PPE) | |
| קומפרסים סטריליים | Cremer | ANVISA רישום: 10071150065 | חומר כירורגי |
| כרית גזה סטרילית | Procitex | ANVISA רישום: 80245210083 | חומר כירורגי |
| וילונות כירורגיים סטריליים 140 ס"מ x 90 ס"מ | Venkuri | 7010003 | חומר כירורגי |
| וילונות כירורגיים סטריליים 150 ס"מ x 190 ס"מ | PolarFix | F00208 | חומר כירורגי |
| כפפות כירורגיות סטריליות | Mucambo | CA: 39.317 | ציוד מגן אישי (PPE) |
| סטטוסקופ | ציוד כירורגי | ||
| כובע כירורגי | Descarpack | 93201 | ציוד מגן אישי (PPE) |
| חלוק כירורגי | Descarpack | 231101 | ציוד מגן אישי (PPE) |
| מסכה כירורגית | Descarpack | 110701 | ציוד מגן אישי (PPE) |
| מספריים כירורגיים בוטה-קהה | גנרי-כירורגי | ||
| מספריים כירורגיים חדים-חדים | גנרי-מכשיר | כירורגי | |
| מהדק כירורגי | Tradevet-חומר | כירורגי | |
| Tekbond סופר דבק | טק בונד | 78072720030 | חומר כירורגי |
| מדחום | כירורגי | ||
| תלת כיווני Stopcock | Solidor | 374 | חומר כירורגי |
| טרמדול הידרוקלוריד | Agener Uniã o | רישום MAPA: SP-000292-5.000002 | |
| חבישת סרט שקוף | Skinupper | רישום ANVISA: 82307460014 | חומר כירורגי |
| דבק עמיד למים 10 ס"מ x 4.5 ס"מ | 364828 גנרי | חומר כירורגי |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.