מאמר שיטה

מודל עכבר לליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה המבוסס על היצרות עורק צוואר משותף דו-צדדי אסימטרי מונחה מחט

2.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/67092

⸱

22 בנובמבר 2024

 ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, University of Pittsburgh, 2Geriatric Research Education and Clinical Center, VA Pittsburgh Healthcare System, 3School of Arts & Sciences, Washington University in St. Louis, 4Animal Imaging Center, University of Pittsburgh

במאמר זה

סיכום

שיטת המחט של היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדית הא-סימטרית מוצעת ליצירת מודל עכבר לפגיעה קוגניטיבית בכלי הדם ודמנציה. זה מביא לתוצאות ארוכות טווח בהשוואה למודלים שנקבעו בעבר ותואם ל-MRI חי. ייצוג חזותי המדגים את ההליך מספק הנחיות לשליטה בניתוח.

תקציר

ליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה (VCID) נובע מפגיעה מוחית בכלי הדם. בהתחשב בשכיחות הגבוהה של VCID, שצפויה להמשיך לעלות ככל שהאוכלוסייה מזדקנת, חיוני לבסס מודל חזק של בעלי חיים למחלה. מאמר זה מציג שיטה חדשה ליצירת מודל עכבר של VCID המבוסס על היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי הא-סימטרי, המחקה היפופרפוזיה מוחית כרונית אנושית הנגרמת על ידי טרשת עורקים קרוטידית.

בקצרה, עורקי צוואר נפוצים (CCAs) נקשרים למחטים בקנה מידה שונה (32 G עבור ה-CCA הימני ו-34 G עבור ה-CCA השמאלי) באמצעות תפרי משי 7-0 ואחריהם הסרת מחט מיידית. טבעות התפרים הנותרות גורמות להפחתה מתמשכת בזרימת הדם ולפגיעה קוגניטיבית ארוכת טווח הקשורה לפגיעה בחומר הלבן, מיקרו-אוטמים וגליוזיס תגובתי, ובכך מחקה מקרוב את הפתוגנזה של VCID. חשוב לציין, במודל מחט זה, הייצוגים הקליניים אינם חוזרים עם הזמן, ומספקים ליקוי קוגניטיבי אמין לטווח ארוך. יתר על כן, שיעור ההישרדות 24 שבועות לאחר הניתוח היה 81.6%, שהוא גבוה יותר בהשוואה למודלים המבוססים האחרים של VCID עם רמה דומה של הפחתת זרימת הדם.

יתרונות נוספים כוללים עלות חומר נמוכה ותאימות ל-MRI לניטור פגיעה מוחית בבעלי חיים מכיוון שלא מושתלת מתכת. האתגר העיקרי בשימוש במודל המחט של VCID הוא הדרישה לפיתוח מיומנויות כירורגיות מתקדמות מכיוון שקוטר CCA של עכברים הוא פחות מ-0.6 מ"מ והם שבירים מאוד. ייצוג חזותי איכותי של הניתוח יעזור לחוקרים לשלוט בטכניקה זו ולקדם את הבנתנו את VCID, מה שעשוי להוביל לפיתוח שיטות טיפוליות חדשות להפחתת הירידה הקוגניטיבית ההרסנית הקשורה ל-VCID.

מבוא

ליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה (VCID) הוא הגורם השני המוביל לירידה קוגניטיבית. למרות ההתקדמות הבלתי ניתנת להכחשה שנעשתה לקראת הבנת פתוגנזה של VCID וגורמי הסיכון שלה, המנגנון של האופן שבו תפקוד נוירו-וסקולרי תורם לירידה ביכולת הקוגניטיבית נותר מעורפל. מספר מודלים של מכרסמים במורכבויות שונות הוקמו כדי לגרום לאיסכמיה מוחית לחקות את הייצוגים הקליניים של VCID1 אנושי. חלק מהמודלים הללו מבוססים על יצירת היפופרפוזיה מוחית חולפת; עם זאת, רובם נוצרים על ידי השראת היפופרפוזיה מוחית כרונית, המנגנון העיקרי המוביל ל- VCID בחולים אנושיים2.

ניתן להכניס היפופרפוזיה מוחית כרונית באמצעות חסימת עורק הצוואר הדו-צדדית (BCAO), הגורמת לתוצאות חמורות, אך לעתים קרובות קטלניות, או היצרות עורק הצוואר הדו-צדדי (BCAS). BCAS מבוצע בדרך כלל באחת משתי שיטות: על ידי הצבת מיקרו-סלילים זהים סביב שני ה-CCA, וכתוצאה מכך היצרות סימטרית3; או על ידי השתלת מכווץ אמרואיד ומיקרו-סליל סביב ה-CCA השמאלי והימני, בהתאמה, הגורמים לחסימה הדרגתית ולהפחתת זרימת הדם ~50% ב-CCA השמאלי והימני, בהתאמה4. החסרונות של שתי השיטות הם שיעור תמותה גבוה אם ההיצרות חמורה מדי או אם ה-CCA חסום וחוסר התאמה לסריקת MRI של בעלי חיים עקב נוכחות מתכת בגוף. כמה מודלים גנטיים של עכברים הוקמו גם 1,5,6,7,8. אפשרויות נוספות כוללות עורקים אוטוזומליים דומיננטיים במוח עם אוטמים תת-קורטיקליים ודגמי עכברים לויקואנצפלופתיה 9,10. עם זאת, אף אחד מהמודלים המוצעים אינו מחקה את כל טווח הנזק האיסכמי המוצג בחולים אנושיים, ולכן החיפוש אחר מודלים מעודכנים של VCID נמשך.

מאמר זה מציג שיטה כירורגית חדשה להשראת היצרות עורק הצוואר המשותף (ABCS) דו-צדדית אסימטרית בעכברים, כאשר היצרות CCA מבוצעת באמצעות תפרי משי ונשלטת על ידי קשירת CCAs למחטים בקטרים שונים ואחריה הסרת מחט מיידית11. כתוצאה מכך, טבעות תפרים בקוטר מדויק נותרות לצמיתות על ה-CCA כדי להבטיח היצרות כרונית. היתרון בשימוש ב-ABCS על פני שיטה סימטרית הוא שהיפופרפוזיה מתונה מימין מבטיחה הישרדות טובה יותר בעוד שהיפופרפוזיה בולטת יותר משמאל מבטיחה ייצוגים נוירולוגיים ופתולוגיים לטווח ארוך. למודל מחט זה מספר יתרונות על פני מודלי BCAS המסורתיים11 כגון תוצאות מתמשכות, תמותה נמוכה יותר, עלות נמוכה במיוחד, גמישות ואפשרות להשתמש בגישות אנליטיות מיוחדות.

כדי להרחיב את היתרונות הללו, שלוש קשירה גורמות לשבר של היצרות CCA במקום היצרות נקודת מוקד, מה שמוביל להיפופרפוזיה מתמשכת, פגיעה בחומר לבן וירידה קוגניטיבית ב~90% מהעכברים. התמותה של עכברי המחט הייתה ~17%, נמוכה מזו של המגביל האמרואידי/מיקרו-סליל מודל4 של האטורי, שיש לו ~30% תמותה במשך 16 שבועות על סמך הניסיון שלנו. כל דגם BCAS עולה בדרך כלל בסביבות 100 דולר בשל המיקרו-סלילים היקרים או מגבילי האמרואידים, בעוד שדגם המחט עולה רק כ-1 דולר לעכבר. יתר על כן, ניתן לשנות את מד המחטים בהתאם לדרישות המחקר הספציפיות להגבלת זרימת הדם משני הצדדים. בווריאציה המוצגת במאמר הנוכחי, מודל המחט מחקה את הפתופיזיולוגיה של היצרות קרוטיד חמורה, הנגרמת על ידי היצרות קבועה חד צדדית ללא חסימה, שהיא הייצוג השכיח ביותר של המחלה במרפאה11. יתר על כן, מגבילים אמרואידים ומיקרו-סלילים המשמשים בדגמי BCAS מסורתיים עשויים מתכת, מה שעלול לגרום לחפצים משמעותיים אם מבוצע MRI in vivo , למרות שהמתכת מושתלת לא במוח אלא בחזה. ייתכן שיהיה קשה לחזות כיצד בדיוק נוכחות המתכת תשפיע על ההדמיה.

בדרך כלל, MRI in vivo המבוצע לאחר השתלת מיקרו-סליל הוא בדרך כלל הדמיה אנטומית פשוטה, שאינה מתאימה לניתוח כמותי של עלבונות מרובים, דבר רצוי מאוד למחקר VCID. לעומת זאת, דגם המחט המוצג כאן משתמש בתפרי משי בלבד ותואם באופן מלא לכל סוג של MRI in vivo. זה משמעותי משתי סיבות: (1) MRI רגיש ביותר לנגעים מוחיים קטנים, מיקרו-דימומים או סידרוזיס שטחי12, ולכן הוא מועדף על פני שיטות הניתוח האחרות, כגון סריקת CT (2) יש להעדיף MRI in vivo על פני MRI ex vivo , מכיוון שמחקר VCID ללא ספק יכול להפיק תועלת ממעקב אחר הדינמיקה של התקדמות/ריפוי הנגע, במיוחד בתגובה לטיפולים החדשים המוצעים. בנוסף, ניתן לבצע תפקודי (fMRI) במודל המחט כדי לספק תובנות קריטיות לגבי שלמות הצימוד הנוירו-וסקולרי בתגובה להיפופרפוזיה מוחית. לפיכך, האפשרות להשתמש ב-MRI in vivo פותחת דרך לניתוח מעמיק של המתאם המורכב בין גודל ומיקום הנגעים לתפקוד קוגניטיבי, כמו גם צימוד נוירו-וסקולרי, במיוחד במחקרי פרמקודינמיקה.

פרוטוקול

כל הפרוטוקולים לבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת פיטסבורג ובוצעו בהתאם למדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. יש לשמור על טכניקות סטריליות בכל ניתוחי ההישרדות. בניסויים שהוצגו נעשה שימוש בעכברים זכרים בני 12 שבועות C57BL/6J עם משקל גוף 25-30 גרם.

1. הכנת החומרים וחלל העבודה

  1. הכן את שברי המחט (באורך ~4 מ"מ; 32 גרם ל-CCA הימני ו-34 G ל-CCA השמאלי). קהה מעט את הקצה החד של המחטים על ידי הקשה בזהירות על הקצה החד על משטח קשה והפרד בזהירות את המחטים מחתיכות הפלסטיק באמצעות מחזיק מחט. חותכים מראש 7-0 תפרי משי לחתיכות באורך 1-2 ס"מ.
  2. עיקור מכשירים כירורגיים, שברי מחטים ותפרים על ידי חיטוי או כל שיטה מתאימה אחרת.

2. ביצוע הניתוח

  1. שקלו את העכבר והשרו הרדמה על ידי הנחת העכבר למשך 2-3 דקות בתא מאוורר עם 3% איזופלורן בתערובת של 25% O2 ו-72% N2O.
  2. הנח את העכבר (הצד הגחוני כלפי מעלה) על כרית חימום המכוסה בסדין כירורגי סטרילי כדי לשמור על טמפרטורת גוף קבועה (37 מעלות צלזיוס) ואבטח מסכת פנים לאוורור עם 1% איזופלורן בתערובת של 25% O2 ו-74% N2O. אבטח את גפי העכבר עם סרט דבק.
  3. לגלח את הפרווה על הצוואר בעזרת מכונת גילוח חשמלית. נקו את השיער הדק בעזרת סרט דבק או שואב מקלדת.
  4. חיטוי אתר הניתוח בתמיסת בטדין (10% יוד). יש להסיר יוד מהעור עם 70% אתנול. חזור על זיהום 3x. ודא שרמת ההרדמה מספקת על ידי חוסר תגובה לצביטה מוצקה בבוהן (רפלקס דוושה).
  5. עטפו את אזור הניתוח. לאחר מכן, בצע חתך אנכי בקו האמצע לאורך קנה הנשימה והפריד את בלוטות התריס הדו-צדדיות בעזרת מיקרו מלקחיים. משוך את העור והרקמות בעזרת מחזירי עור קטנים וסטריליים.
  6. תחת המיקרוסקופ, השתמש בפינצטה זוויתית כדי לחשוף ולנתח בזהירות את אחד ה-CCA מהעצב התועה והמעטפת. השתמש במים סטריליים או במי מלח עם חוצץ פוספט (PBS) כדי להרטיב את מקום החתך אם ה-CCA נוטה להיצמד למלקחיים. הנח מזרק פלסטיק קטן מתחת לצוואר כדי לתמוך ביציבה במידת הצורך.
    הערה: היזהר במיוחד לא לקרוע את ה-CCA.
  7. השחילו שלושה שברי תפרי משי חתוכים מראש (גודל 7-0) מתחת ל-CCA (במרחק של 1 מ"מ זה מזה) באמצעות פינצטה זוויתית.
  8. שרטטו קשר כפול רופף מאוד סביב ה-CCA על אחד משברי התפרים.
    הערה: הרטבת אתר הניתוח והתפרים במים סטריליים או PBS עשויה לעזור במשיכת קשר.
  9. הניחו שבר מחט (32 G עבור ה-CCA הימני ו-34 G עבור ה-CCA השמאלי) במקביל ל-CCA, בתוך הקשר הרופף (איור 1A). הדק בזהירות את הקשר הראשוני סביב המחט וה-CCA עד שלא נצפתה זרימת דם ואבטח אותו עם קשר משני. משוך מיד את המחט כדי להחזיר את זרימת הדם החלקית ולקצץ את קצות התפר.
    הערה: על המנתח להיות זהיר מאוד בקיצוץ קצוות התפרים לאחר השלמת הקשרים. חיתוך קרוב מדי לקשר עלול לגרום להתרופפות הקשר. בנוסף, חשוב להקפיד על ה-CCA לאחר הסרת המחט כדי לוודא שזרימת הדם עדיין מופעלת במורד הזרם של הקשר. אם ה-CCA נראה חיוור מאוד לאחר הסרת המחט, זה אומר שה-CCA דחוס יתר על המידה.
  10. חזור על שלבים 2.8-2.9 עבור חוטי התפרים 2ו-3 באותו CCA, במרחק של כ-1 מ"מ זה מזה (איור 1B).
  11. חזור על שלבים 2.6-2.10 עם ה-CCA הנגדי באמצעות שבר מחט של 32 G.
  12. בדוק היטב אם שני ה-CCAs קשורים ביעילות: ודא שכל שלושת רצועות התפרים קשורות היטב במקומן אך אינן הדוקות עד כדי חסימה מוחלטת של זרימת הדם (בדוק שה-CCAs אינם חיוורים במורד הזרם של הקשרים). בדוק ששלושת רצועות התפרים בכל CCA נמצאות במרחק של כ-1 מ"מ זו מזו.
  13. סגור את העור באמצעות תפרים מונופילמנטים סטריליים.
  14. מיד לאחר הניתוח יש להזריק 100-150 מיקרוליטר של קטופרופן (מלאי 1 מ"ג/מ"ל; 5 מ"ג/ק"ג משקל גוף) תוך צפקית כדי להקל על כאבים לאחר הניתוח. חזור על זריקה זו 24 שעות ו-48 שעות לאחר הניתוח.
  15. הנח את העכבר על שמיכה הומותרמית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לניטור רציף במשך שעתיים לפני החזרת החיה למתקן החיות.
    הערה: עבור הליך דמה, יש להשמיט את שלבים 2.7-2.12.

3. תיקוף המודל

הערה: הפגיעה המוחית נותחה באמצעות MRI in vivo ואומתה עוד יותר באמצעות צביעה כחולה מהירה של Luxol (LFB) ובדיקות התנהגותיות.

  1. הדמיה של זלוף דם מוחי.
    1. להרדים את העכבר באמצעות 1-1.5% איזופלורן. יש לעקר את אזור הניתוח עם תמיסת בטדין (10% יוד). לאחר מכן, יש להסיר יוד מהעור עם 70% אתנול.
    2. אבטח את גולגולת החיה במסגרת סטריאוטקטית. בצע חתך סגיטלי בקו האמצע בקרקפת מהעצם הקדמית לעורפית כדי לחשוף את הגולגולת ולנקות את פני הגולגולת במי מלח סטריליים.
    3. הנח מצלמת מכשיר מצמד טעון 10 ס"מ מעל הגולגולת באמצעות מערכת כתמי לייזר דו מימדית. הנח מחזיק בדיקה מעל אתר כריתת הקרניקטומיה ואבטח אותו היטב.
    4. צלם תמונות זלוף דם 5 דקות לפני הניתוח ומיד לאחר שחרור המחט או 7, 14, 21, 28, 35 ו-42 ימים לאחר הניתוח.
    5. סגור את העור באמצעות תפרים מונופילמנטים סטריליים. יש להזריק 100-150 מיקרוליטר של קטופרופן (מלאי של 1 מ"ג/מ"ל; 5 מ"ג/ק"ג משקל גוף) תוך צפקית כדי להקל על כאבים לאחר הניתוח. חזור על הזרקה זו 24 שעות ו-48 שעות.
  2. in vivo MRI
    1. להרדים את העכברים באמצעות 1-1.5% איזופלורן, כאשר הנשימה מנוטרת באופן רציף והטמפרטורה נשמרת על 37 מעלות צלזיוס עם אוויר חם במהלך רכישת התמונה.
    2. בצע MRI in vivo באמצעות סורק 9.4T, סליל Tx 86 מ"מ ומערך מקלט מוח של עכבר בעל 4 ערוצים, המפעילים את התוכנה המשויכת. לאחר סריקות מיקום ופיילוט, רכוש תמונות משוקללות T2 (T2WI) באמצעות רצף רכישה מהירה עם שיפור הרפיה (RARE), עם הפרמטרים הבאים: זמן הד/זמן חזרה (TE/TR) = 40/4,000 אלפיות השנייה, ממוצעים = 8,256 × 256 מטריצה, 16 פרוסות בעובי פרוסה של 0.5 מ"מ, גורם RARE = 4 ושדה ראייה (FOV) של 20 x 20 מ"מ.
    3. אסוף נתוני דיפוזיה טנזור הדמיה (DTI) באמצעות רצף הדמיה מישורי הד (EPI)-DTI תוך שימוש באותה גיאומטריה ופרמטרים כמו ה-T2WI למעט החריגים הבאים: TR/TE = 2,300/22 אלפיות השנייה, מטריצת רכישה = 128 x 128, 2 מקטעים, 5 תמונות A0 ו-30 תמונות דיפוזיה לא ליניאריות, Δ/δ = 10/3 אלפיות השנייה, וערך b = 1,000 שניות/מ"מ2.
    4. נתח נתוני DTI באמצעות תוכנת DSI Studio (http://dsistudio.labsolver.org/), בחיפוש אחר הבדלים בפרמטרים סקלריים של דיפוזיה (אנאיזוטרופיה חלקית (FA), דיפוזיות ממוצעת (MD), דיפוזיות צירית (AD) ודיפוזיות רדיאלית (RD)). צייר אזורי עניין (ROIs) עבור הקורפוס קלוסום (CC), הקפסולה החיצונית (EC), הקפסולה הפנימית (IC), פימבריה, הקומיסורה הקדמית (AC), הסינגולום (Cing), ההיפוקמפוס (היפופוטם), קליפת המוח (C) והסטריאטום (Str) משתי ההמיספרות.
  3. צביעת Luxol בכחול מהיר (LFB)
    1. הכינו חלקי מוח: קבעו את המוח עם 4% PFA למשך 24 שעות ואז טבלו את המוח ב-30% סוכרוז עד שהמוח שוקע. הטמיעו את המוח בתרכובת OCT על קרח יבש. חותכים פרוסת מוח קורונלית בעובי 20 מיקרומטר על מיקרוטום הזזה. אחסן פרוסות מוח בתמיסת אחסון (30% גליצרול/30% אתילן גליקול ב-PBS).
    2. טבלו את חלקי המוח ב-LFB (תמיסת אלכוהול 0.1%), שמרו בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס למשך הלילה ושטפו במים מזוקקים.
    3. לדגור על חלקי מוח בליתיום קרבונט 0.05% ולייבש באמצעות אלכוהול מדורג.
    4. מכתים את החלקים ב-0.5% סגול קרסיל למשך 5 דקות, מובחן עם 70% אתנול.
    5. הרכיבו את חלקי המוח המוכתמים עם אמצעי הרכבה.
  4. הערכת תפקוד קוגניטיבי עם מבחן מבוך מים מותאם של מוריס
    1. מלאו מיכל עגול במים (25 מעלותצלזיוס, עומק 33 ס"מ) וטבלו משטח פרספקס מרובע ~10 x 10 ס"מ2 1.2 ס"מ מתחת למפלס המים, 31 ס"מ מהקצה הצפוני, המזרחי, הדרומי או המערבי של הבריכה.
      הערה: פלטפורמה זו צריכה להישאר באותו מקום למשך כל תקופת הבדיקה.
    2. הפעל מצלמת וידאו המותקנת על התקרה. הנח עכבר במיכל (אין לשחרר בגובה המים), מול הקיר והחל מצפון-מזרח, דרום מזרח, דרום מערב או צפון מערב. אפשר לעכבר לשחות במשך 90 שניות לכל היותר כדי למצוא פלטפורמה שקועה.
    3. אפשר לעכבר להישאר על הפלטפורמה השקועה למשך 30 שניות אם הפלטפורמה נמצאת. אם הפלטפורמה לא נמצאה, הנח את העכבר שם למשך 30 שניות.
    4. תן לעכבר לנוח במשך 5 דקות וחזור על ניסיון השחייה (שלבים 3.4.2 - 3.4.3) 2x.
    5. יבש את העכבר עם פיסת בד והחזיר אותו לכלוב שלו מתחת לנורת חימום.
    6. חזור על שלושה מבחני שחייה בכל יום במשך 5 ימים רצופים.
    7. באמצעות קטעי וידאו, חשב את ההשהיה לבריחה (כמה זמן לוקח למצוא את הפלטפורמה בכל ניסיון).
    8. ביום האחרון לבדיקה, הסר את הפלטפורמה ורשום את הזמן שהעכבר מבלה ברבע, בו הייתה הפלטפורמה ממוקמת בעבר.

תוצאות

היפופרפוזיה מוחית אסימטרית לטווח ארוך
זרימת הדם של CCA נמדדה לפני ומיד לאחר שחרור המחט מהקשירה האחרונה (השלישית), כפי שתואר קודם לכן11. זרימת הדם הופחתה ב-~70% ב-CCA השמאלי וב-~50% ב-CCA הימני. זלוף דם מוחי נוטר באופן דינמי באמצעות כתמי לייזר דו-ממדיים. הניתוח גרם להיפופרפוזיה מוחית בשתי ההמיספרות, כאשר ההמיספרה השמאלית נפגעה בצורה חמורה יותר (איור 2). היפופרפוזיה מוחית נשמרת לפחות 24 שבועות לאחר הניתוח11.

תמותה נמוכה יותר
שיעור ההישרדות של עכברים זכרים במשך 6 שבועות היה 81.6% (איור 3); עכברים היו מועדים יותר למוות בשבוע הראשון לאחר הניתוח.

זיהוי MRI in vivo של פגיעה מוחית
תמונות משוקללות T2 חשפו אזורים היפו-אינטנסיביים או היפר-אינטנסיביים בהיפוקמפוס (Hippopo), בקפסולה החיצונית (EC), בקפסולה הפנימית (IC), בקורפוס קלוסום (CC) ובסטריאטום (Str) בעכברים שעברו ניתוח ABCS, מה שמצביע על פגיעה מוחית (איור 4A). נזק מבני נצפה במפות הצבע המקודדות כיוונית (DEC) של DTI של עכברי ABCS בהשוואה לזימה (איור 4B).

ניתוחים כמותיים הראו כי עכברי ABCS הראו אנזוטרופיה חלקית נמוכה משמעותית בהיפופוטם השמאלי, IC, קומיסורה קדמית (AC), סינגולום (Cg) ופימבריה (Fi) בהשוואה לדמה (P < 0.05 לעומת דמה), מה שמעיד על פגיעה במיקרו-מבנה החומר הלבן בהמיספרה השמאלית (הפאנל השמאלי העליון, איור 4C). FA ב-Cg הימני ו-Fi בעכברי ABCS הופחתו גם הם (P < 0.05 לעומת דמה). FA ב-IC השמאלי וב-Fi היו נמוכים משמעותית מזה של הימני בעכברי ABCS (P < 0.05, שמאל לעומת ימין).

באופן דומה, דיפוזיביות צירית נמוכה משמעותית (AD) הוצגה בעכברי ABCS השמאליים בהשוואה לדמה, מה שמרמז על פגיעה אקסונלית (הפאנל הימני העליון, איור 4C (P < 0.05 לעומת דמה)). רק ה-Str השמאלי הראה ירידה ממוצעת בדיפוזיביות (MD) בעכברי ABCS בהשוואה לדמה (פאנל שמאלי תחתון, איור 4C). הבדל בדיפוזיביות רדיאלית (RD) נצפה ב-CC, Str ו-Fi שמאליים בעכברי ABCS (פאנל ימני תחתון, איור 4C), מה שמרמז על דלקת ותאיות מוגברת באזורים אלה13.

פגיעה מוחית אסימטרית בשתי ההמיספרות ונזק באזורי החומר הלבן בהמיספרה השמאלית
פגיעה מוחית נותחה בנוסף עם צביעת LFB באמצעות ההליך שתואר קודם לכן14 (איור 5). תמונות בעוצמה נמוכה יותר הראו כתמים כחולים בהירים יותר ב-EC ו-Str, מה שמרמז על דה-מיאלינציה באזורים אלה. תמונות בחדות גבוהה הראו שעכברי דמה הציגו אקסונים מאורגנים היטב ומיאלינים עם אוליגודנדרוציטים בעלי אוריינטציה ליניאלית ב-EC; עם זאת, אקסונים נעלמו ותאים נפוצים ומוכתמים בכחול נצפו ב-EC בעכברי ABCS. עכברי דמה הראו מבני צרור סיבים מוכתמים כחולים עמוקים ומאורגנים היטב ב-Str. עם זאת, צרורות הסיבים הוכתמו בהירים וקטנים יותר, ושלמותם נפגעה; כמה צרורות סיבים שואבים בעכברי ABCS. צרורות הסיבים היו מעוותים, והמטריצה הבין-צרורית התעבה משמעותית ב-AC בעכברי ABCS. לסיכום, ניתוח ABCS גורם לדמיאלינציה אקסונלית ולנזק; נזק לחומר הלבן מתרחש בעיקר בהמיספרה השמאלית.

תפקוד לקוי של למידה וזיכרון
ניתוח המחט ABCS הביא ללקות למידה משמעותית, כפי שמצוין על ידי זמן מוגבר למציאת פלטפורמה שקועה (חביון לברוח) במהלך מבחן מבוך המים של מוריס (איור 6). נכות זו חלה לפחות 24 שבועות לאחר הניתוח. גם הזיכרון הושפע באופן משמעותי, כפי שעולה מירידת הזמן שהושקע ברביע היעד לאחר הסרת הפלטפורמה.

figure-results-1
איור 1: שלבים של ניתוח מחט ליצירת ABCS. (A) CCA שמאלי חשוף, ושלושה תפרי משי מושחלים מתחת ל-CCA. קשר רופף נמתח על אחד משברי התפר והמחט ממוקמת במקביל ל-CCA. (B) שלוש טבעות תפרים ממוקמות במרחק של כ-1 מ"מ זו מזו. קיצורים: ABCS = היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי הא-סימטרי; CCA = עורק הצוואר המשותף. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: היפופרפוזיה מוחית אסימטרית מתמשכת במודל ABCS המחט. ניטור דינמי של זרימת הדם במוח לאחר הניתוח. ניתן להבחין בהיפופרפוזיה מוחית מתמשכת בשתי ההמיספרות, בהיותה עמוקה יותר משמאל. כוכביות שחורות מצביעות על אזורי היפופרפוזיה. קיצור: ABCS = היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי אסימטרי אסימטרית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: שיעור ההישרדות לאחר ניתוח ABCS במחט. הניתוח הביא לשיעור הישרדות של 81.6% במשך 6 שבועות; המוות התרחש בעיקר בשבוע הראשון שלאחר הניתוח. קיצור: ABCS = היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי אסימטרי אסימטרית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4: זיהוי MRI in vivo של פגיעה מוחית במודל ABCS של המחט. (A) תמונות משוקללות T2 מייצגות מעכברי דמה ו-ABCS. ראשי חץ אדומים מצביעים על אזורים היפו-אינטנסיביים או היפר-אינטנסיביים. (B) מפת DEC מייצגת של in vivo DTI שבועיים לאחר ניתוח ABCS במחט. הצבעים מציינים את הכיווניות של ציר הדיפוזיה העיקרי (אדום = שמאל/ימין, ירוק = גבי/גחון, וכחול = רוסטרלי/זנבי). (C) ניתוח כמותי בעכברי דמה ו-ABCS (ANOVA חד-כיווני). * מייצג p < 0.05 ABCS לעומת דמה (המיספרה שמאלית). # מייצג p < 0.05 שמאל לעומת ימין. & מייצג p < 0.05 ABCS לעומת דמה (המיספרה ימנית). הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM; n = 4 עבור דמה, n = 4 עבור עכברי ABCS. קיצורים: ABCS = היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי הא-סימטרי; היפופוטם = היפוקמפוס; EC = קפסולה חיצונית; IC = קפסולה פנימית; CC = קורפוס קלוסום; Str = סטריאטום; DEC = צבע מקודד כיווני; DTI = הדמיית טנזור דיפוזיה; FA = אניזוטרופיה חלקית; MD = דיפוזיות ממוצעת; AD = דיפוזיות צירית; RD = דיפוזיביות רדיאלית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-5
איור 5: צביעת LFB מייצגת של פרוסות מוח 6 שבועות לאחר ניתוח ABCS במחט. (A) תמונות בעוצמה נמוכה של צביעת LFB מעכברי דמה ו-ABCS. תיבות לבנות מציינות את המיקום המתאים לתמונות בחדות גבוהה יותר ב-B. (B) תמונות בחדות גבוהה (200x) ממיקומי EC (פאנל עליון) ו-Str 1 ו-2 (פאנל אמצעי) ו-AC (פאנל תחתון). ראש חץ שחור מראה צרור סיבים רגיל. ראשי חץ כחולים מצביעים על צרור סיבים פגום. ראשי חץ אדומים מציינים סיבים בוואקום. פסי קנה מידה = 1 מ"מ (A), 100 מיקרומטר (B). קיצורים: ABCS = היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי הא-סימטרי; LFB = לוקסול כחול מהיר; EC = קפסולה חיצונית; Str = סטריאטום; AC = קומיסורה קדמית. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-6
איור 6: למידה מרחבית והערכת זיכרון במבחן מבוך מים. הלמידה המרחבית הוערכה (A) 3 שבועות ו-(B) 24 שבועות לאחר הניתוח על ידי מדידת הזמן לאיתור הפלטפורמה בימים רצופים. הזיכרון הוערך (C) 4 שבועות ו-(D) 24 שבועות לאחר הניתוח על ידי מדידת הזמן ששהה ברביע המטרה לאחר הסרת הפלטפורמה. הניתוח הביא לשיבוש ארוך טווח בתפקודים קוגניטיביים. הנתונים בוטאו כממוצע ± SEM, *p < 0.05 מחט לעומת דמה; **עמ' < 0.01 לעומת זיוף; ANOVA דו כיווני ונוימן-קולס פוסט הוק. n = 10 עבור דמה, n = 10 עבור קבוצות מחטים. נתון זה שונה מ-Weng et al.11. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

תוארו מספר שיטות של אינדוקציה של VCID באמצעות היצרות CCA אסימטרית, וכולן חולקות בידוד שלב כירורגי חשוב וקריטי של ה-CCA מהעצב התועה והמעטפת וחשיפה של ה-CCA כדי להפוך אותו לנגיש להיצרות. בעוד שאנו מספקים הדרכה חזותית באיכות טובה על החשיפה הכירורגית של CCAs לפני הקשירה, ברצוננו גם לכוון את החוקרים לצפות בסרטונים נוספים על בידוד CCA הזמינים באינטרנט בהקשר של ניתוחי עכברים וחולדות אחרים 15,16,17,18. יש לנקוט משנה זהירות לא לדחוס או לקרוע את ה-CCA מכיוון שהוא העורק הראשי המספק למוח דם מחומצן.

שלב קריטי נוסף בניתוח שצריך לשלוט בו הוא טיוטת קשר רופף והידוק נוסף סביב ה-CCA עם המחט ואחריה הסרת המחט. אנו ממליצים בחום לתרגל שלב זה רק עם המחט בלבד לפני שמנסים לבצע אותו בעכבר מורדם. זה יאפשר שליטה בתנועות מלקחיים עדינות ושכלול מניפולציות עם התפרים ללא סיכון לפגיעה בעכבר. יש לאבטח את הקשר היטב מבלי להתפרק במהלך הסרת המחט, חזק מספיק כדי להחזיק את המחט אך רופף מספיק כדי לאפשר החלקת המחט הרחק מהתפר הקשור באמצעות מלקחיים.

חשוב לציין, מצאנו שקשירה אחת של כל CCA אינה מספיקה כדי להפחית באופן אמין את זרימת הדם ולשמור על היפופרפוזיה מוחית לטווח ארוך11. הסבר אפשרי אחד עשוי להיות שקשירה בודדת גורמת להיצרות נקודתית, מה שעשוי לגרום לעלייה מקומית בלחץ, מה שמוביל למהירות מוגברת של זרימת הדם כדי לפצות על הפחתת זרימת הדם. אנו ממליצים לבצע שלוש קשירה בהפרש של ~1 מ"מ זו מזו כדי ליצור שבר של היצרות. יתרון נוסף בשימוש בשלוש קשירה הוא שהקשרים משמשים כמנגנון הגהה למקרה שאחד הקשרים ישתחרר במהלך הסרת מחט נוספת. ואכן, שבר של היצרות הנגרם על ידי שלוש קשירה נפרדת של אותו CCA מגביר את עקביות המודל, מה שמוביל להיפופרפוזיה מוחית מתמשכת בכ-90% מהעכברים. יתר על כן, היצרות שבר מחקה היצרות CCA הנגרמת על ידי טרשת עורקים בחולים אנושיים בצורה מדויקת יותר בהשוואה להיצרות נקודת מוקד, ובכך מגדילה את הרלוונטיות הקלינית של מודל המחט.

אנו ממליצים בחום להסיר את המחט במהירות לאחר סיום הקשירה הראשונה כדי לוודא שזרימת הדם CCA מתאוששת חלקית, ורק לאחר מכן לעבור לקשירה השנייה והשלישית ברצף. לא מומלץ לסיים את כל שלושת הקשרים עם המחט בתוך כל שלושת הקשרים, מכיוון שהדבר יגדיל משמעותית את זמן החסימה המלאה של זרימת הדם. בדרך כלל, אנו לא ממליצים על יותר מדקה אחת של חסימת CCA מלאה לפני הסרת המחט. המלצה זו מבוססת על הדיווח כי עכברים לא הראו סימנים לפגיעה תפקודית כלשהי לאחר 3 מפגשים של חסימה של 60 שניות של שני CCAs19. במודל שלנו, המנתח עובד על CCA אחד בכל פעם, וזה סלחני יותר מהחסימה של שני ה-CCA בו זמנית, אך אנו עדיין ממליצים לעקוב אחר ציר הזמן הזה כדי לא לכלול כל חפץ שנגרם על ידי חסימה ממושכת ולא היפופרפוזיה כרונית משני הצדדים.

בעוד שמודל מחט זה מאפשר להתאים את קוטר התפרים המסוקסים באמצעות מחטים בקטרים שונים (בהתבסס על משקל הגוף או הדרישות הספציפיות של הגבלת זרימת הדם), מניסיוננו, לעכברים היו שיעורי הישרדות גבוהים יותר כאשר היפופרפוזיה בהמיספרה הימנית הייתה בינונית ולא חמורה. מצד שני, היפופרפוזיה חמורה מתמשכת בהמיספרה השמאלית הניבה תוצאות פתולוגיות ונוירולוגיות ארוכות טווח. לפיכך, אנו ממליצים לבצע קשירה אסימטרית על ידי שימוש במחט עבה יותר כדי לקשור את ה-CCA הימני (הגורם להיפופרפוזיה מתונה בהמיספרה הימנית) ומחט דקה יותר כדי לקשור את ה-CCA השמאלי (הגורם להיפופרפוזיה חמורה בהמיספרה השמאלית).

לבסוף, חוקרים צריכים להיות מודעים לכך שזני עכברים שונים עשויים לייצר תוצאות שונות מהעלבון האיסכמי או הטראומטי, בעיקר בשל הבדלים באנטומיה של כלי הדם במוח20,21. מכיוון שמחקרים רבים בימינו דורשים יצירת עכברים טרנסגניים חדשים, יש לשקול היטב את זן הרקע אם נדרש ניתוח BCAO בכל שלב של תכנון הניסוי. לדוגמה, גם זני C57BL/6 וגם SV129 הם בחירת רקע נפוצה ליצירת בעלי חיים טרנסגניים לחקר שבץמוחי 21. עם זאת, תועד היטב כי עכברי C57BL/6 רגישים הרבה יותר לאיסכמיה בהשוואה לזנים האחרים שנבדקו, כולל עכברי SV129 20,21. למעשה, ישנן עדויות לכך שההשפעה של זן העכברים יכולה להיות חשובה אפילו יותר מהשפעת הטכניקה המשמשת לגרימת VCID21. לפיכך, חשוב מאוד לשמור על עקביות הרקע של העכברים לאורך כל הניסויים הכוללים גרימת פגיעה מוחית איסכמית במכרסמים. חשוב לציין, חוקרים יכולים להעריך את יעילות תוצאת הניתוח בבעלי חיים באמצעות מערכות ניקוד נוירולוגיות22 עם ציון של 0.5 כקריטריון הכללה. ניתן לאשר פגיעה מוחית באמצעות צביעה חיסונית Iba1 הרגישה מאוד לנזק מוחי גם לאחר עלבון מוקדי קל.

לסיכום, חשוב לזכור ש-VCI הוא מונח מורכב המאחד ייצוגים קליניים וגורמים רבים תחת אותה מטריה. לכן, חוקרים צריכים תמיד לזכור איזה מודל צריך להיבחר על סמך היבטי ה-VCI שהם רוצים לחקור. לעולם לא יכול להיות מודל אוניברסלי אחד לכל הביטויים של VCI. מודלים של היצרות CCA מגבילים מאוד את זרימת הדם מהעורקים הראשיים, ובכך מחקים חולים עם היצרות טרשת עורקים. שיטת המחט החדשנית ליצירת BCAS אסימטרי בעכברי C57BL/6J היא שיטה אמינה לחיקוי VCID המציעה מספר יתרונות על פני השיטות שדווחו בעבר (גמישות גבוהה במיוחד, תמותה נמוכה, תוצאות ארוכות טווח, עלות מינימלית וניטור MRI חי). בשל יתרונותיו על פני המודלים האחרים, ניתן להשתמש בו כדי לקדם עוד יותר את הידע שלנו על התקדמות VCID וכן לשמש בסיס לסינון סוכנים טיפוליים פוטנציאליים לריפוי או להאטת התקדמות VCID. בדומה לשיטות מדווחות אחרות של BCAS, מודל המחט דורש מיומנויות כירורגיות מתקדמות שניתן לשלוט בהן עם הזמן, תוך שימוש בהדגמה חזותית זו כמדריך.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

פרויקט זה נתמך על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות/NINDS RF1NS117509 (G. Cao) ומענקי VA Merit Review BX003923 ו-BX006454 (G. Cao).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרק 1 מ"לBD309659הזרקת IP של קטופרופן
2.5 מ"מ קצות מפסק קההקנט סיינטיפיק תאגידSURGI-5016-22 דרוש
Andis Ion T-Blade גוזם חיות מחמדAndisBTF3לגילוח פרווה
תמיסת בטדין Avrio Health L.P.NDC 67618-150-17
תפר משי קלוע, 5-0טלפלקס רפואי106-Sלתפירת עור
תפר משי קלוע, 7-0טלפלקס רפואי103-Sלקשירת CCAs
מצלמהMed Associates, IncVID-CAM-MONO-7לזכוכית כיסוי אימות דגם
פישרברנד12-541-012לאימות דגם
קרסיל סגולThermo ScientificC581-25לאימות דגם
קצה חלוקה, מחט, גמיש, 34 מד, 1/4 אינץ'OAL Jensen GlobalJG34-0.25HPXעבור CCA
DSIStudiohttps://dsi-studio.labsolver.org השמאלית; לניתוח נתוני DTI
פינצטה Dumont; דפוס #1Roboz Surgical Instrument CoRS-49602 דרוש
פינצטה של Dumont; דפוס #5, זווית 45 מעלותRoboz מכשיר כירורגי CoRS-50582 דרוש
אתנולפישר מדעי64-17-5לדלל ל-70%
אתילן גליקולThermo ScientificE178-4לאימות דגם
מחט עיניים, גודל #4; 3/8 מעגל, קצה חיתוך, 11 מ"מ אורך אקורדמכשיר כירורגי Roboz CoRS-7981-4לתפירת עור
EZ מערכת הרדמה קלאסיתמערכותEZ-7000
גליצרולתרמו סיינטיפיקAAA16205APלאימות דגם
מערכת ניטור הומותרמיתהרווארד ביוסיינסK 022258
מערכת הדמיה EVOS FL AutoLife TechnologiesAMAFD2000לאימות דגם
IsofluraneCovetrus11695-6777-2
KetoprofenZoetis5487
Leica M320 F12 מיקרוסקופ מרפאה וכירורגיהLeicaM320 F12
קרם לידוקאין ופרילוקאין, USP 2.5%/2.5%PadagisNDC 0574-2042-30גנרי לקרם EMLA
ליתיום קרבונטThermo ScientificL119-500לאימות דגם
Luxol מהירכחול Thermo ScientificAC212170250לאימות מודל
שקופיות מיקרוסקופפישרברנד12-550-403לאימות מודל
MicrotomeLeicaSM2010Rלאימות מודל
מים מוריס עם הפלטפורמה הנסתרתמהנדסיhttps://maze.conductscience.com/portfolio/morris-water-maze/
M-Prove Portable BalanceSartoriusמאזני AY711לשקילת MRI של העכבר
עם ParaVision 6.0.1 BrukerAV3HD 9.4Tלאימות דגם
מד זרימת גז מרובה Aalborg InstrumentsGMR2-010334למיזוג גזים בקצב זרימה נמוך (N2O ו-O2)
מחטי עט עדינות במיוחד של ננו - 32G 4 מ"מBD58320883ל-CCA
O.C.TThermo Scientific23-730-571לאימות מודל
Paraformaldehyde, 4%Thermo ScientificJ61899. AKלאימות דגם
PBSThermo ScientificBP399500לאימות דגם
מערכת PeriCam PSI עם מחזיק בדיקה Aperiflux Perimed IncPeriCam PSI HRלאימות דגם
permountThermo ScientificSP15-100לאימות דגם
מלקחיים עם ידית עגולה; תפירה מיקרו עם פלטפורמת קשירה; מכשיר כירורגי מעוקל Roboz CoRS-5264כדי לעזור בחיתוך ותפירת העור
מנורת חום לבעלי חיים קטנים, 75 וואטמורגנוויל סיינטיפיקHL0100לאימות דגם
אפליקטורים קטנים עם קצה כותנהפישר סיינטיפיק23-400-118
מספריים קפיציים - 8 מ"מ כלימדע עדינים15024-10
סטודנט הלסי מחזיק מחטFine Science כלים91201-133 דרושים: 2 להחזקת מחזירי עור ו-1 לתפירת העור
סוכרוזThermo ScientificA15583.36לאימות דגם
אוניברסלית תקרת הרMed Associates, IncENV-598לאימות דגם
אמבט מיםVWR89032-226לאימות דגם
מערכת הדמיה מבוך מבוך הנכון. מצלמה

מקורות

  1. Tuo, Q. Z., Zou, J. J., Lei, P. Rodent models of vascular cognitive impairment. J Mol Neurosci. 71 (5), 1-12 (2021).
  2. Zhou, Z., et al. Deeper cerebral hypoperfusion leads to spatial cognitive impairment in mice. Stroke Vasc Neurol. 7 (6), 527-533 (2022).
  3. Shibata, M., Ohtani, R., Ihara, M., Tomimoto, H. White matter lesions and glial activation in a novel mouse model of chronic cerebral hypoperfusion. Stroke. 35 (11), 2598-2603 (2004).
  4. Hattori, Y., et al. A novel mouse model of subcortical infarcts with dementia. J Neurosci. 35 (9), 3915-3928 (2015).
  5. Janson, J., et al. Increased risk of type 2 diabetes in Alzheimer disease. Diabetes. 53 (2), 474-481 (2004).
  6. Herzig, M. C., et al. Abeta is targeted to the vasculature in a mouse model of hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis. Nat Neurosci. 7 (9), 954-960 (2004).
  7. Miao, J., et al. Cerebral microvascular amyloid beta protein deposition induces vascular degeneration and neuroinflammation in transgenic mice expressing human vasculotropic mutant amyloid beta precursor protein. Am J Pathol. 167 (2), 505-515 (2005).
  8. Moechars, D., et al. Early phenotypic changes in transgenic mice that overexpress different mutants of amyloid precursor protein in brain. J Biol Chem. 274 (10), 6483-6492 (1999).
  9. Wallays, G., et al. Notch3 Arg170Cys knock-in mice display pathologic and clinical features of the neurovascular disorder cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2881-2888 (2011).
  10. Cognat, E., Cleophax, S., Domenga-Denier, V., Joutel, A. Early white matter changes in CADASIL: evidence of segmental intramyelinic oedema in a pre-clinical mouse model. Acta Neuropathol Commun. 2, 49(2014).
  11. Weng, Z., et al. A novel needle mouse model of vascular cognitive impairment and dementia. J Neurosci. 43 (44), 7351-7360 (2023).
  12. Biesbroek, J. M., Biessels, G. J. Diagnosing vascular cognitive impairment: Current challenges and future perspectives. Int J Stroke. 18 (1), 36-43 (2023).
  13. Winklewski, P. J., et al. Understanding the physiopathology behind axial and radial diffusivity changes-what do we know. Front Neurol. 9, 92(2018).
  14. Jing, Z., et al. Neuronal NAMPT is released after cerebral ischemia and protects against white matter injury. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (10), 1613-1621 (2014).
  15. Yang, S. T., et al. Adult mouse venous hypertension model: common carotid artery to external jugular vein anastomosis. J Vis Exp. (95), e50472(2015).
  16. Speetzen, L. J., Endres, M., Kunz, A. Bilateral common carotid artery occlusion as an adequate preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to focal cerebral ischemia. J Vis Exp. (75), e4387(2013).
  17. Lee, D., et al. A murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion. J Vis Exp. (165), (2020).
  18. Schleimer, K., et al. Training a sophisticated microsurgical technique: interposition of external jugular vein graft in the common carotid artery in rats. J Vis Exp. (69), e4124(2012).
  19. Speetzen, L. J., Endres, M., Kunz, A. Bilateral common carotid artery occlusion as an adequate preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to focal cerebral ischemia. J Vis Exp. (75), e4387(2013).
  20. Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. J Cereb Blood Flow Metab. 13 (4), 683-692 (1993).
  21. Wellons, J. C., et al. A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia. Brain Res. 868 (1), 14-21 (2000).
  22. Cao, G., et al. In Vivo delivery of a Bcl-xL fusion protein containing the TAT protein transduction domain protects against ischemic brain injury and neuronal apoptosis. J Neurosci. 22 (13), 5423-5431 (2002).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

MRI

מאמרים קשורים