הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הדמיה חיה מורחבת של נישות תאי גזע נקבות Drosophila melanogaster

1.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/67389

⸱

20 בדצמבר 2024

 ,  , 
1Centro Andaluz de Biología del Desarrollo, CSIC/Universidad Pablo de Olavide/JA, 2Departamento de Genética, Facultad de Biología, Universidad de Sevilla

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לביצוע הדמיה חיה של החלוקה הא-סימטרית של תאי גזע של קו הנבט (GSCs) בנישת השחלות של דרוזופילה. אנו משתמשים בקו טרנסגני המבטא בכל מקום היתוך חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) של חלבון הספקטרוזום Par-1.

תקציר

שיטות הדמיה חיות מאפשרות ניתוח של תהליכים תאיים דינמיים בפירוט ובזמן אמת. שחלת הדרוזופילה מייצגת מודל מצוין לחקר הדינמיקה של מספר עצום של תהליכים התפתחותיים, כגון חלוקת תאים, גזע, התמיינות, נדידה, אפופטוזיס, אוטופגיה, הידבקות תאית וכו', לאורך זמן. לאחרונה, יישמנו תרבות ex vivo מורחבת והדמיה חיה של נישת ה-GSC הנשית של דרוזופילה. באמצעות קו דרוזופילה המכיל טרנסגן GFP::P ar-1 כדוגמה, שיטה זו מאפשרת הדמיה של החלוקה הא-סימטרית של ה-GSCs בתוך הנישה שלהם ותיאור השינויים במורפולוגיה של הספקטרוזום לאורך מחזור התא. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לתרבות ex vivo של Drosophila germaria, המאפשר הדמיה ממושכת של נישת ה-GSC הנשית. חשוב לציין, פרוטוקול זה ישים באופן נרחב להדמיה חיה של GSCs עם מספר חלבונים מתויגים פלואורסצנטיים מעניינים הזמינים במרכזי מלאי ו/או בקהילת המחקר של דרוזופילה.

מבוא

הדמיה חיה של תהליכים ביולוגיים היא חיונית להשגת ראיות ניסיוניות ישירות. השילוב של מיקרוסקופיה קונפוקלית מתקדמת ואופטימיזציה של מתודולוגיות מאפשר לחקור אירועים ביולוגיים מרובים בדיוק גבוה. אופטימיזציה של שלבים בפרוטוקולים כגון מניפולציה ודיסקציה של רקמות, הכנת ושימור דגימות, והגדרות רכישת מיקרוסקופיה היא קריטית כדי למקסם את האמינות והחוסן של התוצאות המתקבלות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לניטור דגימות להדמיה מורחבת, המתמקד במיוחד בשחלות Drosophila melanogaster. השחלה Drosophila melanogaster היא מערכת מודל מצוינת לניתוח של מגוון רחב של תהליכי התפתחות. בין רבים אחרים, איבר רבייה זה של זבוב הפירות Drosophila melanogaster מכיל נישה מוגדרת היטב של תאי גזע בוגרים. נישת GSC זו מקיימת את התפתחות הגמטות הנקביות במהלך הבגרות. שחלות הדרוזופילה מורכבות מכ -18 שחלות, בהן מתפתחים תאי ביצים בגרמריום. בקצה של כל גרמריום, 2-4 GSCs נשמרים בנישה תאית סומטית שנוצרת בעיקר על ידי נימה סופית של 8-10 תאים, שושנת של 5-8 תאי כובע ו-2-3 תאי ליווי קדמיים (<מחלקה חזקה = "xfig">איור 1A). נישה סומטית זו מספקת ל-GSCs אותות חיוניים ותמיכה פיזית כדי לשמור על הגזע שלהם, לשלוט בהתפשטות ולמנוע בידול1,2,3,4,5.

ה-GSCs מתחלקים בדרך כלל בצורה אסימטרית כדי ליצור תא גזע חדש ששומר על קשר עם הנישה הסומטית ותא הבת, הציסטובלסט (CB), שמאבד מגע ישיר עם תאי הכובע הסומטי ומתמיין. GSCs ו-CBs מכילים אברון דינמי וציטופלזמי ביותר, הספקטרוזום, שתפקידו העיקרי הוא הכיוון הנכון של הציר המיטוטי במהלך מיטוזה6. ה-CB מתחלק 4 פעמים עם ציטוקינזיס לא שלם כדי לפתח ציסטות של 16 תאים, כאשר אחד מתאי קו הנבט מציין לתוך הביצית ו-15 התאים האחרים הופכים לתאי אחות. ספקטרוזום ה-CB גדל למבנה מסועף הנקרא פוזום המחבר את תאי קו הנבט המחוברים זה לזה של 16 תאים. הספקטרוזום מועשר בשלפוחיות קטנות וחלבוני שלד כגון סרין-תראונין קינאז Par-1 ורכיב הממברנה Hu-li tai shao (Hts)7. במהלך מחזור תא ה-GSC, הספקטרוזום גדל על ידי הוספת חומר חדש ומשנה את צורתו, מה שמאפשר זיהוי של שלבי G1, S, G2 ו-M (<מחלקה חזקה="xfig">איור 1B)8,9.

לאחרונה יישמנו שיטת תרבית ex vivo של גרמריום דרוזופילה המאפשרת הדמיה של GSCs חיים עד 16 שעות. מכיוון שתאים אלה מתחלקים אחת ל-15.5 שעות בממוצע8, שיטה זו מאפשרת צילום של חלקים גדולים ממחזור תאי ה-GSC. לפיכך, בשילוב עם כלים אחרים, שיטת התרבות שלנו אפשרה תיאור של מורפולוגיה ספקטרוזומית במהלך מחזור התא GSC וניתוח משך שלבי מחזור התא השונים in vivo8 (איור 1C). כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט של שיטת הדמיה חיה מורחבת זו הנתמכת על ידי וידאו מונחה צעד-אחר-צעד המתאר את המתודולוגיה (<מחלקה חזקה = "xfig">איור 2).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: יש לבצע את שלב 1.4 לפחות יומיים מראש. ניתן לבצע את שלבים 2.1 ו-2.2 יום אחד מראש.

1. הגדרה טרום ניסויית I

  1. הכינו 100 מיקרוליטר של תערובת אנטיביוטיקה סטרפטומיצין/פניצילין (10,000 U/mL פניצילין ו-10 מ"ג/מ"ל סטרפטומיצין) ואחסנו בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס עד לשימוש.
  2. הכינו 15 מ"ל מהתמיסות הבאות באמצעות מים טהורים שעברו חיטוי, אחסנו אותם בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס והשתמשו בהם תוך חודש: נתרן ביקרבונט (NaHCO3) 0.1 M pH 8.0 ו-0.1% Tween 20.
  3. הכן את מדיום התרבות והתמיסה הבאים במכסה זרימה למינרי כדי למנוע זיהום. השתמש בקצות ובצינורות סינון מעוקרים.
    1. הכינו 2 מ"ל של סרום בקר עוברי לא מדולל (FBS) ואחסנו בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס עד לשימוש בתנאים אספטיים.
    2. הכינו את מדיום הדרוזופילה של שניידר בתוספת תערובת אנטיביוטיקה של 15% FBS ו-0.6% סטרפטומיצין/פניצילין. הכן 7 מ"ל מנות ואחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. אליקוט אחד מספיק לשני לוחות MatTek (ראה סעיף 2).
      1. הכן את תמיסת רינגר (128 מ"מ NaCl, 2 מ"מ KCl, 1.8 מ"מ CaCl2, 4 מ"מ MgCl2, 35.5 מ"מ סוכרוז, 5 מ"מ Hepes במים טהורים אוטוקלאב; pH 6.9). מכינים 1 מ"ל מנות ושומרים בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס עד לשימוש.
  4. אספו זבובים בני 1-2 ימים המבטאים באופן מכונן ובכל מקום את חלבון ה-Par-1 המותך ל-GFP (קו פולי יוביקוויטין-mGFP6::p ar-1) לתוך שפופרת חדשה עם מזון זבובים בתוספת אבקת שמרים. תרבית אותם במשך יומיים בחום של 25 מעלות צלזיוס בחממה לפני הניתוח.< /> הערה: ניתן לבצע שלב זה עם כל מדווח בעל תיוג פלואורסצנטי שמעוניין בו.

2. ציפוי והכנה של צלחת תחתונה מזכוכית

  1. הנח טיפה של 3 מיקרוליטר של דבק Cell-Tak ספציפי (המכונה מעתה דבק תאים ורקמות) במרכז הכיסוי של צלחת מצופה פולי-D-ליזין בגודל 35 מ"מ (צלחת תחתית זכוכית, ראה טבלת חומרים) ללא פיזור ידני. השתמש בטיפים סטריליים.
    הערה: יש לאחסן את דבק התאים והרקמות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. במקרה של ניסויים עם שני מצבים גנטיים (בדרך כלל, תנאי בקרה ומוטנטיים), הניחו שתי טיפות בודדות ומופרדות היטב של הדבק באותה צלחת תחתונה מזכוכית. זה יבטיח ששני הרקע הגנטי יצולמו באותם תנאים.
  2. מיד לאחר מכן, הוסף נפח שווה (3 μL במערך פרוטוקול זה) של 0.1 M NaHCO3 pH 8.0 בזהירות לתוך טיפת הדבק של 3 μL כפי שהומלץ על ידי היצרן וערבב על ידי פיפטינג.
  3. לאידוי מלא, דגרו את הצלחת בטמפרטורת החדר (RT) למשך 20 דקות ולאחר מכן שמרו על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה לשימוש למחרת. לחלופין, דגרו את הצלחת המוכנה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 25 דקות עד לאידוי מלא והמשיכו ישירות לשלב הבא. בשני המקרים, שמור על הצלחת עם הכיסוי שלה. השתמש בטיפים סטריליים.
  4. אפשר לכלי תחתית הזכוכית המוכנה להגיע ל-RT על ידי הנחתו על הספסל למשך 15-20 דקות לפני השימוש.
  5. שוטפים בזהירות 3 פעמים מהצלחת המוכנה. הימנע מלגעת ולהפריע לשכבות הדבק. בכל שטיפה, הוסף 6 מיקרוליטר מים טהורים שעברו חיטוי ולאחר מכן הסר את המים באמצעות קצה נקי לכל אחת משלוש השטיפות כדי למנוע שאריות של תמיסת NaHCO3.
  6. אפשר אידוי מלא של המים על ידי הנחת הצלחת הנקייה והמוכנה ב-RT תוך ניתוח למשך 5-10 דקות עם המכסה שלה כדי למנוע חלקיקי אבק.

3. דיסקציה של שחלות דרוזופילה ובידוד והרכבה של שחלות

הערה: דיסקציה של השחלות מתבצעת בתמיסת רינגר (במקום המדיום של שניידר) ללא FBS כדי למנוע נוכחות של חלבונים שעלולים להפריע להדבקה של רקמת הדגימה לדבק.

  1. נקו צלחת חיתוך עם שלוש בארות, מלקחיים ומחטי חיתוך עם 70% אתנול לפני שמתחילים.
  2. הוסף נפח מספיק (~200 מיקרוליטר) של תמיסת רינגר בכל אחת משלוש הבארות.
  3. נתח את השחלות של 5 נקבות הניזונות משמרים ב-200 מיקרוליטר של תמיסת רינגר בבאר הראשונה בעזרת שני זוגות מלקחיים לפי נהלים סטנדרטיים10,11. תפוס את נקבת הדרוזופילה בצומת בית החזה והבטן עם אחד המלקחיים. לאחר מכן, קרעו בעדינות את הציפורן בבטן האחורית ומשכו את ציפורן הבטן עד ששתי השחלות ייחשפו.
  4. העבירו את השחלות המנותחות לבאר השנייה כדי להפחית את הזיהום בשאריות של רקמות אחרות או פסולת הנובעת מדיסקציה.
  5. הסר את מעטפת השריר של 15-20 שחלות בעזרת סטריאומיקרוסקופ (זום 8X-13.5X) עם תאורת דיודה פולטת אור (LED) ומלקחיים עדינים נקודתיים. השתמש בזוג אחד של מלקחיים כדי לעגן את כל גוף השחלה, והשתמש בשני כדי לתפוס בצורה חלקה תא ביצית בשלב מאוחר ולמתוח בעדינות עד שהשריר נשבר ומפגר מאחור.
    הערה: חיוני להימנע מנזק לגרמריה רק על ידי הפחתת המגע עם חלק זה של השחלות. הסר תאי ביצים ישנים יותר משלבים 8-9.
  6. העבירו בזה אחר זה את 15-20 השחלות נטולות מעטפת השרירים באמצעות המלקחיים לבאר השלישית המכילה 200 מיקרוליטר של מדיום רינגר.
  7. הרטיבו מראש קצה של 20-200 מיקרוליטר עם 0.1% טווין 20 על ידי פיפטינג. זה מונע את הידבקות השחלות לדפנות הפלסטיק של הקצה.
  8. העבירו 6 מיקרוליטר של תמיסת רינגר המכילה את השחלות נטולות מעטפת השריר באמצעות קצה רטוב מראש לצלחת ההדבקה המוכנה (נשמרת ב-RT).
    הערה: הימנע מכל מגע בין הקצה לשכבת הדבק כדי למנוע ניתוק גרמריה לאחר שקיעת השחלות (השלב הבא). כ-30% מהגרמריה אינם נדבקים כמצופה.
  9. כדי להבטיח שהשחלות המועברות נדבקות למשטח הדבק, לחץ אותן בזהירות כלפי מטה לתחתית טיפת הצלצול עד שהן באות במגע עם משטח הדבק באמצעות מחט חיתוך או מלקחיים.
    הערה: אל תנסה לסדר מחדש את השחלות לאחר שהן מתייצבות.
  10. מלאו את צלחת ה-MatTek בזהירות ב-3 מ"ל של המדיום של שניידר בתוספת תערובת אנטיביוטיקה של 15% FBS ו-0.6% סטרפטומיצין/פניצילין (שלב 1.3). כדי למנוע ניתוק של השחלות, הוסף לאט 1 מ"ל בכל פעם סביב הקצה החיצוני של הצלחת.
  11. העבר את הצלחת המכילה את השחלות ללא מעטפת השריר על משטח ישר לתחנת המיקרוסקופ.

4. הדמיה חיה באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי

  1. הנח את הצלחת על אובייקט 63x של מיקרוסקופ דיסק מסתובב או מיקרוסקופ קונפוקלי (ניתן להשתמש בציוד דומה) ומקד את הדגימה. בחר את מישור ה-z האמצעי עבור כל נגרמריום.
  2. הגדר את הפרמטרים הניסיוניים הבאים: סוג לכידה: זמן-lapse תלת מימדי, התאם את עוצמת הלייזר של 70/100, אורך גל עירור: 488 ננומטר, טווח ערימת z: 30 מיקרומטר ומרחק בין ערימות Z: 1.2 מיקרומטר, משך: 17 שעות, מרווח בין נקודות זמן: כל 10 דקות.
  3. אם זמין, באמצעות אפשרות ריבוי מיקומים, הגדר מחדש את קואורדינטות ה-XY של הדגימות ובחר מישור Z באמצע כל גרמריום, מכיוון שערימות ה-z יהיו מרוכזות במיקום זה. התחל את הרכישה.
    הערה: מכיוון שהרוחב הרגיל של גרמריום הוא 30 מיקרומטר, כל מחסנית Z תהיה ~25-27 חלקים. בהתאם לקונפוקל, ניתן לדמות לפחות 25 גרמריה במרווחים של 10 דקות. בדרך כלל, נעשה שימוש במטרות טבילה בשמן 40x/1.30 NA או 63x/1.40 NA, מתוקנות planapo.
  4. נתח את התמונות בזמן ובציר Z כדי להמחיש שינויים ספציפיים במורפולוגיה של הספקטרוזום באמצעות תוכנת Imaris או ImageJ (Fiji) 12,13. זמנים ספציפיים בתצפית שלהם מוצגים (<מחלקה חזקה = "xfig">איור 1B). כדי להרכיב את הסרטים, בחר ידנית את מישור ה-Z הטוב ביותר בכל נקודת זמן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות פרוטוקול דימוי חי מורחב זה, אנו יכולים להקליט את המיטוזה האסימטרית של GSCs נקביים בתוך הנישה שלהם ללא הפרעות ביולוגיות ניכרות. לשם כך, אנו משתמשים ב-germaria המבטאים באופן גלובלי את החלבון GFP::Par-1, המבחין בין חמישה מורפולוגיות נפרדות של הספקטרוסום לאורך מחזור התא של ה-GSC: עגול (Round), פקק (Plug), מוט (Bar), איחוי (Fusing), וסימן קריאה (Exclamation point) (איור 1B,C). בתיאור מפורט יותר, הבחנו כי אות ה-GFP:Par1 החזק של ספקטרוסום Round-G2 (איור...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן אנו מציגים פרוטוקול לניטור נישת ה- GSC של Drosophila melanogaster למשך תקופה ממושכת, עד 16 שעות. רוב הפרוטוקולים לצילום תהליכים ביולוגיים של דרוזופילה מתמקדים בחלונות זמן קצרים יותר וניתן למצוא דוגמאות רבות לדיסקי כנף דמיוניים 15,16,17, בלוטות המין של העובר 18,19 או שחלות 20,21,22,23

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

אנו מודים ל-Acaimo González Reyes ול-María Olmedo López על ההערות המועילות על כתב היד. מחקר זה נתמך על ידי PID2021-125480NB-I00 (H. S-G), "Ayudas a la contratación de personal Investigador Doctor" מ-Junta de Andalucía (J. G-M), "Ayuda a proyectos de investigación precompetitivos" מ-VI ו-VII PPIT-אוניברסיטת סביליה (P. R-R) ו-"Contrato de Acceso de I+D+i" מ-VI PPIT-אוניברסיטת סביליה (P. R-R). אנו מביעים את תודתנו לחברת ביולוגים בע"מ על מתן זכויות לשיתוף תמונות שעובדו מהפרסום המקורי (doi:10.1242/DEV.199716).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צלחת זכוכית 9 בארותקורנינג 7220-85n/a
סידן כלוריד דיהידראטסיגמא אולדריץ'C3881CaCl2· 2H2O; להכנת הפתרון של רינגר
Cell-TakCorning 354240דבק תאים ורקמות המשמש לחיבור תאים או קטעי רקמה לסוגים רבים של משטחים, כולל פלסטיק, זכוכית, מתכת, פולימר FEP וחומרים ביולוגיים.
דומונט #5 מלקחיים Finescience11252-20n/a
Dumont #55 מלקחיים Finescience11255-20מידות 0.05 מ"מ x 0.02 מ"מ ואורך 11 ס"מ
סרום בקר עובריGibco10500-064מוסמך, מושבת בחום, מאושר על ידי האיחוד האירופי, מוצא דרום אמריקה 
כלי תחתית זכוכיתMatTekP35GC-1.5-10-Cצלחת 35 מ"מ, מס' 1.5 כיסוי, קוטר זכוכית 10 מ"מ,   מצופה פולי-D-ליזין
HEPESSigma AldrichH4034להכנת תמיסת רינגר
מגנזיום כלוריד סיגמא אולדריץ'M1028MgCl<תת>2; להכנת הפתרון של רינגר
מחזיק מחטRoboz RS-6061קל משקל, ידית נירוסטה חלולה; אורך 4 3/4 אינץ'.
ניקון SMZ18 דו-עיני ניקוןhttps://www.microscope.
healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18
פניצילין-סטרפטומיציןתרמו פישר סיינטיפיק1514012210,000 יח'/מ"ל
אשלגן כלוריסיגמא אולדריץ'P3911KCl; להכנת התמיסה של רינגר
שניידר Drosophila MediumBiowest L0207מדיום תרבית תאים לתאי חרקים
נתרן ביקרבונטסיגמא אולדריץ'S8875 NaHCO3; ≥ 99.5%, אבקת
נתרן כלוריSigma AldrichS9888NaCl; להכנת התמיסה של רינגר
סוכרוזסיגמא אולדריץ'S9378≥ 99.5% (GC); להכנת הפתרון של רינגר
מחט דיסקציה טונגסטןRoboz RS-60640.25 מ"מ, דק במיוחד, קצה 1 מיקרון (Pk 10)
Tween 20Sigma AldrichP9416לביולוגיה מולקולרית, אבקת שמרים נוזלית צמיגה
Sigma Aldrich51475n/a

מקורות

  1. Li, L., Xie, T. Stem cell niche: structure and function. Annu Rev Cell Dev Biol. 21, 605-631 (2005).
  2. Drummond-Barbosa, D. Local and physiological control of germline stem cell lineages in Drosophila melanogaster. Genetics. 213 (1), e234(2019).
  3. Eliazer, S., Buszczak, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45(2011).
  4. Rojas-Ríos, P., Guerrero, I., González-Reyes, A. Cytoneme-mediated delivery of Hedgehog regulates the expression of bone morphogenetic proteins to maintain germline stem cells in Drosophila. PLoS Biol. 10 (4), e1001298(2012).
  5. Rojas-Ríos, P., González-Reyes, A. Concise review: the plasticity of stem cell niches: a general property behind tissue homeostasis and repair. Stem Cells. 32 (4), 852-859 (2014).
  6. Deng, W., Lin, H. Spectrosomes and fusomes anchor mitotic spindles during asymmetric germ cell divisions and facilitate the formation of a polarized microtubule array for oocyte specification in Drosophila. Dev Biol. 189 (1), 79-94 (1997).
  7. Huynh, J. R., Shulman, J. M., Benton, R., St Johnston, D. PAR-1 is required for the maintenance of oocyte fate in Drosophila. Development. 128 (7), 1201-1210 (2001).
  8. Villa-Fombuena, G., Lobo-Pecellín, M., Marín-Menguiano, M., Rojas-Ríos, P., González-Reyes, A. Live imaging of the Drosophila ovarian niche shows spectrosome and centrosome dynamics during asymmetric germline stem cell division. Development (Cambridge). 148 (18), dev199716(2021).
  9. De Cuevas, M., Spradling, A. C. Morphogenesis of the Drosophila fusome and its implications for oocyte specification. Development. 125 (15), 2781-2789 (1998).
  10. Wong Li, C., Schedl, P. Dissection of Drosophila ovaries. J Vis Exp. (1), 52(2006).
  11. Merkle, J. A. Dissection, fixation, and standard staining of adult Drosophila ovaries. Methods Mol Biol. 2626, 49-68 (2023).
  12. Thévenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. A pyramid approach to subpixel registration based on intensity. IEEE Trans Image Process. 7 (1), 27-41 (1998).
  13. Miura, K. Bleach correction ImageJ plugin for compensating the photobleaching of time-lapse sequences. F1000Res. 9, 95(2020).
  14. Duan, T., Cupp, R., Geyer, P. K. Drosophila female germline stem cells undergo mitosis without nuclear breakdown. Curr Biol. 31 (7), 1602-1610 (2021).
  15. Aldaz, S., Escudero, L. M., Freeman, M. Live imaging of Drosophila imaginal disc development. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (32), 14217-14222 (2010).
  16. Dye, N. A. Cultivation and live imaging of Drosophila imaginal discs. Methods Mol Biol. 2540, 275-285 (2022).
  17. Sohr, A., Du, L., Roy, S. Ex vivo Drosophila wing imaginal disc culture and furin inhibitor assay. Bio Protoc. 9 (16), e3336(2019).
  18. Anllo, L., Plasschaert, L. W., Sui, J., DiNardo, S. Live imaging reveals hub cell assembly and compaction dynamics during morphogenesis of the Drosophila testis niche. Dev Biol. 446 (1), 25-34 (2019).
  19. Gärthner, S. M. K., Rathke, C., Renkawitz-Pohl, R., Awe, S. Ex vivo culture of Drosophila pupal testis and single male germ-line cysts: dissection, imaging, and pharmacological treatment. J Vis Exp. 91, e51868(2014).
  20. Wilcockson, S. G., Ashe, H. L. Drosophila ovarian germline stem cell cytocensor projections dynamically receive and attenuate BMP signaling. Dev Cell. 50 (3), 296-310 (2019).
  21. Jackson, J. A., Imran Alsous, J., Martin, A. C. Live imaging of nurse cell behavior in late stages of Drosophila oogenesis. Methods Mol Biol. 2626, 191-206 (2023).
  22. Díaz de la Loza, M. C., Díaz-Torres, A., Zurita, F., et al. Laminin levels regulate tissue migration and anterior-posterior polarity during egg morphogenesis in Drosophila. Cell Rep. 20 (1), 121-133 (2017).
  23. Christophorou, N., Rubin, T., Bonnet, I., Piolot, T., Arnaud, M., Huynh, J. R. Microtubule-driven nuclear rotations promote meiotic chromosome dynamics. Nat Cell Biol. 17 (11), 1388-1398 (2015).
  24. Bers, D. M. Cardiac excitation-contraction coupling. Nature. 415 (6868), 198-205 (2002).
  25. Morris, L. X., Spradling, A. C. Long-term live imaging provides new insight into stem cell regulation and germline-soma coordination in the Drosophila ovary. Development. 138 (11), 2207-2215 (2011).
  26. Zielke, N., Korzelius, J., van Straaten, M., et al. Fly-FUCCI: a versatile tool for studying cell proliferation in complex tissues. Cell Rep. 7 (2), 588-598 (2014).
  27. Hinnant, T. D., Alvarez, A. A., Ables, E. T. Temporal remodeling of the cell cycle accompanies differentiation in the Drosophila germline. Dev Biol. 429 (1), 118-131 (2017).
  28. Hsu, H. J., LaFever, L., Drummond-Barbosa, D. Diet controls normal and tumorous germline stem cells via insulin-dependent and -independent mechanisms in Drosophila. Dev Biol. 313 (2), 700-712 (2008).
  29. Andersen, D., Horne-Badovinac, S. Influence of ovarian muscle contraction and oocyte growth on egg chamber elongation in Drosophila. Development (Cambridge). 143 (8), 1375-1382 (2016).
  30. Hudson, A. M., Petrella, L. N., Tanaka, A. J., Cooley, L. Mononuclear muscle cells in Drosophila ovaries revealed by GFP protein traps. Dev Biol. 314 (2), 360-372 (2008).
  31. Ables, E. T., Drummond-Barbosa, D. Cyclin E controls Drosophila female germline stem cell maintenance independently of its role in proliferation by modulating responsiveness to niche signals. Development (Cambridge). 140, 4267-4276 (2013).
  32. Lin, H., Spradling, A. C. Germline stem cell division and egg chamber development in transplanted Drosophila germaria. Dev Biol. 159 (1), 140-152 (1993).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

קו germline של דרוזופילהנישת תאי גזעתרבית ex vivoתאי גזע של קו germlineחלוקה א-סימטריתדינמיקת הספקטרוסוםמיקרוסקופיה קונפוקליתתיוג בחלבון פלואורסצנטיאנליזה של מחזור התא
הדמיה חיה מורחבת של נישות תאי גזע נקבות Drosophila melanogaster
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.