כאן, אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל עכברי של קרדיומיופתיה סוכרתית ומכשיר קיבוע אלקטרו-אקופונקטורה של עכבר לשימוש באלקטרו-אקופונקטורה בעכברים, שיכול לתקן את העכברים בעדינות רבה יותר במהלך הטיפול.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל עכברי של קרדיומיופתיה סוכרתית ומכשיר קיבוע אלקטרו-אקופונקטורה של עכבר לשימוש באלקטרו-אקופונקטורה בעכברים, שיכול לתקן את העכברים בעדינות רבה יותר במהלך הטיפול.
קרדיומיופתיה סוכרתית (DCM) היא סיבוך של סוכרת שיכול להתקדם לאי ספיקת לב ומוגבל על ידי שימוש בתרופות. אלקטרו אקופונקטורה היא דרך יעילה כשיטת טיפול חיצונית ברפואה הסינית המסורתית לטיפול בקרדיומיופתיה סוכרתית. מכשיר לקיבוע אלקטרו-אקופונקטורה בעכבר יכול בקלות ובעדינות לתקן עכברים במהלך טיפול בדיקור אלקטרו-אקופונקטורה ולחשוף נקודות דיקור על הבטן והגפיים של עכברים. מאמר זה מתאר את השיטות המשמשות לייצור מכשיר קיבוע האלקטרו-אקופונקטורה של העכבר עם כל השלבים ואמצעי הזהירות, הקמת מודל עכבר של קרדיומיופתיה סוכרתית עם מדדים מקיפים לרישום מקיף של שינויים במדדים ביוכימיים בדם כגון גלוקוז בדם. הניסוי נעשה עם 3 קבוצות: קבוצת ביקורת, קבוצת מודל וקבוצת טרום טיפול, עם 10 עכברים בכל קבוצה. קבוצת הטיפול המקדים טופלה על ידי טיפול מקדים באלקטרו-אקופונקטורה של נקודות דיקור של ביאובן אחת ליום לסירוגין במשך 7 מפגשים בסך הכל. לאחר דיקור אלקטרו-סיני, העכברים בקבוצת הטיפול המקדים הראו ירידה ברמת הגלוקוז בדם המלווה בהפחתה בתסמיני הסוכרת.
קרדיומיופתיה סוכרתית (DCM) היא סיבוך שכיח של סוכרת המאופיין בשינויים במבנה הלב ובתפקוד הדיאסטולי וההתכווצות של נגע ספציפי, המתפתח עוד יותר לאי ספיקת לב. זהו אחד מגורמי המוות המובילים בחולי סוכרת 1,2, ושכיחותו הגוברת משכה תשומת לב נרחבת בשנים האחרונות3. נמצא כי הפתוגנזה של מחלה זו כוללת בעיקר עמידות לאינסולין, תגובה דלקתית, חילוף חומרים לא תקין של שומנים, מתח חמצוני, נזק למיטוכונדריה 4,5.
נכון לעכשיו, הטיפול הקליני בקרדיומיופתיה סוכרתית מבוסס בעיקר על תרופות דרך הפה לשליטה בגלוקוז בדם ולהקלה על תסמיני מחלות לב, אך יש לו מגבלות מסוימות, כגון תגובות לתרופות, השפעות על תפקוד הכליות ותלות בתרופות ארוכות טווח6. לדיקור סיני, כשיטת טיפול חיצונית ברפואה הסינית המסורתית, יש השפעה מווסתת טובה יותר על הגלוקוז בדם, שומנים בדם ותגובה דלקתית בחולים עם קרדיומיופתיה סוכרתית, והיעילות הקלינית יוצאת דופן7. לדיקור אין השפעות שליליות על תפקודי מערכת העיכול והכליות, וטיפול ארוך טווח אינו מייצר תלות. התיאוריה של נקודות דיקור ביאובן היא שיטה חשובה לבחירה ושימוש בנקודות דיקור בתיאוריה המסורתית של דיקורסיני 8. הוא מגדיר את נקודות הדיקור שיכולות לשפר את תסמיני המחלות כנקודות דיקור ביאו, ונקודות הדיקור שיכולות לווסת את התפקודים הבסיסיים של הגוף הקשורים למחלות ולטפל בגורמי השורש למחלות נקראות נקודות דיקור בן. גירוי נקודות הדיקור של ביאו ובן במקביל לדיקור יכול להשיג את מטרת הטיפול במחלות כמו גם להגביר את עמידות הגוף למחלות ולמנוע החמרה והישנות של המחלות9. זה יכול למנוע החמרה והישנות המחלה. מחקרים מודרניים הוכיחו כי דיקור סיני עם נקודות דיקור ביאובן יעיל לסוכרת וסיבוכיה הרבים, כולל מחלות לב סוכרתיות, נפרופתיה סוכרתית, רטינופתיה סוכרתית, כף רגל סוכרתית וכן הלאה10,11. תוכנית בחירת נקודת דיקור בהתאם לתיאוריה של נקודות דיקור ביאובן היא לבחור PC6 (Neiguan), שיכול לווסת את תפקודי הלב ולשפר את התגובה הדלקתית כמו נקודת הדיקור Biao12, ו-ST36 (Zusanli), שיכולה לשפר את מצב הגלוקוז בדם ואת רמת הסוכר בדם, לשפר את עמידות האינסולין ולהפחית מתח חמצוני, כמו נקודת הדיקור של בן13.
מודלים של בעלי חיים הם כלי חשוב בחקר קרדיומיופתיה סוכרתית מכיוון שהוכח בניסוי כי מודלים של חולדות או עכברים מחקים היטב את החריגות המבניות והשינויים התפקודיים של הלב הנגרמים על ידי קרדיומיופתיה סוכרתית ומספקים את הדגימות הנדרשות למדדי זיהוי ביוכימיים של קרדיומיופתיה סוכרתית14,15. השימוש במזון עתיר סוכר ושומן בשילוב עם תמיסת סטרפטוזוטוצין כדי לגרום לעכברים יכול להוביל להיווצרות מודלים סוכרתיים תוך 4-5 שבועות, לקצר למעשה את זמן הדוגמנות ולשפר את אחוזי ההצלחה, ואין דרישות מיוחדות לסביבת הגידול16,17. קרדיומיופתיה סוכרתית היא סוג של קרדיומיופתיה הנגרמת כתוצאה מהפגיעה במבנה הלב ובתפקודו כתוצאה מהיפרגליקמיה מתמשכת. עם התמשכות מהלך המחלה, מודל מחלות לב סוכרתיות יכול להתפתח באופן טבעי על ידי מודל הסוכרת תחת היפרגליקמיה ארוכת טווח 18,19,20. טיפול מקדים בדיקור מתייחס לטיפול מקדים בעכברים לאחר היווצרות סוכרת ולפני היווצרות פגיעה ברורה בשריר הלב. עם זאת, לאחר גירוי ניסיוני חוזר, עכברים הופכים לעתים קרובות לניידים וקשים לשיתוק, וטכניקות מניפולציה ניסיוניות אלימות עלולות לגרום לפציעה של עכברים או לגרום להם למאניהאו לדיכאון. לכן יש צורך בשיטה מתאימה לשיתוק עכברים. שיטות נפוצות לקיבוע עכברים כוללות הרדמה וחגורה22. למרות ששיטת ההרדמה יכולה לחשוף טוב יותר את נקודות הדיקור, היא עלולה להשפיע על ההולכה העצבית ובסופו של דבר להשפיע על תוצאות הניסוי. שיטת הרצועה היא שיטת קיבוע פיזי ואינה מייצרת את אותן השפעות פיזיולוגיות כמו הרדמה, אך העכברים הקשורים יחוו מתח משמעותי, טונוס שרירים מוגבר ועשיית צרכים מוגברת22,23. בנוסף, המחט אינה יכולה להגיע בקלות למיקום הרצוי. כאן, אנו מציגים מכשיר לקיבוע אלקטרו-אקופונקטורה בעכבר שניתן להשתמש בו כדי להבטיח שעכברים לא יזוזו וגם לחשוף נקודות דיקור במהלך טיפול בדיקור אלקטרו-סיני כך שניתן יהיה לבצע טיפול בדיקור אלקטרו-סיני בנוחות, בבטחה, ללא אלימות וללא השלכות.
מאמר זה מתאר בפירוט את ייצור מכשיר קיבוע האלקטרו-אקופונקטורה של העכבר והקמת מודל עכבר של קרדיומיופתיה סוכרתית. טיפלנו בקרדיומיופתיה סוכרתית על ידי טיפול מקדים באלקטרו-אקופונקטורה של נקודות דיקור ביאובן, הדגמנו כיצד פעולתו התממשה במכשיר הקיבוע של העכברים, והערכנו את ההשפעה הטיפולית של טיפול מקדים באלקטרו-אקופונקטורה של נקודות דיקור ביאובן על קרדיומיופתיה סוכרתית על ידי מדידת מדדים הקשורים למטבוליזם של גליקוליפידים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הניסויים בבעלי חיים עומדים בעקרון 3Rs של אתיקה בבעלי חיים ונבדקו ואושרו על ידי הוועדה לאתיקה של ניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת חוביי לרפואה סינית מסורתית (אישור אתי מספר HUCMS00309300). כאן, 30 עכברים בדרגת SPF התקבלו מהמרכז המחוזי לבקרת מחלות ומניעתן של חוביי (תעודת איכות מס' 42010200009690).
1. ייצור מכשיר קיבוע האלקטרו-אקופונקטורה
2. ביסוס מודל עכברי של קרדיומיופתיה סוכרתית
3. צביעת המטוקסילין-אאוזין (HE)
4. תצפיות על עכברים
5. ניתוח סטטיסטי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
עקבנו אחר ההליך שתואר לעיל והקמנו מודל עכבר של קרדיומיופתיה סוכרתית. כפי שניתן לראות בתמונות המוכתמות ב-HE-(איור 4), לעכברים בקבוצת הביקורת היה מבנה רקמת שריר הלב שלם, סידור קבוע של קרדיומיוציטים, וללא נגעים ברורים. בקבוצת המודל, תאי שריר הלב היו מסודרים בצורה לא סדירה, חלק מתאי שריר הלב נפגעו והתפוררו (חץ שחור), וחדירת תאים דלקתיים ברורה נצפתה באינטרסטיציום (חץ צהוב). מוצע כי העכברים בקבוצת המודל סובלים מפגיעה בשריר הלב. בקבוצת הטיפול המקדים, מבנה רקמת שריר הלב של העכברים היה ברור, תאי שריר...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
במחקר זה, עכברים שהיו בעלי גלוקוז גבוה בדם והראו סימני סוכרת הושגו על ידי הזרקה תוך-צפקית של תמיסת סטרפטוזוטוצין, שהיא שיטה יעילה ומוכרת למידול27. PC6 נבחרה כנקודת ביאו, ו-ST36 נבחרה כנקודת בן על פי התיאוריה של נקודות דיקור ביאובן28. כל הנקודות הללו נמצאות על גפי העכבר, כך שהצינורות האקריליים שיכולים לחשוף את הבטן ולשתק את הגפיים מתאימים היטב לדיקור נקודות אלה. העכברים הוכנסו לגוף הצינור ותוקנו, ומכשיר הדיקור האלקטרו-אקופונקטורה הופעל לטיפו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו נתמכת על ידי מענק מהפרויקט המשותף של קרן מדעי הטבע של הוביי 2022CFD024; הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין, מס' 81704142; אוניברסיטת חוביי לרפואה סינית מסורתית 2023 פרויקט מחקר מדעי מיוחד כפול מהשורה הראשונה, 2023ZZXT005; לחקור את המנגנון של התניה מוקדמת של אלקטרו-אקופונקטורה של נקודות דיקור ביאובן על ויסות פרופטוזיס של תאי שריר הלב בחולדות עם פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה של שריר הלב (MIRI) במסגרת פרויקט המפתח של המינהל המחוזי של חוביי לרפואה סינית מסורתית,ZY2025D001; פרויקט חדשנות הידע של לשכת המדע והטכנולוגיה של ווהאן, מס' 2023020201010172; פרויקט הנדסת הכישרונות של הוביי שי ג'ן, E Wei Han [2024]256.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פלסטיק חלול אקרילי | Henan Zhike | ZK-GDQ | |
| מחט דיקור סיני | Hwato | 0.3 מ"מ x 13 מ"מ | |
| C57BL/6 עכברים | המרכז המחוזי של חוביי לבקרת מחלות ומניעתן | ||
| חומצת לימון מונוהידראט | Sigma | C1909 | |
| מכשיר לטיפול בדיקור אלקטרו-סיני | Hwato | SDZ-V | |
| איזון אלקטרוני | Henan Zhike | ZK-DST | |
| מדי גלוקוז | LifeScan | OneTouch VerioVue | |
| רצועת בדיקת גלוקוז | LifeScan | OneTouch Verio | |
| סטרפטוזוטוצין | סיגמא | S0130 | |
| טריסודיום ציטראט דיהידראט | סיגמא | W302600 | |
| פינצטה | Labshark | 130302001 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה